تحديد معدل الترشيح الكبيبي (GFR) هو المعيار الذهبي لتقييم وظائف الكلى بشكل عام. ومع ذلك ، فإن الإجراءات التقليدية لقياس هذه المعلمة مرهقة وتتطلب استثمارا كبيرا للوقت. نصف هنا طريقة أسرع وطفيفة التوغل لتحديد GFR عن طريق الجلد.
مقالة منهجية
تقييم عبر الجلد من وظيفة الكلى في القوارض واعية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
معدل الترشيح الكبيبي (GFR) هو المعيار الذهبي لتقييم وظائف الكلى بشكل عام. ومع ذلك ، فإن الطرق التقليدية لتقييم الترشيح العالمي مرهقة وتستغرق وقتا طويلا. بالإضافة إلى ذلك ، هناك حاجة إلى عينات من الدم أو البول التسلسلي ، مع ما يرتبط بالضغط على حيوانات التجارب. تقلل تقنية حديثة بشكل كبير من الاستثمار في الوقت والموارد ، مما يقلل من الغزو والإجهاد الحيواني ، ولكنه صالح بنفس القدر من الأساليب التقليدية. تقيس الطريقة وظيفة الكلى عبر الجلد. باستخدام جهاز بصري وعلامة الكلى الخارجية فلوريسين إيزوثيوسيانات (FITC)-sinistrin ، هذه التقنية قادرة على قياس حركية التخلص من العلامة من خلال الجلد. مع عدم الحاجة إلى عينات الدم أو البول أو المقايسات المعملية المرتبطة بها ، فإن نتائج القياس عبر الجلد متاحة على الفور تقريبا. تم التحقق من صحة الطريقة بالفعل في أنواع مختلفة وتم تطبيقها بنجاح في العديد من نماذج أمراض الكلى. علاوة على ذلك ، نظرا لخصائصه طفيفة التوغل ، فهو مناسب للقياسات المتسلسلة داخل نفس. هنا يتم توفير بروتوكول مفصل لإجراء التقييم عبر الجلد لوظيفة الكلى في القوارض.
المقدمة
معدل الترشيح الكبيبي (GFR) هو أفضل معلمة لتقييم وظائف الكلى بشكل عام. المعيار الذهبي لتحديد معدل الترشيح الكبيبي يعتمد على إزالة البول أو البلازما من علامات الكلى الخارجية، مثل حبوب 1. ومع ذلك، فإن هذه الإجراءات هي مضيعة للوقت ومعقدة، وتتطلب جمع الدم التسلسلي و / أو عينات البول وفحوصات المختبر الخلفي لتحليلها. وبالإضافة إلى ذلك، وهذه الأساليب هي الغازية والمجهدة للحيوانات، مما يحد من عدد المرات وتردد فيه القياسات يمكن أن تتكرر. وقد تم تطوير عدد من النهج البديلة لتبسيط الإجراءات التقليدية لتحديد معدل الترشيح الكبيبي، لكنها لا تزال تعتمد على البول والبلازما أخذ العينات 2-4 و / أو تتطلب التخدير العميق 5،6، والذي يعرف للتأثير على ديناميكا الدم الكلوي وظيفة 7، 8. المنتجات النهائية من عملية التمثيل الغذائي، مثل الكرياتينين، كما تستخدم على نطاق واسع لتقدير وظيفة الكلى. ومع ذلك، فمن المعروف أن accurACY من هذه العلامات الذاتية ليس الأمثل، وعلاوة على ذلك، لتحليلها، البول أو أخذ عينات الدم أمر لا غنى عنه أيضا.
نحن هنا وصف منهجية عبر الجلد لتقييم وظيفة الكلى في الحيوانات واعية. هذا الأسلوب هو أبسط وأسرع من الطرق التقليدية وكذلك فقط الغازية الحد الأدنى. مع هذه التقنية، وذلك باستخدام جهاز بصري المنمنمة و-sinistrin خارجية المنشأ الكلوي علامة فلوريسئين ثيوسيانات (FITC)، فمن الممكن لتحديد وظائف الكلى تقريبا في الوقت الحقيقي دون الحاجة إلى البلازما أو أخذ عينات البول ودون القسطرة الجراحية لإدارة المواد المخدرة. ونظرا لهذه الخصائص، فإن هذه الطريقة مناسبة لإجراء قياسات متتابعة في نفس الحيوان.
FITC-sinistrin هو علامة الكلى تصفيتها بحرية الكبيبة، مع عدم استيعاب أنبوبي أو إفراز. الجزء البصري للجهاز المنمنمة يتكون من اثنين من الثنائيات الباعثة للضوء (LED)، والتي تثيرعلامة تدار والضوئي للكشف عن مضان المنبعثة من خلال الجلد. يتم تخزين البيانات المسجلة في الذاكرة الداخلية المدمجة في الجهاز والتي يمكن استخدامها لتوليد حركية القضاء منحنى FITC sinistrin. يتم توفير الطاقة بواسطة بطارية صغيرة يثيوم قابلة للشحن. للحصول على معلومات أكثر تفصيلا عن الجهاز ومكوناته الفردية الرجوع إلى شرايبر وآخرون. 9. هي التي شنت الجهاز بسهولة في جسم الحيوان باستخدام رقعة لاصقة على الوجهين يحمل نافذة شفافة للمكونات البصرية. وهنا النتائج متوفرة بسهولة بعد فترة تسجيل قد انتهت.
مع أسلوب وبروتوكول المقدمة هنا، ونحن نقدم تكنولوجيا واعدة والتي يمكن أن تحل محل معيار الذهب الحالي لتحديد معدل الترشيح الكبيبي، وليس فقط في مجال البحوث ولكن أيضا في مجال السريري.
البروتوكول
وقد أجريت التجارب اللازمة لتطوير البروتوكول وفقا للوائح وطنية وتمت الموافقة من قبل لجنة العلوم الأخلاقية المحلية (Regierungspräsidium كارلسروه).
1. إعداد FITC-sinistrin حقن الحل
- حل FITC-sinistrin في المياه المالحة الفسيولوجية لإعداد محلول المخزون. الجرعة الموصى بها في الفئران هي 7.5 ملغ / 100 غرام من وزن الجسم (BW)، في حين أن الفئران 5 ملغ / 100 غ BW FITC-sinistrin هو الأفضل. بالنسبة للفئران، يعد حل من حل الأسهم FITC-sinistrin في 15 ملغ / مل، بينما بالنسبة للفئران إعداد بتركيز 40 ملغ / مل.
ملاحظة: حل الأسهم FITC-sinistrin يمكن إعداد مقدما وتخزينها في -20 درجة مئوية محمية من الضوء.
2. إعداد الحيوان
- تأقلم الحيوانات لمدة أسبوع على الأقل قبل بدء العمل بها في أي تجربة.
- تخدير الحيوانات باستخدام 5٪ الأيزوفلورين في 5 لتر / دقيقة O 2 تدفق لمدة 2 دقيقة.
- تأكد من أن الحيوان هو تخدير بشكل صحيح من خلال مراقبة التنفس، والذي يصبح أبطأ وأكثر عمقا، والتحقق من عدم تجاوب مع عدم وجود استجابة أخمص قدميه.
- وبمجرد أن الحيوان هو نائم، والحد من التخدير إلى 2.5٪ الأيزوفلورين في 2 لتر / دقيقة يا معدل تسليم 2 واتخاذ BW.
- إزالة الفراء من الجهة الجزء الخلفي من الحيوان باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية. حلاقة مساحة أكبر قليلا من المنطقة التي سيتم المحتلة من قبل التصحيح لاصقة على الوجهين، والتي لها أبعاد 3 سم × 6 سم.
- تطبيق في وقت لاحق كريم إزالة الشعر لفترة قصيرة (2-3 دقيقة) لإزالة الفراء المتبقية.
- اغسل المنطقة حتى تمت إزالة كريم تماما، حيث أن كريم في حد ذاته قد يكون الفلورسنت.
ملاحظة: تجنب خدش جلد الحيوان لأنها يمكن أن تنتج تهيج / ذمة. إذا تبين منطقة نزعه تصبغ على الجلد، حلاقة منطقة أكبر حتى بقعة غير الصباغية للتم العثور على جزء البصري للجهاز. فمن المستحسن أن يحلق 24 ساعة مقدما للحد من التعرض التخدير.
3. جهاز تحضير
- وضع الجهاز البصري لقياس وظائف الكلى على جانب واحد من الوجهين رقعة لاصقة، وتحديد المواقع على جزء بصري فوق نافذة شفافة (الشكل 1) وترك الجزء الآخر مع احباط واقية.
ملاحظة: عند العمل مع القوارض الصغيرة، والحد من حجم التصحيح كما هو مبين في الشكل 2. - نعلق على قطعة من الوجهين رقعة لاصقة من حجم مطابقة للبطارية كما هو مبين في الشكل (3).
4. تثبيت للجهاز على الحيوان
- حساب حجم مناسب لحقن على أساس الوزن جسم الحيوان.
- تخدير الحيوانات مع isoflurane كما هو مشار إليه في السابق على أقسام 2،1-2،3.
- قطع قطعة من الشاش أنبوبي مرنة ضمادة سو حوالي 1 سم أطول من عرض على الوجهين رقعة لاصقة لاستخدامها.
- سحب ضمادة الشاش المرنة على رأس الحيوان ومكان على ظهرها، وترك منطقة حلق كشف.
ملاحظة: بدلا من ذلك، إصلاح الجهاز باستخدام شريط لاصق فقط، ولكن يكون على بينة من ضغوط لا داعي لها على الجهاز. - توصيل البطارية إلى الجهاز عن طريق توصيل موصل البطارية إلى المنفذ المقابل على الجهاز. بعد ذلك إزالة احباط واقية من قطعة من التصحيح وتركيب البطارية على السطح العلوي من الجهاز (الشكل 4A). تأكد من أن بطارية موصول بشكل صحيح عن طريق التحقق من أن الجهاز يبدأ الوميض.
ملاحظة: في الفئران، وبطارية يمكن تركيبها أيضا مباشرة على رقعة لاصقة، إلى جانب الجهاز (الشكل 4B). - إزالة الغطاء الواقي من التصحيح مع جهاز التشغيل ووضعه على منطقة حلق على ظهر الحيوان إمساكهالصورة حواف حتى يتم إصلاحه بشكل صحيح.
- تغطية الجهاز مع أنبوبي ضمادة الشاش دنة الانضمام إلى السطح لاصقة من التصحيح (الشكل 5).
- صحيح تمتد ضمادة أنبوبية على البطن للحيوان، وضمان أن الأطراف يمكن أن تتحرك بحرية.
- لتثبيت وحماية الجهاز أفضل، وتطبيق شريط من شريط لاصق التالية شكل الجهاز وتغطية أسلاك البطارية.
- قياس الخلفية ل1-3 دقائق، من دون الضغط على الجهاز
إدارة 5. FITC-sinistrin وإجراء القياس
- إذا لزم الأمر، الاحماء ذيل الحيوان باستخدام الماء الدافئ قبل الحقن أو لوحة التدفئة التحكم في درجة الحرارة على طول كل إجراء.
- حقن عن طريق الوريد الذيل حجم مناسب من حل الأسهم FITC-sinistrin. حجم حقن يعتمد على الأسلحة البيولوجية الحيوانية، وبالتالي يجب أن تحسب لكل السلبيات الفرديةidering الجرعة المطلوبة وتركيز المحلول، سبق ذكره في القسم 1.1.
- التأكد من أن جميع حل FITC-sinistrin تدار عن طريق الوريد وليس تحت الجلد.
ملاحظة: بدلا من ذلك، FITC-sinistrin يمكن أن تدار باستخدام قسطرة وريدية زرعها قبل خرجت من مؤخر العنق في القوارض أو عن طريق الحقن المداري الرجعية في الفئران. - بعناية، وعودة الحيوان إلى قفص وطنه تجنب الحركات القوية وأي ضغط على الجهاز، كما انها ستقدم التحف الحركة.
- وضع قفص المنزل في مكان هادئ لتجنب أن الحيوان تشعر بالانزعاج.
- إجراء القياس أثناء لا يقل عن 1 ساعة إذا كان يعمل مع الفئران و 2 ساعة عند استخدام الفئران. خلال تلك الفترة، وسيقوم الجهاز البصري قياس من خلال الجلد مضان المنبعثة من FITC-sinistrin.
ملاحظة: خلال فترة التسجيل لابد من استضافة الحيوان وحدها. وعلاوة على ذلك إمدادات المياه، فضلا عن جاحظهياكل مثل أغطية الأسلاك، ويجب إزالة لتجنب إلحاق الضرر الجهاز وحركة القطع الأثرية الإلكترونية بسبب الآثار مع الكائنات.
إزالة 6. جهاز
- مرة واحدة في فترة التسجيل قد انتهت، إزالة الجهاز من دون تخدير. ومع ذلك، إذا لزم الأمر، تخدير الحيوان لفترة وجيزة تحت 5٪ الأيزوفلورين في 5 لتر / دقيقة معدل تسليم O 2 خلال 2 دقيقة.
- بعناية، وسحب قبالة شريط لاصق أولا، ثم ضمادة أنبوبي.
- فصل بلطف على الوجهين رقعة لاصقة من الجلد والعودة الحيوان إلى قفص المنزل العادي لها.
7. مقروءة من البيانات
- افصل البطارية من الجهاز وإزالة التصحيح لاصقة.
ملاحظة: يتم تخزين البيانات على الجهاز حتى يبدأ قياس جديد. عندما يتم توصيل البطارية البيانات المخزنة هي الكتابة مع التسجيلات الجديدة. لذلك، لا إعادة توصيل البطارية قبل تحميل البيانات منجهاز. هناك فترة سماح 10 ثانية مخصصة لإعادة التحام عرضية من البطارية. - توصيل الجهاز بجهاز الكمبيوتر باستخدام كابل USB مصغر وتحميل البيانات باستخدام البرامج المقدمة. الملف الناتج هو ملف .csv التي يمكن فتحها وتعديلها مع برنامج جداول البيانات.
- فتح ملف البيانات مع برامج معينة للجهاز البصري وتوليد منحنى حركية القضاء باستخدام بروتوكولات البرمجيات.
- تحليل منحنى باتباع الإرشادات المتوفرة مع الجهاز البصري. قريبا، لتقييم البيانات، تعيين إشارة الخلفية قياس إدارة FITC-sinistrin السابقة وتشكل بداية مرحلة إفراز الأسية للعلامة، والذي يحدث عادة 15 دقيقة و 45 دقيقة بعد حقن البلعة، في الفئران والجرذان على التوالي .
ملاحظة: سوف يقوم البرنامج تلقائيا عرض للFITC-sinistrin نصف الحياة (ر 1/2) جنبا إلى جنب مع قيمة R 2، يحددها-compar 1نموذج tment. ر 1/2 يمكن استخدامها لحساب معدل الترشيح الكبيبي باستخدام عامل تحويل 9،10.
النتائج
الإعداد للقياس عبر الجلد هو بسيط جدا وسريع: يتم وضع الجهاز على الوجهين رقعة لاصقة (الشكل 1) وتعديلها في حجم إذا لزم الأمر (الشكل 2)، وأعد البطارية (الشكل 3) ومتصلة (الشكل 4).
هذه الطريقة لتقييم وظيفة الكلى وقد تم التحقق بالفعل في الأنواع المختلفة من خلال المقارنة مع النهج التقليدي لإزالة البلازما 9،11،12. بعد بروتوكول يتعرض هنا، شرايبر وآخرون. أثبتت صحة هذه التقنية في نماذج الماوس المختلفة، والتي تبين نتائج مماثلة إلى حد كبير بين عبر الجلد القياس والبلازما إزالة لجميع المجموعات المدروسة (الجدول 1) 9. في هذا العمل تم تحويل ر الحصول على 1/2 إلى GFR باستخدام الماوس تحويل محددة شبه تجريبيعامل.
وقد أثبتت اتساق التقييم عبر الجلد وظيفة الكلى أيضا باستخدام سلالات مختلفة من الفئران. وأظهرت قياسات متتابعة خلال 3 أيام في نفس الحيوان معامل الفروق من 3،0-6،2٪ 13. في هذه الدراسة كان هناك أي تحويل لGFR لكن وأعرب عن النتائج وتفسيرها مباشرة من حيث ر 1/2.
إمكانية الحصول على النتائج تقريبا في الوقت الحقيقي هي واحدة من مزايا كبيرة من هذا الأسلوب. بعد فترة التسجيل، وهنا النتائج يتسن على الفور الحصول التحليل والبرامج المقدمة يعرض منحنى إفراز FITC-sinistrin على الفور (الشكل 6). في داخل البرنامج نفسه ر 1/2 من FITC-sinistrin يمكن الحصول عليها، والتي يمكن استخدامها مباشرة كمعلمة لتقييم وظائف الكلى من تحويلها من حيث معدل الترشيح الكبيبي الشكل 7 يظهر كيف يبدو منحنى إفراز FITC-sinistrin قياس transcutaneously في حيوان يعانون من القصور الكلوي. عندما وظيفة الكلى يتأثر، FITC-sinistrin ر 1/2 زيادات ترجع إلى إفراز انخفاض للمادة وظهور التغييرات منحنى. عادة، لا يأتي منحنى قياس إلى مستوى الخلفية ويقدم مساحة متزايدة تحت المنحنى. في نفس الحيوان، يمكن أن القياسات من بعدها إلى ما بعد الإصابة تجربة زيادة في الحد الأقصى لكثافة مضان بسبب تراكم علامة الناجمة عن خفض إفراز لها. في حال وجود قصور الكلى، ويمكن منحنى قياس transcutaneously من FITC-sinistrin تظهر حالة مستقرة بسبب وظيفة ضعف شديد (7B الشكل).
وقد أظهرت استخدام جهاز المنمنمة في عدة سلالات من القوارض مع الحالة الصحية المختلفة أن هذا الأسلوب هو مناسبة وحساسة بما يكفي للكشف عن تغيرات درق لأمراض الكلى والشيخوخة. ويبين الجدول 2 ملخص للنماذج الفئران درس حتى الآن مع هذا الأسلوب.
الشكل 1. تنسيب الجهاز على الوجهين رقعة لاصقة. هي التي شنت الجهاز على لاصق التصحيح المواقع جزء البصرية في نافذة شفافة.
الشكل 2. التكيف مع التصحيح لاصقة للقوارض صغيرة الحجم. لاستخدامها في الحيوانات الصغيرة فمن المستحسن للحد من حجم التصحيح. ج: استخدام الجهاز بمثابة دليل لقطع التصحيح بشكل صحيح. باء: وبعد الحصول على الحجم المطلوب، الجهاز يمكن وضعها على سطح لزجة من التصحيح. Pتأجير انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. إعداد البطارية. لتوصيل البطارية إلى الجهاز، وقطع قطعة صغيرة من الوجهين رقعة لاصقة (A و B) ووضعه على سطح البطارية (C). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4. اتصال ووضع البطارية أثناء القياس. (A) في القوارض الصغيرة مثل الفئران، ويرجع ذلك إلى انخفاض مساحة، يجب وضع البطارية على الجزء العلوي من الجهاز. (ب) في الحيوانات الكبيرة البطارية جعلى أن توضع بجانب الجهاز. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 5. التنسيب من أنبوبي ضمادة الشاش مرنة في الفئران. وينبغي أن يغطي ضمادة أنبوبية على الوجهين رقعة لاصقة دون التدخل في حرية حركة الأطراف لراحة الحيوان. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
تم الكشف عن الشكل 6. صورة الممثل من منحنى القضاء على FITC-sinistrin. إشارة الناتجة عن FITC-sinistrin transcuاآلن ذاته وتخزينها في الذاكرة الداخلية للجهاز. عندما يتم تحميل البيانات المسجلة على جهاز كمبيوتر، والبرنامج بإنشاء منحنى مماثلة لتلك التي قدمت في الصورة. يظهر العمودي شدة سجلت مضان [الاتحاد الافريقي]، المنبعثة من علامة FITC-sinistrin حقن، بينما يمثل المحور السيني مدة القياس في وقت [مين]. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 7. صورة الممثل من منحنى القضاء على FITC-sinistrin في الحيوانات مع اختلال وظائف الكلى. (A) منحنى القضاء FITC-sinistrin في الحيوانات مع انخفاض وظائف الكلى ويظهر عادة مساحة زيادة تحت المنحنى وعدم القدرة على الوصول إلى خط الأساس داخل فترة القياس العادية . (ب) في الحيوانات ضعف شديد منحنى قياس transcutaneously يمكن أن تظهر حالة مستقرة مما يشير إلى الفشل الكلوي. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
تم التحقق من صحة الجدول 1. التحقق من قياس عبر الجلد عن طريق مقارنة مع إزالة البلازما التقليدية. القياس عبر الجلد وظيفة الكلى في نماذج مختلفة الماوس (صحية وnephrectomized من جانب واحد (UNX) C57BL / 6-129 SV الفئران والفأر نموذج من سحاف الكلية ( pcy)) بالمقارنة مع إزالة البلازما. القيم هي وسائل ± SD. معدل الترشيح الكبيبي، الكبيبي معدل الترشيح 9.
/53767/53767table2.jpg "/>
درس الجدول 2. نماذج الفئران باستخدام قياس عبر الجلد UNX، nephrectomized من جانب واحد؛ ACE، الإنزيم المحول للأنجيوتنسين. تي gumodwt / بالوزن، المعدلة وراثيا uromodulin خروج المغلوب، والتنمية المستدامة، سبراغ داولي الفئران. PKD، مرض الكلى المتعدد الكيسات.
المناقشة
تصف هذه الورقة الإجراء لتحديد وظائف الكلى في القوارض واعية باستخدام جهاز المنمنمة وخارجي علامة الكلى FITC-sinistrin. كما ذكر من قبل، وهذا الأسلوب له العديد من المزايا مقارنة مع الإجراءات التقليدية لإزالة البول والبلازما. واحد منهم هو الاستقلال عن اخذ عينات من الدم والبول مما يؤدي إلى تحقيق وفورات كبيرة من حيث المواد الاستهلاكية، والوقت، وبطبيعة الحال، والإجهاد الحيوان.
كما هو مبين في الجدول رقم 2، ودخيلة علامة الكلى FITC-sinistrin وقياس حركية القضاء عليه من خلال الجلد تسمح للتأثير أمراض الكلى على وظيفة الكلى لدراستها 9،10،14-18. جمع التسلسلي للعينات الدم اللازمة لتقييم إزالة البلازما أو المؤشرات الحيوية لأمراض الكلى والمجهدة للحيوان، مرهقة وللباحثين تستغرق وقتا طويلا. لذلك، كانت قياسات متتابعة في نفس الحيوان ليمited من رفاهية الحيوانات وأسباب منهجية. وثبت استنساخ داخل الحيوان من قياس عبر الجلد 13 يجعلها الأسلوب الأمثل للكشف عن تغيرات في وظائف الكلى بسبب تطور المرض أو الشيخوخة. لنفس السبب، كما يمكن أن يكون مفيدا للغاية لدراسة فعالية المناهج العلاجية.
اثنين من الخطوات الحاسمة لنجاح تطبيق هذه التكنولوجيا هي تثبيت الجهاز البصري على الحيوان والإدارة الصحيحة للعلامة. يجب أن يكون الجهاز ثابتة بشكل مناسب لتجنب القطع الأثرية الحركة. لهذا الغرض، ومنع الحجز ومفرزة من التصحيح لاصقة على الوجهين أمر بالغ الأهمية لأنها يمكن أن تؤدي إلى فقدان خصائصه لاصق وفي نهاية المطاف إلى تثبيت غير مناسب على الحيوان. كما ورد في البروتوكول، تجميد وحماية الجهاز البصري من خلال تغطية ذلك مع شريط لاصق هو نهج فعال لضمان ADEQUATه التثبيت. عند تنفيذ FITC-sinistrin حقن البلعة من الأهمية بمكان لإدارة كل مادة عن طريق الوريد وليس تحت الجلد. الافراج عن علامة في الأنسجة تحت الجلد يمكن التعرف عليها بسهولة من قبل عصابة الصفراء تحلق ذيل الحيوان التي تنتجها اللون FITC-sinistrin نفسه. وحقن تحت الجلد يظهر عادة ما منحنى تملق ولفترة طويلة وقت علامة الإفراز. الحد الممكن من هذا الأسلوب هو أكثر صلة لعلامة تستخدم من مع التكنولوجيا في حد ذاتها. وعندما تكون موجودة في جلد حيوان ذمة، لن أوصى التقييم عبر الجلد وظيفة الكلى، كما أن هناك حجرة إضافية التي يمكن أن تغير ديناميات إفراز FITC-sinistrin. وبالمثل، يمكن أن الجلد المصطبغ تحد من استخدام هذه التقنية نظرا لتداخل الإثارة وانبعاث أطياف FITC-sinistrin والميلانين. ومع ذلك، في الحيوانات مع تصبغ الجلد في البقع، ويتم حل المشكلة عن طريق وضع البصريةجزء من الجهاز في منطقة unpigmented.
ومن الممكن تعديل الجوانب المختلفة للتقييم عبر الجلد وظيفة الكلى من أجل التكيف مع الإجراء لمختلف أنواع الحيوانات و / أو النهج. على سبيل المثال، والجرعة الموصى بها FITC-sinistrin أو طول قياس يمكن تعديلها حسب الهدف من التجربة فضلا عن الأنواع المختلفة أو النماذج الحيوانية. وقد تم بالفعل تأكدت هذه القدرة على التكيف من الطريقة التي التطبيق الناجح في أنواع مختلفة من القوارض وعدة أنواع من سلالات يعانون من ظروف صحية متنوعة. وبالإضافة إلى ذلك، تم التحقق من صحة التقييم عبر الجلد وظيفة الكلى مؤخرا في الكلاب والقطط 12 مع نتائج ممتازة. نظرا للاختلافات لا شك بين هذه الحيوانات والقوارض، تحدد هذه الدراسة الجرعة المناسبة من FITC-sinistrin على حد سواء، والكلاب والقطط، وإنه أجرى قتا أطول بكثير قياس، 4 ساعات بدلا من ساعة 1 أو 2 استخدامد في القوارض.
معا، واستخدام هذه التقنية يمكن أن تساعدنا على الحصول على رؤى أكثر دقة في علاج امراض الكلى، بما في ذلك فهم أفضل لتطور المرض الكلوي وتأثير العلاج. خصائص التقييم عبر الجلد وظيفة الكلى يضعه كتقنية مناسبة ليتم تطبيقها في المجالات الطبية البشرية والبيطرية في المستقبل، وينبغي النظر فيها باعتبارها تكنولوجيا واعدة لتحل محل الطرق التقليدية.
الإفصاحات
NG حاصل على براءة اختراع على إنتاج FITC-sinistrin.
شكر وتقدير
ZHP مدعوم من قبل مشروع Marie-Curie: NephroTools.
المواد
جهاز
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| NIC-Kidney | Mannheim Pharma & يتم توفير برنامج Diagnostics GmbH | والبطاريات وأجهزة الشحن مع الجهاز / الأجهزة ، ويجب أن تتم الطلبات من خلال info@mapdiagnostics.com | |
| FITC-sinistrin | Mannheim Pharma & يجب أن تتم طلبات Diagnostics GmbH | من خلال info@mapdiagnostics.com | |
| رقعة لاصقة على الوجهين | Mannheim Pharma & يجب أن تتم طلبات Diagnostics GmbH | من خلال ماكينة | |
| الحلاقة الكهربائية info@mapdiagnostics.com Isis Rodent | Braun Aesculap | GT420 | |
| Isoflurane | Abbott GmbH | PZN4831850 | |
| شريط لاصق Leukosilk | BSN الطبي | 102200 | |
| ضمادة شاش مرنة أنبوبية ؛ | MaiMed Medical GmbH | 73012 | هناك أحجام مختلفة متاحة. يوصى باستخدام الحجم 1 للفئران. |
| كريم إزالة الشعر Veet | Reckitt Benckiser | PZN7768307 | يوصى بتركيبة البشرة الحساسة كما هو أكثر رقة مع بشرة |
| كابل Micro USB | Samsung | APCBU10BBE | |
| Deltajonin الحل الفسيولوجي | AlleMan Pharma GmbH | 3366954 | بدلا من ذلك ، يمكن استخدامه محلول ملحي أو PBS & nbsp ؛ |
المراجع
- Stevens, L. A., Levey, A. S. Measured GFR as a confirmatory test for estimated GFR. J Am Soc Nephrol. 20, 2305-2313 (2009).
- Katayama, R., et al. Calculation of glomerular filtration rate in conscious rats by the use of a bolus injection of iodixanol and a single blood sample. J Pharmacol Toxicol Methods. 61, 59-64 (2010).
- Reinhardt, C. P., et al. Functional immunoassay technology (FIT), a new approach for measuring physiological functions: application of FIT to measure glomerular filtration rate (GFR). Am J Physiol Renal Physiol. 295, F1583-F1588 (2008).
- Rieg, T. A high-throughput method for measurement of glomerular filtration rate in conscious mice. J Vis Exp. , e50330(2013).
- Yu, W., Sandoval, R. M., Molitoris, B. A. Rapid determination of renal filtration function using an optical ratiometric imaging approach. Am J Physiol Renal Physiol. 292, F1873-F1880 (2007).
- Wang, E., Sandoval, R. M., Campos, S. B., Molitoris, B. A. Rapid diagnosis and quantification of acute kidney injury using fluorescent ratio-metric determination of glomerular filtration rate in the rat. Am J Physiol Renal Physiol. 299, F1048-F1055 (2010).
- Colson, P., et al. Does choice of the anesthetic influence renal function during infrarenal aortic surgery? Anesth Analg. 74, 481-485 (1992).
- Fusellier, M., et al. Influence of three anesthetic protocols on glomerular filtration rate in dogs. Am J Vet Res. 68, 807-811 (2007).
- Schreiber, A., et al. Transcutaneous measurement of renal function in conscious mice. Am J Physiol Renal Physiol. 303, F783-F788 (2012).
- Schock-Kusch, D., et al. Transcutaneous measurement of glomerular filtration rate using FITC-sinistrin in rats. Nephrol Dial Transplant. 24, 2997-3001 (2009).
- Schock-Kusch, D., et al. Transcutaneous assessment of renal function in conscious rats with a device for measuring FITC-sinistrin disappearance curves. Kidney Int. 79, 1254-1258 (2011).
- Steinbach, S., et al. A pilot study to assess the feasibility of transcutaneous glomerular filtration rate measurement using fluorescence-labelled sinistrin in dogs and cats. PLoS One. 9, e111734(2014).
- Schock-Kusch, D., et al. Reliability of transcutaneous measurement of renal function in various strains of conscious mice. PLoS One. 8, e71519(2013).
- Cowley, A. W. Jr, et al. Progression of glomerular filtration rate reduction determined in conscious Dahl salt-sensitive hypertensive rats. Hypertension. 62, 85-90 (2013).
- Giani, J. F., et al. Renal angiotensin-converting enzyme is essential for the hypertension induced by nitric oxide synthesis inhibition. J Am Soc Nephrol. 25, 2752-2763 (2014).
- Sadick, M., et al. Two non-invasive GFR-estimation methods in rat models of polycystic kidney disease: 3.0 Tesla dynamic contrast-enhanced MRI and optical imaging. Nephrol Dial Transplant. 26, 3101-3108 (2011).
- Trudu, M., et al. Common noncoding UMOD gene variants induce salt-sensitive hypertension and kidney damage by increasing uromodulin expression. Nat Med. 19, 1655-1660 (2013).
- Zollner, F. G., et al. Simultaneous measurement of kidney function by dynamic contrast enhanced MRI and FITC-sinistrin clearance in rats at 3 tesla: initial results. PLoS One. 8, e79992(2013).
إعادة الطباعة والأذونات
