مقالة منهجية

النمذجة العلاج الكيميائي اللوكيميا المقاومة في المختبر

DOI:

10.3791/53645

⸱

فبراير 9, 2016

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Alexander B. Osborn Hematopoietic Malignancy and Transplantation Program of the Mary Babb Randolph Cancer Center, Robert C. Byrd Health Sciences Center, West Virginia University School of Medicine, 2Department of Neurobiology and Anatomy, Robert C. Byrd Health Sciences Center, West Virginia University School of Medicine, 3Department of Microbiology, Immunology and Cell Biology, Robert C. Byrd Health Sciences Center, West Virginia University School of Medicine

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يلخص التقرير الحالي بروتوكولا يمكن استخدامه لنمذجة تأثير البيئة المكروية لنخاع العظام على خلايا سرطان الدم مع التركيز على إثراء السكان الفرعيين الأكثر مقاومة للكيماويات.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

من الثابت أن البيئة المكروية لنخاع العظم توفر موقعا فريدا للملاذ الآمن للأمراض المكونة للدم التي تبدأ وتتقدم في هذا الموقع. يستخدم النموذج المقدم في التقرير الحالي الخلايا اللحمية لنخاع العظم البشري الأولي وبانيات العظم كنوعين تمثيليين من الخلايا من مكانة النخاع التي تؤثر على النمط الظاهري للخلايا السرطانية. تدعم ظروف الزراعة المشتركة في المختبر الموصوفة لخلايا سرطان الدم البشرية مع هذه المكونات المتخصصة الأولية توليد مجموعة سكانية فرعية مقاومة للعلاج الكيميائي من الخلايا السرطانية التي يمكن استردادها بكفاءة من المزرعة لتحليلها بتقنيات متنوعة. يوفر جدول التغذية الصارم لمنع تدفقات المغذيات متبوعا باستعادة جزيئات ديكستران المتشابكة من النوع 10 من مجموعة الخلايا السرطانية التي هاجرت تحت الخلايا اللحمية لنخاع العظم الملتصقة (BMSC) أو بانيات العظم (OB) التي تولد مجموعة "خافتة الطور" (PD) من الخلايا السرطانية ، مصدرا ثابتا لخلايا سرطان الدم المقاومة للعلاج النقي. يمكن تقييم هذه المجموعة ذات الصلة سريريا من الخلايا السرطانية بالطرق القياسية للتحقيق في المسارات التنظيمية لموت الخلايا المبرمج والتمثيل الغذائي ودورة الخلية بالإضافة إلى توفير هدف أكثر صرامة لاختبار الاستراتيجيات العلاجية الجديدة قبل التحقيقات قبل السريرية التي تستهدف الحد الأدنى من المرض المتبقي.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهدف العام للطريقة الموصوفة هو توفير نهج فعال وفعال من حيث التكلفة في المختبر يدعم التحقيق في الآليات التي تكمن وراء بقاء خلايا سرطان الدم المدعومة بنخاع العظم أثناء التعرض للعلاج الكيميائي. من الموثق جيدا أن الخلايا السرطانية المتبقية التي تستمر بعد العلاج تساهم في انتكاسة المرض الذي غالبا ما يكون أكثر عدوانية من ذلك عند التشخيص وغالبا ما يتم علاجه بشكل أقل فعالية1-8. النماذج التي تتضمن خلايا سرطان الدم بمعزل عن بعضها البعض ، مثل تلك التي تقتصر على زراعة الخلايا في الوسائط وحدها ، لاختبار الأساليب العلاجية لا تأخذ في الاعتبار هذه الإشارات الحرجة ، أو عدم تجانس المرض الذي يحدث استجابة لتوافر الإشارات المشتقة المتخصصة التي تستمد فيها المجموعات السكانية الفرعية للخلايا السرطانية ذات التفاعلات المحددة للغاية مع الخلايا المتخصصة حماية معززة. عالجت نماذج الزراعة المشتركة القياسية ثنائية الأبعاد التي تشارك في الزراعة المشتركة للخلايا اللحمية المشتقة من نخاع العظام وخلايا سرطان الدم إلى حد ما مساهمة مكانة النخاع وأظهرت أن التفاعل مع خلايا البيئة المكروية لنخاع العظم يزيد من مقاومتها للعلاج الكيميائي ويغير خصائص نموها9-14. ومع ذلك ، غالبا ما تفشل هذه النماذج في تلخيص بقاء الخلايا السرطانية على المدى الطويل ولا تبلغ بدقة النتائج المرتبطة بمجموعات خلايا سرطان الدم الأكثر مقاومة التي تساهم في MRD. تظل النماذج في الجسم الحي حاسمة وتحدد "المعيار الذهبي" للتحقيق في العلاجات المبتكرة قبل التجارب السريرية ، ولكنها غالبا ما تواجه تحديا بسبب الوقت والتكلفة اللازمين لاختبار الفرضيات المتعلقة بالأورام المقاومة وانتكاس المرض. على هذا النحو ، فإن تطوير نماذج ثنائية الأبعاد أكثر إفادة سيكون مفيدا للتحقيقات التجريبية لإبلاغ تصميم ما قبل السريري اللاحق القائم على الفئران بشكل أفضل.

يفتقر النموذج 2D في المختبر المقدم في هذا التقرير إلى تعقيد البيئة المكروية الحقيقية في الجسم الحي ، ولكنه يوفر وسيلة فعالة من حيث التكلفة وقابلة للتكرار لاستجواب تفاعلات الورم مع البيئة المكروية التي تفسح المجال على وجه التحديد لإثراء السكان الفرعيين المقاوم للمواد الكيميائية للخلايا السرطانية. هذا التمييز ذو قيمة لأن تقييم جميع مجموعات الخلايا السرطانية قد يخفي النمط الظاهري لمجموعة ثانوية من الخلايا السرطانية المقاومة للعلاج والتي تشكل الهدف الأكثر أهمية. ميزة إضافية هي قابلية التوسع للنموذج ليناسب تحليل الاهتمام. يمكن إنشاء الثقافات السائبة لتلك التحليلات التي تتطلب انتعاشا كبيرا للخلايا السرطانية ، بينما يمكن استخدام الثقافات المشتركة الصغيرة في الألواح متعددة الآبار للتحليل القائم على تفاعل البوليميراز المتسلسل أو التقييمات القائمة على الفحص المجهري.

< p class = 'jove_content'>بناء على هذه الحاجة ، قمنا بتطوير نموذج في المختبر لمعالجة عدم تجانس المرض الذي يميز ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد (ALL) من سلالة B. نثبت أن جميع الخلايا ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد ، التي تشترك في العديد من الخصائص المشتركة مع نظيراتها السليمة ، تتمركز في مقصورات متميزة من BMSC أو الزراعة المشتركة OB. يتم إنشاء ثلاث مجموعات من الخلايا السرطانية التي لها أنماط ظاهرية مميزة ذات قيمة للتحقيق في الاستجابة العلاجية. على وجه التحديد ، نوضح أن خلايا (ALL) المستردة من مجموعة "خافت الطور" (PD) للزراعة المشتركة تكون مقاومة باستمرار للعلاج مع البقاء على قيد الحياة الذي يقترب من الخلايا السرطانية التي لم تتعرض للعوامل السامة للخلايا. تهاجر خلايا ALL هذه ، إما من خطوط الخلايا الراسخة أو عينات المرضى الأولية ، تحت الخلايا اللحمية الملتصقة أو طبقات بانيات العظم ولكن يمكن التقاطها بعد التربسين للثقافات وفصل أنواع الخلايا عن طريق استخدام أعمدة الجسيمات من النوع 10 من ديكستران المتقاطع (G10)15.

نقدم هنا إعدادا لثقافة مشتركة ثنائية الأبعاد يمكن استخدامها لنمذجة التفاعلات بين الخلايا اللحمية للبيئة المصغرة لنخاع العظام (BMSC / OB) وخلايا سرطان الدم. من الأهمية بمكان ملاحظة أن خلايا سرطان الدم تشكل ثلاث مجموعات سكانية فرعية مكانية بالنسبة للطبقة الأحادية للخلايا اللحمية وأن مجموعة باركنسون تمثل مجموعة من الأورام المقاومة للعلاج الكيميائي بسبب تفاعلها مع BMSC أو OB. علاوة على ذلك ، نوضح كيفية عزل مجموعات خلايا سرطان الدم بشكل فعال بواسطة أعمدة G10. وتجدر الإشارة إلى أننا وجدنا أن عزل هذه المجموعات السكانية الفرعية يسمح بتحليل المصب لمجموعة باركنسون الأكثر مقاومة لتحديد أنماط المقاومة المحتملة التي تمنح لهذه الخلايا بسبب تفاعلها مع الخلايا اللحمية أو الخلايا العظمية أو بانيات العظم. تشمل التقنيات التي استخدمناها في اتجاه مجرى نموذج الزراعة والعزل المشترك تقييم قياس التدفق الخلوي والتحليل البروتيني وتقييم تعبير البروتين المستهدف بالإضافة إلى تأين الرش الكهربائي للاستئصال بالليزر (LAESI) وتحليل فرس البحر لتقييم ملامح التمثيل الغذائي. من خلال استخدام هذا النموذج جنبا إلى جنب مع التقنيات المذكورة أعلاه ، وجدنا أن مجموعة باركنسون من خلايا سرطان الدم لديها نمط ظاهري مقاوم للعلاج الكيميائي فريد من نوعه عند مقارنته بخلايا سرطان الدم المزروعة في الوسائط وحدها أو تلك التي تم استردادها من المجموعات السكانية الفرعية الأخرى في نفس الثقافة المشتركة. على هذا النحو ، فإن هذا النموذج يفسح المجال لتقييم أكثر صرامة لاختبار الاستراتيجيات التي تستهدف خلايا اللوكيميا الأكثر مقاومة للعلاج الكيميائي والتي تستمد نمطها الظاهري المقاوم من خلال التفاعل مع البيئة الدقيقة لنخاع العظم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إعداد المتقدم

  1. إعداد جزيئات G10 ديكستران.
    1. إعداد G10 الطين وذلك بإضافة 50 مل برنامج تلفزيوني 1X إلى 10 جزيئات ز G10. مزيج من قبل انقلاب والسماح G10 لتسوية من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) في 4 درجات CO / N.
    2. يوم الفصل العمود G10، نضح في برنامج تلفزيوني من الجسيمات G10 استقر وإضافة 50 مل برنامج تلفزيوني جديد. مزيج من قبل انقلاب. كرر مرتين، بإضافة 50 مل برنامج تلفزيوني جديد للجسيمات G10 استقر وتخزينها في 4 درجات مئوية لتصبح جاهزة للاستخدام.
  2. زراعة BMSC وOB.
    1. الحفاظ على حد سواء BMSC أو OB عند 37 درجة مئوية في 6٪ CO 2 ونمت على لوحات زراعة الأنسجة 10 سم حتى يتم التوصل إلى 90٪ confluency.
    2. يعرض للتريبسين BMSC أو خلايا OB وتقسيم 1: 2 على 10 سم لوحات جديدة. تزرع الخلايا لهذه المعايير لحين الحاجة إليها لاللوكيميا شارك في زراعة.

2. إنشاء والحفاظ على المشارك الثقافة

  1. إضافة 5-20 × 10 6 خلايا اللوكيميا طن 10 مل من الورم وسائل الإعلام ثقافة بعينها على 80٪ -90٪ متموجة BMSC أو لوحة OB.
    ملاحظة: يحتفظ مختبرنا المشترك الثقافات عند 37 درجة مئوية في 5٪ O 2 لألخص أفضل المكروية نخاع العظام وهو ما ثبت بما يتراوح بين 1٪ إلى 7٪ 16-18. ومع ذلك، والحفاظ على المشترك الثقافات في هذا التوتر الأكسجين ليست حرجة لإنشاء القطعان اللوكيميا ثلاثة وهو في السلطة التقديرية للمختبر.
  2. كل يوم 4 تشرين إزالة جميع ولكن 1 مل من وسائل الاعلام (بما في ذلك خلايا اللوكيميا في تعليق) واستبدالها مع 9 مل سائل الإعلام والثقافة ابيضاض الدم النقي. عند إزالة 9 مل من وسائل الاعلام من لوحة، ويجب الحرص على عدم تعكير صفو BMSC أو OB طبقة ملتصقة.
    1. إزالة وسائل الاعلام عن طريق إمالة لوحة إلى جانب وسائل الاعلام نضح في زاوية اللوحة. بالإضافة إلى ذلك، عند إضافة وسائل الإعلام الجديدة، ومن المؤكد أن إضافة قطرة من الحكمة في ركن من لوحة على جدار لضمان الحد الأدنى من انقطاع طبقة BMSC أو OB ملتصقة.
  3. بعد اليوم ال 12 من شارك في الثقافة، وشطف خلايا اللوكيميا من BMSC أو طبقة OB قبل pipetting سائل الإعلام والثقافة من الطبق إلى أعلى وأسفل بلطف على طبق ما يقرب من 5 إلى 10 مرات ثم جمع في 15 مل أنبوب مخروطي الشكل. RESEED على الجديدة 80٪ -90٪ BMSC متموجة أو لوحة OB كما هو موضح في الخطوة 2.1.
    ملاحظة: الشطف لطيف من الثقافة المشتركة كما هو موضح في الخطوة 2.3 سيزيل S وPB خلايا اللوكيميا دون تعطيل BMSC أو OB أحادي الطبقة. وهذا يسمح الخلايا السرطانية فقط على أن يتم تحويلها إلى لوحة الثقافة المشتركة القادمة. هذه الدورة 12 يوما ويمكن تكرار عدة مرات حسب الحاجة على أساس احتياجات المستخدمين.

3. إعداد أعمدة G10 الخرزة

ملاحظة: إذا كان مطلوبا تحليل المصب معقمة أو زراعة بعد الانفصال العمود G10 ينبغي إجراء الخطوات التالية خارج باستخدام تقنية معقمة ويجب أن أعمدة G10 يكون الإعداد في غطاء البيولوجي العقيمة.

  1. قبل واجمهورية مقدونيا وسائل الإعلام ثقافة الخلية إلى 37 درجة مئوية في حمام مائي (~ 30 مل لكل عمود). باستخدام الحقنة 10 مل، إزالة والتخلص الغطاس. إضافة الصوف الزجاجي إلى حقنة.
  2. باستخدام الملقط، مزق الصوف الزجاجي إلى فضفاضة رقيقة. إضافة طبقات متعددة من الصوف الزجاجي معبأة طفيفة إلى حقنة حتى يتم ملء 2/3 من الحقنة مع الصوف الزجاجي.
    ملاحظة: والصوف الزجاجي أمر حاسم لمنع الجزيئات G10 فضفاضة من تلويث جمع خلية اللوكيميا. جعل حزمت متأكد الصوف الزجاجي كافية لدعم الجسيمات G10، ولكن ليس مكتظة جدا لمنع تدفق وسائل الاعلام من خلال العمود.
  3. نعلق 1 في اتجاه ومحبس إلى طرف الحقنة في موقف مغلقة.
  4. المشبك العمود حقنة لعصابة تقف عالية بما فيه الكفاية حتى 50 مل أنبوب مخروطي (أنبوب جمع) يمكن وضعها تحت محبس. وضع أنبوب جمع تحت العمود حقنة.
  5. باستخدام ماصة 10 مل إضافة، وانخفاض الحكيم، والجسيمات G10 معلق في برنامج تلفزيوني للعمود على رأسالصوف الزجاجي. متابعة إضافة جزيئات G10 حتى مل بيليه ~ 2 (مقاسا التخرج على حقنة) من G10 الجسيمات النماذج على أعلى الصوف الزجاجي.
  6. تتوازن العمود G10 مع وسائل الاعلام قبل تحسنت.
    1. إضافة 2 مل من وسائل الاعلام قبل تحسنت إلى العمود. فتح صمام محبس ببطء بحيث يتدفق سائل الإعلام من العمود قطرة من الحكمة.
    2. كرر الخطوة 3.6.1 حتى ما مجموعه 10 مل من وسائل الاعلام استعد مسبقا تم ركض عبر العمود.
      ملاحظة: إذا كان ينظر إلى جسيمات G10 في تدفق عن طريق أنبوب جمع، إما 1) إضافة المزيد من الجسيمات G10 للحفاظ ~ 2 مل بيليه والتأكد من عدم وجود جزيئات G10 إضافية الهروب من العمود أو 2) استبدال عمود مع واحد غير المستخدمة وتكرار الخطوات 3.4-3.6.1.
    3. بعد المصارف وسائل الاعلام قبل تحسنت من العمود، إغلاق محبس وتجاهل أنبوب جمع مع التدفق من خلال. إضافة أنبوب مجموعة جديدة تحت العمود. العمود جاهز للتحميل مع وسائل الاعلام + خلية الخليط.
      ملاحظة: أعمدةيجب أن تستخدم فورا وعدم السماح لتجف.

4. فصل 3 مجموعات سكانية فرعية داخل المشارك الثقافة

  1. جمع حيوانية تعليق (S) الورم.
    1. وسائل الإعلام نضح من لوحة ثقافة مشتركة مع ماصة وبلطف إعادة تطبيق نفس وسائل الإعلام لشطف لوحة، وجمع وسائل الإعلام التي تحتوي على خلايا اللوكيميا في 15 مل أنبوب مخروطي الشكل. خلايا اللوكيميا التي تم جمعها هي حيوانية S.
  2. مجموعة من المرحلة الساطع (PB) حيوانية الورم.
    1. إضافة 10 مل وسائل الإعلام الجديدة مرة أخرى على لوحة ثقافة مشتركة. شطف بقوة من قبل pipetting وسائل الاعلام وأضاف صعودا وهبوطا ما يقرب من 5 مرات لإزالة خلايا اللوكيميا ملتصقة لكن ليس من الصعب بما فيه الكفاية لطرد ملتصقة BMSC / OB المكون.
    2. نضح مع ماصة، وجمع وسائل الاعلام في 15 مل أنبوب مخروطي الشكل. الخلايا التي تم جمعها هي حيوانية PB.
  3. مجموعة من المرحلة خافت (PD) حيوانية الورم.
    1. لوحة شطف مع 1 مل برنامج تلفزيوني لعينيوسائل الاعلام المتبقية اوفه. يعرض للتريبسين لوحة ثقافة مشتركة مع 3 مل التربسين ومكان في الحاضنة 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
    2. إزالة لوحة من الحاضنة وبلطف استفادة الجانبين من لوحة لطرد ملتصقة BMSC / OB.
    3. إضافة 1 مل الجنين المصل البقري (FBS) وماصة صعودا وهبوطا 3-5 مرات لكسر المجاميع خلية كبيرة عن بعضها البعض.
    4. جمع وسائل الإعلام مع خلايا في أنبوب مخروطي 15 مل. هذه الخلايا هي حيوانية PD غير المكرر، مع BMSC / OB كذلك.
  4. الطرد المركزي 3 معزولة القطعان في 400 x ج لمدة 7 دقائق. نضح وتجاهل طاف resuspend ثم بشكل فردي الكريات في 1 مل وسائل الاعلام قبل تحسنت. الخلايا جاهزة للتحميل على عمود G10.

5. تحميل خلايا المشارك الثقافة على G10 العمود

ملاحظة: تأكد من محبس مغلق تماما قبل إضافة الخلايا سائل الإعلام التي تحتوي على عمود G10. أيضا، يجب أن يدير مجموعة حيوانية على عمود G10 منفصلة حتى لا introducالبريد أي تحيز بين السكان في تحليل المصب.

  1. باستخدام ماصة 1000 ميكرولتر، إضافة 1 مل من كل حيوانية خلية في وسائل الاعلام قبل تحسنت إلى عمود G10 منفصل قطرة من الحكمة. تأكد من أن وسائل الإعلام التي تحتوي على خلايا يبقى على رأس أو داخل بيليه G10. تسمح للخلايا لاحتضان على بيليه G10 لمدة 20 دقيقة في RT.
    ملاحظة: لا يزال محبس مغلقة لمدة الحضانة.

6. جمع خلايا اللوكيميا السرطانية من G10 العمود

  1. إضافة 1-3 وسائل الإعلام مل قبل تحسنت إلى كل عمود G10. فتح صمام محبس والسماح لوسائل الإعلام للخروج ببطء العمود قطرة من الحكمة.
    ملاحظة: من المهم جدا للحفاظ على معدل تدفق بطيء من العمود أو بيليه G10 التي تحتوي على BMSC / OB يمكن أن تغسل العمود وتلوث خلايا اللوكيميا معزولة.
  2. الاستمرار في إضافة وسائل الاعلام قبل تحسنت بزيادات صغيرة (1-2 مل) إلى العمود G10 حتى ما مجموعه 15-20 مل وتعمل من خلال عمود وتم جمعها. انهيار فا محبسأنبوب LVE وغطاء جمع.
    ملاحظة: إذا كان ينظر إلى بيليه G10 الجسيمات في الجزء السفلي من أنبوب جمع، وإزالة بلطف وسائل الاعلام من أنبوب ترك G10 الجسيمات بيليه دون عائق، ونقل إلى أنبوب جديد.
  3. أجهزة الطرد المركزي التي تم جمعها وسائل الاعلام في 400 x ج لمدة 7 دقائق على RT. إزالة طاف و resuspend بيليه خلية في العازلة المناسبة لتطبيق المصب.
  4. الخلايا هي الآن السكان نقية من خلايا اللوكيميا خالية من BMSC أو تلوث OB ونحن على استعداد ليتم تطبيقها على التطبيقات المصب في تقدير المستخدم.
    ملاحظة: يجب أن تبقى بقاء الخلية اللوكيميا السرطانية دون تغيير عند تمرير الخلايا من خلال أعمدة G10.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سيقوم برنامج الإعداد الناجح وثقافة هذا النموذج ثقافة مشتركة تؤدي إلى إنشاء 3 مجموعات سكانية فرعية من الخلايا اللوكيميا النسبية إلى ملتصقة BMSC أو OB أحادي الطبقة. يوضح الشكل 1 كيف ALL الخلايا المزروعة في أحادي الطبقة BMSC تظهر في البداية على أنها فقط من السكان واحد من وقف التنفيذ خلايا اللوكيميا. وعلى مدار 4 أيام خلايا اللوكيميا تتفاعل مع BMSC لتشكيل 3 مجموعات سكانية فرعية المكانية للخلايا اللوكيميا (مع وقف التنفيذ (S)، مرحلة مشرقة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرض المتبقية الحد الأدنى (MRD) الذي يساهم في انتكاس المرض لا يزال يشكل تحديا كبيرا السريرية في علاج صهر عدوانية ALL، وكذلك، ومجموعة من الأورام الخبيثة الدم الأخرى. المكروية نخاع العظام هي الموقع الاكثر شيوعا من انتكاسة في جميع 3،8. على هذا النحو، ونماذج أن نموذج المكروية نخاع العظم هي أدوات حيوية لاختبار الفرضيات المتعلقة اللوكيميا بقاء الخلايا السرطانية وصيانة MRD أثناء التعرض للعلاج الكيميائي. في حين أن النماذج الماوس تحدد المعيار الذهبي لأسئلة الاختبار المتعلقة نجاعة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس للمؤلفين مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = 'jove_content'> بدعم من المعاهد الوطنية للصحة (NHLBI) R01 HL056888 (LFG) ، والمعهد الوطني للسرطان (NCI) RO1 CA134573NIH (LFG) ، و P30 GM103488 (LFG) ، و WV CTR-IDEA NIH 1U54 GM104942 ، وبرنامج ألكسندر ب. أوزبورن للأورام الخبيثة المكونة للدم وزرعها ، والصندوق الاستئماني للأبحاث WV. نحن ممتنون لدعم الدكتورة كاثي بروندج والمرفق الأساسي لقياس التدفق الخلوي بجامعة ويست فيرجينيا ، بدعم من المعاهد الوطنية للصحة S10-OD016165 وجائزة التطوير المؤسسي (IDeA) من معهد المعاهد الوطنية للصحة للعلوم الطبية العامة التابع للمعاهد الوطنية للصحة (CoBRE P30GM103488 و INBRE P20GM103434).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حبات سيفاديكس G10سيجماG10120يشار إليها في المخطوطة باسم جسيمات ديكستران من النوع 10 متشابكة
10 مل حقنة معقمةBD309604
الصوف الزجاجيPyrex3950
1-way stopcocksWorld Precision Instruments، Inc.14054-10
50 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية فيأنحاء العالم المنتجات الطبية41021039تستخدم كأنابيب تجميع
15 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية فيجميع أنحاء العالم 41021037تستخدم لجمع الخلايا
مصل الأبقار الجنينيسيجماF6178
0.05٪ التربسين & nbsp ؛ميدياتك ، إنك.25-053-CI
100 × 20 مم أطباق ثقافة الخلاياGreiner Bio-One664160
Culture media
Osteoblast Culture, Media PromoCellC-27001لوسائط بانيات العظم البشرية  
RPMI 1640 وسائل الإعلامMediatech، Inc.15-040لتحضير وسائط الورم   ؛
<خطوط خلوية قوية>
< قوية > خلايا ملتصقة: < / قوي >
بانيات العظم البشريةPromoCellC-12720تم استزراع بانيات العظم البشرية وفقا للمورد ' توصيات S. 
تم توفير خلايا اللحمة للعظام البشرية موروWVU العينات الحيوية الأساسيةغير المحددة من سرطان الدم البشري الأولي والخلايا اللحمية لنخاع العظم (BMSC) من قبل مركز ماري باب راندولف للسرطان (MBRCC) وقسم قسم علم الأمراض بنك الأنسجة بجامعة فيرجينيا الغربية. تم إنشاء ثقافات BMSC كما هو موضح سابقا (*) <
قوية >خلايا اللوكيم: < / قوي>
REHATCCATCC-CRL-8286تم استزراع خلايا REH وفقا للمورد ' توصيات ووسائل الإعلام الموصى بها. 
SD-1DSMZACC 366SD-1 وفقا للمورد توصيات ووسائل الإعلام الموصى بها. 
جميع تم استزراع < td colspan = "4" > (*) جيبسون إل إف ، فورتني جيه ، لاندريث كانساس إس ، بيكتيل دي ، إريكسون إس جي ، لينش جي بي. اضطراب وظيفة الخلايا اللحمية لنخاع العظم بواسطة إيتوبوسيد. زرع نخاع الدم بيول J Am Soc زرع نخاع الدم. 1997 أغسطس; 3 (3): 122 - 32.

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ayala, F., Dewar, R., Kieran, M., Kalluri, R. Contribution of bone microenvironment to leukemogenesis and leukemia progression. Leukemia. 23 (12), 2233-2241 (2009).
  2. Coustan-Smith, E., Sancho, J., et al. Clinical importance of minimal residual disease in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood. 96 (8), 2691-2696 (2000).
  3. Gaynon, P. S., Qu, R. P., et al. Survival after relapse in childhood acute lymphoblastic leukemia. Cancer. 82 (7), 1387-1395 (1998).
  4. Kikuchi, M., Tanaka, J., et al. Clinical significance of minimal residual disease in adult acute lymphoblastic leukemia. Int. J. Hematol. 92 (3), 481-489 (2010).
  5. Krause, D. S., Scadden, D. T., Preffer, F. I. The hematopoietic stem cell niche-home for friend and foe? Cytometry B Clin. Cytom. 84 (1), 7-20 (2013).
  6. Meads, M. B., Hazlehurst, L. A., Dalton, W. S. The Bone Marrow Microenvironment as a Tumor Sanctuary and Contributor to Drug Resistance. Clin. Cancer Res. 14 (9), 2519-2526 (2008).
  7. Nguyen, K., Devidas, M., et al. Factors Influencing Survival After Relapse From Acute Lymphoblastic Leukemia: A Children's Oncology Group Study. Leuk. Off. J. Leuk. Soc. Am. Leuk. Res. Fund UK. 22 (12), 2142-2150 (2008).
  8. Szczepanek, J., Styczyński, J., Haus, O., Tretyn, A., Wysocki, M. Relapse of Acute Lymphoblastic Leukemia in Children in the Context of Microarray Analyses. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.). 59 (1), 61-68 (2011).
  9. Boyerinas, B., Zafrir, M., Yesilkanal, A. E., Price, T. T., Hyjek, E. M., Sipkins, D. A. Adhesion to osteopontin in the bone marrow niche regulates lymphoblastic leukemia cell dormancy. Blood. 121 (24), 4821-4831 (2013).
  10. Bradstock, K., Bianchi, A., Makrynikola, V., Filshie, R., Gottlieb, D. Long-term survival and proliferation of precursor-B acute lymphoblastic leukemia cells on human bone marrow stroma. Leukemia. 10 (5), 813-820 (1996).
  11. Clutter, S. D., Fortney, J., Gibson, L. F. MMP-2 is required for bone marrow stromal cell support of pro-B-cell chemotaxis. Exp. Hematol. 33 (10), 1192-1200 (2005).
  12. Manabe, A., Murti, K. G., et al. Adhesion-dependent survival of normal and leukemic human B lymphoblasts on bone marrow stromal cells. Blood. 83 (3), 758-766 (1994).
  13. Mudry, R. E., Fortney, J. E., York, T., Hall, B. M., Gibson, L. F. Stromal cells regulate survival of B-lineage leukemic cells during chemotherapy. Blood. 96 (5), 1926-1932 (2000).
  14. Tesfai, Y., Ford, J., et al. Interactions between acute lymphoblastic leukemia and bone marrow stromal cells influence response to therapy. Leuk. Res. 36 (3), 299-306 (2012).
  15. Hathcock, K. S. Depletion of Accessory Cells by Adherence to Sephadex G-10. Curr. Protoc. , (2001).
  16. Berniakovich, I., Giorgio, M. Low oxygen tension maintains multipotency, whereas normoxia increases differentiation of mouse bone marrow stromal cells. Int. J. Mol. Sci. 14 (1), 2119-2134 (2013).
  17. Chow, D. C., Wenning, L. A., Miller, W. M., Papoutsakis, E. T. Modeling pO(2) distributions in the bone marrow hematopoietic compartment. II. Modified Kroghian models. Biophys. J. 81 (2), 685-696 (2001).
  18. Holzwarth, C., Vaegler, M., et al. Low physiologic oxygen tensions reduce proliferation and differentiation of human multipotent mesenchymal stromal cells. BMC Cell Biol. 11, (2010).
  19. O'Leary, H., Akers, S. M., et al. VE-cadherin Regulates Philadelphia Chromosome Positive Acute Lymphoblastic Leukemia Sensitivity to Apoptosis. Cancer Microenviron. Off. J. Int. Cancer Microenviron. Soc. 3 (1), 67-81 (2010).
  20. Wang, L., Chen, L., Benincosa, J., Fortney, J., Gibson, L. F. VEGF-induced phosphorylation of Bcl-2 influences B lineage leukemic cell response to apoptotic stimuli. Leukemia. 19 (3), 344-353 (2005).
  21. Wang, L., Coad, J. E., Fortney, J. M., Gibson, L. F. VEGF-induced survival of chronic lymphocytic leukemia is independent of Bcl-2 phosphorylation. Leukemia. 19 (8), 1486-1487 (2005).
  22. Jing, D., Fonseca, A. V., et al. Hematopoietic stem cells in co-culture with mesenchymal stromal cells--modeling the niche compartments in vitro. Haematologica. 95 (4), 542-550 (2010).
  23. Jing, D., Wobus, M., Poitz, D. M., Bornhäuser, M., Ehninger, G., Ordemann, R. Oxygen tension plays a critical role in the hematopoietic microenvironment in vitro. Haematologica. 97 (3), 331-339 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Phase Dim G10

مقالات ذات صلة