تحليل إكلينيكية من ميرنا التعبير في سرطان الثدي الأنسجة باستخدام ميرنا<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين

ملخص

نقدم هنا بروتوكولا للكشف عن تعبير miRNA في عينات مرضى سرطان الثدي باستخدام miRNA في التهجين الموضعي

الملخص

في هذه المقالة ، نصف بروتوكولا مفصلا للكشف عن miRNA في أنسجة سرطان الثدي باستخدام التهجين في الموقع باستخدام مسبار LNA (الحمض النووي المغلق) المسمى digoxigenin. تم التعرف على المسبار بواسطة الأجسام المضادة للفوسفاتيز القلوية المضادة ل DIG وتم تطويره لاحقا باستخدام ركيزة الفوسفاتيز القلوية التي تنتج إشارات مضانة. استخدمنا هنا تقنية التهجين الموضعي (MISH) miRNA لتحليل التعبير عن miR-489 في أنسجة مرضى سرطان الثدي. يمكن لهذه التقنية اكتشاف توطين miRNA ذات الأهمية في عينات الأنسجة الفردية. يمكن استخدام هذه التقنية لمقارنة التعبير عن miRNA المطلوب في أنسجة الورم مع ذلك الموجود في الأنسجة الطبيعية المجاورة ولتحديد الهياكل المحددة المسؤولة عن التعبير عن هذا miRNA. يمكن أن تكون هذه التقنية مفيدة جدا في الإجابة على بعض الأسئلة السريرية ، مثل دور miRNA المحدد في تطور السرطان. تشير نتائجنا إلى أن الخلايا الظهارية الثديية تعبر عن مستويات أعلى بكثير من miR-489 من الخلايا السرطانية المجاورة.

المقدمة

سرطان الثدي هو من بين الأورام الخبيثة الأكثر شيوعا التي تؤثر على السكان الإناث في جميع أنحاء العالم. وذكرت أكثر من 1.3 مليون حالة إصابة بسرطان الثدي كل عام في جميع أنحاء العالم ^1،2. على الرغم من أن الخلايا السرطانية قد تعتبر تقليديا متجانسة من الناحية البيولوجية والتكاثري للغاية، أصبح من الواضح أن سرطان الثدي هو جينيا وغير متجانسة سريريا. مقاومة للعقاقير المضادة للسرطان انتشارا هي السمة المميزة لسرطان الثدي المتقدمة، مما أدى إلى وفيات في الغالبية العظمى من المرضى من خلال تسهيله من تطور السرطان وبعد ورم خبيث ^3.

الرنا الميكروية (miRNAs) هي ....

البروتوكول

وافقت هذه الدراسة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية للمستشفى شونام الجامعة الوطنية هواسون وجامعة ولاية كارولينا الجنوبية. وقدمت عينات TMA تتألف من سرطان الثدي ومطابقة الأنسجة الطبيعية للثدي المجاورة من قبل البنك الحيوي من مستشفى شونام الجامعة الوطنية هواسون، وهو عضو في شبكة البنك الحيوي كوريا.

1. الحل تحضير

1. إعداد 1 لتر من الدناز وريبونوكلياز المياه مجانا. جعل جميع الحلول الكيماوية التي تستخدم diethylpyrocarbonate (DEPC) المياه المعالجة. علاج 1 لتر من الماء مع 500 ميكرولتر من....

النتائج

تم استخدام أنسجة الأورام السرطانية الثديية البشرية لتحديد التعبير ميرنا-489. تم العثور على الثديية قناة الغدة والخلايا الظهارية للتعبير عن أعلى بكثير ميرنا-489 مستويات من الأنسجة المجاورة ورم في اثنين من المرضى (الشكل 1A و 1B). يدل هذا بوضوح أن ميرنا-489 التعبير قد ضاع في أنسجة الورم، مما يشير إلى ورم النشاط القمعية من ميرنا-489. لمزيد من تأكيد هذه النتائج، نسيج الورم والأنسجة الطبيعية المجاورة من نفس المريض وتمت م.......

المناقشة

وكان الهدف من هذه الدراسة هو تحديد مستوى التعبير ميرنا في أنسجة سرطان الثدي باستخدام ميرنا في الموقع التهجين. وتجدر الإشارة إلى أنه في هذه التجربة، وتحسين كل الظروف لأنسجة سرطان الثدي. قد تكون هناك حاجة مزيد من التحسين لأنواع الأنسجة الأخرى. ويجب بذل كل الحلول مع الماء DEPC ويجب أن تشطف بالماء DEPC المعالجة وتعقيمها بعد كل حاويات لاستخدامها. تلوث ريبونوكلياز طفيف حتى يمكن أن تتداخل مع النتيجة النهائية للتجربة. كما ميرنا هي سلسلة قصيرة جدا، فمن الضروري استخدام مسبار LNA لت.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
ELF-97	تكنولوجيا الحياة	E6604
50x Denhard't	تكنولوجيا الحياة	750018
t-RNA	Roche	109541	إعادة التكوين في مياه
DEPC الرنجة المنوية الحمض النووي	Promega & nbsp ؛	D1815
Roche Blocking	روش	11096176001
RVC	Fisher	50-812-650	قبل الاستخدام قم بتدويرها عند 16.1 RCF وخذ طافي   ؛
مسبار miR-489	Exiqon	38599-01
Nuclease free BSA	Roche	711454
الأجسام المضادة الأولية المضادة DIG	Roche	11093274910
ثنائي إيثيل بيروكربونات	سيجما	1609478