يظهر هذا الفيديو إجراء بضع القحف الذي يسمح بالتصوير المزمن للخلايا العصبية في قشرة خلف الطحال للفأر باستخدام الفحص المجهري للفوتون في الجسم الحي في الخط المعدل وراثيا Thy1-GFP. يتم الجمع بين هذا النهج مع حقن الفيروس المرتبط بالغدة المعبر عن mCherry في الحصين الظهري. تسمح هذه التقنيات بمراقبة طويلة الأمد للدونة الهيكلية المعتمدة على الخبرة في RSC.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في وقت واحد ثنائي الفوتون
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يظهر هذا الفيديو إجراء حج القحف الذي يسمح بالتصوير المزمن للخلايا العصبية في قشرة خلف الطحال للفأر (RSC) باستخدام الفحص المجهري ثنائي الفوتون في الجسم الحي في خط الفأر المعدل وراثيا Thy1-GFP. يخلق هذا النهج إمكانية للتحقيق في ارتباط التلاعب السلوكي بالتغيرات في مورفولوجيا الخلايا العصبية في الجسم الحي.
اعتبر إجراء زرع النافذة القحفية يقتصر فقط على مناطق القشرة التي يسهل الوصول إليها مثل حقل البرميل. يسمح نهجنا بتصور الخلايا العصبية في RSC شديد الأوعية الدموية. RSC هو عنصر مهم في دائرة الدماغ المسؤولة عن الذاكرة المكانية ، والذي كان يعتبر سابقا مشكلة في التصوير ثنائي الفوتون في الجسم الحي.
يتم دمج زرع النافذة القحفية فوق RSC مع حقن الفيروس المؤتلف المرتبط بالغدة (rAAVmCherry) في الحصين الظهري. ينتشر mCherry المعبر عنه إلى الإسقاطات المحورية من الحصين إلى RSC ، مما يتيح تصور التغييرات في كل من العروات المحورية قبل المشبكية والعمود الفقري التغصني بعد المشبكي في القشرة.
تسمح هذه التقنية بمراقبة طويلة الأمد للدونة الهيكلية المعتمدة على الخبرة في RSC.
المقدمة
ثورة ثنائي الفوتون المجهري مراقبة نشاط الدماغ في العيش والتصرف الحيوانات. منذ إطلاقها في عام 1990 وسرعان ما اكتسب شعبية ويتم تنفيذه الآن واحدة من الطرق الأكثر إثارة للاهتمام ومبتكرة من أجل النظر في جوانب عديدة من نشاط الدماغ في الجسم الحي 1،2. وتشمل هذه التطبيقات قياس تدفق الدم، وتنشيط الخلايا العصبية (على سبيل المثال، وذلك باستخدام مؤشرات مستوى الكالسيوم أو الجينات في وقت مبكر فورية التعبير) ومورفولوجيا الخلايا العصبية. عدد متزايد من المختبرات استخدام المجهر ثنائي الفوتون، وتنفيذ تقنية في جميع أنحاء العالم العلمي كمعيار جديد للتصوير في الجسم الحي الدماغ.
ينطوي على نهج موحد زرع نافذة في الجمجمة (حفرة مستديرة في الجمجمة مغطاة غطاء زجاجي) على برميل أو القشرة البصرية في الدماغ الماوس 3. المقبل، اعتمادا على بروتوكول التجريبية، ومذكرة التفاهمحد ذاته يخضع لسلسلة من التصور والدورات التدريبية السلوكية، مما يسمح لرصد التغيرات في نشاط الدماغ ومورفولوجيا الخلايا العصبية على مر الزمن 4،5. في كلتا الحالتين يؤثر على حج القحف فقط العظم الجداري، دون عبور الغرز. ويعتقد إلى حد كبير أن العيب الرئيسي لهذه التقنية هو التطبيق المحدود لاللحاء يمكن الوصول إليها بسهولة مثل برميل أو القشرة البصرية. زرع نافذة في الجمجمة على مناطق أخرى يطرح الكثير من الصعوبات، بسبب النزيف و / أو إعاقة المكاني.
في هذه الورقة نقترح زرع نافذة في الجمجمة فوق قشرة خلف الطحال (RSC)، ومنطقة أخرى ممكنة من الفائدة لمدة الفوتون في الجسم الحي المجهري 6. RSC هو عنصر هام من الدائرة الدماغ المسؤولة عن تكوين الذاكرة المكانية. تشريحيا، RSC هو جزء من شبكة الخلايا العصبية التي تربط القشرية، الحصين، والمناطق مهادي 7. أنهشارك بقوة في مجموعة من السلوكيات، مثل التعلم المكاني والانقراض وكذلك الملاحة الفضائية 6.
من أجل تصور التغيرات المورفولوجية من الخلايا العصبية التي نستخدمها خط الماوس المعدلة وراثيا التعبير عن بروتين الفلورية الخضراء (GFP) تحت المروج thy1. في هذه الفئران، ويتم التعبير عن GFP في ما يقرب من 10٪ من الخلايا العصبية في الدماغ مما يسمح لتصور واضح للمحاور القشرية والتشعبات باستخدام اثنين من الفوتون المجهري 8. آخر الابتكارات التي نقترحها هي حقن المؤتلف الغدة المرتبطة المصلي فيروس 2/1 (rAAV2 / 1) الترميز بروتين أحمر فلوري (mCherry) تحت الخلايا العصبية المحددة كمكي المروج 9 في هياكل العميقة من الدماغ إسقاط لRSC ، مثل الحصين. التعبير عن rAAV2 / 1 mCherry في حصين الماوس Thy1-GFP يسمح لتصور في وقت واحد من العناصر قبل وبعد المشبكي من hippocampo-corticaل نقاط الاشتباك العصبي 10. التعبير مدفوعة rAAV من mCherry يتطلب 2-3 أسابيع للبروتين لتصل إلى مستوى كاف في محطات محور عصبي. هذه الفترة هي متسقة مع الوقت المعتاد المطلوبة للانتعاش من حج القحف.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد وافق جميع الإجراءات التجريبية المبينة أدناه من قبل لجنة الأخلاقية المحلية في معهد نينكي البيولوجيا التجريبية، أكاديمية العلوم البولندية.
ملاحظة: يتم تسارع بعض المشاهد في الفيديو المرتبطة. يشار عامل السرعة في هذه المشاهد.
1. جراحة التحضير
- تعقيم جميع الأدوات والعبوات الزجاجية للسوائل ومسحات القطن في الأوتوكلاف. استخدام قفازات يمكن الاستغناء عنها. تنظيف طاولة الجراحة، والإطار التجسيمي وجميع المناطق المحيطة بها مع 70٪ من الإيثانول. استخدام وسادة الجراحية المعقمة لخلق مساحة معقمة لجميع المعدات المعقمة. قطع جلفوم إلى قطع صغيرة وينقع في محلول ملحي.
ملاحظة: وفقا لدليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، الإيثانول يست المعقمات ولا مطهر رفيع المستوى. وينبغي أن تستخدم فقط كعامل تنظيف / defatting على الأسطح تعقيم سابقا. - وضع الحيوان في الالبريد غرفة تحريض وتعيين مستوى الأيزوفلورين إلى 5٪ وتدفق الأوكسجين إلى 2 لتر / دقيقة. هذا الإجراء ينبغي أن يستغرق حوالي 3 دقائق.
- خذ الحيوان من غرفة تحريض. استخدام الذيل أو أخمص القدمين القرصات من أجل التأكد من أن الحيوان مخدرا تماما.
- باستخدام الانتهازي الدقيق يحلق الشعر من مؤخرة الرأس (بين الأذنين) ما يصل الى العينين.
- وضع الحيوان في إطار التجسيمي وتحقيق الاستقرار في الرأس بقضبان الأذن.
- تحديد مستويات التخدير إلى 1.5-2٪ الأيزوفلورين و 0.3 لتر / دقيقة الأكسجين.
- تطبيق مرهم العين.
- حقن تحت الجلد الحيواني مع Tolfedine (4 ملغ / كلغ)، Butomidor (2 ملغ / كلغ) وBaytril (5 ملغ / كلغ) لمنع التهاب والألم والعدوى، على التوالي.
- حقن في العضل الحيوان مع ديكساميثازون (0.2 ملغ / كلغ) لمنع تورم الدماغ.
ملاحظة: من الممكن لحقن ديكساميثازون تحت الجلد أو داخل الغشاء البريتونى لمنع تلف العضلات. - تنظيف الجلد باستخدام الصورةمسحات القطن terile مع Betadine تليها 70٪ من الإيثانول.
- تغيير القفازات وترشها مع 70٪ من الإيثانول.
ملاحظة: أثناء استخدام القفازات القابل للتصرف لا تلمس المجال المعقم. لمس الحيوان فقط مع نصائح من الأدوات الجراحية المعقمة ومسحات معقمة.
جراحة 2. الجمجمة النافذة
- رفع الجلد مع ملقط واستخدام المقص الصغير شق الجلد أفقيا على طول قاعدة من الرأس ومن ثم بشكل غير مباشر إلى النقطة الأمامية بين العينين. إزالة رفرف الجلد.
- تطبيق يدوكائين مرهم مع مسحة معقمة على السمحاق لمنع النزيف والألم.
- استخدام قطعة قطن معقمة أو مشرط لإزالة السمحاق. تجفيف الجمجمة مع مسحات معقمة.
- باستخدام إبرة معقمة تطبيق كثيفة الغراء cyanoacrylate على حواف الجلد لشل حركة لهم، ومنع من الاتصال مع الاسمنت الأسنان. انتظر الغراء لتجف.
- وضع العقيمة ساترة 3 مم أنحاء رانه الجمجمة الأمامية إلى الدرز اللامي. توسيط ساترة في RSC تنسق: AP، bregma -2.8. ML، bregma 0. كافة حواف ساترة من خدش سطح الجمجمة بإبرة معقمة. وضع ساترة مرة أخرى في حاوية معقمة مع 70٪ من الإيثانول.
- استخدام حفر الأسنان عالية السرعة مع لدغ قطرها صغير لوضع الخطوط العريضة لدائرة قطرها 3 مم. تنظيف موقع الحفر من الغبار العظام مع ملحي معقم مسحات تراجع. استخدام جلفوم ومسحات لوقف النزيف في بعض الأحيان وتنظيف العظام.
- بين الحفر فحص سماكة العظام مع ملقط غرامة عن طريق لمس بلطف دائرة العظام وفحص التنقل به. نضع في اعتبارنا أن العظام هي أكثر سمكا في منطقة خياطة و. وقف الحفر عند دائرة العظام هي النقالة وتركت فقط حتى، طبقة رقيقة من العظم على محيط. تنظيف الميدان العملي من كل الغبار العظام المتبقية مع المياه المالحة انخفض مسحات.
- إسقاط ملحي معقم على منطقة الحفر، والتي تغطي سي آي آر حفرشركة كلي. بعناية نقب دائرة العظام مع ملقط غرامة ثم بلطف ولكن بحزم إزالة العظام من خلال رفع لأعلى. يجب الحرص على عدم تحريف دائرة العظام في حين رفع لمنع الضرر المحتمل لالجافية.
- بلطف تطبيق جلفوم غارقة في المياه المالحة عقيمة على الجافية للمساعدة في وقف النزيف. انتظر حتى يتم إيقاف جميع النزيف تماما. إزالة بعناية جلفوم لا تعكر صفو عملية التخثر.
ملاحظة: المنطقة خياطة هي أوعية دموية للغاية، وبالتالي فإن النزيف في هذه المرحلة قد يثبت أن تكون عميقة. لا بد من الانتظار لوقت كاف للنزيف لوقف تماما. ومن المفيد للحفاظ على جلفوم غارقة في المياه المالحة المبردة عن طريق وضعه على الجليد.
3. الفيروسات حقن
- إرفاق مضخة التسريب إلى برج المجسم وربط وحدة تحكم.
- ادخال الإبرة 35G في حقنة. تدفق الحقنة 10 مرات مع الإيثانول لتعقيمها و 10 مرات مع ملحي معقم لإزالة آثار هthanol. إزالة فقاعات الهواء من الحقنة. إدراج الحقنة في مضخة.
ملاحظة: النظر في استخدام المطهرات الأخرى. - ذوبان الجليد جرعة واحدة من rAAV2 / 1 إعداد mCherry (ينصح 10 12 PFU) والحفاظ على الجليد. ملء المحاقن مع الحل فيروس.
- توسيط إبرة على bregma ثم تضاف برفق في قرن آمون باستخدام الإحداثيات التالية: AP -2، ML +/- 1.0، DV -1. وسيكون مقر هذه الإحداثيات بالقرب من حافة حج القحف. الانتظار لمدة 5 دقائق للأنسجة لتحقيق الاستقرار.
- ضخ 0.7 ميكرولتر من الحل mCherry rAAV2 / 1 بمعدل 50 نيكولا لانغ / دقيقة. انتظر 10 دقيقة للفيروس إلى كثف تماما. إزالة بلطف الإبرة. وصمة عار مع جلفوم في حالة حدوث نزيف. كرر مع الموقع المقابل.
4. الجمجمة النافذة زرع
- وضع العقيمة، ساترة المجففة على رأس الجافية في إطار دائرة حفر. عقد ساترة مع forcالعائد على السهم إلى تتسطح بلطف الجافية وجلب ساترة 'حواف أقرب إلى سطح الجمجمة.
ملاحظة: من الممكن أن ساترة يعطل جلطة ونزيف السير الذاتية. إذا كان هذا هو الحال، ورفع ساترة، وضعه في الكحول وجافة والعودة إلى الخطوة 2.9. - باستخدام إبرة معقمة تطبيق الغراء cyanoacrylate كثيفة على حواف ساترة لضمها إلى الجمجمة. انتظر الغراء لتجف.
- وضع شريط التثبيت (الجوز M2 أو تصميم حسب الطلب) في الجزء الأمامي من الجمجمة. تطبيق الغراء cyanoacrylate على حواف العارضة. انتظر الغراء لتجف.
- وضع شريط التثبيت في المنصب الذي سيمكن وضع أفقي من نافذة في الجمجمة أثناء التصوير الدورة. وضعه بعيدة قدر الإمكان من النافذة. إذا ما وضعت قريبة جدا من النافذة، ونقابة المحامين، والمسمار الذي يربط مع صاحب العرف قد تشكل عائقا لتحقيق الهدف أثناء عملية التصوير.
إعداد الاكريليك الأسنان وتطبيقه على سطح الجمجمة حول الزجاج. ومن المفيد لتشكيل شكل يشبه فوهة البركان حول النافذة. فإنه سيتم إنشاء تجويف للمياه تطبيقها في وقت لاحق للتصوير مع الهدف المياه. - إنشاء سقف مع الاكريليك الأسنان التي تغطي باقي المساحة التشغيلية، وحواف الجلد، شريط التثبيت، وتعزيز الحفرة حول نافذة في الجمجمة. انتظر الاسمنت الأسنان لتتصلب.
- إزالة الحيوان من الإطار التجسيمي ووضعها في غرفة الإنعاش.
- الانتظار للحيوان للتعافي من الجراحة مع مراعاة الوظائف الفسيولوجية.
- تطبيق تسكين بعد العملية (كاربروفين، 10 ملغ / كلغ) والعلاج المضادات الحيوية (baytril، 5 ملغ / كلغ) لمدة 48 ساعة.
5. التصوير
- بدء تي: ليزر الياقوت، قوة تصل المجهر. وقد تم تجهيز النظام المستخدم في هذه التجربة مع ليزر ثنائي الفوتون، نظام OPO والمزدوج PMT GaAsP.
- وضع الحيوان في inducغرفة نشوئها وإحداث التخدير.
- إزالة الحيوان من غرفة تحريض ومكان في قناع التخدير الغاز تحت المجهر. انخفاض تدفق الأكسجين إلى 0.3 لتر / دقيقة وتركيز الأيزوفلورين إلى 1.5-2٪.
- إصلاح الحيوان إلى الإطار المجهر مخصصة مع المسمار M2 (أو نظام مخصص آخر). مستوى النافذة في الجمجمة.
ملاحظة: من الممكن استخدام نظام رئيس تثبيت الصانع المجهر، على الرغم من أن إطار مخصص محدد يعطي نتائج أفضل (تحسين الاستقرار الرأس، وتحديد المواقع المستمر في جلسات متعددة خلال تجربة المزمنة). - باستخدام إعدادات المجهر widefield وانخفاض مركز موضوعي التكبير وجهة النظر على أحد جانبي القشرة خلف الطحال والتركيز على سطح ساترة.
- تطبيق قطرة من الماء في البئر الاكريليك تشبه فوهة البركان. التحول إلى هدف غمر المياه لمسافات طويلة. نقل الهدف نحو النافذة الجمجمة حتى يخدع الغضروف المفصلي المياهnects العينة والهدف.
- التبديل إلى إعدادات ثنائي الفوتون والبدء في مسح رأس العينة إلى أسفل باستخدام أدنى التكبير. سوف عبور جافية تكون واضحة كما مرأى ومسمع من ارتفاع في إشارة غير محددة.
- ضبط إعدادات اكتساب المجهر في كل قنوات (GFP وmCherry) وفقا لقوة الإشارة من الخلايا فلوري من أجل تغطية النطاق الديناميكي بأكمله.
- بعد العثور على الخلايا العصبية مناسبة (مع الشجرة شجيري فصلها عن الخلايا الأخرى) إجراء المسح الأولي فقط باستخدام filterset GFP مع أدنى التكبير وض مسافة 5 ميكرون.
- الحصول على إسقاط الحد الأقصى لكومة الممسوحة ضوئيا وطباعته الشروح (باستخدام الألوان المقلوب).
- ضبط التكبير إلى قيمة من شأنها أن تسمح لصورة تفاصيل الشكلية المطلوبة. صورة الشجرة شجيري كامل في قنوات GFP وmCherry باستخدام الحد الأقصى إسقاط كدليل.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
التعبير عن GFP في مجموعة فرعية من الخلايا العصبية في مراسل الماوس Thy1-GFP يسمح في التصوير المجراة من التشعبات القشرية والتوقعات محور عصبي المحلية في RSC. ويبين الشكل 1A أقصى الإسقاط من كومة من الصور مع العديد من التشعبات GFP إيجابية واضحة. تحجب خلايا الجسم عن طريق الشريان. ويبين الشكل 1B صورة أسرع طائرة واحدة (تقريب رقمي 3X) من فرع شجيري مبين في 1A. تفاصيل التشكل شجيري (العمود الفقري، أرجل ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذه الورقة نقدم بروتوكول لفي وقت واحد ثنائي الفوتون في التصوير المجراة من مدخلات متشابك والأهداف بعد المشبكي في RSC من خلال نافذة في الجمجمة. تتكون إجراء زرع عدة خطوات رئيسية. أولا، هذا الحيوان هو تخدير عميق وثابت في إطار المجسم، ومن ثم ضعفت الجمجمة على RSC مع حفر على طول خطوط دائرية ملحوظ وإزالة العظام دائري. بعد توقف النزيف، يتم حقن rAAV2 / 1 mCherry في الحصين، ويتم إصلاح الغطاء الزجاجي في الجمجمة على منطقة حفر. وأخيرا يتم تأمين شريط التثبيت على ا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب (KL، MR، KR) لديها حقوق لبراءات الاختراع في انتظار (PL410001) لإطار حامل المستخدمة في هذه المادة.
شكر وتقدير
فإن الكتاب أود أن أشكر السيد Steczkowski لتسجيلات صوتية، M. Borczyk للرسومات، A. Trąbczyńska لإنتاج الفيروس، M. Ziókowska عن التنميط الجيني وA. Mirgos للحصول على المساعدة مع التصوير. KR يعترف هدية النوع من الفيروس المؤتلف الغدة المرتبطة (rAAV) التعبير عن بروتين فلوري mCherry تحت سيطرة المروج CaMK من K. Deisseroth. تم تنفيذ هذا المشروع في المرافق الأساسية من مختبر النماذج الحيوانية ومختبر بنية الأنسجة وظيفة، مركز علم الأعصاب، معهد نينكي علم الأحياء التجريبي، مع استخدام البنية التحتية CEPT بتمويل من الاتحاد الأوروبي - صندوق التنمية الإقليمية الأوروبي في البرنامج التشغيلي "المبتكرة الاقتصاد" للفترة 2007-2013. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المركز الوطني للعلوم: سوناتا مكرر 2012/05 / E / NZ4 / 02996، هارمونيا 2013/08 / M / NZ3 / 00861، Symfonia 2013/08 / W / NZ24 / 00691 لKR وسوناتا مكرر 2014 / 14 / E / NZ4 / 00172 لRC
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي>دواء< قوي> | |||
| إيزوفلوران | باكستر | AErrane 8DG9623 | 5-2٪ قبل الجراحة |
| Isoflurane | Baxter | AErrane 8DG9623 | 1.5-2٪ أثناء الجراحة |
| ديكساميتازون | فحص الطبيب البيطري | ديكساسون 2 مجم / مل | 0.2 مجم / كجم في العضل |
| Baytril | Bayer | 2.50٪ | 5 مجم / كجم تحت الجلد |
| تولفيدين | فيتوكينول | 4٪ | 4 مجم / كجم تحت الجلد |
| بوتوميدور | ريختر فارما | 10 مجم / مل | 2 مجم / كجم تحت الجلد |
| كاربروفين | KRKA-Polska | Rycarfa 50 مجم / مل | 10 مجم / كجم تحت الجلد |
| ليدوكائين | Jelfa | Lignocainum | موضعيا |
| ليدوكائين | جلفا | 20 مجم / جم | موضعيا |
| <قوي>الجراحة< / قوي> | |||
| Gelfoam | Ethicon | Spongostan الأسنان ؛ REF MS0005 | |
| مرهم العين | Dedra | Lubrithal | موضعيا |
| CA الغراء | Pelikan Daniel | 20G Huste | |
| أكريليك الأسنان | SpofaDental | Duracryl Plus | |
| إطار مجسم | Stoelting | 51500D | |
| < قوي > أداة < / قوي > | |||
| غطاء | هارفارد جهاز | HSE-64-0720 | 3 مم |
| مثقاب الأسنان | Sigmed | Keystone KVet | |
| شريط تثبيت | مصنوعة حسب الطلب N / A | M2 أو M3 يمكن استخدام | |
| الملقط | Renex | PN-7B-SA | |
| مقص صغير | Falcon | BM.183.180 | |
| تشريح مجهر | KOZO | XTL6445T | |
| إطار <قوي > تصوير < / قوي > | |||
| حامل | مخصص مجهر | ثنائي | |
| الفوتون | Zeiss | تستقيم Axio Examiner Z1 | وحدة الليزر: حرباء متماسكة 690-1040 نانومتر مع مذبذب بصري بارامتري 1050-1300 نانومتر. الأهداف: EC-PLAN-NEUFLUAR 10x / 0.1 و LD Plan-APOCHROMAT 20x / 1.0. الكشف: مرشحات ممر النطاق الترددي Zeiss BP 500-550 (GFP) و BP 570-610 (mCherry) مفصولة بفاصل شعاع عند 560 نانومتر ومقترنة بكاشفين ضوئيين GaAsP. |
| <قوي > كاشف < / قوي > | |||
| هدية من K. Deisseroth | الفيروس المؤتلف المرتبط بالغدة (rAAV) الذي يعبر عن البروتين الفلوري mCherry تحت سيطرة محفز CaMK |
المراجع
- Grutzendler, J., Gan, W. B. Two-photon imaging of synaptic plasticity and pathology in the living mouse brain. NeuroRx. 3, 489-496 (2006).
- Svoboda, K., Yasuda, R. Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience. Neuron. 50, 823-839 (2006).
- Trachtenberg, J. T., et al. Long-term in vivo imaging of experience-dependent synaptic plasticity in adult cortex. Nature. 420, 788-794 (2002).
- Holtmaat, A., et al. Imaging neocortical neurons through a chronic cranial window. Cold Spring Harb Protoc. 2012, 694-701 (2012).
- Chow, D. K., et al. Laminar and compartmental regulation of dendritic growth in mature cortex. Nat Neurosci. 12, 116-118 (2009).
- Czajkowski, R., et al. Encoding and storage of spatial information in the retrosplenial cortex. Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 8661-8666 (2014).
- Czajkowski, R., et al. Superficially projecting principal neurons in layer V of medial entorhinal cortex in the rat receive excitatory retrosplenial input. J Neurosci. 33, 15779-15792 (2013).
- Feng, G., et al. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28, 41-51 (2000).
- Couey, J. J., et al. Recurrent inhibitory circuitry as a mechanism for grid formation. Nat Neurosci. 16, 318-324 (2013).
- Miyashita, T., Rockland, K. S. GABAergic projections from the hippocampus to the retrosplenial cortex in the rat. European Journal of Neuroscience. 26, 1193-1204 (2007).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
