يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تسلسل مصنع ستريت Heteroxylans عن طريق إنزيمي، والمواد الكيميائية (مثلأيشن) والمادية (الطيف الكتلي، الرنين المغناطيسي النووي) تقنيات

7.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/53748

⸱

مارس 24, 2016

 ,  , 
1ARC Centre of Excellence in Plant Cell Walls, School of BioSciences, University of Melbourne

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا البروتوكول التقنيات المحددة المستخدمة للتوصيف الهيكلي للنهاية المختزلة (RE) وتسلسل (تسلسلات) الجليكوسيل في المنطقة الداخلية من غير المتجانسة عن طريق وضع علامات على RE ب 2 أمينوبنزاميد قبل التحلل المائي الأنزيمي (إندوكسيلاناز) ثم تحليل السكريات قليلة السكاريد الناتجة باستخدام قياس الطيف الكتلي (MS) والرنين المغناطيسي النووي (NMR).

الملخص

يصف هذا البروتوكول تقنيات محددة تستخدم لتوصيف الحد نهاية (RE) وتسلسل غليكوزيل المنطقة الداخلية (ق) من heteroxylans. تم عزل دي منشى-جدران الخلايا السويداء القمح باعتباره بقايا الكحول غير قابلة للذوبان (AIR) (1) وبالتتابع استخراج مع الماء (W-سول الاب) و 1 M KOH تحتوي على 1٪ NaBH 4 (كوه-سول الأب) كما وصفها راتناياك وآخرون آل (2014) (2). واعتمد نهجين مختلفين (انظر ملخص في الشكل 1). في المرحلة الأولى، يتم التعامل AXS سليمة W-سول مع 2AB لوضع علامة الأصلي RE العمود الفقري بقايا سلسلة السكر وبعد ذلك تعامل مع endoxylanase لتوليد مزيج من RE-وصفت 2AB والمنطقة الداخلية والحد يغوساكاريدس، على التوالي. في النهج الثاني، وتحلل من الأب كوه-سول مع endoxylanase لتوليد أول خليط من يغوساكاريدس التي وصفت في وقت لاحق مع 2AB. صدر enzymically ((الامم المتحدة) الموسومة ب) يغوساكاريدس من كلاW- وFRS كوه-سول هي ثم مميثل والتحليل الهيكلي التفصيلي لكل من يغوساكاريدس الأم ومميثل يتم تنفيذ ذلك باستخدام مزيج من MALDI-TOF-MS، RP-HPLC-ESI-QTOF-MS وESI-MS ن. هضمها Endoxylanase تتميز كوه-سول AXS أيضا الرنين المغناطيسي النووي (الرنين المغناطيسي) الذي يقدم أيضا معلومات عن التكوين المصاوغ الكربونيلي. ويمكن تطبيق هذه التقنيات إلى فئات أخرى من السكريات باستخدام إندو-هيدروليز المناسبة.

المقدمة

Heteroxylans أسرة مكونة من السكريات التي هي الغالبة السكريات غير السليلوزية من الجدران الأساسية من الأعشاب والجدران الثانوية من جميع كاسيات البذور 3-6. العمود الفقرى الزيلان تختلف في أنواعها وأنماط الاستبدال مع غليكوزيل (حمض الغلوكورونيك (GlcA)، أرابينوز (عارف)) وغير غليكوزيل (O-أسيتيل، وحمض الفيرليك) بقايا اعتمادا على نوع الأنسجة، ومرحلة التطوير والأنواع 7.

جدران من القمح وتتكون (الحنطة ايستيفوم L.) السويداء في المقام الأول من arabinoxylans (AXS) (70٪) و (1 → 3) (1 → 4) -β جلوكان-D (20٪) مع كميات ضئيلة من السليلوز وheteromannans (2٪ لكل منهما) 8. قد يكون العمود الفقري الزيلان الامم المتحدة واستبداله بأشكال مختلفة وفي الغالب (في المقام الأول O-2 موقف وإلى حد أقل O-3 موقف) استبدال أحادي و (O-2 و O-3 وظائف) مع α-L-آرا استبداله دى المخلفات و 9. نهاية الحد (RE) من مغايرxylans من dicots (على سبيل المثال، نبات الأرابيدوبسيس thaliana) 10 وعاريات البذور (على سبيل المثال، شجرة التنوب (ABIES Picea)) 11 يحتوي على سمة تسلسل رباعي السكاريد غليكوزيل. -β-D-XYL ص - (1 → 3) -α-L-رحه ع - (1 → 2) -α-D-غال ص A- (1 → 4) -D-XYL ص. لفهم الحيوي heteroxylan وظيفة (البيولوجية والصناعية)، فمن المهم أن تسلسل كامل العمود الفقري الزيلان لفهم أنواع وأنماط من التبديلات فضلا عن سلسلة من نهاية الحد (RE).

ووصف تقنيات محددة تستخدم لتوصيف هيكلي للحد من نهاية (RE) وتسلسل غليكوزيل المنطقة الداخلية (ق) من heteroxylans في هذه المخطوطة. تقنيات تعتمد على fluorophore علامات (مع 2 aminobenzamide (2AB)) والحد من نهاية (RE) من سلسلة heteroxylan قبل الأنزيمية (endoxylanase) التحلل. هذا النهج، لا سيما بالنسبة للتسلسل RE، كانلاول مرة من قبل المختبر نيويورك 10،12-13 لكن الآن امتد ليشمل المنطقة التسلسل الداخلي وهو مزيج من التقنيات الراسخة التي هي قابلة للتكيف بشكل متساو على جميع heteroxylans مستقلة عن مصدرها من العزلة. ويمكن أيضا أن هذا النهج يتم تطبيقها على فئات أخرى من السكريات باستخدام (إن وجدت) وإندو-هيدروليز المناسبة.

في هذه الدراسة، تم عزل جدران الخلايا السويداء القمح منشى دي باعتبارها بقايا الكحول غير قابلة للذوبان (AIR) وبالتتابع استخراج مع الماء (W-سول الاب) و1M KOH تحتوي على 1٪ NaBH 4 (كوه-سول الأب) كما هو موضح في راتناياك وآخرون (2014) (2). ويغوساكاريدس صدر من كلا W- وFRS كوه-SOL ثم يتم مميثل والتحليل الهيكلي التفصيلي لكل من يغوساكاريدس الأم ومميثل يتم تنفيذ ذلك باستخدام مزيج من MALDI-TOF-MS، ESI-QTOF-MS إلى جانب مع HPLC مع الفصل الكروماتوغرافي الانترنت باستخدام RP العمود C-18وESI-MS ن. هضمها Endoxylanase كان كوه-سول AXS تتميز أيضا الرنين المغناطيسي النووي (NMR).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. وضع البطاقات التعريفية على نهاية الحد (RE) السكر بقايا من W-سول AXS مع 2-aminobenzamide (2AB)

  1. احتضان W-سول AXS مع 2AB (0.2 م) في وجود من 1 M NaBH 3 CN (سيان بورهيدريد الصوديوم) (الرقم الهيدروجيني 5.5) لمدة 2 ساعة على 65 درجة مئوية لتحويل نهايات الحد من السلاسل السكاريد العمود الفقري لمشتقات الفلورسنت الخاصة بهم.
    تنبيه: يجب أن يتم تنفيذ الخطوة التالية في غطاء الدخان كما يطلق NaBH 3 CN غاز السيانيد السام عندما يكون في اتصال مع الماء.
    1. تزن خارج NaBH 3 CN (62.8 ملغ) وتذوب في الماء (1 مل) في أنبوب microcentrifuge (1.5 مل) لإعداد حل M NaBH 3 CN 1. حل كاشف 2AB (27.2 ملغ) في 1 الحل M NaBH 3 CN (1 مل) عن طريق التسخين في 65   درجة مئوية، وضبط درجة الحموضة من خليط التفاعل (0.2 M 2AB، 1 م NaBH 3 CN) لدرجة الحموضة 5.5 مع حمض الخليك 10٪.
    2. إضافة 200 ميكرولتر من خليط التفاعل (0.2 M 2AB، 1 م NaBH 3 CN) إلى W-حتىAXS ل (1 ملغ) في أنبوب زجاجي مع غطاء وتخلط باستخدام خلاط دوامة. احتضان لمدة 2 ساعة على 65   ° C في غطاء الدخان. تبريد تعليق على RT وإضافة 4 مجلدات. من الايثانول المطلق.
    3. ضع تعليق في التخزين البارد (4 درجة مئوية) O / N لترسيب السكريات.
    4. أجهزة الطرد المركزي (1500 x ج، 10 دقيقة، RT) لإزالة طاف. يغسل بيليه على نطاق واسع مع الايثانول المطلق (4X)، والأسيتون (1X) والميثانول (1X)، الطرد المركزي بين كل غسل. الجاف فراغ عند 40 درجة CO / N.
      ملاحظة: غسل اسعة يزيل أيضا 2AB المتبقية.

2. توليد XYLO-يغوساكاريدس من 2 AB صفتها W-سول AXS

  1. حل 2AB المسمى W-سول AXS (1 ملغ) في 500 ميكرولتر من العازلة خلات الصوديوم (100 ملم، ودرجة الحموضة 5) في أنبوب microcentrifuge (1.5 مل). إضافة 4 وحدات من endoxylanase (GH 11، [M1])، واحتضان في 37   ° مئوية لمدة 16 ساعة.
  2. تدمير نشاط انزيم عن طريق تسخين MIXT رد فعللدى عودتهم لمدة 10 دقيقة في حمام ماء يغلي. تبريد تعليق على RT ونقل إلى أنبوب زجاجي مع غطاء. إضافة 4 مجلدات. من الايثانول المطلق ووضع تعليق في التخزين البارد (4 درجة مئوية) O / N لترسيب أي السكريات غير المهضومة.
  3. أجهزة الطرد المركزي (1500 x ج، 10 دقيقة، RT) لفصل السكريات غير المهضومة (بيليه) وendoxylanase إنشاء XYLO-يغوساكاريدس (طاف). صب طاف في أنبوب زجاجي نظيف ووضعه في حمام ماء دافئ (40 درجة مئوية).
  4. يتبخر الإيثانول تحت تيار من غاز النيتروجين إلى وحدة تخزين نقطة النهاية (~ 500 ميكرولتر). تجميد طاف في -80 درجة مئوية لمدة 4 ساعات وتجفيف طاف المجمدة في مجفف تجميد لاسترداد XYLO-يغوساكاريدس.

3. الجيل من XYLO-يغوساكاريدس من KOH-سول AXS ووسمها 2AB

  1. علاج كوه-سول AXS مع endoxylanase (GH 11، [M1]) لتوليد XYLO-يغوساكاريدس كما هو موضح أعلاه (الأقسام 2،1-2،4).
  2. علاج endoxولدت ylanase XYLO-يغوساكاريدس من KOH-سول AXS مع خليط التفاعل 2AB (0.2 M 2AB، 1 م NaBH 3 CN) كما هو موضح أعلاه (الأقسام 1.1.1-1.1.2).
  3. صب طاف في أنبوب زجاجي نظيف ووضعه في حمام ماء دافئ (40 درجة مئوية). يتبخر الإيثانول تحت تيار من غاز النيتروجين إلى وحدة تخزين نقطة النهاية (~ 500 ميكرولتر). تجميد طاف في -80 درجة مئوية لمدة 4 ساعات وتجفيف طاف المجمدة في مجفف تجميد لاسترداد XYLO-يغوساكاريدس.

4. MALDI-TOF-MS

  1. إعداد MALDI مصفوفة الحل
    1. إضافة مغرفة صغيرة من 2، وحمض 5-dihydroxbenzoic (DHB) إلى 50٪ الأسيتونتريل (500 مل) تحتوي على حمض الفورميك بنسبة 0.1٪ في أنبوب (حل MALDI مصفوفة). مزيج باستخدام الدوامة، إذا كان يذوب بسرعة، إضافة مغرفة صغيرة أخرى من المجالس الصحية المحلية. ملاحظة: التركيز المثالي من حل MALDI مصفوفة هو 10 ميكروغرام / ميكرولتر -1.
  2. إعداد لوحة MALDI المستهدفة
    1. إيداع aqueoلنا قليل السكاريد عينات (الأم) (5-10 ميكروغرام) (W-سول و / أو KOH-سول) على طبق من ذهب MALDI المستهدفة. إضافة 0.3 ميكرولتر حل MALDI مصفوفة باستخدام طرف مستقل ومزيج من قبل pipetting صعودا وهبوطا. السماح للخليط لتجف في RT.
      ملاحظة: يجب أن تتألف العينات المجففة بشكل صحيح من بلورات على شكل إبرة طويلة لافتا نحو وسط بقعة. إذا كانت ودائع غير لزجة و / أو ملطخ العينة قد إما أن تتركز جدا أو تتكون من أملاح، هي تلك الودائع غير المرجح أن تنتج أطياف جيد وينبغي أيضا طهروا العينة.
    2. تقديم لوحة الهدف في مصدر MS وتعمل في (+ إيف) وضع إيجابي أيون. ضبط الجهد مسرع إلى 19.0 كيلو فولت في مصدر أيون 1 و 16.3 كيلو فولت في مصدر أيون 2. ضبط قوة الليزر إلى أكثر من 70٪. حدد بقعة العينة على لوحة MALDI-الهدف وانقر فوق ابدأ لبدء طلقات الليزر.
      ملاحظة: جميع مناطق المستهدفة لم تسفر الإشارات. وهناك نقطة محددة تعطي سوى إشارة لبضع طلقات الليزر إما بسبباستنزاف العينة / خليط مصفوفة أو خصائص وضوح الشمس.
      1. نقل الليزر لمناطق مختلفة من هدف خلال اقتناء والمتوسط ​​ما يقرب من 200 أطياف عشوائي للحصول مرضية إشارة إلى الضجيج.

5. ESI-QTOF-MS

  1. تحليل يغوساكاريدس ولدت endoxylanase (اللغة الأم) باستخدام نانو HPLC مقرونا تأين بالإرذاذ الإلكتروني (ESI) وقت رباعي الرحلة (QTOF) MS أداة مع الفصل الكروماتوغرافي الانترنت باستخدام RP العمود C-18 (75 ميكرون س 150 مم؛ 3.5 ميكرون حبة حجم).
    1. نقل ولدت endoxylanase يغوساكاريدس المائية الخليط في قنينة ووضعه في العينات السيارات HPLC. برنامج التدرج شطف من 5-80٪ مع المراحل المتنقلة 0.1٪ (ت / ت) وحامض الفورميك في الماء و 0.1٪ (ت / ت) وحامض الفورميك في أسيتونتريل، على التوالي، أكثر من 60 دقيقة.
    2. ضبط معدل تدفق إلى 0.2 ميكرولتر / دقيقة. ضبط الوضع الإيجابي أيون في نطاق المسح الضوئيمن 300-1،600 م / ض ومعدل المسح من 0.5 بالاشعة / ثانية مستغلا ظروف مصدر ESI على النحو التالي: ستارة الغاز 10، GS1 4، ودرجة الحرارة مصدر 100 درجة مئوية، أيون رذاذ الجهد 2300 V، وإزالة تجميع المحتملين 50 خامسا تشغيل برنامج LC الكروماتوغرافي ويغوساكاريدس أزل. يتم حفظ مجموع اللوني ايون الناتج (TIC) تلقائيا من قبل البرنامج.
    3. فتح TIC حفظ واختر استخراج اللوني. اكتب الجماهير المتوقع (على سبيل المثال، 271، 403، 535، 667، 799 و 931 م / ض) في سطر الأوامر. اللوني الضوئي عن طريق النقر أدخل. معالجة بالاشعة أيون مختارة من البيانات اللوني ESI-MS QTOF باستخدام البرمجيات وفقا لتعليمات الشركة الصانعة 14.

6. ESI-MS ن

  1. إدراج 1-2 ميكرولتر من لكل-O الميثيلي قليل السكاريد (ميثليته كما وصفها Pettolino آخرون 1) عينة في 50٪ الأسيتونتريل إلى طرف nanospray باستخدام حقنة. تقليمغيض نانو رذاذ استخدام قطع الزجاج لتنسجم مع حامل نانو رذاذ منفصلة تعلق على MS.
  2. تعيين كتلة وفقا لمجموعة من المتوقع الشامل (200-1،500 م / ض) والغاز الستار إلى 10، والجهد ionspray في 1900 V والاستقطاب إلى إيجابية.
  3. اضغط على زر اكتساب لفتح نافذة ذات الصلة، أدخل اسم ملف البيانات للحصول على مسح أيون الإجمالي (ESI-MS 1). ثم تضغط على زر التوقف.
  4. تغيير نوع المسح من ايون المنتج لتفتيت ذروة الفائدة. أدخل كتلة الفائدة (على سبيل المثال، 885 م / ض) لتفتيت وضبط مجموعة كتلة (200-900 م / ض). اضغط على زر اكتساب وضبط الطاقة الاصطدام (صعودا و/ أو لأسفل في علامة التبويب مركب) لتحقيق تفتيت كامل أيون الأم (885 م / ض) والحصول على مسح جزء أيون (ESI-MS 2).
  5. أدخل كتلة أيون جزء من الفائدة (على سبيل المثال، 711 م / ض) وضبط مجموعة كتلة (200-720 م / ض). اضغط على زر اكتسابد ضبط الطاقة تصادم تحقيق تفتيت كامل أيون السلائف (711 م / ض) والحصول على مسح جزء أيون (ESI-MS 3).

7. H 1 NMR الطيفي

  1. حل endoxylanase لدت خليط من يغوساكاريدس (كوه-سول، شكل الأصلي) (~ 500 ميكروغرام) في D 2 O (1.0 مل، 99.9٪) في أنبوب اختبار البلاستيك (15 مل). تجميد تعليق في -80 درجة مئوية لمدة 4 ساعات وتجفيف تعليق المجمدة في مجفف تجميد لاسترداد XYLO-يغوساكاريدس.
  2. كرر 7.1 مرتين من أجل تبادل تماما H 2 O مع D 2 O.
  3. حل يغوساكاريدس المجففة في D 2 O (0.6 مل، 99.9٪) وإضافة 0.5 ميكرولتر من الأسيتون (5٪ في D 2 O) كمعيار داخلي. نقل يغوساكاريدس بالديوتيريوم في أنبوب عينة NMR.
  4. عقد أنبوب يحتوي على عينة NMR من أعلى وإدراج أنبوب عينة في الدوار البلاستيك. وضع الدوار في قياس عينة العمق. صديدح أو سحب أنبوب عينة لضبط عمق العينة للتأكد من أن خط الوسط من أعلى العينات ومقاييس عمق القاع متساوون.
  5. إزالة قياس عمق وتضاف العينة إلى العينات السيارات تعلق على NMR مطياف 600 ميغاهيرتز مجهزة البرد التحقيق.
  6. تسجيل الدخول وفتح برنامج حاسوبي لمراقبة الطيف. أدخل اسم ملف عينة. فتح مجموعة البيانات الموجودة ثم استخدام الأمر "تنمية الصادرات" لحفظه إلى تحت اسم جديد. اكتب رقم الموقف من العينة في العينات السيارات واضغط على "دخول".
    ملاحظة: الضغط على زر "دخول" وإسقاط أنبوب عينة بلطف إلى تجويف المغناطيس حيث سيتم وضعه على رأس لجنة التحقيق.
  7. ضبط درجة حرارة العينة المطلوبة عن طريق كتابة "edte" في سطر الأوامر. انتظر درجة حرارة العينة للوصول إلى القيمة المطلوبة قبل الانتقال إلى الخطوة التالية. أدخل "تأمين" في سطر الأوامر وحدد مذيب مناسب (D 2 O). انتظر & #34؛ قفل "رسالة النهائية لتظهر في الجزء السفلي من الإطار.
  8. اكتب "atmm" في سطر الأوامر ثم اضغط على "الأمثل" في الجزء العلوي من شريط القوائم atmm. اختر بدء لضبط ومطابقة لجنة التحقيق للقناة المحددة (1 H في هذه الحالة).
  9. اكتب "topshim" في سطر الأوامر لعملية الملئ التي يتم فيها إجراء تعديلات طفيفة على المجال المغناطيسي حتى يتحقق مجال مغناطيسي منتظم في جميع أنحاء sample.Acquire إشارة عن طريق كتابة "زج" في سطر الأوامر وأدخل.
  10. تحليل الأطياف باستخدام برنامج 15 وفقا لتعليمات الشركة الصانعة مع 1 H التحول الكيميائية المشار إليها في مستوى داخلي من الأسيتون في 2.225 جزء من المليون.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

الهضم Endoxylanase من 2AB المسمى W-سول AXS يولد مزيجا من يغوساكاريدس RE-وصفت 2AB وسلسلة من يغوساكاريدس (دون تسمية 2AB) وصفت الامم المتحدة المستمدة من المناطق الداخلية من سلسلة الزيلان (الشكل 1؛ من راتناياك وآخرون. 2). سلسلة من النهج الكروماتوغرافي ثم يتم توظيف ليجزئ من خليط معقد من سداسي. وأخيرا، وتستخدم تقنيات مايكروسوفت لتحديد الهياكل ايزوميريا أن يتم بعد ذلك التسلسل بواسطة MS ن التقنيات. هنا نقدم م...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ومعظم المرحلة مصفوفة السكريات جدار الخلية على ما يبدو بديلا عشوائيا العمود الفقرى (مع كل غليكوزيل والمخلفات غير غليكوزيل) التي تختلف اختلافا كبيرا تبعا لنوع من النباتات، ومرحلة النمو ونوع الأنسجة 3. منذ السكريات هي منتجات الجين الثانوية تسلسلها لا قالب اشتقاق، وبالتالي لا يوجد نهج تحليلي واحد، مثل وجود للأحماض النووية والبروتينات، لتسلسلها. وقد وفرت توافر الإنزيمات حلمهي النقاء-رابط محدد أداة قوية لتتحلل السكريات إلى يغوساكاريدس التي يمكن أن تكون ثم مجزأة chromatographi...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدينا ما نكشف عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا المشروع بأموال من برنامج البحث التعاوني الرائد التابع لمنظمة الكومنولث العلمية والبحثية ، والذي تم توفيره لمجموعة الحبوب عالية الألياف عبر الرائد في العقود الآجلة للأغذية. تعترف AB أيضا بدعم منحة مجلس البحوث الأسترالي (ARC) لمركز ARC للتميز في جدران الخلايا النباتية (CE110001007).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2 أمينوبنزاميد (2AB)سيجما ألدريتش (www.sigmaaldrich.com)A89804
بوروهيدريد الصوديوم (NaBH 4< / sub>)سيجما ألدريتش (www.sigmaaldrich.com)247677خطير ، يتعامل بحذر
سيانوبوروهيدريد الصوديوم (NaBH 3< / sub>CN)سيجما ألدريتش (www.sigmaaldrich.com)156159خطير ، تعامل بحذر
endo-1،4-& beta ؛ -Xylanase M1 (من Trichoderma viride) (120101a)Megazyme (www.megazyme.com)E-XYTR1
أكسيد الديوتيريوم (D2< / sub>O)Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com)151882
مجفف التجميد (CHRIST-ALPHA 1-4 LD plus) RP
C18 Zorbax eclipse plus column  ؛Agilent (2.1 & مرات ؛ 100 مم ؛ 1.8 ومايكرو. م حجم حبة) 
MicroFlex MALDI-TOF MS    (نموذج - MicroFlex LR)(Bruker Daltonics، ألمانيا)
(ESI) -(QTOF) MS    (موديل # 6520)(Agilent, Palo Alto, CA)
sup>n  - ion-trap  (موديل # 1100 HCT)(أجيلينت ، بالو ألتو ، كاليفورنيا).
[بروكر] [أفنس] [إييي] 600 [مهرتز] -[نمر][بروكر] [دلتونيكس], ألمانيا
[توبسبين] (صيغة 3.0)-[بيوسبين]- برمجية Bruker 
GC-MS (موديل # 7890B)Agilent 
مع ESI-MS<

المراجع

  1. Pettolino, F. A., Walsh, C., Fincher, G. B., Bacic, A. Determining the polysaccharide composition of plant cell walls. Nature Protocols. 7, 1590-1607 (2012).
  2. Ratnayake, S., Beahan, C. T., Callahan, D. L., Bacic, A. The reducing end sequence of wheat endosperm cell wall arabinoxylans. Carbohydr. Res. 386, 23-32 (2014).
  3. Bacic, A., Harris, P. J., Stone, B. A. The Biochemistry of Plants, Vol. 14, Carbohydrates. Preiss, J. 14, Academic Press. San Diego. 297-371 (1988).
  4. York, W. S., O'Neill, M. A. Biochemical control of xylan biosynthesis - which end is up? Plant Biol. 11, 258-265 (2008).
  5. Fincher, G. B. Revolutionary times in our understanding of cell wall biosynthesis and remodeling in the grasses. Plant Physiol. 149, 27-37 (2009).
  6. Faik, A. Xylan Biosynthesis: News from the Grass. Plant Physiol. 153, 396-402 (2010).
  7. Scheller, H. V., Ulskov, P. Hemicelluloses. Annu. Rev. Plant Biol. 61, 263-289 (2010).
  8. Bacic, A., Stone, B. A (1→3)- and (1→4)-linked β-D-glucan in the endosperm cell-wall of wheat. Carbohydr. Res. 82 (13), 372-377 (1980).
  9. Comino, P., Collins, H., Lahnstein, J., Beahan, C., Gidley, M. J. Characterisation of soluble and insoluble cell wall fractions from rye, wheat and hull-less barley endosperm flours. Food Hydrocolloids. 41, 219-226 (2014).
  10. Pena, M. J., et al. Arabidopsis irregular xylem8 and irregular xylem9: Implicationsfor the Complexity of Glucuronoxylan Biosynthesis. Plant Cell. 19, 549-563 (2007).
  11. Andersson, S. I., Samuelson, O., Ishihara, M., Shimizu, K. Structure of the reducing end-groups in Spruce xylan. Carbohydr. Res. 111, 283-288 (1983).
  12. Mazumder, K., York, W. S. Structural analysis of arabinoxylans isolated from ball-milled switchgrass biomass. Carbohydr. Res. 345, 2183-2193 (2010).
  13. Kulkarni, A. R., et al. The ability of land plants to synthesize glucuronoxylans predates the evolution of tracheophytes. Glycobiol. 22 (2012), 439-451 (2012).
  14. Agilent MassHunter Workstation Software - Quantitative Analysis Familiarization Guide. , Agilent Technologies. Available from: http://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/Public/G3335_90061_Quant_Familiarization-EN.pdf (2010).
  15. Topspin User Manual. , Bruker. Available from: http://www.nmr.ucdavis.edu/docs/user_manual_topspin_ts30.pdf (2010).
  16. Domon, B., Costello, C. E. A systematic nomenclature for carbohydrate fragmentation in FAB-MS/MS spectra of glycoconjugates. Glycoconjugate. J. 5, 397-409 (1988).
  17. Hoffmann, R. A., Leeflang, B. R., De Barse, M. M. J., Kamerling, J. P., Vliegenthart, J. F. Characterisation by 1H-n.m.r. spectroscopy of oligosaccharides, derived from arabinoxylans of white endosperm of wheat, that contain the elements ----4)[alpha-L-Araf-(1----3)]-beta-D-Xylp-(1---- or ----4)[alpha- L-Araf-(1----2)][alpha-L-Araf-(1----3)]-beta-D-Xylp-(1----. Carbohydr. Res. 221, 63-81 (1991).
  18. Gruppen, H., Hoffmann, R. A., Kormelink, F. J. M., Voragen, A. G. J., Kamerling, J. P., Vliegenthart, J. F. Characterisation by 1H NMR spectroscopy of enzymically derived oligosaccharides from alkali-extractable wheat-flour arabinoxylan. Carbohydr. Res. 233, 45-64 (1992).
  19. Kosik, O., Bromley, J. R., Busse-Wicher, M., Zhang, Z., Dupree, P. Studies of enzymatic cleavage of cellulose using polysaccharide analysis by carbohydrate gel electrophoresis (PACE). Methods Enzymol. 510, 51-67 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

2AB MALDI TOF MS RP HPLC ESI QTOF MS ESI MSn
تسلسل مصنع ستريت Heteroxylans عن طريق إنزيمي، والمواد الكيميائية (مثلأيشن) والمادية (الطيف الكتلي، الرنين المغناطيسي النووي) تقنيات
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.