يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

Loss- ونهج كسب من وظيفة إلى التحقيق في خلية المبكر مصير محددات في سابق للانغراس أجنة الفئران

8.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/53696

⸱

يونيو 6, 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Nanobiomedical Sciences and BK21 PLUS NBM Global Research Center for Regenerative Medicine, Dankook University, 2Insititute of Tissue Regeneration Engineering, Dankook University, 3Department of Biological Sciences, Ajou University, 4Department of Pharmacy, Sahmyook University, 5Department of Animal Biotechnology, Sahmyook University

في هذه المقالة

ملخص

والهدف من هذا البروتوكول هو لوصف loss- وكسب من طريقة وظيفة التي تنطبق على تحديد neogenin بمثابة مستقبلات مرحلة معينة أن يؤدي إلى الأديم الظاهر الغاذي والخلايا الداخلية التمايز الشامل في الأجنة قبل الغرس الماوس.

الملخص

تعد تقنيات إسكات الجينات والإفراط في التعبير عنها مفيدة في تحديد الجينات المشاركة في التطور الجنيني. يوفر التعديل الجيني المستهدف المباشر في أجنة ما قبل الزرع وسيلة لدراسة الآليات الأساسية للجينات المتورطة ، على سبيل المثال ، في التمايز الخلوي في الأديم الغاذي (TE) وكتلة الخلية الداخلية (ICM). هنا ، نصف بروتوكولا يفحص دور النيوجينين كمستقبل أصيل لتحديد مصير الخلية الأولي في أجنة الفئران قبل الزرع. أولا ، نناقش التلاعبات التجريبية التي تم استخدامها لإنتاج اكتساب وفقدان وظيفة النيوجينين عن طريق الحقن الدقيق للنيوجينين (كدنا) و shRNA. تم تأكيد فعالية هذا النهج من خلال وجود علاقة قوية بين مستويات التعبير الزوجي إما للبروتين الفلوري الأحمر (RFP) أو البروتين الفلوري الأخضر (GFP) والتقدير الكمي الكيميائي المناعي لتعبير النيوجينين. ثانيا ، يؤدي الإفراط في التعبير عن النيوجينين في أجنة الفئران قبل الزرع إلى تطور ICM الطبيعي بينما تتسبب ضربة قاضية من النيوجينين في تطور ICM بشكل غير طبيعي ، مما يعني أن النيوجينين يمكن أن يكون مستقبلا ينقل إشارات خارج الخلية لدفع الأريمات إلى مصائر الخلايا المبكرة. نظرا لنجاح هذا البروتوكول التفصيلي في التحقيق في وظيفة مستقبلات جديدة خاصة بمرحلة النمو الجنينية ، نقترح أن لديه القدرة على المساعدة في استكشاف وتحديد الجينات الأخرى الخاصة بالمرحلة أثناء التطور الجنيني.

المقدمة

سابق للانغراس التطور الجنيني يمكن تقسيمها إلى عدة مراحل متميزة، من مرحلة خلية واحدة إلى تويتة والكيسة. وتشير أدلة كثيرة على أن الاستقطاب والعظة الموضعية تلعب دورا في أوائل تقرير مصير الخلية إلى الأديم الظاهر الغاذي (TE) وكتلة الخلايا الداخلية (ICM). ومع ذلك، فإن طبيعة العظة، وكيف transduced أنها في الإشارات الخلوية، والسياقات الفسيولوجية التي يمكن لهذه الإشارات هي قادرة على الشروع في خلية النسب التمايز ليست معروفة. هذه الخلايا المتمايزة ثم الخضوع التخصص، بدأت تأخذ على هياكل مميزة والوظائف اللازمة للجنين تشكيل السليم ونمو المشيمة 1-3.

الأجنة ما قبل الزرع قابلة جدا للتلاعب عن طريق الحقن المباشر للمواد الجينية المعدلة مثل سيرنا أو كدنا] الهدف، وبالتالي يمكن استخدامها لدراسة الجزيئات المستهدفة المحددة. هناك فهم متزايد بأن الوراثيةتحليل للأجنة الفقاريات أمر بالغ الأهمية لتعزيز فهمنا من التطور الجنيني 4. مقدمة الدقيق للجينات من النوع البري أو شكل متحولة إلى الجنين في سياق الوقت المناسب لإنجاز gain- أو الخسارة من وظيفة الجين قد سهلت كثيرا من دراسة الجينات ينظم تنمويا. Loss- وكسب من وظيفة عبر Microinjection من المواد الوراثية في الأجنة غير الثدييات والثدييات الفردية في وقت مبكر هو بسيط نسبيا بسبب حجمها الكبير والتقبل الكبير 5. وعادة ما يتم إجراء حقن مكروي باستخدام ناقلات غير الفيروسية. وقد اتخذت ميزة خاصة من سهولة استخدام ناقلات غير الفيروسية عبر ناقلات فيروسية والجينات المحورة. وقد وضعت loss- السريع أو تحقيق مكاسب من وظيفة نظام التعبير في أجنة الفئران التي تسمح لنا لتشريح وفهم وظائف الجينات في الأجنة الفقارية 6،7.

أن وضع العلامات الفلورية الأجنة يسهل إلى حد كبير في اختيار ميكرoinjected أو وراثيا التلاعب الأجنة، وفي الوقت نفسه منح وسيلة لقياس غير مباشر على مستوى التعبير سيرنا microinjected أو كدنا] على أساس كثافة الفلورسنت 8. لإنجاز هذه العلامات، فلوري كدنا] بروتين، GFP أو طلب تقديم العروض، هي شارك في حقن إما يبني الانصهار أو على حدة. كثافة مضان من GFP أو طلب تقديم العروض تكشف عن مدى تعبير عن سيرنا أو الحمض النووي الأجانب لضمان أن loss- أو الحصول على وظيفة، وقد تم إنجازه.

هنا، نقدم بروتوكول المجهرية لloss- والكسب وغالبا تقنية وظيفة التي سمحت لنا لتحديد neogenin بمثابة مستقبلات أن التبديلات العظة خارج الخلية مهمة في تمايز الخلايا في وقت مبكر من الأجنة قبل الغرس الماوس.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: تم تنفيذ جميع الإجراءات اللازمة لتربية الحيوانات وهموم وفقا للوائح IACUC جامعة Sahmyook، سيول، كوريا الجنوبية.

1. فرط الإباضة، تربية وعزل قناة البيض

  1. الحفاظ الفطرية C57BL / 6 الفئران وفقا للشروط التالية: 22 ± 3 درجة مئوية، ~ 60٪ الرطوبة 12 ساعة ضوء / دورة الظلام، والماء والغذاء الإرضاع بحسب الرغبة.
  2. حمل فرط الإباضة من إناث الفئران القديم أسابيع 3-5 عن طريق الحقن داخل الصفاق من 5 وحدة دولية فرس الحامل موجهة الغدد التناسلية المصل (PMSG) في 0.1 مل / رئيس جاء بعد 48 ساعة عن طريق الحقن داخل الصفاق من 5 وحدة دولية موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية (HCG) في 0.1 مل /رئيس.
  3. مباشرة بعد الحقن قوات حرس السواحل الهايتية، تتزاوج الإناث الناجم عن فرط الإباضة مع الذكور الناضجة جنسيا من نفس السلالة من خلال ابقائها في نفس القفص بين عشية وضحاها.
  4. صباح اليوم التالي، تأكيد التزاوج الناجح من خلال وجود المكونات التزاوج أو المكونات المهبل على المسالك التناسلية للإناث.
  5. تضحية إناث الفئران الحواملبواسطة CO 2 التسمم تليها عنق الرحم التفكك 18-20 ساعة بعد الحقن قوات حرس السواحل الهايتية.
  6. فتح تجويف البطن عن طريق قطع الجلد ثم طبقة البريتوني مع مقص غرامة.
  7. التقاط قرون الرحم مع ملقط غرامة وسحب بعيدا الرحم، قناة البيض، المبيض، وسادة من الدهون بلطف من تجويف الجسم.
  8. قطع المنطقة الواقعة بين قناة البيض والمبيض مع مقص غرامة. إعادة ملقط وقطع الرحم بالقرب من قناة البيض، وترك 1 سم على الأقل من الجزء العلوي من الرحم المرفقة.
  9. نقل أمبولة بوقي إلى 35 مم طبق بتري تحتوي M16 المتوسطة في درجة حرارة الغرفة. تجمع ناقلة البيضات من الفئران عدة في نفس الطبق.
  10. ضع الأطباق تحت مجهر تشريحي لاسترجاع الأجنة.

2. استرجاع وثقافة 2-Pronuclear (2-PN) الأجنة

  1. قطع نهاية 30 أو 32 G إبرة تحت الجلد، طحنها إلى طرف غير حادة، واستخدامه بمثابة إبرة التنظيف.
  2. استعمالملقط غرامة لتنزلق نهاية قناة البيض على إبرة التنظيف. اضغط بلطف على رأس الإبرة بيغ ضد أسفل الطبق ليثبت في مكانه. طرد قناة البيض مع ~ 0.1 مل من M16 المتوسطة للافراج عن الأجنة 2-PN في طبق بيتري.
  3. استرداد الأجنة 2-PN جنبا إلى جنب مع توضيح الجماهير الركامية من المتوسط ​​M16 مسح تحت مجهر تشريحي باستخدام ماصة زجاجية معقمة ونقلها إلى طبق بيتري جديد.
  4. فصل الخلايا الركامية من الأجنة 2-PN عن طريق الهضم الأنزيمي مع 1.0 مل من 0.1-0.5٪ هيالورونيداز في Dulbecco والفوسفات مخزنة المالحة (DPBS) عند 37 درجة مئوية لمدة 5-10 دقيقة.
  5. تعرية الأجنة عن طريق pipetting بلطف مع ماصة الزجاج وإزالة المادية الخلايا الركامية.
  6. غسل الأجنة الجرداء ثلاث مرات مع 30-50 مل من الطازجة الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) في الجنين.
  7. احتضان الأجنة في 35 مم البلاستيك طبق بيتري في وسائل الإعلام M16 تستكمل مع 10 ملغ / مل ألبومين المصل البقري (BSA، Fractأيون V) عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2 في حاضنة ترطيب حتى يتم إجراء حقن مكروي، التي عادة ما تكون بعد أقل من 4 ساعات.

3. الأجنة النسخ العكسي (RT) وتفاعل البلمرة المتسلسل (PCR)

  1. جمع لا يقل عن 10 الأجنة من كل مرحلة وصولا إلى مرحلة الكيسة الأريمية وتجميع لهم في 4.0 ميكرولتر من 5X عكس الناسخ حل قبل مزيج يحتوي على إنزيم النسخ العكسي، ريبونوكلياز المانع، بنسبة ضئيلة DT التمهيدي، 6mers عشوائي، خليط dNTP، ورد فعل العازلة في PCR أنبوب.
  2. إضافة ريبونوكلياز خالية المقطر H 2 O إلى وحدة تخزين ما مجموعه 20 ميكرولتر ويصوتن الأجنة المجمعة لمدة 30 ثانية في 200 دبليو الشروع في رد فعل RT فورا في 42 درجة مئوية لمدة 1 ساعة يليها 5 دقائق حضانة في درجة حرارة 95 درجة مئوية.
  3. لكل 5.0 ميكرولتر من محلول كدنا] ولدت، إجراء طبيعي PCR التضخيم مع الاشعال لneogenin، Cdx2، Sox2، Tead4، NANOG، Oct3 / 4، أو β-الأكتين (تسلسل التمهيدي الواردة في الجدول 1. PCR يتكون من 40 دورات من الحضانة 15 ثانية في 95 درجة مئوية، و 30 ثانية في درجة حرارة الصلب (كما هو موضح في الجدول رقم 1)، و 30 ثانية في 72 درجة مئوية.
  4. المنتجات PCR منفصلة من قبل الكهربائي على هلام الاغاروز 2٪ وتصور هلام تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية بعد تلطيخ مع بروميد إيثيديوم.
  5. تطبيع التعبير الجيني الهدف ضد مستويات β أكتين.

4. سيتولوجية مناعية من الأجنة

  1. إصلاح الأجنة من كل مرحلة مع بارافورمالدهيد 4٪ في برنامج تلفزيوني لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة تليها غسل وجيزة 3 مرات مع برنامج تلفزيوني يحتوي على 0.01٪ BSA.
  2. الأغشية Permeabilize الخلية التي يحتضنها 10 الأجنة في 1.0 مل من برنامج تلفزيوني يحتوي على 0.1٪ توين 20 و 0.1٪ TritonX-100 في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة.
  3. لمنع انوعي ملزمة احتضان الأجنة permeabilized في 1.0 مل من برنامج تلفزيوني تستكمل مع 10٪ مصل الماعز العادي لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  4. احتضان سدت الأجنة خفة دمح أرنب أضداد neogenin في 1: 100 التخفيف في برنامج تلفزيوني يحتوي على 0.1٪ BSA بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
  5. بعد ثلاثة يغسل لمدة 30 ثانية في كل من قطرات من برنامج تلفزيوني، واحتضان الأجنة مع إما اليكسا 488 مترافق مفتش الماعز المضادة للأرنب أو اليكسا 568 مترافق مفتش الماعز المضادة للأرنب في 1: 500 التخفيف في حل PBS / جيش صرب البوسنة بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية .
  6. لتصور خيوط الأكتين، واحتضان الأجنة في 1 ميكروغرام / مل phalloidin في برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  7. وصمة عار في نوى بإضافة 5 مل برنامج تلفزيوني يحتوي على 1 ميكروغرام / مل دابي (4، 6 diamidino-2-phenylindole، هيدروكلوريد) لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  8. غسل الأجنة ثلاث مرات لفترة وجيزة مع برنامج تلفزيوني.
  9. نقل الأجنة إلى شريحة زجاجية وغطاء لهم مع قطرة من الزيوت المعدنية.
  10. التقاط صور في 1،000X التكبير مع المجهر متحد البؤر مع الإثارة من طول موجة المناسب.

5. إعداد Neogenin-طلب تقديم العروض وNeogenin سيرنا GFP البلازميدات

  1. الفرعيةاستنساخ [كدنا ترميز neogenin الماوس إلى بروتين أحمر فلوري (RFP) المحتوية على ناقلات، مما أدى إلى neogenin العلم، طلب تقديم العروض.
  2. Subclone صغير دبوس الشعر RNA تستهدف neogenin إلى البروتين الأخضر الزمردي نيون (EmGFP) المحتوية على ناقلات، مما أدى إلى pcDNA-EmGFP-مير neogenin (كما هو موضح في الشكل رقم 1).
  3. تضخيم كلا neogenin العلم، طلب تقديم العروض والبلازميدات pcDNA-EmGFP-مير neogenin وتنقية بينها وبين الطرق التقليدية.
  4. ضبط تركيزات النهائي من البلازميدات إلى ~ 1.0 ميكروغرام / مل في المخزن العقيمة تريس، EDTA (TE).

6. Microinjection من البلازميدات إلى 2-PN الأجنة

  1. غسل الجرداء 2-PN الأجنة مرة واحدة، لفترة وجيزة، مع وسائل الاعلام M16 جديدة.
  2. أجهزة الطرد المركزي الأجنة 2-PN لمدة 10 دقيقة في 1000 x ج في أعلى الجدول الطرد المركزي للسماح للمراقبة من pronuclei.
  3. احتضان الأجنة في انخفاض الجزئي من 20-30 ميكرولتر من وسائل الإعلام M16 في جنين تحت الزيوت المعدنية عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2 لadditiاونال 1-2 ساعة.
  4. تصنيع ماصات الحقن وماصات عقد عن طريق سحب أنابيب البورسليكات الزجاج الشعرية (OD = 1.2 مم؛ ID = 0.94 ملم) مع مجتذب الميكانيكية.
  5. تلفيق الماصات الحقن لديك نصائح صريحة وفتحات مصقول من <500 ميكرون طول الحافة و1-2 ميكرون قطر الحافة الداخلية باستخدام microgrinder وmicroforger.
  6. افتعال عقد ماصات مثل أن لديهم نصائح صريحة وفتحات مصقول مع قطرها الداخلي 20 ميكرون ويبلغ قطرها الخارجي من 100 ميكرون.
  7. ماصات حقن الحمل مع كمية كافية (> 200 نيكولا لانغ) من الحل البلازميد عند 1.0 ميكروغرام / ميكرولتر.
  8. Microinject ~ 10 رر من الحل البلازميد لكل جنين 2-PN إلى واحدة من pronuclei باستخدام microinjector تعلق على micromanipulator بمحركات. خلال هذه العملية، والحفاظ على الأجنة في الموقف من خلال تطبيق الضغط السلبي مع ماصة القابضة.
  9. بعد حقن مكروي، وغسل الأجنة 2-PN 3 مرات مع وسائل الاعلام M16 جديدة للتروفاق سطيف من 1 دقيقة في كل مرة.
  10. ثقافة الأجنة 2-PN في قطرة من وسائل الاعلام M16 جديدة على طبق ثقافة البلاستيك التي كتبها قطرة الزيت المعدني لمنع التبخر وسائل الإعلام تغطيتها.
  11. مراقبة الأجنة في 24 فترات ساعة تحت المقابل تدخل الفرق (DIC) مجهر مقلوب في 200X التكبير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

اكتشفنا وأعرب عن أن neogenin عابر خلال مراحل النمو المبكرة للأجنة قبل الغرس الماوس، والتي تظهر في وقت مبكر في مرحلة 2-الخلية وتستمر لحين تويتة في وقت مبكر ولكن أن تصبح ناقصة في أواخر تويتة ومراحل الكيسة الأريمية (الشكل 2A). وبالإضافة إلى ذلك، اقتصر التوزيع المكاني للneogenin أساسا إلى خارج الخلايا. وكانت نتائج تحليل RT-PCR تتناسب مع طبيعة المبكرة وعابرة التعبير neogenin، وتبلغ ذروتها في مرحلة 4 خلايا ولكنها تفتقر تماما في المرحلة 1...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذا البروتوكول، ونحن لشرح أساليب جديدة للMicroinjection من المواد الجينية، إما كدنا] أو shRNA، إلى الأجنة 2-PN الماوس لاستكشاف دور neogenin في تمايز الخلايا في وقت مبكر خلال مرحلة التطور الجنيني الماوس. التعديل الوراثي للأجنة قبل الغرس هي تقنية قوية في الكشف عن المعلومات الأساسية عن الآليات الكامنة الجزيئية ل، على سبيل المثال، أول تقرير خلية النسب. التعديل الوراثي هي واحدة من أكثر الطرق شيوعا للتحقق من وظيفة الجين. مع استقبالية كبيرة نسبيا من الأجنة 2-PN للمواد الوراثية الأجنبي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة في الكشف عنها.

شكر وتقدير

فإن الكتاب أود أيضا أن نعترف مجموعة الدكتور شيونغ في جامعة العلوم الصحية جورجيا لتصنيع وتقاسم البنى لneogenin كدنا] وshRNA ناقلات. وأيد هذه الدراسة من المنح المقدمة من برنامج العلوم الاساسية بحوث (2013R1A1A4A01012572) بتمويل من مؤسسة أبحاث الكورية ومنحة بحثية من جامعة Sahmyook.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
M16متوسط,Gibco BRL (جراند آيلاند, نيويورك)M7292 LOT# 11A832
مصل الماعز, داكو (Glostrup ، الدنمارك)X0907
PMSGFolligon ، Intervet ، هولنداG4877-1000IU LOT # SLBD0719V
الزيوت المعدنيةSigma AldrichCG5-1VL LOT # SLBC6783V
الغدد التناسلية المشيمية البشرية وموجهة الغدد التناسلية للفرس الحامل   ؛(Intervet ، هولندا)(invitrogen ، 15596-026)
SuperScript & reg ؛ III تقنيات حياة النسخ العكسي18080-044
خليط ما قبل PCR ( بيونير ، دايجون ، كوريا الجنوبية)GenDEPOT ، A0224-050
Agarose (درجة جزيئية)BioRad161-3101
محلول بارافورمالديهايد ، 4٪ في PBSAffymetrix USA19943
أجسام مضادة للأرانب متعددة النسيلة مضادة للنيوجينينسانتا كروز للتكنولوجيا الحيوية ، الولايات المتحدةSC-15337
Alexa fluor 488 المسمى الأجسام المضادة للأرانبالمجسات الجزيئية (Invitrogen ، الولايات المتحدة الأمريكية)A-11094
Alexa fluor 555 المسمى الأجسام المضادة للأرانبالمجسات الجزيئية (Invitrogen ، الولايات المتحدة الأمريكية)A-21428
Alexa Fluor & Reg ؛ 555مجسات جزيئية من الفالودين (Invitrogen ، الولايات المتحدة الأمريكية)A34055
DAPI (4 '، 6-Diamidino-2-Phenylindole ، ثنائي هيدروكلوريد)Invitrogen ، الولايات المتحدة الأمريكيةD1306
المؤتلف البشري RGM-C / HemojuvelinR &;D أنظمة3720-RG
جميع تركيبات البلازميد البروفيسور ون تشنغ شيونغ في جامعة جورجيا للعلوم الصحية (أغوستا ، جورجيا).للدراسات الحالية تم توفيرها من قبل  
نيون & ريج;   نظام التعديlifetechMPK10096
ستيريو ميكروسكورفنيكونSMZ1000
نظام Micromainpulation مع نيكوننيكون Narishige ONM-1
حاقن دقيقنيكون NarishigeGASTIGHT # 1750
حاملنيكون NarishigeNarishige IM 16
Microfugeنيكون NarishigeNarishige MF-900
طاحونةNarishigeEG400
مجتذبSutter Instrumnet شركةP-97
CO2< / sub> حاضنةThermo Scientific FormaEW-39320-16
Veriti & reg ؛ 384-Well Thermal Cycler 4388444Lifetechnologies
موجهة

المراجع

  1. Yamanaka, Y., Ralston, A., Stephenson, R. O., Rossant, J. Cell and molecular regulation of the mouse blastocyst. Dev. Dyn. 235 (9), 2301-2314 (2006).
  2. Sasaki, H. Mechanisms of trophectoderm fate specification in preimplantation mouse development. Dev. Growth Differ. 52 (3), 263-273 (2010).
  3. Nishioka, N., Yamamoto, S., Kiyonari, H., Sato, H., Sawada, A., Ota, M., et al. Tead4 is required for specification of trophectoderm in pre-implantation mouse. Mech. Dev. 125 (3-4), 270-283 (2008).
  4. Ovitt, C. E., Schöler, H. R. The molecular biology of Oct-4 in the early mouse embryo. Mol. Hum. Reprod. 4 (11), 1021-1031 (1998).
  5. Stein, P., Schindler, K. Mouse Oocyte Microinjection, Maturation and Ploidy Assessment. J. Vis. Exp. (53), e2851(2011).
  6. Shin, M. R., Cui, X. S., Jun, J. H., Jeong, Y. J., Kim, N. H. Identification of mouse blastocyst genes that are down regulated by double-stranded RNA-mediated knockdown of Oct-4 expression. Mol. Reprod. Dev. 70 (4), 390-396 (2005).
  7. Khang, I., Sonn, S., Park, J. -H., Rhee, K., Park, D., Kim, K. Expression of epithin in mouse preimplantation development: Its role in compaction. Dev. Biol. 281, 134-144 (2005).
  8. Prieto, D., Aparicio, G., Machado, M., Zolessi, F. R. Application of the DNA-Specific Stain Methyl Green in the Fluorescent Labeling of Embryos. J. Vis. Exp. (99), e52769(2015).
  9. Lee, J. H., Choi, S. S., Kim, H. W., Xiong, W. C., Min, C. K., Lee, S. J. Neogenin as a receptor for early cell fate determination in preimplantation mouse embryos. PLoS One. 9 (7), e101989(2014).
  10. Gordon, J. W., Scangos, G. A., Plotkin, D. J., Barbosa, J. A., Ruddle, F. H. Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 77 (12), 7380-7384 (1980).
  11. Brinster, R. L., Chen, H. Y., Trumbauer, M. E., Yagle, M. K., Palmiter, R. D. Factors affecting the efficiency of introducing foreign DNA into mice by microinjecting eggs. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82, 4438-4442 (1985).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

وظيفة نيوجينيننهج فقدان الوظيفةتقنية الحقن المجهريالمجهر البؤريتحليل التألق المناعيتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقيالكتلة الخلوية الداخليةتمايز الأديم الظاهر المغذي
Loss- ونهج كسب من وظيفة إلى التحقيق في خلية المبكر مصير محددات في سابق للانغراس أجنة الفئران
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.