يستخدم هذا البروتوكول التثقيب الكهربائي لإدخال البروتينات المسماة بالفلورسنت والتعبير عنها في ألياف عضلات الفأر. بعد التعافي بعد التثقيب الكهربائي ، يتم عزل الألياف. ثم يتم تصوير الألياف الفردية باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر عالي الدقة لتصور بنية العضلات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
DNA Electroporation لل، عزل والتصوير من Myofibers
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
العضلات الناضجة لها بنية فريدة قابلة لتصوير الخلايا الحية. هنا ، نصف البروتوكول التجريبي للتعبير عن البروتينات المصنفة بالفلورسنت في عضلة المثنية الأصابع المقاومة (FDB). تم تحسين الظروف لتوفير عدد كبير من الألياف العضلية عالية الجودة التي تعبر عن البلازميد الكهربائي مع تقليل تلف العضلات. تستخدم الطريقة علامات الفلورسنت على البروتينات المختلفة. يسمح الجمع بين طريقة التعبير هذه والفحص المجهري متحد البؤر عالي الدقة بتصوير الخلايا الحية ، بما في ذلك التصوير بعد التلف الناجم عن الليزر. توفر الأصباغ الفلورية جنبا إلى جنب مع تصوير البروتينات الموسومة بالفلورسنت معلومات تتعلق بالتركيب الأساسي للعضلات واستجابتها للمنبهات.
المقدمة
myofibers الفردية هي خلايا المخلوي كبيرة، عالية التنظيم. هناك عدد قليل من النماذج خلية ثقافة العضلات. ومع ذلك، فإن هذه النماذج لديها كما قيدا رئيسيا على أنها لا تفرق تماما في myofibers ناضجة. على سبيل المثال، وتستمد خطوط الخلايا C2C12 وL6 من الفئران والجرذان على التوالي 1-4. في ظل ظروف المجاعة في الدم، وخلايا وحيدة النواة "شبيهة بالخلايا العضلية الجذعية" وقف انتشار الأسلحة النووية، تخضع لدورة الخلية الانسحاب، ويدخل في برنامج عضلي تشكيل خلايا متعددة النوى مع sarcomeres، ويشار إلى myotubes. مع الظروف الثقافة لفترات طويلة، قد myotubes يظهر خصائص مقلص و"نشل" في الثقافة. وقد جرى الآن أيضا إنشاء خطوط الخلايا البشرية 5. وبالإضافة إلى هذه خطوط الخلايا خلده، myoblasts وحيدات النوى يمكن عزلها عن العضلات وتحت ظروف مماثلة من الجوع الدم ستشكل myotubes. هذه خطوط الخلايا والثقافات بالخلايا العضلية الجذعية الأساسية هي استخدام عاليةفول لأنها يمكن أن تكون مع transfected البلازميدات أو transduced مع الفيروسات واستخدامها لدراسة العمليات البيولوجية الخلية الأساسية. ومع ذلك، هذه الخلايا، حتى عندما يسببها لتشكيل myotubes، تفتقر إلى العديد من الميزات البارزة لتنظيم العضلات ناضجة. على وجه التحديد، myotubes هي أصغر بكثير من myofibers ناضجة الفردية وتفتقر إلى الشكل الطبيعي للmyofibers. الأهم من ذلك، myotubes تفتقر عرضية (T-) الأنابيب، وشبكة غشائي اللازمة لكفاءة الكالسيوم 2+ إطلاق سراح جميع أنحاء هيولى عضلية.
طريقة بديلة لبالخلايا العضلية الجذعية الأولية أو خطوط الخلايا عضلي يستلزم استخدام myofibers ناضجة. ويمكن استخدام Transgenesis لإقامة التعبير عن البروتينات الموسومة، ولكن هذه الطريقة مكلفة وتستغرق وقتا طويلا. وقد برزت في الجسم الحي Electroporation للمن العضلات الماوس بوصفه الأسلوب المفضل لسرعته والموثوقية 10/06.
طرق لفي الجسم الحي Electroporation للوالعزلة الفعالة من myofibers هكتارلقد تم تحسين للماوس الباسطة للأصابع القصيرة (FDB) في العضلات 6. الأساليب يمكن أن تكتمل بسهولة وهم الغازية الحد الأدنى للحث في التعبير المجراة من البلازميدات. يتم الجمع بين هذا النهج الآن مع أساليب التصوير عالية الدقة بما في ذلك التصوير بعد انقطاع ليزر من 6،7 غمد الليف العضلي. مزيج من الأصباغ الفلورية والتعبير عن البروتينات fluorescently المسمى يمكن استخدامها لمراقبة العمليات الحيوية في الخلية myofibers ناضجة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تنفيذ الطرق في هذه الدراسة وفقا الأخلاقي مع مدرسة فاينبيرغ جامعة نورث وسترن الطب المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام (IACUC) وافق المبادئ التوجيهية. تم بذل كل الجهود للحد من المعاناة.
1. الإجراءات التجريبية في الجسم الحي Electroporation للمن المثنية القصيرة للأصابع (FDB) العضلات حزمة في ماوس
- البلازميدات تصميم لفي الجسم الحي التعبير باستخدام المروج المعروفة للتعبير في خلايا الثدييات (على سبيل المثال، الفيروس المضخم للخلايا، CMV) أو في العضلات (مثل العضلات الكرياتين كيناز، MCK) 6،7. البلازميدات أكبر قد مبديا في المستويات الدنيا. وقد استخدم المروج CMV على نطاق واسع 6،7.
- تنقية البلازميدات من E. القولونية باستخدام ظروف خالية الذيفان الداخلي في تعليمات الشركة الصانعة. حل البلازميد في العقيمة، الذيفان الداخلي العازلة TE مجانا في 2-5 ميكروغرام البلازميد / ميكرولتر.
- تمييع وقسامة البلازميد إلى concentratioن من 20 ميكروغرام من الحمض النووي في 10 ميكرولتر من الذيفان الداخلي معقمة خالية TE (2 ميكروغرام / ميكرولتر) العازلة في الحقن في أنبوب microcentrifuge العقيمة. إعداد قسامة واحدة لكل الحقن.
- تمييع الأسهم من هيالورونيداز ل1x أخرى العقيمة مع الفوسفات مخزنة المالحة دون الكالسيوم والمغنيسيوم (PBS - / -) إعطاء تركيز النهائي من 8 وحدات. قسامة 10 ميكرولتر من هيالورونيداز المخفف للحقن في أنبوب microcentrifuge العقيمة.
- تخدير الماوس باستخدام 2.5٪ الأيزوفلورين حتى مخدرا وتستجيب إلى الذيل أو أخمص القدمين معسر. وضع الحيوان في موقف ضعيف على وسادة التدفئة أو جدول التدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم العادية.
- تنظيف قاطع الطريق من الفأرة مع تطبيق بالتناوب من فرك البوفيدون اليود والكحول ثلاث مرات باستخدام تقنية الإعدادية منشؤها من موقع الإبرة ويشع إلى الخارج. تحتفظ هذه التقنية موقع الإبرة في حالة العقيم، والتقليل من العوامل المسببة للأمراض المقدمة.
- حقن قاطع الطريق من الالبريد الفأر مع 10 ميكرولتر من الحل 1X هيالورونيداز (2 ملغ / مل = 8 وحدات) بين الجلد والعضلات باستخدام معقمة 1 مل حقنة. هيالورونيداز يساعد على هضم مكونات المصفوفة خارج الخلية للسماح دخول أكثر كفاءة البلازميد إلى myofibers. أدخل في قاعدة كعب ودفع الإبرة في اتجاه أصابع القدم. الافراج عن ببطء السائل كما هو تراجع الإبرة. وموقع الحقن تحت الجلد توسيع والبدء في تحويل الوردي.
- كرر الخطوات من 1.6 و 1.7 على سفح المقابل.
- افصل التخدير ومكان الماوس مرة أخرى في قفص. السماح الماوس ليتعافى تماما من التخدير.
- الانتظار 2 ساعة.
- تكرار إجراءات التعقيم التخدير والقدم، خطوات 1.5 و 1.6.
- حقن DNA البلازميد المخفف في قاطع الطريق في نفس منوال هيالورونيداز. ضمان أن الحد الأقصى لحجم 20 ميكرولتر أو أقل. لالمزدوج التعبير البلازميد حقن 20 ميكروغرام لكل البلازميد مع الحد الأقصى لحجم 20 &# 181؛ ل أو أقل.
- تكرار حقن البلازميد على قاطع الطريق المقابل أو استخدام القدم المقابل لحقن السيطرة.
- على القدم التي تم حقن في البداية، ورفع الجلد بعيدا عن العضلات يؤكد بالملقط الجميلة ومكان واحد 27 إبرة G عن طريق الكرات من الجلد بالقرب من أصابع القدم في وضع عمودي على خط شفاء أخمص القدمين القدم. خذ الثانية العقيمة 27 G الإبرة ووضعه أفقيا من خلال الجلد في كعب. مكان الإبر موازية لبعضها البعض ~ 1 سم عن بعضها البعض.
- استخدام المشابك التمساح، أسلاك المشبك إلى الإبر موازية التأكد من الإبر عدم الاتصال بعضها البعض. استخدام الصلصال يمكن تأمين المشابك في المكان.
- توصيل الأقطاب الكهربائية إلى التحفيز والتشجيع والكهربائية.
- Electroporate العضلات عن طريق تطبيق 20 البقول، 20 ميللي ثانية في مدة / لكل منهما، في 1 هرتز، 100 V / سم. أصابع القدم قد نشل مع التحفيز.
- كرر الإجراء التحفيز على سفح المقابل إذا لزم الأمر.
- إزالة الإبر. مسح قاطع الطريق مع البوفيدون اليود فرك.
- إيقاف التخدير. عودة الماوس إلى القفص الانتعاش والنشاط الشاشة. إذا أجريت الإجراء كما هو متوقع، يجب الحيوان استعادة التمشي العادي خلال 30 دقيقة، وتظهر أي اختلاف في التمشي أو النشاط مستوى من السلوك ما قبل الحقن. ولذلك، هناك حاجة إلى أي المسكنات بعد العملية. بعد شفائهم، والعودة الحيوان إلى الحظيرة.
ملاحظة: تعبير البروتين يمكن أن يعاير في أقرب وقت 48 ساعة بعد Electroporation لل. ومع ذلك، للسماح للانتعاش أكثر اكتمالا بعد Electroporation لل، ونحن نفضل العزلة ودراسة myofibers 7 - بعد 14 يوما Electroporation لل10. التعبير يمكن يعاير طويلة مثل بعد 4 أسابيع Electroporation لل.
2. إجراء التجريبية للعزل من المثنية القصيرة للأصابع (FDB) ألياف
- كولاجيناز ذوبان الجليد. لكل حزمة FDB إعداد بئرين في 12-جيدا لوحة زراعة الأنسجة. في واحدة إضافة جيدا 1 مl من قبل تحسنت Dulbecco لتعديل النسور وسائل الإعلام بالإضافة إلى الأبقار مصل الزلال (DMEM + BSA) والآخر إضافة جيدا 1 مل من قبل تحسنت قارعو الأجراس الحل. بالإضافة إلى ذلك، إضافة 10 مل جديدة من 1X قارعو الأجراس حل لل35 مم Sylgard الطبق.
- التضحية الحيوانية من خلال CO 2 أو استنشاق الغاز المخدر، تليها خلع عنق الرحم أو أي طريقة أخرى لضمان الموت.
- إزالة قدميه الخلفيتين فوق مفصل الكاحل باستخدام شفرة حلاقة نظيفة ويغرق في 1X قارعو الأجراس الحل في 35 ملم Sylgard الطبق.
- دبوس قدم واحدة ضيقة، وحيد مواجهة، على طبق Sylgard مع 30 الإبر G من خلال كل من النصائح اصبع القدم 5 وعند الكاحل.
- بدءا من الكاحل، قص الجلد مباشرة من الناحية القدم على طول شعري نحو أصابع القدم، والحرص على عدم شق العضلات تحت الجلد. كرر على الجانب الآخر من القدم.
- القابضة للجلد عند قاعدة الكاحل مع ملقط غرامة، وقطع الجلد في كعب.
- رفع الجلدرفرف بالملقط، نشير المقص الخاص نحو الجلد حتى لا نيك العضلات. قص النسيج الضام الكامنة، وإزالة بشكل فعال على الجلد.
- لإزالة قطع حزمة العضلات FDB وتر كبير في كعب لتحرير وتر من العظام. عقد الوتر مع ملقط، تشريح حزمة FDB من وتر أبيض كبير إزالة بعناية أي النسيج الضام تعلق على FDB مع مقص. إذا فعلت بشكل صحيح حزمة ورفع بسهولة الخروج من الأوتار وراء الكشف عن الأوتار بيضاء مشرقة مما يؤدي إلى الأرقام الفردية. قطع FDB في الأوتار بالقرب من أصابع تحرير حزمة من القدم.
- وضع حزمة العضلات بأكملها في تحتوي جيدا DMEM + BSA.
- كرر على القدم المقابل.
- مرة واحدة يتم عزل جميع العضلات FDB، إضافة 100 ميكرولتر من كولاجيناز لتحتوي كل منها على جيدا DMEM + BSA والعضلات.
- تحقق من نجاح Electroporation للفي مجهر فلوري مقلوب قبل الهضم. إذا فعلت بصورة ملائمةذ، لا يمكن أن يتحقق ما يزيد عن 90٪ كفاءة ترنسفكأيشن.
- احتضان لوحة في ترطيب، 37 ° C الحاضنة في 10٪ CO 2 لحوالي 1 ساعة. قد تختلف فترة حضانة اعتمادا على نموذج المرض والخلفية والكثير من كولاجيناز.
- بعد 1 ساعة، ونقل بعناية حزمة FDB إلى تحتوي أيضا الحل الوحيد قارعو الأجراس.
- يسحن حزمة FDB في البئر مع الحل قارعو الأجراس باستخدام ماصة 1 مل. قطع نهاية طرف ماصة مع شفرة حلاقة نظيفة مثل أن حزمة يمكن أن يمر بسهولة من خلال طرف ماصة. يسحن بلطف العضلات (~ 15 مرات) السماح للحزمة لتمرير صعودا وهبوطا موازية لطرف. والألياف سليمة تسقط في الحل قارعو الأجراس. عندما الألياف لا تقع بسهولة قبالة حزمة، ضع العضلات مرة أخرى إلى حل كولاجيناز.
- لوحة ألياف معزولة على طبق ~ 500 ميكرولتر لكل لوحة.
- السماح للعضلات لهضمها في البئر لمدة 15 دقيقة.
- كرر الخطوات من 2.15إلى 2.17 حتى يقلل من حزمة في الحجم ونأت معظم الألياف من حزمة (عادة ما مجموعه 2-3 مرات). مرة واحدة فصل العضلات يمر بسهولة من خلال ماصة 1 مل.
- السماح الألياف نعلق على طبق مدة لا تقل عن 15 دقيقة. ويمكن أن يضاف الحل قارعو الأجراس جديدة لوحة لتخفيف كولاجيناز المتبقية أو تغييرها تبعا ضيق الوقت.
ملاحظة: الالياف هي الآن جاهزة للتصوير.
3. الإجراءات التجريبية لالتصور التي يسببها الليزر غشاء الأضرار باستخدام متحد البؤر المجهري
- الألياف تحميل مباشرة قبل التصوير مع 300 ميكرولتر من 2.5 ميكرومتر FM 1-43 من FM 4-64 الصبغة في حل قارعو الأجراس. عموما، ألياف الصورة 15 دقيقة إلى 2 ساعة بعد العزلة. ومع ذلك، يمكن تصوير الألياف تصل إلى 24 ساعة بعد العزلة.
- وضع الطبق أسفل الزجاج على المجهر متحد البؤر مجهزة ليزر الأشعة فوق البنفسجية والهدف 60X / 63X.
- تحديد موقع الألياف. ضمان إرفاق الألياف بحزمعلى طبق من خلال الاستفادة من قاعدة المجهر. استبعاد الألياف التي تضررت في عملية التفكك. قد تحتوي على الألياف التالفة الفقاعات الغشاء، وارتفاع مستويات الإقبال على صبغ FM، حليقة أو ينحني بشكل مكثف.
- للحث على الضرر غشاء على الألياف، ضع غمد الليف العضلي في وسط النافذة التصوير مع حقل واضح من النوى. التركيز على غمد الليف العضلي باستخدام الصبغة قناة FM بحيث غمد الليف العضلي هو حاد للغاية.
- وضع الشعر ROI عبر عن غمد الليف العضلي باستخدام قناة FM 4-64.
- أشرق نقطة 1 بكسل في 80٪ من الطاقة لمدة 3 ثانية (~ 350 نانومتر س 350 منطقة نانومتر). وصبغ FM يدخل الخلية في موقع الإصابة. يمكن تعديل الطاقة والوقت لزيادة أو نقصان مجال الإهانة.
- التقاط الصور من الألياف قبل الضرر، في وقت الضرر، كل 2 ثانية بعد الضرر، ثم كل 10 ثانية لمدة تصل إلى 5 دقائق. يمكن تعديل التوقيت حسب الحاجة. ويمكن تحويل الصور الفردية للأفلام مرور الزمن في صورة J.
- كرر الخطوات3.3 من خلال 3.7 على ما يصل إلى 3 الألياف لكل طبق.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
Electroporation للهو أسلوب الغازية الحد الأدنى الذي يقدم كفاءة تنقية DNA البلازميد في العضلة القابضة لأصابع القصيرة (FDB) حزمة العضلات (الشكل 1A). سبعة أيام بعد ترنسفكأيشن fluorescently هو تصور البروتين الموسومة في myofibers معزولة (الشكل 1B). الألياف معزولة ثم يتم مطلي، وأعد للتصوير في المجهر متحد البؤر. الألياف يمكن أن تخضع ليزر الناجم عن الإصابة. يمكن استخدام صبغة FM لتحديد موقع تلف غشاء (الشكل 1C)
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هي مناسبة للاستخدام Electroporation لللدراسة البروتينات الموسومة fluorescently في الجسم الحي مثالي لدراسة العضلات نظرا لعدم وجود نماذج خط الخلية المناسبة التي تحاكي بأمانة هيكل الخلية بأكملها من العضلات. يصف هذا البروتوكول استخدام Electroporation للوعالية الدقة متحد البؤر المجهري لتوفير صور مفصلة للتوطين البروتين والنبات بعد إصابة ليزر. هذه الطريقة يمكن تكييفها لدراسة العمليات الخلوية الأخرى بما في ذلك إعادة تنظيم الهيكل الخلوي، والاتجار، والانصهار.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
هناك أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح NS047726، NS072027، وAR052646.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| DMEM | Life Technologies | 11995-073 | تشريح الوسائط التخفيف: 50 مل + 100 جم BSA |
| كولاجيناز ، النوع الثاني | من تقنيات الحياة | 17101-015 | هضم الألياف التخفيف: 160 مجم / 4 مل DMEM (مخزون 40 مجم / مل aliquot) |
| أطباق فالكون 12 بئر | فيشر Scientific | 877229 | |
| محلول | حلقات هضم الأليافهضم الألياف والتصوير التخفيف: 146 ملي كلوريد الصوديوم 5 ملي مولار & nbsp ؛ KCl 2 mM CaCl2 1 mM ؛ MCl2 10 ملي مولار HEPES pH7.4 في H2O | ||
| 1 مل Pipettes | Axygen | T-1000-C-R | شفرات |
| حلاقة | Personna | 94-120-71 | دقة الهضم |
| انزلاق 30 جرام إبرة | BD Biosciences | 305128 | تشريح |
| 1x PBS (-/-) | Life Technologies | 14190-250 | تشريح |
| سيلجارد 184 | فيشر Scientific | 50-366-794 | ملقط التشريح |
| FST بواسطة Dumont | # 5/45 | التشريح | |
| Roboz | RS-4913 | التشريح | |
| Precision Instruments | 500260 | تشريح | |
| BSA | Sigma | A7906 | وسائط التشريح التخفيف: 100 مجم / 50 مل أطباق DMEM |
| Falcon 60 مم | فيشر ساينفيك | 08772B | تشريح - يستخدم لعقد |
| التثقيب الكهربائي | Clay | ||
| ؛ | العشب | s88x | |
| المشابك | راديو شاك | 270-356 | التثقيب الكهربائي |
| Triadine | Aplicare | 82-220 | التثقيب الكهربائي |
| الدقيق الانزلاق 27 جرام إبرة | BD Biosciences | 305136 | التثقيب الكهربائي |
| العشب | SIU-V | التثقيب الكهربائي | |
| الشاش | Covidien | 2146 | التثقيب الكهربائي |
| حقن Hyaluronidase | Sigma | H4272 | التخفيف: أضف 160 ul PBS (1x) إلى 40 & micro ؛ ل 5x مخزون |
| 1 سم مكعب U-100 حقنة الأنسولين (28G1 / 2) ؛ | BD Biosciences | 329420 | حقن |
| أنابيب إيبندورف | فيشر Scientific | 02-682-550 | حقن |
| 35 مم قاع زجاجي طبق Microwell | MaTek | P35G-1.5-14-C | المجهر |
| FM 4-64 | Life Technologies | T-13320 | المجهر التخفيف: نهائي 2.5 ميكروغرام / مل |
| FM 1-43 | Life Technologies | T-35356 | المجهر< br / > التخفيف: نهائي 2.5 ug / ml |
| Endotoxinfree Endotoxinfree Plasmid Maxi Kit | Qiagen | 12362 | تنقية البلازميد |
المراجع
- Blau, H. M., et al. Plasticity of the differentiated state. Science. 230, 758-766 (1985).
- Yaffe, D., Saxel, O. Serial passaging and differentiation of myogenic cells isolated from dystrophic mouse muscle. Nature. 270, 725-727 (1977).
- Richler, C., Yaffe, D. The in vitro cultivation and differentiation capacities of myogenic cell lines. Dev Biol. 23, 1-22 (1970).
- Yaffe, D. Retention of differentiation potentialities during prolonged cultivation of myogenic cells. Proc Natl Acad Sci USA. 61, 477-483 (1968).
- Mamchaoui, K., et al. Immortalized pathological human myoblasts: towards a universal tool for the study of neuromuscular disorders. Skelet muscle. 1, 34(2011).
- DiFranco, M., Quinonez, M., Capote, J., Vergara, J. DNA transfection of mammalian skeletal muscles using in vivo electroporation. J Vis Exp: JoVE. , (2009).
- Swaggart, K. A., et al. Annexin A6 modifies muscular dystrophy by mediating sarcolemmal repair. Proc Natl Acad Sci USA. 111, 6004-6009 (2014).
- Kerr, J. P., et al. Dysferlin stabilizes stress-induced Ca2+ signaling in the transverse tubule membrane. Proc Natl Acad Sci USA. 110, 20831-20836 (2013).
- Anderson, D. M., et al. A micropeptide encoded by a putative long noncoding RNA regulates muscle performance. Cell. 160, 595-606 (2015).
- Roche, J. A., et al. Physiological and histological changes in skeletal muscle following in vivo gene transfer by electroporation. Am J Physiol Cell Physiol. 301, C1239-1250 (2011).
- Reddy, A., Caler, E. V., Andrews, N. W. Plasma membrane repair is mediated by Ca(2+)-regulated exocytosis of lysosomes. Cell. 106, 157-169 (2001).
- Wang, B., et al. Membrane blebbing as an assessment of functional rescue of dysferlin-deficient human myotubes via nonsense suppression. J Appl physiol. 109, 901-905 (2010).
- Cai, C., et al. MG53 nucleates assembly of cell membrane repair machinery. Nat Cell Biol. 11, 56-64 (2009).
- Marg, A., et al. Sarcolemmal repair is a slow process and includes EHD2. Traffic. 13, 1286-1294 (2012).
- Bansal, D., et al. Defective membrane repair in dysferlin-deficient muscular dystrophy. Nature. 423, 168-172 (2003).
- Defour, A., et al. Dysferlin regulates cell membrane repair by facilitating injury-triggered acid sphingomyelinase secretion. Cell Death Dis. 5, e1306(2014).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
