Method Article

تتبع وقياس العمليات التنموية في C. ايليجانس استخدام أدوات المصدر المفتوح

DOI:

10.3791/53469

⸱

December 16th, 2015

 ,  ,  ,  , 
1Buchmann Institute for Molecular Life Sciences and Institute of Biochemistry II, School of Medicine, Goethe University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا يتم توضيح كيفية تتبع وقياس العمليات التنموية في C. ايليجانس. تعتمد الطرق المقدمة على أدوات مفتوحة المصدر يمكن تنفيذها بسهولة. يتم توضيح كيفية إعادة بناء نماذج شكل خلية ثلاثية الأبعاد ، وكيفية تتبع الهياكل الخلوية يدويا ، وكيفية تحليل التدفق المقلص القشري.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التقاط كميا العمليات التنموية أمر بالغ الأهمية لاستخلاص النماذج الميكانيكية والمفتاح لتحديد ووصف الظواهر متحولة. هنا يتم عرض بروتوكولات لإعداد الأجنة وC. الكبار ايليجانس الحيوانات لقصيرة وطويلة الأجل الوقت الفاصل بين المجهر وطرق تتبع وتقدير من العمليات التنموية. الأساليب المقدمة تستند فقط على C. سلالات ايليجانس المتاحة من مركز علم الوراثة انواع معينة وعلى البرمجيات مفتوحة المصدر التي يمكن تنفيذها بسهولة في أي مختبر مستقل عن نظام المجهر المستخدمة. A إعادة بناء نموذج 3D خلية الشكل باستخدام IMOD نماذج البرمجيات، وتتبع اليدوي الهياكل التحت خلوية fluorescently المسمى باستخدام متعددة الأغراض برنامج تحليل الصور Endrov، وتحليل تدفق مقلص القشرية باستخدام PIVlab (حل الزمن الرقمي الجسيمات صورة Velocimetry وأظهرت أداة لMATLAB). تم مناقشته كيف يمكن أيضا أن يتم نشر هذه الأساليب رس التقاط كميا العمليات التنموية الأخرى في نماذج مختلفة، على سبيل المثال، تتبع الخلايا والنسب تتبع، تتبع تدفق الحويصلة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مع التحسن المطرد من البروتينات الفلورية، والهندسة الجينية، المجهر الضوئي، والبرنامج التشغيلى الكمبيوتر والأجهزة، أصبح من الممكن الآن لتسجيل تطوير العديد من الكائنات النموذجية في القرار المكانية والزمانية لم يسبق له مثيل. هذا يسمح للباحثين لطرح الأسئلة التي لا يمكن معالجتها سابقا أو لإعادة النظر في العمليات التنموية المعروفة من أجل البحث عن الجوانب تجاهلها. وأثار هذا التقدم في مجال البيولوجيا التطورية الكمي، الذي يهدف إلى تحويل، ونماذج رسمية النوعية في النماذج الكمية التي كتبها قياسات دقيقة والتحليلات الإحصائية.

جعلت خلايا تتبع والهياكل التحت خلوية من الممكن اس....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إعداد C. ايليجانس الأجنة عن الوقت الفاصل بين المجهري باستخدام بلي

  1. نقل الديدان البالغة حامل باستخدام معول دودة (سلك البلاتين) إلى قطرة من العازلة M9 وتنظيف قبالة البكتيريا عن طريق أولا تهييج بقوة ومن ثم نقل كل الدودة إلى انخفاض المجاور M9 باستخدام السوط العين التي شنت على اختيار الأسنان / ماصة أو استخدام الزجاج الشعرية أشار.
  2. تمييع تشتت تحتوي على 20 ميكرومتر الخرز قطر البوليسترين 10 أضعاف في M9 العازلة (يحتوي على 1 L M9 عازلة 3 ز KH 2 PO 4 و 6 ز نا

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باستخدام بروتوكولات 2، 3، و 4، والتصوير الوقت الفاصل بين الغدد التناسلية في البرية من نوع C. ايليجانس يتم تنفيذ البالغين (سلالة OD58 (UNC-119 (ED3) الثالث؛ ltIs38 [pAA1؛ فطيرة-1 :: :: GFP PH (PLC1delta1) + UNC-119 (+)])، معربا عن علامة الغشاء من المروج سلالة الجرثومية ). التركيز على منعطف من الغدد التناسلية، يتم إنشاء نموذج 3D من الخلايا الجرثومية من البيانات المجهري (الشكل 2). هذا النموذج يسمح لتحليل التغيرات في حجم الخلية في حين عبور خلايا تشكل البعيدة .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

من خلال تتبع الكائن في التنمية ولا سيما تتبع النووي، كان، فإنه من الممكن توضيح الآليات الزخرفة المركزية للC. ايليجانس مرحلة التطور الجنيني 1،23،24. توسيع هذه الاستراتيجية إلى ارتفاع الإنتاجية، فقد كان من الممكن مؤخرا للكشف عن قواعد الزخرفة إضافية واقتراح الأسلوب كيفية استخلاص قواعد الزخرفة دي نوفو 10. بالنسبة لكثير من المسوخ، ومع ذلك، فإن العيوب الزخرفة الدقيقة لا تزال غير معروفة. الأساليب المذكورة هنا هي الأدوات التي يمكن أن تكون مفيدة في ت.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم تمويل البحث في مختبر الإنتاج الأنظف من قبل Deutsche Forschungsgemeinschaft (EXC 115; FOR 1756) ومجموعة أبحاث LOEWE شبكات Ubiquitin. ويحظى البرنامج الأنظف بدعم إضافي من البرنامج الإطاري 7 للاتحاد الأوروبي (مشروع أعمال ماري كوري 326632).

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
مجهر ستيريوMotic / VWROT4005Sمجهر ستيريو لتشريح وتركيب
Polybead Polystyrene المجهرية ،   ؛علوم متعددة18329تركيب الأجنة
20 & م
كريات البوليسترين المجهرية ،   ؛Polysciences876تصاعد البالغة
0.1 & micro; m
شرائح المجهرVWR 631-0902تركيب البالغة
غطاء زجاجي 18x18 ممVWR631-1331تركيب الأجنة / البالغين
غطاء زجاجي 24x60 ممVWR631-1339تركيب الأجنة
مشرطVWR233-5455تشريح الأجنة
أنابيب سيليكونVWR228-1501أنابيب لماصة الفم
30 مم مرشح غشاء PTFENeoLabJul-01مرشح لماصة الفم
أنابيب الشعيرات الدمويةVWR621-0003طرف ماصة الفم
الفازلينروثE746.1تركيب الجنين / البالغين
أجارروث5210.5تصاعد البالغة
البوتاسيوم ثنائي هيدروجينفوسفات روثP018.2M9 عازلة
ثنائي الصوديوم - فوسفات الهيدروجينروثP030.2M9 عازلة
كلوريد الصوديومروث3957.1M9 عازلة
VisiScope الغزل قرص نظام متحد البؤرأنظمة VisitronN / Aالفحص المجهري متحد البؤر

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. The embryonic cell lineage of the nematode Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 100 (1), 64-119 (1983).
  2. Kimmel, C. B., Warga, R. M. Tissue-specific cell lineages originate in the gastrula of the zebrafish. Science.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

C Elegans Developmental BiologyTime lapse MicroscopyOpen source Software3D Cell Shape ModelingFluorescent TrackingParticle Image VelocimetryCortical Contractile FlowCell Lineage TracingVesicle Flow TrackingQuantitative Image Analysis

Related Articles