تم تطوير العديد من أجهزة الموائع الدقيقة لاستخدامها في دراسة التاكسير الكهربائي. ومع ذلك ، لا تسمح أي من هذه الرقائق بالدراسة الفعالة للتأثيرات المتزامنة للمجال الكيميائي والمجال الكهربائي (EF) على الخلايا. لقد طورنا جهازا قائما على بولي ميثيل ميثاكريلات يوفر تعايشا متعايشا بشكل أفضل وتحفيزا كيميائيا لاستخدامه في أبحاث التاكسي الكهربائي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الدراسات انجذاب كهربي من الرئة خلايا سرطان باستخدام القنوات المتعددة ثنائي الكهربائية الميدان ميكروفلويديك رقاقة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يشار إلى سلوك الهجرة الخلية الاتجاه في ظل المباشر التيار الكهربائي الميدان (dcEF) على أنها انجذاب كهربي. وقد تجلى دور كبير الفسيولوجية dcEF في توجيه حركة الخلية أثناء تطور الجنين، تمايز الخلايا، والتئام الجروح في العديد من الدراسات. من خلال تطبيق رقائق ميكروفلويديك لمقايسة انجذاب كهربي، هو تقصير عملية التحقيق ويتم الحد من الأخطاء التجريبية. في السنوات الأخيرة، وأجهزة ميكروفلويديك المصنوعة من المواد البوليمرية (على سبيل المثال، البولى، PMMA، أو الاكريليك) أو (PDMS) polydimethylsiloxane استخدمت على نطاق واسع في دراسة ردود الخلايا لالتحفيز الكهربائي. ولكن، على عكس العديد من الخطوات اللازمة لصنع جهاز PDMS، وبناء بسيط وسريع للالصغرى الاكريليك فلوريدا رقاقة uidic يجعلها مناسبة لكلا النماذج الجهاز والإنتاج. إلا أن أيا من الأجهزة وذكرت تسهيل دراسة كفاءة المادة الكيميائية وهندسة المدنية في وقت واحدالآثار و على الخلايا. في هذا التقرير، وصفنا لدينا تصميم وتصنيع والمتعددة القائمة على الاكريليك المزدوج الكهربائي الميدان (MDF) رقاقة لدراسة تأثير المتزامنة الكيميائية والتحفيز الكهربائي على خلايا سرطان الرئة. يوفر رقاقة MDF ثماني مجموعات من التحفيز الكهربائية / الكيميائية في اختبار واحد. رقاقة ليس فقط يقصر كثيرا من الوقت تجريبي مطلوب ولكن أيضا يزيد من دقة في انجذاب كهربي الدراسات.
المقدمة
يشار إلى سلوك الخلايا الملتصقة تتحرك باتجاه القطب الموجب أو السالب تحت المباشر التيار الكهربائي الميدان (dcEF) على أنها انجذاب كهربي. سلوك electrotactic الخلايا يلعب دورا هاما في تكوين الجنين، وتجديد الأعصاب، والتئام الجروح. وقد أظهرت 1 الخلايا السرطانية مثل خلايا سرطان البروستاتا الفئران، الخلايا السرطانية 2 الثدي، 3 والرئة خلايا غدية 4-8 الحركة electrotactic تحت dcEF تطبيقها . وقد تم قياس EF الفسيولوجية في أنسجة الغدة. كما تم الإبلاغ عن 9،10 انجذاب كهربي في الخلايا السرطانية، الغدة المرتبطة بها. 2،3 مجتمعة، ويعتبر انجذاب كهربي للخلايا السرطانية أن يكون عاملا ور....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. تصميم وتصنيع رقاقة MDF
- رسم نمط طبقة الاكريليك الفردية باستخدام البرمجيات التجارية، مثل أوتوكاد، وحفظ النمط.
- إعادة النظر في تصميم نمط ورقة الاكريليك أربعة الطبقات في الشكل 1A وتأكيد الروابط بين طبقة.
- افتعال كل أوراق الأكريليك والشريط على الوجهين من قبل الاستئصال بالليزر باستخدام الليزر الناسخ CO 2 (أرقام 1B، 2A، ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تصنيع وتجميع الجهاز MDF
ويظهر رسم تخطيطي للMDF رقاقة الاكريليك ومقرها في الشكل 1A. استخدمت أربع صفائح الاكريليك والزجاج غطاء واحد، 13 محولات الاكريليك، وقطعة من الشريط على الوجهين في التجمع من الشريحة MDF الانتهاء (الشكل 2D). هناك أربعة فقط من خلال القنوات ثقافة مستقلة في الجهاز MD.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وجدنا عملية الانضمام محولات الاكريليك على طبقة 1 من الشريحة MDF إلى أن تكون خادعة. تطبيق فقط 1-2 ميكرولتر من الغراء سوبر كافية وثبتك على محول على رقاقة MDF. أدت كميات أكبر من الغراء في بلمرة غير مكتملة من الغراء عظمى، وعدم الالتزام. مرة واحدة تم الالتزام محولات الاكريليك بشدة على رقاقة MDF، ونادرا ما حدث تسرب السائل في نظام ميكروفلويديك. وبالإضافة إلى ذلك، ساعدت O / N الحضانة داخل فراغ الغرفة لإزالة الهواء المحبوس بين الشريط على الوجهين / الغطاء الزجاجي أو على الوجهين واجهة ورقة ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.
شكر وتقدير
هذا العمل مدعوم ماليا من قبل وزارة العلوم والتكنولوجيا في تايوان (رقم العقد. MOST 103-2113-M-001 -003 -MY2) وبرنامج البحث في علوم النانو وتكنولوجيا النانو ، أكاديميا سينيكا ، تايوان.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي > كاشف < / قوي > | |||
| DMEM متوسط | جيبكو ، إنفيتروجين ، الولايات المتحدة الأمريكية | 12800-017 | |
| مصل الأبقار الجنيني | جيبكو ، إنفيتروجين ، الولايات المتحدة الأمريكية | 16000-044 | |
| التربسين | جيبكو ، إنفيتروجين ، الولايات المتحدة الأمريكية | 25200-072 | |
| PBS | الحياة الأساسية | BL2651 | |
| Y-27632 (هيدروكلوريد) | كايمان كيماويات 10005583 | ||
| agarose | LONZO ، الولايات المتحدة الأمريكية | SeaKem LE AGAROSE | |
| حقنة | Terumo | 3 مل مع Luer تفتق | |
| 3 اتجاهات محبس | Nipro | مع Luer تفتق | |
| PMMA (أكريليك) | HiShiRon Industries CO. ، Ltd ، سمك تايوان | 1 مم ، | |
| محول أكريليك | 2 مم KuanMin Technology Co.، Ltd ، تايتشونغ ، تايوان | 1 / 4-28 ميناء ، 10x10x6 مم | الجوز المخصص |
| Thermo Fisher Scientific Inc. | أبتشيرش: P-206x ، P-200x ، F120x ، P-659 ، P-315x | ||
| غطاء مجهر | زجاجي Deckgl & auml ؛ ser, ألمانيا | 24x60 مم | |
| شريط على الوجهين | 3M | PET 8018 | |
| سوبر الغراء | 3M | سكوتش السائل بالإضافة إلى سوبر الغراء | |
| TFD4 منظف | فرانكلاب ، فرنسا | TFD4 | |
| بالموجات فوق الصوتية ستيري الأنظف | LEO ULTRASONIC CO., LTD., Taiwan | ||
| Thermo bonder | KuanMin Technology Co., Ltd, Taichung, Taiwan | مخصص | |
| CO2 ليزر كاتب | LTT مجموعة ، تايوان | ISL-II | |
| المشتق النسبي التكاملي (PID) وحدة التحكم | JETEC للإلكترونيات المحدودة ، Japen | TTM-J40-R-AB ، | |
| المزدوجة الحرارية من النوع K | TECPEL | TPK-02A | |
| مضخة حقنة 4 قنوات | KdScientific ، الولايات المتحدة الأمريكية | 250P | |
| DC امدادات الطاقة | GWInstek ، تايوان | ||
| محرك XYZ | TanLian ، E-O Co. Ltd. ، تايوان | مجهر | |
| أوليمبوس ، اليابان | CKX41 | ||
| Canon ، اليابان | 60D |
المراجع
- McCaig, C. D., Rajnicek, A. M., Song, B., Zhao, M. Controlling cell behavior electrically: current views and future potential. Physiol Rev. 85, 943-978 (2005).
- Djamgoz, M. B. A., Mycielska, M., Madeja, Z., Fraser, S. P., Korohoda, W.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
