يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

ثلاثي الأبعاد الثقافة الجيني حبة من خلايا الإنسان ورم الغدة النخامية

10.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/53637

⸱

فبراير 18, 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Physiology, Biophysics and Neurosciences, Center for Research and Advanced Studies (CINVESTAV-IPN), 2Department of Experimental Pathology, Nacional Institute of Neurology and Neurosurgery

في هذه المقالة

ملخص

تم اختيار الثقافة ثلاثية الأبعاد في حبات الجينات ، نظرا لبساطتها وقابليتها للتكاثر ، للحفاظ على خلايا الورم الحميد في الغدة النخامية. تضمنت الإجراءات الهضم الأنزيمي الأولي والتفكك الميكانيكي لأنسجة الورم ، وتم تغليف تعليق الخلية اللاحق في حبات الجينات.

الملخص

يوصف أسلوب ثقافة ثلاثي الأبعاد التي تزرع خلايا الورم الحميد في الغدة النخامية الأولية في حبات الجينات. الجينات هو بوليمر المستمدة من الطحالب البحرية البني. لفترة وجيزة، يتم قطع نسيج الورم إلى أجزاء صغيرة وتقديمها إلى الهضم الأنزيمي مع كولاجيناز والتربسين. بعد ذلك، يتم الحصول على تعليق خلية. يتم خلط تعليق خلية الورم مع 1.2٪ الجينات الصوديوم وانخفض إلى 2 حل CaCl، وتبلور تعليق الجينات / الخلية على اتصال مع CaCl 2 لتشكيل حبات كروية. يتم تزويد الخلايا جزءا لا يتجزأ من الخرز الجينات مع المواد الغذائية التي تقدمها وسائل الإعلام الثقافة المخصب بنسبة 20٪ FBS. ثقافة ثلاثي الأبعاد في حبات الجينات يحافظ على سلامة خلايا الورم الحميد لفترات طويلة من الزمن، تصل إلى أربعة أشهر. وعلاوة على ذلك، فإن الخلايا يمكن أن تتحرر من الجينات عن طريق غسل الخرز مع سترات الصوديوم والمصنفة على coverslips الزجاج لإجراء المزيد من التحليلات immunocytochemical. استخدام سلنموذج الثقافة ل يسمح لتثبيت والتصور من الهيكل الخلوي الأكتين مع الحد الأدنى من الفوضى. وباختصار، توفر الخرز الجينات نظام الثقافة موثوق للحفاظ على خلايا ورم الغدة النخامية.

المقدمة

وقد استخدمت السقالات ثلاثي الأبعاد على نطاق واسع في زراعة الخلايا لأنها توفر الدعم الهيكلي ثلاثي الأبعاد للخلايا المستزرعة والحفاظ على خلية الى خلية الاتصال 1. وقد استخدمت مواد البوليمر المشتقة من الطبيعي أن يجعل السقالات ثلاثية الأبعاد بما في ذلك النوع الأول الكولاجين، الشيتوزان والجينات. الجينات هو بوليمر طبيعي مشتق من Macrocystispyrifera الطحالب البني البحر (عشب البحر). ويتكون هذا البوليمر وحدات متكررة من حمض β-D-mannuronic (M) وα-L-guluronic حمض (G) (2) وأشكال المواد الهلامية مستقرة في وجود بعض الكاتيونات ثنائي التكافؤ، مثل الكالسيوم والباريوم. وتستخدم (CaCl 2) حلول كلوريد الكالسيوم عموما باسم كاشف يشابك لتشكيل الخرز الجينات. انخفضت حلول الجينات في CaCl 2 تشكيل الفور المواد الهلامية كروية ثلاثية الأبعاد. عندما يتم خلط حل الجينات مع الخلايا، يتم تغليف الخلايا في الجينات باي ايه دي اس 3.

لديها الجينات الخصائص التي مكنته من أن تستخدم مصفوفة لتغليف مجموعة متنوعة من الخلايا، بما في ذلك غضروفية 4، myoblasts الهيكل العظمي 5 والخلايا الجذعية العصبية 6. ومن المواد الخاملة ويسمح للنشر المواد المغذية والأكسجين ومنتجات الأيض التي تحافظ على بقاء الخلية ووظيفتها. علاوة على ذلك، على عكس الأنظمة الأخرى التي تعتمد على ثقافة هلام، والخلايا مثقف داخل حبات الجينات يمكن أيضا أن تتحرر من السقالة باستخدام chelators الكالسيوم، مثل سترات الصوديوم، ويمكن بعد ذلك الخلايا أن تحصد لمزيد من التحقيقات 7.

أورام الغدة النخامية عادة أورام حميدة مع معدلات انتشار منخفضة. وكانت الفئران خطوط الخلايا ورم الغدة النخامية مثقف بنجاح في نظام ثنائي الأبعاد 8. ومع ذلك، هذه الثقافة من إفرازية أورام الخلايا النخامية الإنسان ليست تنمية كفاءة؛ فرقت الخلايا السرطانية في الغدة النخامية تنمو بشكل سيئفي الثقافة والخلايا يحمل المرفق محدود، ونشر، والخلايا عادة تشكل مجاميع العائمة في صحن الثقافة 9،10.

وقد بذلت عدة محاولات للحصول على تعليق ورم الخلايا النخامية، بما في ذلك النهج الأنزيمية وتشتت الميكانيكية 11، نهج تشتت الميكانيكية فقط 12 وزراعة من إإكسبلنتس ورم 10. مع هذه المناهج، والحصول على الكتاب مختلف الثقافات ملتصقة قابلة للحياة لفترات مختلفة من الزمن. قدرات الخلايا السرطانية إفرازية البقاء على قيد الحياة في هذه النظم ثنائية الأبعاد تعتمد على نوع الورم ومعدلات انتشارها 9. ومع ذلك، في الثقافات على المدى الطويل، والخلايا الليفية مع الظواهر تسود 11،13. وتصف هذه الورقة طريقة الحصول على ثقافة الأولية من خلايا الورم الحميد في الغدة النخامية مغلفة في حبات الجينات التي تحرر مزيد لهم من سقالة الجينات التي تمكن تحليلات مفصلة للجوانب بيولوجيا الخلية، وعلى سبيل المثال، ترتيباتها هيكل الخلية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وافقت هذه الدراسة لاستخدام المواد البشرية من قبل اللجان الأخلاقية المحلية للمؤسسة الطبية ومركز البحوث والدراسات المتقدمة في معهد البوليتكنيك الوطني.

1. ورم اكتساب عينة

  1. الحصول على خزعة الأنسجة ورم الغدة النخامية من المريض عن طريق الجراحة بطريق الوتدي 14.
  2. جمع عينة ورم الغدة النخامية ووضعه في زجاجة معقمة تحتوي على 50 مل من جديد 199 مستنبت (M199) المخصب بنسبة 10٪ مصل بقري جنيني (FBS)، و 0.6 ملغ / مل بيكربونات الصوديوم، 2.4 ملغ / مل HEPES و 1٪ المضادات الحيوية (البنسلين / الستربتومايسين) في 7.4 درجة الحموضة. الحفاظ على عينة في زجاجة على الجليد.
    ملاحظة: نسيج الورم يمكن معالجة العديد من ساعة بعد الجراحة.
  3. نقل عينة الورم إلى المختبر في زجاجة على الجليد.

2. إعداد حلول الأنسجة تفارق الأنزيمية، والحل التربسين المانع وحلول الجيني

ملاحظة: قبل إجراء زراعة الخلايا إعداد الحلول التالية. تصفية كل الحلول باستخدام فلتر 0.22 ميكرون الغشاء، قبل الاستخدام.

  1. إعداد كولاجيناز 1٪ حل عن طريق إذابة 5 ملغ من كولاجيناز (النوع الأول) في 5 مل من M199 المصل مجانا.
  2. إعداد التربسين حل 0.01٪ عن طريق إذابة 0.01 غرام من التربسين في 10 مل من برنامج تلفزيوني-EDTA 0.3٪.
  3. تحضير 0.1٪ محلول التربسين المانع عن طريق إذابة 2 ملغ من مثبط التربسين فول الصويا في 20 مل من M199 المصل مجانا.
  4. يعد حل الدناز عن طريق تذويب 20 ميكرولتر من أنا الدناز 134 U / مل في 4 مل من محلول التربسين المانع.
  5. يعد حل EGTA (1.2 م) عن طريق إذابة 22.8 ملغ من EGTA في 40 مل من 155 ملي مول كلوريد الصوديوم. ضبط درجة الحموضة إلى 7.4. الاستمرار في الحجم النهائي من 50 مل.
  6. يعد حل HEPES (20 ملم) عن طريق إذابة 238 HEPES ملغ في 50 مل من 155 ملي مول كلوريد الصوديوم.
  7. تحضير 1.2٪ حل الجينات عن طريق إذابة 1.2ز الجينات الصوديوم في 100 مل من محلول HEPES. الأوتوكلاف الحل الجينات.
  8. يعد حل الكالسيوم (102 ملم) عن طريق إذابة 750 ملغ من CaCl 2 في 50 مل من محلول HEPES، وضبط درجة الحموضة إلى 7.4

3. خلية الابتدائي الثقافة والجيني تغليف

  1. داخل مجلس الوزراء تدفق الصفحي، ضع نسيج الورم في 35 مم طبق بتري تحتوي على ما يقرب من 20 مل من برنامج تلفزيوني الكالسيوم والمغنيسيوم 2+ 2+ مجانا، ودرجة الحموضة 7.4 (PBS *).
  2. أخذ الأنسجة مع منتاش جراحية ووضعه في طبق بتري أخرى تحتوي جديدة برنامج تلفزيوني *، وغسل بلطف الأنسجة. كرر هذه الخطوة حتى يتم إزالة خلايا الدم الحمراء والحطام.
  3. باستخدام الملقط الجراحي، وعقد أنسجة ورم الغدة النخامية، ومع مقص جراحي صغير، تقطع الى قطع صغيرة. مع ماصة باستور مع حواف مدورة، ونقل أجزاء الأنسجة وبرنامج تلفزيوني * في أنبوب 15 مل، الطرد المركزي في 68 x ج لمدة 10 دقيقة في RT.
    ملاحظة: لتدوير حواف باستورماصة، لهب قليلا غيض من ماصة في موقد بنسن.
  4. إزالة برنامج تلفزيوني * باستخدام ماصة باستور وإضافة 3-5 مل من محلول كولاجيناز (حوالي 5 مل لمدة 65 ملم 3 من الأنسجة)، مزيج 2-3 مرات من قبل قلب. احتضان الأنسجة في كولاجيناز لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في دوران مستمر.
  5. أنبوب الطرد المركزي في 68 x ج لمدة 10 دقيقة في RT وإزالة كولاجيناز مع ماصة باستور.
  6. إضافة 5 مل من الدناز وتخلط 2-3 مرات من قبل قلب، ثم الطرد المركزي الأنبوب في 68 x ج لمدة 10 دقيقة في RT.
    ملاحظة: إذا لم يتم فصل الأنسجة تماما، إجراء عملية الهضم الأنزيمي الثاني مع التربسين لمدة 3 دقائق عند 37 درجة مئوية. وقف عملية الهضم عن طريق إضافة وحدات التخزين 2 من حل مثبط التربسين.
  7. نضح طاف مع ماصة باستور وتجاهل. إعادة تعليق بيليه في حجم 1 من حل EGTA وتخلط مع 2 مجلدات من حل الجينات.
  8. المزيج بلطف تعليق الخلية والجيناتبواسطة pipetting مع ماصة باستور. خذ محقنة معقمة مع 21 G إبرة، وإزالة المكبس. استخدام ماصة لتحميل المحاقن مع الحل الجينات والخلايا.
  9. إدراج بلطف على المكبس إلى حقنة والاستغناء بعناية الحل الجينات خلية إسقاط تلو قطرة في كوب زجاجي يحتوي على حوالي 30 مل من محلول الغنية بالكالسيوم.
  10. وضع إبرة الحقنة حوالي 5 سم وحتى حل CaCl 2. المواد الهلامية تعليق الجينات الخلية على اتصال مع CaCl 2 لتشكيل حبات كروية. الحفاظ على حبات الجينات في حل الكالسيوم لمدة 5 دقائق.
    ملاحظة: تحريك الدورق الزجاجي الذي يتم إسقاط الخرز. تحرك ببطء مع اليد في حركات دائرية، لمنعها من الالتصاق ببعضها البعض.
  11. إزالة بعناية حل الكالسيوم مع ماصة باستور، وتغسل حبات مرتين مع 3-5 مل من M199 المخصب بنسبة 20٪ من FBS.
  12. نقل حبات الجينات في زراعة الأنسجة T25 العاديةقارورة معقمة باستخدام ملعقة، إضافة 4-5 مل من M199 المخصب بنسبة 20٪ FBS وحضنت عند 37 درجة مئوية في حاضنة ترطيب مع 5٪ CO 2. تغيير ثقافة المتوسط ​​كل يوم الثالث على التوالي.

4. حرروا خلايا من الجينات

ملاحظة: قبل تحرير الخلايا من الخرز الجينات، ومعطف 13 coverslips مم مع بولي-D-ليسين.

تنبيه: حامض الكبريتيك هو الأكالة ACID، وAPTS يمكن أن يسبب تهيج العين والجلد. يستعمل قفازات مطاطية للتعامل مع هذه الكواشف.

  1. في غطاء الدخان، مع منتاش نقطة تزج لل coverslips في طبق بتري زجاجي يحتوي على 20٪ مائي حامض الكبريتيك لمدة 1 ساعة على RT.
  2. صب حامض الكبريتيك، وغسل لل coverslips خمس مرات مع الماء المقطر لمدة 5 دقائق لكل منهما. عن طريق مكان نقطة منتاش لل coverslips نظيفة في طبق بتري تحتوي على 0.1 M هيدروكسيد الصوديوم لمدة 5 دقائق على RT 15.
  3. صب هيدروكسيد الصوديوم ويغسل مرة واحدة مع استخلاصالمياه أدى، نضح الماء وتجفيف coverslips.
  4. استخدام micropipette إلى معطف لل coverslips مع APTS (أمينو-triethoxysilane) لمدة 4 دقائق (استخدام 500 ميكرولتر لمدة 6 coverslips) إغراق طبق بيتري مع الماء المقطر. نضح الماء بسرعة والاستمرار في غسل بالماء المقطر، والانتقال لل coverslips مع ملاقط نقطة للسماح للماء بالنفاذ إلى تحت.
  5. نضح الماء وتجفيف coverslips، وذلك باستخدام مكان نقطة منتاش لل coverslips في طبق بيتري نظيفة وتعقيم لهم داخل الميكروويف خلال 3 مرات، في كل 45 ثانية. إضافة 1000 ميكرولتر من الماء المعقم إلى 100 ميكروغرام من بولي-D-ليسين (0.1 ملغ / مل).
  6. لاحتضان coverslips مع ما يقرب من 50 ميكرولتر من بولي-D-ليسين لمدة 5 دقائق على RT. نضح بولي-D-يسين تماما.
    ملاحظة: هذا مهم جدا لأنه قابل للذوبان بولي-D-ليسين في مستنبت يمكن أن تمنع تكاثر الخلايا.
  7. شطف لل coverslips خمس مرات مع الماء المعقم لمدة 5 دقائق لكل منهما. نضح الحاديerile coverslips المياه والسماح ليجف داخل مجلس الوزراء تدفق الصفحي.
  8. تحليل الهيكل الخلوي الأكتين، وتحرير خلايا الغدة النخامية من الجينات. تأخذ بعض حبات الجينات من القارورة ثقافة باستخدام 1 مل ماصة ووضعها في أنبوب 15 مل.
  9. إضافة 5 مل من 55 ملي سيترات الصوديوم (حل 323.6 ملغ من الصوديوم 3 C 6 H 5 O 7، 2 H 2 O في 20 مل HEPES الحل) وأجهزة الطرد المركزي في 68 x ج لمدة 10 دقيقة في RT. نضح طاف وتجاهل.
  10. إعادة تعليق بيليه في 1 مل من M199 دافئ المخصب بنسبة 20٪ FSB. المزيج بلطف تعليق الخلية مع ماصة باستور.
    تنبيه: PHALLOIDIN ودابي سامة. • استخدمي قفازات للتعامل مع هذه الكواشف.
  11. عد الخلايا، ونقل 125 ميكرولتر من 0.4٪ التريبان حل الأزرق إلى أنبوب 1.5 مل. إضافة 75 ميكرولتر من M199 و 50 ميكرولتر من تعليق الخلية التي تم الحصول عليها في الخطوة الأخيرة (عامل التخفيف = 5). تخلط جيدا.
  12. استخدام غيض micropipette إلى PLACه ما يقرب من 10 ميكرولتر من تعليق الزرقاء خلايا التريبان في غرفة عدادة الكريات.
  13. عدد الخلايا في عداد عدادة الكريات باستخدام مجهر مقلوب مع إضاءة على النقيض من المرحلة. عدد جميع الخلايا في ساحة مركز 1 ملم وأربعة مربعات الزاوية 1 مم. الحصول على كثافة الخلية في الملليمتر الواحد بضرب متوسط ​​عدد لكل متر مربع من قبل عامل التخفيف - 10 4 على سبيل المثال إذا كان متوسط ​​التهم لكل متر مربع 45 خلايا × 5 × 104 = 2.25 س 106 خلية / مل.
    ملاحظة: عدد الخلايا في عشرة مربعات من الغرفة عدادة الكريات. لا تعول الخلايا لمس خط الوسط في القاع والجانبين الأيمن.
  14. البذور 35،000 الخلايا على 13 ملم coverslips قطر الزجاج مغطاة بولي-D-ليسين.

5. الهيكل الخلوي أكتين ترتيب

  1. بعد 48 ساعة في الثقافة، وإزالة مستنبت مع ماصة باستور بسرعة وإضافة 500 ميكرولتر في ساترة من برنامج تلفزيوني، وعلى الفور إزالة برنامج تلفزيوني.
  2. إصلاح وpermeabilize رانه الخلايا مع 500 ميكرولتر في ساترة من العازلة تثبيت (0.1 M أنابيب، ودرجة الحموضة 6.75، 4٪ PEG-6000، 1 ملي EGTA، 1 ملي MgSO 4، 0.5٪ تريتون X-100 و 2٪ الفورمالديهايد) لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة C
  3. إزالة المنطقة العازلة تثبيت وإضافة 500 ميكرولتر في ساترة من 3.5٪ امتصاص العرق في برنامج تلفزيوني لمدة 30 دقيقة في RT. إزالة حل لامتصاص العرق.
  4. غسل لل coverslips ثلاث مرات وذلك بإضافة 500 ميكرولتر في ساترة من برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق لكل منهما. شطف لل coverslips في RT، في التحريض المستمر.
  5. احتضان الخلايا مع كلوريد الأمونيوم 50 ملم لمدة 10 دقيقة، ونضح محلول كلوريد الأمونيوم وكرر الخطوة 5.4.
  6. احتضان الخلايا مع 1٪ BSA (مفتش خالية، خالية البروتياز) في برنامج تلفزيوني لمدة 30 دقيقة، وإزالة حل جيش صرب البوسنة وكرر الخطوة 5.4.
  7. احتضان الخلايا مع 50 ميكرومتر من phalloidin-رودامين مترافق لمدة 7 دقائق على RT، كرر الخطوة 5.4.
  8. احتضان الخلايا مع 255 ميكرومتر من دابي المخفف في برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق على RT، كرر الخطوة 5.4. وأخيرا جبل رانه coverslips مع تصاعد المتوسط ​​وختم لهم بطلاء الأظافر.
  9. الحصول على صور من الترتيبات الأكتين هيكل الخلية باستخدام متحد البؤر مجهر المسح الضوئي ليزر مع الهدف 63X، في 541 نانومتر الطول الموجي الإثارة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

وقد تم تطبيق هذا البروتوكول بنجاح في الثقافة والحفاظ على خلايا ورم الغدة النخامية في حبات الجينات لفترات مختلفة من الزمن يبين الشكل 1 خلايا جزءا لا يتجزأ من الخرز الجينات بعد ثلاثة أشهر؛ هذه الخلايا يحمل أشكالا دائرية ثنائية الانكسار تحت ضوء المجهر المقلوب (الشكل 1). يبين الشكل 2 توطين N-كادهيرين في خلايا الورم الحميد الفئران الغدة النخامية جزءا لا يتجزأ من الجينات. يتم ترجمة N-كادهيرين في الاتصالا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هذا البروتوكول لديه العديد من الخطوات الهامة. الأول هو حجم حبة التجانس، وهو مطلوب للحفاظ على نفس شروط نشر المواد المغذية والغازات في كل من زراعة الخلايا. في تجربتنا، واستخدام إبرة 21 G لجعل الخرز الجينات يسمح لاكتساب ثقافة كفاءة موحدة حجم حبة. العامل الثاني المهم هو المسافة من الإبرة. ويجب أن تكون هذه المسافة لا يزيد عن 5 سم من محلول الكالسيوم لتجنب اللؤلؤ المشوهة والخلايا الميتة بسبب اصطدام تيار الحل الجينات / الخلية التي تحتوي على السطح من الحل الكالسيوم. والخطوة الثالثة الحاسمة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

نشكر السيد O. Rios على مساعدته الفنية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Reagent 
199 الثقافة متوسطة Invitrogen 31100-027للثقافة ، دافئة في 37 درجة ؛ ج حمام مائي قبل الاستخدام 
مصل الأبقار الجنينية PAAA15-751
بيكربونات الصوديوم (NaHCO3)Merck106329
N- (2-Hydroxyethyl) piperazine-N&حاد;-2 حمض إيثان سلفونيك (HEPES)Sigma H-4034
البنسلين / الستربتومايسينPAAP11-010
PBS (محلول ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco)Invitrogen   ؛21600-044
كولاجيناز النوع الأولورثينجتون4176
التربسين & nbsp ؛Invitrogen 27250-018
حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA)Research Organics3002E
مثبط التربسين السوربي Invitrogen 17075-029
DNAseWorthington2139
حمض الألجنيك ، من Macrocystis pyrifera (عشب البحر)Sigma   ؛A-2158
كلوريد الكالسيوم (CaCl 2< / sub>) جيتي بيكر1332
سترات الصوديوم (Na3C6H5O7)جي تي بيكر3646
بيبيرازين-ن ، ن & برايم ؛ -بيس (2-حمض إيثان سلفونيك) (PIPES)Research Organics9624P
بولي إيثيلين جلايكول 6000 (PEG 6000)كالبيوكيم528877
الإيثيلين حمض الجليكول رباعي الأسيتيك (EGTA)Research Organics9574E
كبريتات المغنيسيوم (MgSO4< / sub>)جي تي بيكر2500
تريتون-إكس 100سيجماX100
الفورمالديهايدجي تي بيكر2106
بارافورمالديهايدسيجماP6148
كلوريد الأمونيوم (NH4< / sub>Cl)جي تي بيكر660
BSA مصل الأبقار الألبومين IgG-FreeJackson Immuno Research001-000-161
Phalloidin &ndash ؛ رباعي ميثيل رودامين ب إيزوثيوسياناتسيجماP1951سامة. استخدم القفازات للتعامل مع هذا الكاشف  
4',6-Diamidino-2-Phenylindole, ثنائي هيدروكلوريد (DAPI)Invitrogen D1306سامة. استخدم القفازات للتعامل مع هذا الكاشف  
حامض الكبريتيك (H2< / sub>SO4< / sub>) JTBaker9681شديد التآكل. استخدم القفازات للتعامل مع هذا الكاشف  
هيدروكسيد الصوديوم (NAOH)ميرك1.06498يمكن أن يسبب تهيج العين والجلد. استخدم القفازات للتعامل مع هذا الكاشف  
(3-أمينوبروبيل) ثلاثي إيثوكسيسيلان (APTS)سيجماA-3648
بولي دي ليسين هيدروبروميدسيجماP7280
محلول تريبان الأزرقسيجماT8154   ؛
Name    < / strong>Company  Catalog Number  Comments
Equipment  < / قوي >سام: قد يسبب السرطان. استخدم القفازات للتعامل مع هذا الكاشف  
الدوار BoekelScientific Model 230300
أجهزة الطرد المركزيDuPont Corporation نموذج sorvall TC6
شاكر أدوات خط المختبرنموذج 314-820   ؛

المراجع

  1. Tibbitt, M. W., Anseth, K. S. Hydrogels as Extracellular Matrix Mimics for 3D Cell Culture. Biotechnol. Bioeng. 103 (4), 655-663 (2009).
  2. Amsden, B., Turner, N. Diffusion characteristics of calcium alginate gels. Biotechnol. Bioeng. 65 (5), 605-610 (1999).
  3. Andersen, T., Strand, B., Formo, K., Alsberg, E., Christensen, B. Alginates as biomaterials in tissue engineering. Carbohydrate chemistry. Rauter, A. P., Lindhorst, T. K. Vol. 37, Royal Society of Chemistry. 227-258 (2012).
  4. Jonitz, A., et al. Differentiation capacity of human chondrocytes embedded in alginate matrix. Connect. Tissue. Res. 52 (6), 503-551 (2011).
  5. Hill, E., Boontheekul, T., Mooney, D. J. Designing scaffolds to enhance transplanted myoblast survival and migration. Tissue. Eng. 12 (5), 1295-1304 (2006).
  6. Purcell, E. K., Singh, A., Kipke, D. R. Alginate composition effects on a neural stem cell-seeded scaffold. Tissue. Eng. Part. C. Methods. 15 (4), 541-550 (2009).
  7. Wee, S., Gombotz, W. R. Protein release from alginate matrices. Adv. Drug. Deliv. Rev. 31 (4), 267-285 (1998).
  8. Tashjian, A. H. Jr Clonal strains of hormone-producing pituitary cells. Methods. Enzymol. 58, 527-535 (1979).
  9. Fasekas, I., et al. Characterization of human pituitary adenomas in cell cultures by light and electron microscopic morphology and immunolabeling. Folia. Histochem. Cytobiol. 43 (2), 81-90 (2005).
  10. Kohler, P. O., Bridson, W. E., Rayford, P. L., Kohler, S. E. Hormone Production by Human Pituitary Adenomas in Culture. Metabolism. 18 (9), 782-788 (1969).
  11. Kletzkky, O. A., Marrs, R. P., Rundall, T. T., Weiss, M. H., Beierle, J. W. Monolayer and suspension culture of human prolactin-secreting pituitary adenoma. Am. J. Obstet. Gynecol. 138 (6), 660-664 (1980).
  12. Melmed, S., Odenheimer, D., Carlson, H. E., Hershman, J. M. Establishment of functional human pituitary tumor cell cultures. In Vitro. 18 (1), 35-42 (1982).
  13. Thompson, K. W., Vincent, M. M., Jensen, F. C., Price, R. T., Schapiro, E. Production of hormones by human anterior pituitary cells in serial culture. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 102 (2), 403-408 (1959).
  14. Cappabianca, P., Cavallo, L. M., Solari, D., Stagno, V., Esposito, F., de Angelis, M. Endoscopic endonasal surgery for pituitary adenomas. World neurosurg. 82 (6 Suppl), S3-S11 (2014).
  15. Aplin, J. Model Matrices for Studing Cell Adhesion. Measuring cell adhesion. Curtis, A. S. G., Lackie, J. M. , John Wiley & Sons. 110-111 (1991).
  16. Guiraud, J. M., et al. Human prolactin-producing pituitary adenomas in three-dimensional culture. In. Vitro. Cell. Dev. Biol. 27 (3), 188-190 (1991).
  17. Ma, H. L., Hung, S. C., Lin, S. Y., Chen, Y. L., Lo, W. H. Chondrogenesis of human mesenchymal stem cells encapsulated in alginate beads. J. Biomed. Mater. Res. A. 64 (2), 273-281 (2003).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

ثلاثي الأبعاد الثقافة الجيني حبة من خلايا الإنسان ورم الغدة النخامية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.