مقالة منهجية

الفصل Immunomagnetic من Sca1 الدهون مستودع محددة

DOI:

10.3791/53890

⸱

أغسطس 11, 2016

 , 
1Department of Internal Medicine, Division of Metabolism, Endocrinology and Diabetes, Biointerfaces Institute, University of Michigan

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم التقنيات المطلوبة لعزل الجزء الوعائي اللحمي (SVF) من مستودعات الأنسجة الدهنية الأربية (تحت الجلد) وحول الغدد التناسلية (الحشوية) لتقييم تعبيرها الجيني ونشاطها الكولاجيني. تتضمن هذه الطريقة إثراء الخلايا الجذعيةالمشتقة من الدهون العالية Sca1 (ASCs) باستخدام فصل الخلايا المغناطيسية المناعية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد عزل الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون (ASCs) طريقة مهمة في مجال بيولوجيا الأنسجة الدهنية ، وتكوين الشحم ، وإعادة تشكيل المصفوفة خارج الخلية (ECM). في الجسم الحي ، توفر البيئة الغنية ب ECM التي تتكون من كولاجين ليفي دعما هيكليا للأنسجة الدهنية أثناء تطور السمنة وتتراجعها. تلعب إعادة تشكيل ECM الفسيولوجية بوساطة البروتينات المعدنية المصفوفة (MMPs) دورا رئيسيا في تنظيم حجم الأنسجة الدهنية ووظيفتها1،2. قد يؤدي فقدان إعادة تشكيل ECM الكولاجيني الفسيولوجي إلى تراكم مفرط للكولاجين (تليف الأنسجة) ، وتسلل البلاعم ، وفي النهاية ، فقدان التوازن الأيضي بما في ذلك مقاومة الأنسولين3،4. عندما يلاحظ تغيير في النمط الظاهري للأنسجة الدهنية في نماذج الفئران المستهدفة للجينات ، فإن عزل ASCs الأولية عن مستودعات الدهون للدراسات في المختبر هو نهج فعال لتحديد دور الجين المحدد في تنظيم وظيفة ASCs. في ما يلي ، نحدد الفصل المناعي المغناطيسي ل Sca1ASCs العالية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخلايا الجذعية مستضد 1 (Sca1، أو Ly6A / E) كان أول من عرف كعلامة سطح الخلية التي عبرت عنها المكونة للدم والخلايا الجذعية الوسيطة 5،6. جزء الأوعية الدموية اللحمية (صندوق التبرعات الخاص) من الأنسجة الدهنية التي تم الحصول عليها من مستودعات الماوس الدهون هي مجموعة متغايرة من الخلايا التي تتكون من الخلايا الليفية، الضامة، وخلايا بطانة الأوعية الدموية، والخلايا العصبية، وخلايا خلية شحمية السلف 7. الخلايا الاولية خلية شحمية، أو الخلايا الجذعية الدهنية المشتقة (مخولا لصيانة طائرات) هي خلايا غير الدهون لادن الموجودة في المصفوفة خارج الخلية المحيطة بالأوعية الكولاجين الغني (ECM) 8. ما يقرب من 50٪ من صندوق التبرعات الخاص تتكون من مخولا لصيانة طائرات، والتي وصفها بأنها نسب سلبية (لين -) وCD29 +: CD34 +: Sca1 + 9. معظم هذه الخلايا هي Sca1 +: CD24 - الأسلاف خلية شحمية، والتي هي قادرة على التمايز خلية شحمية في المختبر. ومع ذلك، سوى جزء صغير من الخلايا (0.08٪ من صندوق التبرعات الخاص) يشكل Sca1 +: CD24 + الخلايا التي هي قادرة تماما على المتكاثرة والتفريق في الخلايا الشحمية في ظروف في الجسم الحي 9. وعلى الرغم من التحذير المحتمل لاستخدام Sca1 + صندوق التبرعات الخاص دون تمييز الخلايا CD24 + CD24 من - الخلايا، عزل Sca1 + مخولا لصيانة طائرات من مخازن الدهون باستخدام فصل الخلية immunomagnetic هو نهج فعال وعملي لتحديد النمط الظاهري خلية مستقلة الخلايا الاصلية خلية شحمية الأولية.

في مجال السمنة ومرض السكري، تليف الأنسجة والتهاب تلعب دورا حاسما في تطوير وصيانة النوع 2 من داء السكري 3. في الآونة الأخيرة، توكوناجا وآخرون. أظهرت أن Sca1 خلايا عالية معزولة عن الاربية (أو تحت الجلد، SQ) وperigonadal (أو الحشوية، VIS) C57BL6 / J مستودعات الدهون يحمل توقيعات الجينات المختلفة، وECM إعادة عرض في المختبر 10. MMP14 (MT1-MMP)، وهو عضو تنميط للغشاء تييب] مصفوفة الفلزي (MMP) أسرة تتوسط تطوير الأنسجة الدهنية البيضاء (وات) من خلال النشاط حال للكولاجين ل1.

وتشمل الأمثلة من التجارب التي يمكن أن تجري مع الخلايا المعزولة والتخصيب من خلال بروتوكول التالي ثقافة ثلاثية الأبعاد، دراسات التمايز، المقايسات تدهور الكولاجين، وRNA تسلسل 10،11. وينبغي إجراء فحوصات تدهور مع الكولاجين حمض المستخرجة لضمان الحفاظ على telopeptide 11،12. فإن بروتوكول التالية لشرح طرق لعزل خلايا انسجة الوعائية الأولية من مستودعات الدهون المختلفة، وإثراء الخلايا الاولية خلية شحمية باستخدام فصل الخلية immunomagnetic. وسيتم تقييم صلاحية فرز الخلايا مع التدفق الخلوي ومن خلال استخدام-Sca1 GFP الفئران التي تعبر عن GFP في Sca1 + الخلايا، يقودها Sca1 المروج 13.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أخلاقيات الإعلان: جامعة ميشيغان اللجنة على استخدام ورعاية الحيوانات (UCUCA) تمت الموافقة على جميع الطرق والبروتوكولات وفقا لدليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية (معهد مختبر أبحاث الحيوان، المجلس الوطني للبحوث). تتم المحافظة على الفئران في جامعة ميشيغان الحظيرة وتعطى حرية الوصول إلى الغذاء والماء وأبقى على 12 ساعة الظلام دورة / الخفيفة.

1. التحضيرات

  1. إعداد وسائل الإعلام ثقافة الأساسي مع DMEM، و 10٪ FBS، 1X P / S / G، و1X المضادات الحيوية / مضادات الفطريات. وسوف تستخدم هذه للحفاظ على الأنسجة الدخول قبل الهضم. وضع الأسهم وقسامة في 37 حمام ماء درجة مئوية.
  2. إعداد خمسة ملليلتر من النوع الثالث حل كولاجيناز في 5mg / حل مل في HBSS (+ الكالسيوم، المغنيسيوم +) لكل نوع من منصة الدهون عزله، ما يصل إلى خمسة الفئران. على سبيل المثال، عندما عزل SQ وVIS من النمط الجيني واحد، وجعل 10 مل، إذا من النوع البري ومتحولة SQ وVIS، وجعل 20 مل. ضبط درجة الحموضة إلى 7.4 والظريفيثير غضب التصفية. قسامة إلى 50 مل أنابيب. جانبا بعيدا عن الضوء.
  3. استخدام الايثانول 70٪ لتطهير الجراحي الميداني. مسح أسفل، وتغطي مع لوحة زرقاء. رش بعض الإيثانول على لوحة زرقاء.
  4. استخدام الإبر 22 G ليتعرفوا على وسادة ماصة لمجلس الستايروفوم وتقليم مع مقص. رش لوحة مع الإيثانول ثم تعيين مجلس على لوحة زرقاء وتغطية مع لوحة زرقاء آخر حتى يبدأ تشريح.
  5. ملء اثنين من 50 مل أنابيب مع الإيثانول وضعها في موقف مجاور للالجراحي الميداني. وضع مقص وملقط في الإيثانول.
  6. ملء أنبوب آخر 50 مل مع برنامج تلفزيوني بالإضافة إلى 1X مكافحة المضادة للشطف الإيثانول من الأدوات الجراحية.
  7. في غطاء محرك السيارة، والتسمية 60 أطباق مم لكل نوع من أنواع الأنسجة وتمتلئ وسائل الإعلام ثقافة تحسنت إلى 37 درجة مئوية. وضع لوحات المتاخمة لمنطقة العمليات الجراحية.

2. عزل تحت الجلد (SQ) الدهون وسادات

  1. الموت ببطء الفأر مع جرعة زائدة من الأيزوفلورين واسترواح الصدر.
  2. بلطفرذاذ الفأر مع الايثانول 70٪ ووضع مستلق. دبوس الكفوف إلى مجلس رغوة مع 22 الإبر G.
  3. جعل قطع صغير في الجلد من أسفل البطن. عقد قمة للقطع مع ملقط، واتخاذ مقص وفصل الجلد من البريتوني.
  4. مرة واحدة يتم فصل الجلد من البريتوني من البطن إلى القفص الصدري، يعكس الجلد بعيدا عن الصفاق نحو الرأس من خلال جعل التخفيضات الجانبية في الجلد على طول الجانب من الجسم.
  5. تعكس الجلد المتبقية عقد الدهون الإربي بعيدا عن الجسم ويتعرفوا إلى لوحة مع 22 الإبر G.
  6. التبديل إلى مقص الجميلة وملقط. الاستيلاء على لوحة الدهون الأربية مع ملقط في أصل قرب الصفاق وقص بعيدا بين الجلد والدهون الإربي تتقدم نحو الفخذ تجنب تلويث SQ مع الجلد.
  7. وضع insolated الأربية منصة الدهون في الطبق المسمى 60 ملم.

3. عزل الحشوية (VIS) وسادات الدهون

  1. بطريقة مماثلة إلى الخطوة 2.5، وقطع الصفاق مفتوحة لفضح منصات الدهون والأمعاء الحشوية.
  2. نقل القناة الهضمية بعيدا نحو الصدر.
  3. الاستيلاء على VIS منصة الدهون في نهاية القاصي وسحب بلطف صعودا. تشريح خارج VIS وحة الدهون مع الحرص على استبعاد بربخي (أو الرحم، إذا كان استخدام إناث الفئران) الأنسجة.
  4. مكان في صحن وصفت وكرر الخطوة 3.3 لوحة VIS المتبقية.

4. كولاجيناز هضم الدهون وسادات

  1. نقل 60 ملم الأطباق إلى غطاء محرك السيارة زراعة الأنسجة، ونضح من وسائل الإعلام.
  2. تخطر على منصات الدهون مع مقص منحني ثم يضاف إلى حل كولاجيناز. يجب التأكد من شطف مقص وملقط بين أنواع الأنسجة مع الايثانول وبرنامج تلفزيوني.
  3. هزة في 300 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية لمدة 10-20 دقيقة حتى يتم هضمها الأنسجة. كان مقبولا إذا كان بعض القطع من SQ لا تزال مرئية. وسيتم تناول ذلك في خطوة لاحقة.
  4. إضافة 25 مل من وسائل الاعلام والثقافة في حل كولاجيناز لوقف collagالعلاج enase، وماصة صعودا وهبوطا 10 مرات مع 10 مل ماصة المصلية لتفريق الأنسجة هضمها.
  5. خلايا السلالة باستخدام مصفاة الخلية 100 ميكرون. أجهزة الطرد المركزي لمدة 10 دقيقة في 300 × ز.
  6. صب بعناية من وسائل الإعلام على عدم تعكير صفو بيليه وإضافة 5 مل من الماء المعقم لبيليه وبلطف ماصة لتعليق الخلايا. الانتظار 2 دقيقة لليز كريات الدم الحمراء.
  7. إضافة 25 مل من وسائل الاعلام مع FBS 10٪ وسلالة الخلايا من خلال جديدة 100 ميكرومتر مصفاة الخلية.
  8. أجهزة الطرد المركزي لمدة 10 دقيقة في 300 × ز. وسائل الإعلام صب وبيليه resuspend في 1 مل من ثقافة وسائل الإعلام.
  9. عدد الخلايا مع عدادة الكريات باستخدام 1: 1 التريبان الأزرق.
  10. لوحة 1 × 10 6 خلايا في بئر واحدة على لوحة 6 جيدا.

5. المغناطيسي فصل خلية

  1. بعد حوالي 4-6 ساعة من التصاق الخلية، وشطف الخلايا مرتين مع HBSS (-CA، -Mg). فصل الخلايا الملتصقة باستخدام التربسين 0.05٪. تمييع تعليق خلية التربسين في المخزن الفصل 1 مل وتدور ل5 دقائق في 300 × ز.
  2. نضح طاف. Resuspend الخلايا في 500 العازلة ميكرولتر. إزالة قسامة 10 ميكرولتر وعدد الخلايا باستخدام عدادة الكريات.
  3. خلايا تدور لمدة 5 دقائق في 300 × ز.
  4. نضح طاف تماما. خلايا resuspend في 90 العازلة ميكرولتر. إضافة 10 الأجسام المضادة الأولية مكافحة Sca1-FITC ميكرولتر. تخلط جيدا واحتضان لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية في الظلام.
  5. غسل الخلايا مع 1 مل العازلة والخلايا الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 300 × ز. إزالة طاف تماما.
  6. خلايا resuspend في 80 العازلة ميكرولتر. إضافة 20 ميكرولتر ميكروبيدات مكافحة FITC. تخلط جيدا واحتضان لمدة 15 دقيقة على 4 درجات مئوية في الظلام.
  7. غسل الخلايا مع 1 مل العازلة والخلايا الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 300 × ز.
  8. إزالة وطاف بيليه resuspend في 500 ميكرولتر عازلة.
  9. وضع عمود في حامل المغناطيسي وشطف العمود مع 500 العازلة ميكرولتر.
  10. إضافة تعليق الخلية إلى العمود. تجنب فقاعات في حين pipetting ل.
  11. جمع Sca1 الخالي من الملصقات - </ sup> في الخلايا وغسل العمود 3 مرات مع 500 ميكرولتر عازلة. فقط إضافة عازلة الجديد عند الخزان فارغ. تجنب فقاعات في حين pipetting ل.
  12. إزالة عمود من حامل المغناطيسي والمكان الى 15 مل أنبوب مخروطي الشكل.
  13. إضافة 1 مل العازلة إلى العمود وأزل Sca1 + عن طريق دفع المكبس توفيره من خلال الخزان العمود.
  14. تدور باستمرار كسور خلية لمدة 5 دقائق في 300 × ز. Resuspend الخلايا في وسائل الإعلام والثقافة 1 مل.
  15. إزالة قسامة 10 ميكرولتر من الكسور وصفت وغير المسماة وعدد الخلايا باستخدام عدادة الكريات.
  16. لوحة كل جزء الخلية في 1 بئر من لوحة 6 جيدا.

6. التأكيد من الفصل Immunomagnetic من Sca1 عالية ACSS مع التدفق الخلوي

  1. شطف الخلايا مرتين مع HBSS (-CA، -Mg) وفصل الخلايا باستخدام 0.05٪ التربسين.
  2. خلايا الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 5 دقائق. Resuspend الخلايا في وسائل الإعلام والثقافة 1 مل وتحسب باستخدام عدادة الكريات.
  3. الحصول على> 10 6 الخلايا في 1 مل سائل الإعلام والثقافة وأجهزة الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 5 دقائق.
  4. إزالة طاف وكرر الخطوة 6.3 مرتين أخريين.
  5. Resuspend الخلايا مع 1 مل من 2٪ مصل الماعز + 2٪ BSA وكتلة لمدة 30 دقيقة في RT.
  6. خلايا الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 5 دقائق.
  7. إزالة عرقلة الحل.
  8. إضافة الفئران IgG2a اليكسا فلور 647 (0.25 ميكروغرام، 1: 400) أو مكافحة Sca1 اليكسا فلور 647 (0.25 ميكروغرام، 1: 400)، في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني مع 2٪ مصل الماعز و 2٪ BSA + برنامج تلفزيوني في 4 درجات مئوية لمدة 30 دقيقة في الظلام.
  9. إضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني الباردة إلى الخلايا. الطرد المركزي 300 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية.
  10. إزالة طاف وكرر الخطوة 6.9 مرتين أخريين.
  11. Resuspend الخلايا في 1 مل برنامج تلفزيوني. تمرير تعليق الخلية من خلال مصفاة الخلية 100 ميكرومتر في إعداد لتحليل تدفق cytometric.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إثراء مخولا لصيانة طائرات عالية Sca1 من سادات الدهون المختلفة.

خلايا انسجة الوعائية معزولة عن مثل الخلايا الليفية عرض SQ الدهون، امتدت شكل الخلية بغض النظر عن مستوى التعبير Sca1 (الشكل 1A). من ناحية أخرى، VIS (eWAT المشتقة) Sca1 عالية وSca1 خلايا المنخفضة تظهر فرق واضح في شكل الخلية الخاصة بهم. مثل ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وهنا علينا أن نبرهن على العزلة والانفصال خلية immunomagnetic من مخولا لصيانة طائرات الفئران من منصات الدهون المختلفة واستخدامها لاجراء تجارب في المختبر. الطريقة المعروضة فعال لعزل سريعة لعدد كبير من مخولا لصيانة طائرات-Sca1 إيجابي، وهو أمر مفيد على العزلة معقدة ومكلفة من الناحية الفنية بوساطة نظام مراقبة الأصول الميدانية من مخولا لصيانة طائرات 9،14. وخلافا لنظام مراقبة الأصول الميدانية، فصل الخلية immunomagnetic لا تسمح باستخدام مستضد متعددة لتحديد السكان الخلي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويؤيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة DK095137 (لTHC). نشكر أعضاء المختبر الحاليين والسابقين الذين ساهموا في تنمية وتطور الأساليب المذكورة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
النوع 3 كولاجينازورثينجتون الكيمياء الحيويةLS004182هضم الأنسجة
DMEMGibco11965-092متوسط ثقافة الجلوكوز
عالية القلم / البكتيريا العقدية / الجلوتامين (100x)Gibco10378-016مضاد حيوي للوسائط
مضاد مضاد (100x)Gibco15240-062وسائل الإعلام مضاد للفطريات
FBSGibco16000-044
PBS (1x ، درجة الحموضة 7.4)Gibco10010-023
Trypsin (0.05٪)Gibco25300-054
مصفاة الخلاياBD Bioscience352360100-& mu ؛ مصفاة خلية m
لوحات 60 مم مقصBD Falcon353004
FST14001-12مقص كبير
FST14091-11طرف ناعم منحني
ملقط كبيرFST11000-12
ملقط ناعمأي بائع
25G 5/8 "إبرBD305122
22G 1.5 "إبرBD305159
15 مل أنابيب مخروطية BDFalcon 352097
50 مل أنابيب مخروطية BDFalcon352098
أعمدة فصل MACSMiltenyi Biotec130-042-201
مجموعة microbead مضادة ل Sca1 (FITC)Miltenyi Biotec130-092-529FITC-anti-Sca1 1 & ordm ؛ أب وميكروبيدات مضادة ل FITC 2 & ordm; Ab
AutoMACS تشغيل المخزن المؤقتMiltenyi Biotec130-091-221
فاصل MiniMACSMiltenyi Biotec130-042-102
MACS MultiStandMiltenyi Biotec130-042-303
وسادات chux زرقاءفيشر276-12424
وسادات ماصةفيشر19-165-621
لوح الستايروفوماستخدم من أنابيب 50 مل 70
٪ إيثانول
إيزوفلورانأي بائع
فأر IgG2a Alexa Fluor 647InvitrogenR2a21
Rat IgG2a مضاد للفأر Sca1 Alexa Fluor 647InvitrogenMSCA21
Rat IgG2A R-PEInvitrogenR2a04
Rat IgG2A مضاد للفأر F4 / 80 R-PEInvitrogenMF48004
أنبوب دائريالقاع BD Falcon352058
HBSS (– Ca ، & ndash ؛ Mg)Gibco14175-095
HBSS (+ Ca ، + Mg)Gibco14025-092لمحلول الكولاجيناز
من النوع الأول من الكولاجين (2.7 مجم / مل في حمض الأسيتيك 37 ممالتحضير في المنزل 12< / sup>
10x MEMGibco11430-030
1 M HEPESGibco15630-080
0.34 N هيدروكسيد الصوديوماستعد في المنزل
زلات الغطاءCorning2870-22
Alexa Fluor 594 حمض الكربوكسيل ، إستر السكسينيمديل ، الأيزومرات المختلطةInvitrogenA-20004
0.89 M NaHCO3  < / فرعي>جيبكو25080-094

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chun, T. H., et al. A pericellular collagenase directs the 3-dimensional development of white adipose tissue. Cell. 125 (3), 577-591 (2006).
  2. Chun, T. H., et al. Genetic link between obesity and MMP14-dependent adipogenic collagen turnover. Diabetes. 59 (10), 2484-2494 (2010).
  3. Chun, T. H. Peri-adipocyte ECM remodeling in obesity and adipose tissue fibrosis. Adipocyte. 1 (2), 89-95 (2012).
  4. Sun, K., Tordjman, J., Clement, K., Scherer, P. E. Fibrosis and adipose tissue dysfunction. Cell Metab. 18 (4), 470-477 (2013).
  5. Spangrude, G., Heimfeld, S., Weissman, I. Purification and Characterization of Mouse Hematopoietic Stem Cells. Science. 241, 58-62 (1988).
  6. Welm, B. E., et al. Sca-1(pos) cells in the mouse mammary gland represent an enriched progenitor cell population. Dev Biol. 245 (1), 42-56 (2002).
  7. Gesta, S., Tseng, Y. H., Kahn, C. R. Developmental origin of fat: tracking obesity to its source. Cell. 131 (2), 242-256 (2007).
  8. Tang, W., Zeve, D., Suh, J. M., Bosnakovski, D., Kyba, M., Hammer, R. E., Tallquist, M. D., Graff, J. M. White fat progenitor cells reside in the adipose vasculature. Science. 322, 583-586 (2008).
  9. Rodeheffer, M. S., Birsoy, K., Friedman, J. M. Identification of white adipocyte progenitor cells in vivo. Cell. 135 (2), 240-249 (2008).
  10. Tokunaga, M., et al. Fat depot-specific gene signature and ECM remodeling of Sca1(high) adipose-derived stem cells. Matrix Biol. 36, 28-38 (2014).
  11. Chun, T. H., Inoue, M. 3-D adipocyte differentiation and peri-adipocyte collagen turnover. Methods Enzymol. 538, 15-34 (2014).
  12. Rajan, N., Habermehl, J., Cote, M. F., Doillon, C. J., Mantovani, D. Preparation of ready-to-use, storable and reconstituted type I collagen from rat tail tendon for tissue engineering applications. Nat Protoc. 1 (6), 2753-2758 (2006).
  13. Ma, X., Robin, C., Ottersbach, K., Dzierzak, E. The Ly-6A (Sca-1) GFP Transgene is Expressed in all Adult Mouse Hematopoietic Stem Cells. Stem Cells. 20 (6), 514-521 (2002).
  14. Berry, R., Rodeheffer, M. S. Characterization of the adipocyte cellular lineage in vivo. Nat Cell Biol. 15 (3), 302-308 (2013).
  15. Jeffery, E., Church, C. D., Holtrup, B., Colman, L., Rodeheffer, M. S. Rapid depot-specific activation of adipocyte precursor cells at the onset of obesity. Nat Cell Biol. 17 (4), 376-385 (2015).
  16. Mori, S., Kiuchi, S., Ouchi, A., Hase, T., Murase, T. Characteristic Expression of Extracellular Matrix in Subcutaneous Adipose Tissue Development and Adipogenesis; Comparison with Visceral Adipose Tissue. Int J Biol Sci. 10 (8), 825-833 (2014).
  17. Ong, W. K., et al. Identification of Specific Cell-Surface Markers of Adipose-Derived Stem Cells from Subcutaneous and Visceral Fat Depots. Stem Cell Reports. 2 (2), 171-179 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Sca1 Sca1

مقالات ذات صلة