Method Article

متعدد الألوان كشف الإسفار عن القطرة على microfluidics عن طريق الألياف البصرية

DOI:

10.3791/54010

⸱

May 5th, 2016

 ,  , 
1Department of Pharmaceutical Chemistry, University of California, San Francisco, 2Department of Bioengineering and Therapeutic Sciences, California Institute for Quantitative Biosciences, University of California, San Francisco

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
عادة ما يتضمن الكشف عن التألق متعدد الألوان < فئة = 'jove_content '> متعدد الألوان في الموائع الدقيقة للقطرات أنظمة الكشف الضخمة والمعقدة القائمة على المجهر الفائي فلوري. نصف هنا مخطط كشف متعدد الألوان مضغوط ومعياري يستخدم مجموعة من الألياف الضوئية لتشفير البيانات متعددة الألوان التي تم جمعها مؤقتا بواسطة كاشف ضوئي واحد.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فحوصات التألق هي أكثر القراءات شيوعا المستخدمة في الموائع الدقيقة بالقطرات نظرا لإشاراتها الساطعة واستجابتها السريعة للوقت. تتطلب تطبيقات مثل فحوصات تعدد الإرسال وتطور الإنزيم وفرز الخلايا المعزز بالبيولوجيا الجزيئية الكشف عن لونين أو أكثر من الألوان الفلورية. أنظمة الكشف القياسية متعددة الألوان التي تربط ليزر الفضاء الحر بالمجاهر الفائقة الفلورية ضخمة ومكلفة ويصعب صيانتها. في هذه الورقة ، نصف مخططا لإجراء الكشف عن الألوان المتعددة من خلال مناطق منفصلة مثيرة لقناة موائع دقيقة مع ليزر مقترن بالألياف الضوئية. يتم جمع الضوء المنبعث بواسطة ألياف ضوئية مقترنة بكاشف ضوئي واحد. نظرا لأن الإثارة تحدث في مواقع مكانية مختلفة ، يمكن ترميز هوية الضوء المنبعث كتحول زمني ، مما يلغي الحاجة إلى مخططات تصفية الضوء الأكثر تعقيدا. تم استخدام النظام للكشف عن مجموعات القطرات التي تحتوي على أربع مجموعات فريدة من الأصباغ وللكشف عن تركيزات الفلورسينات دون النانوية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

توفر على microfluidics الحبرية منبرا للعلم الأحياء إنتاجية عالية من compartmentalizing التجارب في عدد كبير من قطرات مائية معلقة في الناقل للنفط 1. وقد استخدمت قطرات لتطبيقات متنوعة مثل تحليل خلية واحدة 2، البلمرة الرقمي سلسلة من ردود الفعل (PCR) 3، وانزيم تطور 4. المقايسات الفلورسنت هي الوضع العادي من الكشف عن على microfluidics الحبرية، وإشاراتها مشرقة وزمن الاستجابة سريعة متوافقة مع اكتشاف كميات قطرات نانولتر الفرعي في معدلات كيلوهيرتز. تتطلب العديد من التطبيقات الكشف عن مضان لمدة سنتين على الأقل الألوان في وقت واحد. على سبيل المثال، لدينا مختبر يؤدي عادة PCR تنشيط قطرة فرز التجارب التي تستخدم القناة كشف واحد لنتيجة لفحص، ويستخدم صبغة خلفية الثانوي لجعل-فحص سلبي قطرة قابل للعد 5.

محطات الكشف نموذجية لعلى microfluidics الحبرية هي باالحوار الاقتصادي الاستراتيجي على المجاهر epifluorescence، وتتطلب معقدة مخططات التلاعب الخفيفة لإدخال ضوء الإثارة من الليزر مساحة حرة داخل المجهر لأن تركز على العينة. بعد خروجه مضان من قطرات، يتم تصفية ضوء fluoresced المنبعثة بحيث تستخدم كل قناة الكشف عن أنبوب مضخم واحد (PMT) تركزت على نطاق الطول الموجي. توفر أنظمة الكشف البصري Epifluorescence أساس المجهر عائقا أمام دخول السوق بسبب نفقتهم والتعقيد، وتتطلب صيانة. توفر الألياف البصرية وسيلة لبناء نظام كشف مبسط وقوية، منذ الألياف يمكن إدراجها يدويا في أجهزة ميكروفلويديك، وإزالة الحاجة لالقائم على مرآة ضوء التوجيه، والسماح للمسارات الضوء على أن ربطه باستخدام موصلات الألياف البصرية.

في هذه الورقة، ونحن تصف الجمعية والمصادقة على مخطط صغير وحدات لأداء كشف مضان متعدد الألوان من خلال الاستفادة من مجموعة من الألياف البصرية لدا مكشاف ضوئي واحد (6). تقترن الألياف البصرية ليزر الفردية وإدراج طبيعية لقناة تدفق شكل حرف L في إزاحة المكانية العادية. وتوجه والألياف جمع مضان موازية للمناطق الإثارة ويرتبط إلى PMT واحد. لأن قطرات يمر عبر أشعة الليزر في أوقات مختلفة، والبيانات التي سجلتها PMT يظهر الزمنية تعويض التي تسمح للمستخدم للتمييز بين مضان المنبعثة بعد هو متحمس الحبرية كل شعاع الليزر واضح. هذا التحول الزمني يلغي الحاجة لفصل الضوء المنبعث من هذه الفرق منفصلة باستخدام سلسلة من المرايا مزدوج اللون والمرشحات ممر الموجة. للتحقق من صحة فعالية للكشف، ونحن quantitate مضان في السكان قطرة التغليف الأصباغ من لون مختلف والتركيز. تم دراسة حساسية نظام واحد كشف اللون فلوريسئين، ويظهر القدرة على الكشف عن قطرات مع تركيزات الى 0.1 نانومتر، حساسية الظهور 200Xovement بالمقارنة مع النهج الألياف مقرها الأخيرة التي أعلن عنها في الأدب 7.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. SU8 تصنيع ماستر

  1. تصميم الهياكل الموائع الدقيقة لمدة ثلاثة طبقة تلفيق باستخدام برامج التصميم ولها التصميمات المطبوعة من قبل بائع على الفيلم لوحة الدوائر مع 10 ميكرون القرار. وترد تفاصيل تصميم الجهاز في إشارة تعلق 6 وترد في هندستها القناة في الشكل 1. وينبغي أن تشمل طبقات علامات المحاذاة للمساعدة في رصف الميزات من كل طبقة تلفيق 8.
  2. وضع 3 بوصة قطرها رقاقة السيليكون تنظيفها مسبقا على المغطي تدور وتشغيل فراغ ليضعوا لها تشوك. تطبيق 1 مل من SU8-3050 في وسط رقاقة وتدور لمدة 20 ثانية في 500 دورة في الدقيقة، ثم 30 ثانية في 1750 دورة في الدقيقة، وتوفير سماكة طبقة من 80 ميكرون.
  3. إزالة الرقاقة وتخبز على 135 درجة مئوية موقد لمدة 30 دقيقة. تسمح الرقاقة لتبريد لRT قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.
  4. فضح الرقاقة المغلفة للشارع قناع طبقة 1 تحت موازى 190 مترW، 365 نانومتر الصمام لمدة 3 دقائق. بعد التعرض، ووضع رقاقة على 135 درجة مئوية موقد لمدة 1 دقيقة، ثم بارد لRT قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.
  5. وضع رقاقة على المغطي تدور وتشغيل فراغ ليضعوا لها تشوك. تطبيق 1 مل من SU8-3050 في وسط رقاقة وتدور لمدة 20 ثانية في 500 دورة في الدقيقة، ثم 30 ثانية في 5000 دورة في الدقيقة، مما أدى إلى الطبقة التي توفر سمك إضافي من 40 ميكرون.
  6. إزالة الرقاقة وتخبز على 135 درجة مئوية موقد لمدة 30 دقيقة، ثم بارد لRT قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.
  7. محاذاة قناع طبقة الثانية 2 على هندسة نمط 1.3 وفضح الرقاقة المغلفة لموازى 190 ميغاواط، 365 نانومتر الصمام لمدة 3 دقائق. بعد التعرض، ووضع على 135 درجة مئوية موقد لمدة 4 دقائق و 30 ثانية، ثم بارد لRT قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.
  8. وضع رقاقة على المغطي تدور وتشغيل فراغ ليضعوا لها تشوك. تطبيق 1 مل من SU8-3050 في وسط رقاقة وتدور لمدة 20 ثانية في 500 دورة في الدقيقة، ثم 30ثانية في 1000 دورة في الدقيقة، مما أدى إلى الطبقة التي توفر سمك إضافي من 100 ميكرون.
  9. إزالة الرقاقة وتخبز على 135 درجة مئوية موقد لمدة 30 دقيقة، ثم بارد لRT قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.
  10. محاذاة قناع طبقة 3 الثالثة على هندسة نمط 1.3 وفضح الرقاقة المغلفة لموازى 190 ميغاواط، 365 نانومتر الصمام لمدة 3 دقائق. بعد التعرض، ووضع على 135 درجة مئوية موقد لمدة 9 دقائق، ثم تبرد لRT قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.
  11. تطوير الأقنعة عن طريق غمر في حمام أثار من البروبيلين غليكول monomethyl الأثير خلات لمدة 30 دقيقة. غسل الرقاقة في الأيسوبروبانول وتخبز على 135 درجة مئوية موقد لمدة 1 دقيقة. وضع سيد وضعت في صحن 100 ملم بيتري لثنائي ميثيل بولي سيلوكسان (PDMS) صب.

2. PDMS تصنيع الأجهزة

  1. إعداد 10: 1 PDMS من خلال الجمع بين 50 غراما من قاعدة السيليكون مع 5 غرام من وكيل علاج في كوب من البلاستيك. خلط المحتويات مع أداة دوارة مزودة عصا ضجة. درجةكما الخليط داخل المجفف لمدة 30 دقيقة، أو حتى يتم إزالة جميع فقاعات الهواء.
  2. صب PDMS لإعطاء سماكة 3 ملم على الماجستير والمكان مرة أخرى في مجفف لمزيد من التفريغ. حالما تتم إزالة جميع فقاعات، خبز الجهاز على 80 درجة مئوية لمدة 80 دقيقة.
  3. قطع الجهاز من العفن باستخدام مشرط ومكان على سطح نظيف مع الجانب منقوشة صعودا ولكمة مداخل ومنافذ الموائعية مع خزعة لكمة 0.75 مم. يجب أن تقطع الجهاز بحيث 120 ميكرون و 220 ميكرون هندستها طويل القامة يمكن الوصول إليها من جانب الجهاز.
  4. البلازما علاج الجهاز، مع الجانب ميزة تصل، جنبا إلى جنب مع ما قبل تنظيفها 2 بوصة بنسبة 3 بوصة شريحة زجاجية في 1 مللي بار O 2 البلازما لمدة 20 ثانية في نظافة البلازما 300 واط. السندات الجهاز PDMS عن طريق وضع الجانب منقوشة من الجهاز PDMS على الجانب المعالجة البلازما من شريحة زجاجية. وضع الجهاز في C الفرن 80 درجة وتخبز الجهاز تجميعها لمدة 40 دقيقة.
  5. جعل قنواتمسعور باستخدام حقنة لمسح الجهاز مع المفلورة سائل المعالجة السطحية. على الفور خبز الجهاز على 80 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة لتتبخر المذيب.

3. إعداد مكونات البصرية

  1. تحضير الألياف الإثارة ليزر عن طريق إزالة العزل من 5 ملم الأخير من 105 ميكرون الأساسية، 125 ميكرون الكسوة، NA = 0.22 الألياف البصرية.
  2. إعداد 2 الثانية ليزر ملونة الألياف الإثارة بتكرار 3.1 لألياف متطابقة 2 الثانية.
  3. تحضير الألياف لجمع إشارة مضان بتكرار 3.1 ل200 ميكرون الأساسية، 225 ميكرون الكسوة، NA = 0.39 الألياف البصرية.
  4. تفقد النصائح من كل ألياف - إذا النصائح لا تنتهي في سطح مستو، وإعادة يلتصق-نهايات مع الكاتب الألياف.
  5. إرفاق مقرنة الألياف الليزر إلى 50 ميغاواط، 405 نانومتر ليزر ونعلق واحدة من 105 ميكرون الألياف الأساسية لليزر. توجيه نهاية جردت على استشعار قوة الليزرمتر، واستخدام التعديلات غرامة مقرنة الليزر لتحقيق أقصى قدر من قوة الليزر.
  6. كرر 3.5 لنانومتر الليزر 50 ميغاواط، 473.
  7. شن 446/510/581/703 نانومتر مرشحات ممر الموجة رباعية على PMT باستخدام أنابيب عدسة لمنع ضوء الليزر ونقل مضان المنبعثة. إرفاق مقرنة الألياف بحيث ينتقل هذا الضوء من خلال مرشحات قبل أن تصل إلى PMT.
  8. إرفاق الألياف من 3.3 إلى وحدة مجمعة في 3.7.

4. الجيل مستحلب مختلط غير متصل

  1. الحصول على التركيز تدفق الجهاز على microfluidics dropmaker مع 60 ميكرون × 60 ميكرون فتحة.
  2. ملء حقنة 1 مل مع HFE 7500 الزيوت مع 2٪ الفلورية الأيونية 9.
  3. ملء سلسلة من 1 مل المحاقن مع المجموعات التالية من فلوريسئين (FITC) وديكستران مترافق الأصباغ الزرقاء (CB) في برنامج تلفزيوني: 1 نانومتر FITC / 10 نانومتر CB، 10 نانومتر FITC / 10 نانومتر CB، 1 نانومتر FITC / 100 نانومتر CB، و 10 نانومتر FITC / 100 نانومتر CB.
  4. تركيب جهاز dropmaker على مرحلة من مراحل ميكرو مقلوبمواجهة ومائي والنفط الحقن على مضخات الحقنة. زوجان المحاقن إلى الأجهزة التي تستخدم PE-2 الأنابيب.
  5. تشغيل مضخات حقنة في 500 ميكرولتر / ساعة للنفط و 250 ميكرولتر / ساعة لالمحاليل المائية، وخلق مزيج من 80 ميكرون قطرات تحتوي على حلول من 4.3. لكل نوع من عينة المائية، واستخدام جهاز dropmaker جديدة للقضاء على انتقال التلوث. جمع ~ 200 ميكرولتر من مستحلب من كل مزيج صبغة في حقنة فارغة.
  6. بعد أن تم جمع قطرات أنواع 4 في حقنة مجموعة واحدة، ومزيج مستحلب من قبل مرارا وتكرارا الدورية للحقنة.
  7. كرر الخطوات من 4،2-4،6 مع المحاليل المائية التي تحتوي على 0.1، 1، 10، و 100 نانومتر FITC في برنامج تلفزيوني.

5. الألياف البصرية الإدراج

  1. وضع رقاقة ميكروفلويديك ملفقة في الخطوة 2 على مرحلة مجهر مقلوب إلى جانب وجود كاميرا رقمية قادرة على <100 μsec سرعات مصراع.
  2. العمل بعناية من جانب، INSERT الألياف بالإضافة إلى نانومتر ليزر 473 إلى أبعد المنبع قناة ميكرون 120، مع الحرص على عدم ثقب من خلال لقناة التدفق الرئيسية.
  3. إدراج الألياف بالإضافة إلى نانومتر ليزر 405 إلى ابعد المصب 120 قناة ميكرون الجانب عالية، وتوفير التباعد الألياف من 300 ميكرون.
  4. تضاف الألياف إلى جانب PMT-في قناة طويل القامة 220 ميكرون العادية لاثنين من الألياف الإثارة الليزر.

6. كشف الإسفار من المستحلبات المختلطة

  1. جبل حقنة 5 مل مملوءة HFE 7500 مع 2٪ الفلورية الأيونية إلى مدخل النفط فاصل من جهاز الكشف مع PE-2 الأنابيب.
  2. جبل حقنة تحتوي على المختلط FITC / CB مستحلب على ضخ حقنة موجه عموديا والزوجان إلى مدخل قطرة إعادة حقن الجهاز باستخدام PE-2 الأنابيب. توصيل طول أنابيب PE-2 من مخرج الجهاز إلى حاوية النفايات.
  3. رئيس الجهاز عن طريق تشغيل كل من المضخات في 1000 ميكرولتر / ساعة حتى على حد سواءوينظر النفط وقطرات إلى أن الجمع بين بانتظام في الجهاز والتي تتدفق المصب.
  4. ضبط معدلات التدفق بحيث النفط هل يعمل على 6000 ميكرولتر / ساعة وقطرات في 100 ميكرولتر / ساعة، وتوفير تباعد كبير بين قطرات السفر من خلال المنطقة الكشف.
  5. بدوره على الليزر، بدء تشغيل البرنامج الحصول على البيانات، وضبط الربح PMT في تقديم إشارات التي هي أكثر من 100X الطابق ضجيج خط الأساس. ضبط قوة الليزر حتى يتسنى لجميع من قمم صدرة تكون مرئية بشكل واضح على واحدة، timetrace تحجيم خطيا.
  6. الحصول على 60 ثانية من timetrace PMT الجهد في لا يقل عن 20 كيلو هرتز. استيراد البيانات إلى برنامج الحوسبة مثل ماتلاب وقياس ارتفاعات قمم الحلل سجلت باستخدام البرنامج النصي برنامج الحوسبة حسب الطلب.
    ملاحظة: يتم توفير هذه كمعلومات إضافية.
  7. كرر الخطوات من 6،2-6،7 باستخدام FITC فقط مستحلب مختلطة تم إنشاؤها في 4.7، مع نانومتر ليزر 405 إيقاف.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصنيع جهاز PDMS التي تسمح لإدخال الألياف البصرية يتطلب إجراء ضوئيه متعددة الخطوات لإنشاء قنوات متفاوتة الارتفاع (الشكل 1). أولا، يتم نسج 80 ميكرون طبقة طويل القامة من SU-8 على رقاقة السيليكون ومنقوشة باستخدام قناع لخلق التعامل مع هندسة السوائل. المقبل، ونسج على 40 ميكرون طبقة إضافية من SU-8 على الرقاقة، ومنقوشة باستخدام قناع الثاني لخلق الميزات التي ستشكل 120 ميكرون ليزر طويل القامة قنوات الألياف الإدراج. وأخيرا، ونسج 100 ميكرون أك...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كشف الألياف البصرية يتطلب محاذاة الألياف البصرية فيما يتعلق قنوات السوائل. لأن لدينا جهاز يستخدم القنوات دليل ملفقة مع ضوئيه متعدد الطبقات، وضع أقنعة مع الاحترام لبعضهما البعض هو من أهمية كبيرة. إذا كانت القنوات دليل الألياف هي قريبة جدا من قناة السوائل، وهناك احتمال لتسرب السوائل؛ إذا توجد قنوات دليل بعيدة جدا أو المنحرفة، إشارة مضان من الألياف كشف تجمع قد تضاءل بشكل ملحوظ. المحاذاة الصحيحة يمكن بمساعدة من تصميم علامات المحاذاة، مثل دوائر متحدة المركز إلى أقنعة لتكون متواجدا خلال...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل من خلال منحة DARPA رقم 84389.01.44908 ، وجائزة NSF CAREER (DBI-1253293) ، ومنحة البحوث الاستكشافية / التنموية من المعاهد الوطنية للصحة (CA195709) ، وجوائز المبتكر الجديد للمعاهد الوطنية للصحة (HD080351 ، DP2-AR068129-01) ، ومنحة اتجاهات جديدة من برنامج تخصيص الموارد في جامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
PhotomasksCadArt Servcies
3 "رقائق السيليكون ، نوع P ، درجة الاختبار البكررقائق الجامعة447
SU-8 3035MicrochemY311074
SU-8 2050MicrochemY111072
Sylgard 184 مجموعة مطاط أسطوانة السيليكونKrayden4019862
1 مل محاقنBD309628
10 مل محاقنBD309604
27 إبر قياسBD305109
PE 2 أنابيب البولي إيثيلينScientific Commodities، Inc.B31695-PE / 2
Novec 7500Fisher Scientific98-0212-2928-5المعروف باسم HFE 7500
التوترKrytox في المرجع # 10
زرقاء مترافقة مع ديكسترانLife TechnologiesD-1976
ملح الصوديوم الفلوريسينSigma28803
ممرالنطاق الرباعيSemrockFF01-446 / 510/581 / 703-25
PMTThorlabsPMM02
منفذ الأليافThorlabsPAFA-X-4-A
أنبوب عدسةThorlabsSM1L05
كابل التصحيح مع 200 & # 956 ؛ م كور / 225 &# 956; م الكسوة الألياف الضوئية مع طرف واحد مجرد وموصل FC / PCThorlabsCustom
Patch مع 105 &# 956 ؛ م كور / 125 &# 956; م الكسوة الألياف الضوئية مع طرف واحد مجرد وموصل FC / PCThorlabsCustom
125 &# 956 ؛ م أداة تجريد الأليافThorlabsT08S13
225 &# 956 ؛ م أداة تجريد الأليافThorlabsT10S13
محول ألياف الليزرOptoEngineFC / PC محول
405 نانومتر CW ليزر عند 50 & nbsp ؛ ميغاواطOptoEngineMDL-III-405الموزع لليزر CNI
473 نانومتر CW ليزر في 50 & nbsp ؛ ميغاواطOptoEngineMLL-FN-473-50
تعليمات تخليق السطحي الأيوني صبغة مرشح واحد كابل واحد

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Teh, S. Y., Lin, R., Hung, L. H., Lee, A. P. Droplet microfluidics. Lab Chip. 8, 198-220 (2008).
  2. Mazutis, L., Gilbert, J., Ung, W. L., Weitz, D. A., Griffiths, A. D., Heyman, J. A. Single-cell analysis and sorting using droplet-based microfluidics. Nat Protocol. 8 (5), 870-891 (2013).
  3. Hindson, B. J., Ness, K. D. High-throughput droplet digital PCR system for absolute quantitation of DNA copy number. Anal Chem. 83, 8604-8610 (2011).
  4. Agresti, J. J., Antipov, E. Ultrahigh-throughput screening in drop-based microfluidics for directed evolution. Proc Nat Acad Sci USA. 107 (14), 4004(2010).
  5. Eastburn, D. J., Sciambi, A., Abate, A. R. Picoinjection Enables Digital Detection of RNA with Droplet RT-PCR. PLOS ONE. 8 (4), (2013).
  6. Cole, R. H., de Lange, N., Gartner, Z. J., Abate, A. R. Compact and modular multicolour fluorescence detector for droplet microfluidics. Lab Chip. 15 (13), 2754-2758 (2015).
  7. Guo, F., Lapsley, M. I. A droplet-based, optofluidic device for high-throughput, quantitative bioanalysis. Anal Chem. 84, 10745-10749 (2012).
  8. Lithography. , Available from: https://www.memsnet.org/mems/processes/lithography.html (2015).
  9. DeJournette, C. J., Kim, J., Medlen, H., Li, X., Vincent, L. J., Easley, C. J. Creating Biocompatible Oil-Water Interfaces without Synthesis: Direct Interactions between Primary Amines and Carboxylated Perfluorocarbon Surfactants. Anal Chem. 85 (21), (2013).
  10. Fallah-Araghi, A., Baret, J. C., Ryckelynck, M., Griffiths, A. D. A completely in vitro ultrahigh-throughput droplet-based microfluidic screening system for protein engineering and directed evolution. Lab Chip. 12, 882(2012).
  11. Eastburn, D. J., Sciambi, A., Abate, A. R. Ultrahigh-Throughput Mammalian Single-Cell Reverse-Transcriptase Polymerase Chain Reaction in Microfluidic Drops. Anal Chem. 85 (16), 8016-8021 (2013).
  12. Martini, J., Recht, M. I., Huck, M., Bern, M. W., Johnson, N. M., Kiesel, P. Time encoded multicolor fluorescence detection in a microfluidic flow cytometer. Lab Chip. 12 (23), 5057-5062 (2012).
  13. Bliss, C. L., McMullin, J. N., Backhouse, C. J. Rapid fabrication of a microfluidic device with integrated optical waveguides for DNA fragment analysis. Lab Chip. 7 (10), 1280-1287 (2007).
  14. Martinez Vazquez, R., Osellame, R. Optical sensing in microfluidic lab-on-a-chip by femtosecond-laser-written waveguides. Anal Bioanal Chem. 393, 1209-1216 (2009).
  15. Vishnubhatla, K. C., Bellini, N., Ramponi, R., Cerullo, G., Osellame, R. Shape control of microchannels fabricated in fused silica by femtosecond laser irradiation and chemical etching. Opt Express. 17 (10), 8685-8695 (2009).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Droplet MicrofluidicsFluorescence DetectionOptical FibersMulticolor DetectionLaser ExcitationPhotodetector SystemMicrofluidic ChipFiber CouplingFluorescein DetectionHydrophobic Channels

Related Articles