Method Article

الجلدي إزالة التعصيب الجراحي: هناك طريقة لاختبار شرط لالأعصاب في نماذج الماوس من الأمراض الجلدية

DOI:

10.3791/54050

⸱

June 26th, 2016

 ,  , 
1Dermatology, Cell and Developmental Biology, University of Michigan, 2Dermatology Branch, National Cancer Institute, National Institutes of Health

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تتضمن هذه المقالة بروتوكولات مفصلة للوسم الجيني لجلد الفأر ، وإزالة التعصيب الجراحي ، وخزعة الجلد ، وتصور الظهارة المصنفة عن طريق تلطيخ β-galactosidase بالكامل. يمكن استخدام هذه الطرق لاختبار متطلبات الأعصاب في نماذج الفئران ذات الجلد الطبيعي والمرضي.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعمل الأعصاب الحسية الجسدية الجلدية على اكتشاف المحفزات المتنوعة التي تعمل على الجلد. بالإضافة إلى أدوارها الحسية الراسخة ، أشارت الدراسات الحديثة إلى أن الأعصاب قد تعدل أيضا اضطرابات الجلد بما في ذلك التهاب الجلد التأتبي والصدفية والسرطان. هنا ، نصف بروتوكولات اختبار متطلبات الأعصاب في الحفاظ على العضو الحسي الميكانيكي الجلدي ، قبة اللمس (TD). على وجه التحديد ، نناقش طرق وضع العلامات الوراثية والحصاد وتصور TDs عن طريق تلطيخ التثبيت بالكامل ، ولإجراء إزالة التعصيب الجراحي من جانب واحد على جلد ظهر الفأر الظهري. معا ، يمكن استخدام هذه الأساليب لمقارنة مورفولوجيا TD والتعبير الجيني مباشرة في الجلد منزوع التعصيب وكذلك الجلد الذي يتم تشغيله بواسطة الزيمة من نفس. يمكن أيضا تكييف هذه الطرق بسهولة لفحص متطلبات الأعصاب في نماذج الفئران لأمراض الجلد. أخيرا ، توفر القدرة على أخذ عينات من الجلد بشكل متكرر فرصة لمراقبة تطور المرض في مراحل وأوقات مختلفة بعد البدء.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

على مدى السنوات القليلة الماضية ، كان هناك تقدير متزايد لتأثير الأعصاب على الأمراض التي لا ينظر إليها عادة على أنها اعتلالات عصبيةكلاسيكية 1-4. في الجلد ، أشارت الأدلة التجريبية الحديثة إلى أن الأعصاب الحسية يمكن أن تعدل أمراض متنوعة تتراوح من الصدفية إلى السرطان5-9. وقد ثبت ذلك باستخدام تقنيات مثل إزالة التعصيب الجراحية والتثبيط الدوائي للوظيفة العصبية في القوارض. في حالة الصدفية ، قدمت هذه الدراسات إطارا ميكانيكيا لفهم سبب تراجع لويحات الصدفية البشرية بعد فقدان الوظيفة العصبية7،10-12.

يمكن أن تؤثر الأعصاب الجلدية أيضا على التعبير الجيني13،14 وهي ضرورية للاستشعار الميكانيكي في الجلدالط....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ جميع الإجراءات الموضحة في هذا البروتوكول وفقا للوائح التي تضعها جامعة ميشيغان وحدة لمختبر الطب الحيواني.

1. الحث على إعادة التركيب الجيني في الفئران

ملاحظة: Gli1 TM3 (لجنة المساواة العرقية / ERT2) العلج / J الماوس سلالة (Gli1-CreERT2) 13 تمكن تستهدف إعادة التركيب الجيني تاموكسيفين التي يسببها لTD ظهائر. عبور هذه السلالة مع B6.129S4-GT (ROSA) 26Sor tm1Sor / J الفئران مراسل (LacZ) 22 لتوليد Gli1، الحيوانات....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عن طريق توليد الفئران معربا-تاموكسيفين محرض Gli1-CreERT2 وأليل مراسل LacZ، فمن الممكن تصور TD ظهائر وتتبع مصائر هذه الخلايا مع مرور الوقت. وعادة ما يمكن أن تكتمل إجراءات إزالة التعصيب كامل حدود 1 ساعة في الماوس، وينبغي أن يسبب الحد الأدنى من الضيق للحيوان.

وأشارت دراساتنا السابقة أن الأعصاب أساسية للمحافظة على كل من المواد الصلبة .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأعصاب تخدم وظائف حاسمة ليس فقط في الإحساس، ولكن أيضا في تطوير الجهاز الثدييات، وصيانة وتجديد 13،24-27. كما تم مؤخرا تورط الأعصاب في الأمراض الجلدية المختلفة، والأساليب المذكورة هنا يمكن أن تستخدم لدراسة متطلبات تعصيب في مجموعة متنوعة من نماذج الأمراض الحيوانية. وفي الواقع، فإن تقنية إزالة التعصيب من جانب واحد يسمح للمقارنة مباشرة من الجلد مع أي أعصاب سليمة أو تعطلت من نفس الماوس. وهذا يوفر الرقابة الداخلية المثالية للتعويض عن الاختلافات الحيوان إلى الحيوان، مع تحليل ا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يود المؤلفون أن يشكروا الخريف بيترسون على المساعدة في تصوير الفئران ، ودانيال ثورسن للمساعدة في الفئران ، والدكتورين نيكول وارد وعبد المجيد بلقاضي للمساعدة في إزالة التعصيب الجراحي. تم دعم هذه الدراسات بتمويل من المعهد الوطني لالتهاب المفاصل وأمراض العضلات والعظام والجلد (منح R00AR059796 و R01AR065409). قسم الأمراض الجلدية بجامعة ميشيغان. برنامج علماء العلوم البيولوجية. مركز تكوين الأعضاء. مركز السرطان الشامل بجامعة ميشيغان. وصندوق جون إس وسوزان سي مون للسرطان. تم دعم SCP بتمويل من المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة (منحة T32 GM007315). تم دعم هذا العمل أيضا من قبل برنامج البحوث الداخلية التابع للمعاهد الوطنية للصحة ، ومركز أبحاث السرطان ، والمعهد الوطني للسرطان.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
ضمادات تحضير الكحولPDIB339
AnaSed (Xylazine)LloydNADA 139-236
الجسم المضاد ، المضاد للكيراتين 8دراسات تنموية بنك الورم الهجينTROMA-Iالجسم المضاد للفئران ، استخدم بتركيز 1: 500
الجسم المضاد ، المضاد للكيراتين 17إشارة الخلية# 4543الجسم المضاد للأرانب ، استخدم بتركيز 1: 1،000
الجسم المضاد ، المضادة للخيوط العصبيةإشاراتC28E10أجسام مضادة للأرانب ، استخدم بتركيز 1: 500
وسادات إعداد البيتادينميدلاينMDS093917
كاربروفين (ريماديل)Zoetis
ماكينة تشذيب لاسلكية قابلة لإعادة الشحنWahlموديل 8900
زيت الذرةSigma-AldrichC8267
CryostatLeicaCM1860
DAPIThermoFisher ScientificD1306يستخدم بتركيز 1: 1،000
DeoxycholateSigma-AldrichD6750
كريم مزيل الشعرNairN / A
ثنائي ميثيل فوراميدسيجما ألدريتش319937
ميثيل سلفوكسيد (DMSO)سيجما ألدريتشD8418
جلوتارالديهايدسيجما ألدريتشG5882
مختبرات ناقلاتالقلم ImmEdgeH-4000
الكيتامين هيدروكلوريكHospiraNDC 0409-2051-05
كلوريد المغنيسيومSigmaM8266
زجاج الغطاء الصغيرVWR48404-454
الشرائح الدقيقةVWR48311-703
10٪ خيوط نايلون فورمالين مخزنةمحايدة BDH0502-4LP
6-0 خيوط نايلونDemeTECHNL166012F4P
أوكتيل فينيل بولي إيثيلين جلايكولسيجما ألدريتشI8896
OCT مركبساكورا الأنسجة - تيك4583
بارافورمالديهايدسيجما ألدريتش158127
بوتاسيوم فيروسيانيدسيجما ألدريتشP9387
بوتاسيوم فيريسيانيدسيجما ألدريتش702587
فوسفات الصوديوم أحادي القاعدةسيجما ألدريتشP9791
فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدةسيجما ألدريتشS5136
السكروزسيجما ألدريتش84097
تاموكسيفينسيجما ألدريتشT5648-1G
ملقط فائق الدقةDumont0103-5-PO
VectashieldVector LaboratoriesH1000
X-galRoche10 651 745 001يذوب في ثنائي ميثيل فوراميد لإنشاء مخزون 50x قبل الاستخدام
الخلية ثنائي

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Magnon, C., et al. Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression. Science. 341, 1236361(2013).
  2. Zhao, C. M., et al. Denervation suppresses gastric tumorigenesis. Sci Transl Med. 6, 115(2014).
  3. Chiu, I. M., von Hehn, C. A., Woo....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cutaneous Surgical DenervationMouse Skin DiseaseTouch Dome MorphologyDorsal Cutaneous NerveWhole Mount StainingGenetic LabelingSham Operated ControlHistological Section AnalysisHedgehog SignalingMerkel Cells

Related Articles