يتم تقديم بروتوكول سريع للهضم المحلل للبروتين مع مفاعل دقيق مدمج للتدفق الداخلي مقترن بمطياف كتلة تأين الرش الكهربائي (ESI). يتم وصف تصنيع المفاعل الصغير والإعداد التجريبي وعملية الحصول على البيانات.
مقالة منهجية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مصيدة الأيونات ESI-MS | Thermo Electron | LTQ | يتم استخدام مطياف الكتلة LTQ للحصول على بيانات MS الترادفية |
| مرحلة XYZ | نيوبورت | أجزاء متعددة | تستخدم مرحلة XYZ المصنوعة منزليا لتكييف مصدر LTQ nano-ESI التجاري لتلقي المدخلات من أنظمة توصيل العينات |
| المختلفة مجهر ستيريو | بصريات إدموند | G81-278 | المجهر لمراقبة عملية تعبئة المفاعل الدقيق |
| الميزان التحليلي / Metler | VWR | 46600-204 | يستخدم الميزان لوزن عينات البروتين |
| حمام بالموجات فوق الصوتية / برانسون | VWR | 33995-540 | الحمام الصوتي لخلط / تجانس العينات وتشتيت مضخة حقنة الملاط الجسيمي C18 |
| 22 | Harvard Apparatus | 552222 | يتم استخدام المضخة الدقيقة لتحميل وشطف وشطف العينة والإنزيم على وإلى المفاعل الشعري المعبأ |
| نظام المياه عالي النقاء Milli-Q | EMD Millipore | ZD5311595 ؛ | نظام المياه MilliQ لتحضير مياه DI النقية |
| Pipettor/Eppendorf (1,000 ومايكرو. ل) | VWR | 53513-410 | يتم استخدام الماصة لقياس كميات صغيرة من حلول العينات |
| Pipettor / Eppendorf (100 & nbsp ؛ ومايكرو. ل) | VWR | 53513-406 | يستخدم الماصة لقياس كميات صغيرة من حلول العينات |
| Pipettor / Eppendorf (10 ؛ ومايكرو. ل) | VWR | 53513-402 | يتم استخدام الماصة لقياس كميات صغيرة من حلول العينات الشعرية |
| السيليكا المنصهرة (100 وميكرو ؛ م معرف × 360 & ميكرو; م OD) | تقنيات Polymicro | TSP100375 | يستخدم هذا الشعيرات الدموية لتصنيع المفاعل الصغير |
| الشعرية المنصهرة من السيليكا (20 & nbsp; ومايكرو. م معرف × 100 وميكرو ؛ م OD) | تقنيات Polymicro | TSP020090 | تستخدم هذه الشعيرات الدموية لتصنيع باعث ESI |
| الشعرية السيليكا المنصهرة (50 & nbsp; ومايكرو. م معرف × 360 & ميكرو; م OD) | تقنيات Polymicro | TSP050375 | يتم استخدام هذه الشعيرات الدموية لنقل العينات والمواد من مضخة الحقنة إلى المفاعل الشعري الصغير |
| الساطور الشعري الزجاجي | Supelco | 23740-U | هذه أداة لقطع الشعيرات الدموية المدمجة من السيليكا بالطول المطلوب |
| منتجات الغراء | الانتقائية | E6000 Craft | يستخدم هذا الغراء لتأمين باعث ESI في المفاعل الشعري أو رقاقة الموائع |
| الدقيقة غراء الايبوكسي | Epo-Tek | 353NDT | يستخدم هذا الغراء لإغلاق فتحة مدخل الموائع الدقيقة التي يتم من خلالها تحميل جزيئات C18 |
| جزيئات المرحلة العكسية C18 (5 ومايكرو. م) | Agilent Technologies | Zorbax 300SB-C18 | هذه هي جسيمات C18 التي يتم امتصاص البروتينات عليها ؛ تم استخراج الجسيمات من 4 & nbsp ؛ مم × 20 سم عمود C18 LC من حقنة / زجاج Agilent |
| (250 & micro; ل) | هاميلتون | 81130-1725RN | تستخدم المحاقن الزجاجية لتحميل ملاط الجسيمات C18 في المفاعل الدقيق الشعري وتسليم العينة والمزيدات إلى المفاعل الدقيق |
| الداخلي لتقليل اتحاد PEEK (1/16 "إلى 1/32") | Valco | ZRU1.5FPK | يستخدم هذا الاتحاد لتوصيل 250 & micro ؛ ل حقنة إلى المفاعل الصغير لتحميل 5 & مايكرو ؛ م الملاط الجسيمات |
| اتحاد الفولاذ المقاوم للصدأ (1/16 بوصة) | Valco | ZU1XC | يتم استخدام اتحاد الفولاذ المقاوم للصدأ لتوصيل إبرة الحقنة الزجاجية |
| بموصل Microvolume PEEK Tee الشعري للتسريب (1/32 بوصة) | Valco | MT.5XCPK | يتم استخدام نقطة الإنطلاق Peek لتوصيل الشعيرات الدموية لنقل العينة بالمفاعل الصغير الشعري ؛ على ذراعها الجانبي ، فإنه يتيح إدخال |
| موصل نقطة الإنطلاق السلكية Pt (خفيف الوزن) | Valco | C-NTXFPK | يستخدم موصل نقطة الإنطلاق هذا لتطبيق جهد ESI على رقاقة الموائع الدقيقة من خلال خط نقل العينة |
| سلك Pt (0.404 مم) | VWR | 66260-126 | يوفر سلك Pt اتصالا كهربائيا لتوليد ESI ويتم توصيله بأنبوب PTFE لإمداد الطاقة ESI |
| (1/16 " OD) | Valco | TTF115-10FT | يتم استخدام أنابيب التفلون لتمكين اتصال محكم الهواء بين إبرة المحقنة واتحاد الفولاذ المقاوم للصدأ & nbsp ؛ |
| أنابيب نظرة خاطفة (0.015 بوصة معرف × 1/16 بوصة OD) | Upchurch Scientific | 1565 | يتم استخدام أنبوب Peek كغلاف لتمكين اتصال محكم الغلق بين اتحاد الفولاذ المقاوم للصدأ و 50 & nbsp ؛ ومايكرو. m ID نقل أنابيب نظرة خاطفة الشعرية |
| (0.015 " معرف × 1/32 بوصة OD) | Valco | TPK.515-25 | يتم استخدام أنبوب Peek كغلاف لتمكين اتصال خال من التسرب بين الشعيرات الدموية المصنوعة من السيليكا المنصهرة وقاطع أنابيب البوليمر Peek Tee |
| Clean-cut | Valco | JR-797 | هذا القاطع لقطع 1/16 بوصة و 1/32 بوصة مسبقا أنابيب بوليمر نظرة خاطفة تستخدم كغلاف للوصلات الخالية من التسرب في قطع ~ 4-5 سم في الطول |
| قارورة العنبر (2 مل) Agilent | & nbsp ؛ | HP-5183-2069 | تستخدم القوارير لإعداد حلول العينات وملاط الجسيمات C18 ؛ |
| قارورة العنبر (4 مل) | VWR | 66011-948 | تستخدم القوارير لتحضير حلول العينات |
| أنبوب البولي بروبلين (15 & nbsp ؛ مل) | فيشر | 12-565-286D | تستخدم القوارير لتحضير المحاليل العازلة |
| اسطوانة (100 مل) | VWR | 24710-463 | الأسطوانة لقياس أحجام أسطوانة المذيبات |
| (10 مل) | VWR | 24710-441 | الأسطوانة لقياس أحجام |
| أطراف ماصة المذيبات (1,000 & micro; ل) | VWR | 83007-386 | تستخدم أطراف الماصة لقياس كميات صغيرة من حلول العينات |
| أطراف الماصات (100 ومايكرو؛ ل) | VWR | 53503-781 | تستخدم أطراف الماصة لقياس كميات صغيرة من حلول العينات |
| أطراف الماصات (10 & micro; ل) | VWR | 53511-681 | تستخدم أطراف الماصة لقياس كميات صغيرة من حلول العينات |
| ركائز زجاجية | تاج أبيض نانوفيلم | B270 ، 3 × 3 بوصة | هذه ركائز زجاجية لتصنيع الرقائق الدقيقة |
| تركيب الجوز الذكور (1/16 بوصة) | Upchurch | P203X | يستخدم هذا التركيب لتوصيل الشعيرات الدموية للنقل بشريحة الموائع الدقيقة |
| مجموعة Nanoport | Upchurch | N-122H | هذا التركيب لتوصيل الشعيرات الدموية بشريحة الموائع الدقيقة |
| معايير البروتين | Sigma | Multiple # | |
| Acetonitrile ، درجة HPLC | Fisher | A955 | |
| Methanol ، درجة | HPLCفيشر | A452 | |
| الأيزوبروبانول ، HPLC الصف | سيجما | 650447 | |
| حمض ثلاثي فلورو أسيتيك | سيجما | 302031 | |
| بيكربونات الأمونيوم | Aldrich | A6141 | |
| Trypsin ، درجة التسلسل | Promega | V5111 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن