التساهمية ملزم من الأجسام المضادة لالسليلوز أقراص الورق وتطبيقاتها في العين المجردة اللونية يمونواسايس

الدراسة التشخيصية نقطة الرعاية السريرية (POCT) مهمة لتطوير استراتيجيات جديدة لعلاجات وأدوية شخصية، والرعاية المنزلية ^1. وتستخدم أوراق السيلولوز على نطاق واسع منصات في المناعية، لأنها رخيصة، يمكن الوصول إليها، ومألوفة للمستخدمين ^2. وبالإضافة إلى ذلك، فإن بنية مسامية من الورق السليلوز يملك القدرة على دفع تدفق السائل دون تأثير طاقة إضافية. سجلات التحاليل الطبية الورقية يمكن العثور في وقت مبكر من القرن ^ال 20، عندما اخترع اللوني ورقة لأول مرة في عام 1952. والمثال الأكثر انتشارا هو الاختبارات المناعي ^3، مثل الحمل واختبار السكري شرائط. توفر هذه الاختبارات مرات فحص سريع نسبيا وتحليل غير مكلفة ^4. نظرا لبساطتها، وقد استخدمت على نطاق واسع هذه الاختبارات قطاع الورقية التقليدية في التشخيص POCT ^5.

طرق الكشف بما في ذلك اللونية ^6، الكهربائيةوقد تم الإبلاغ عن مادة كيميائية ^7، وelectrochemiluminescence ⁸ طرق لقياس أهداف في العينات البيولوجية. وبالإضافة إلى هذه الأساليب الكمية، وهي طريقة يمكن الاعتماد عليها لشل حركة الأجسام المضادة على ورق السيلولوز مهم لتطوير أجهزة التشخيص أيضا. الامتزاز غير محددة هو الاستراتيجية الرئيسية لتعديل الأجسام المضادة على سطح الأجهزة الورقية ^{9 و 10} لضمان قدرة ملزمة القصوى لأهدافها بعد الشلل. ومع ذلك، فإن دراسة سابقة أظهرت أن الأجسام المضادة التي كثف على ورق السيلولوز يمكن يلتفظ من الألياف ¹¹ بنسبة 40٪. وهكذا، والامتزاز المباشر من الأجسام المضادة على السليلوز قد لا توفر نتائج استنساخه ^12. التساهمية تجميد الأجسام المضادة التي يتم زرعها على أسطح الورقة هو طريقة بديلة لتطوير اختبارات بيولوجية الورقية فعالة ^13. وقد تم الإبلاغ عن أساليب مختلفة لتعديل السليلوز ^{14، 15} 12. Carbonyldiimidazole جنبا إلى جنب مع 1-cyano-4-dimethylaminopyridinium رباعي فلوروبورات ^16؛ 1-الفلورية-2-نيترو-4-azidobenzene من خلال القائمة على الأشعة فوق البنفسجية استراتيجية تفعيل ^{17، 18؛} استراتيجية chemoenzymatic على أساس ¹⁹ تعديل xyloglucan. على 1،4-phenylenediisothiocyanate عامل ربط ^20؛ عديد السكاريدات المتغاير الأكسدة ²¹ نقرة الكيمياء ^22؛ والبروفيرين الموجبة ²³ استخدمت لشل حركة تساهمي الجزيئات الحيوية على ورق السيلولوز. وقد استخدم الشيتوزان رقة معدلة لتطوير immunodevices الورقية ^24-26 لأنها وفيرة وحيويا ^27. الشيتوزان هو الموجبة وتتمسك بقوة إلى السليلوز الأنيونية ^27. ويجمد الأجسام المضادة القبض على الورق من خلال طلاء الشيتوزان وغلوتارالدهيد عبر ربط. الأكسدة بريودات هي طريقة أخرى لتطعيم الكابتنأجسام مضادة لدى عودتهم على ورقة السليلوز ^28. في هذه الطريقة، يتم رصدت بريودات الصوديوم على ورقة لتحويل مجموعة 1،2-dihydroxyl (جلايكول) في السليلوز مباشرة إلى مجموعة ألدهيد. ثم يتم استخدام مجموعة ألدهيد لتشكيل روابط تساهمية بين السكريات والأجسام المضادة ^28. على الرغم من أن التصنيع هو بسيط، فمن الصعب أن يغسل تماما بريودات الصوديوم. وبريودات الصوديوم غير مغسولة يمكن أن يسبب المزيد من أكسدة الأجسام المضادة التي ثبتوا على ورقة السليلوز، مما يؤثر على النشاط والاستقرار من الأجسام المضادة N - (3-dimethylaminopropyl) - N هيدروكلوريد -ethylcarbodiimide وN تستخدم linkers عبر -hydroxysuccinimide أيضا تساهميا شل الأجسام المضادة على حامض وخلات السليلوز ألياف النانو بولي-L-اللبنيك electrospun لتطوير المقايسات القائمة على ألياف نانوية ^29.

في هذه الدراسة، تم استخدام تقنية اقتران سيلاني إلى الكسب غير المشروع المجموعات الوظيفية أمين على cellulosأقراص البريد ورقة. هذه التقنية تساعد على الإبقاء على الحجم الأصلي المسام، فتل، ومعدل الترشيح للأوراق الترشيح السليلوز، مما يتيح أقصى العمودية المناعية تدفق من خلال في. وقد استخدمت هذه التقنية سيلاني اقتران على نطاق واسع في أجهزة الاستشعار لfunctionalize السطوح الركيزة مع مجموعات أمين الثانوية، تليها مزيد من التعديل باستخدام الجزيئات الحيوية. تطعيم الفئات أمين على سطح مصفوفة يتألف رد فعل التكثيف بين الجماعات أوه من وكلاء سيلاني organofunctional ومصفوفة الركيزة ^30. تم functionalized الأقراص رقة السليلوز مع مجموعات أمين كتبها اقتران سيلاني من خلال 3-aminopropyltrimethoxysilane (APS) ^31. وأعقب ذلك الأجسام المضادة القبض على شل حركة تساهميا باستخدام طريقتين مختلفتين. تشارك الطريقة الأولى ملزم من بريودات الأجسام المضادة القبض المؤكسد إلى أمين functionalized أقراص ورق السليلوز. استخدام الطريقة الثانية غلوتارالدهيد كعامل عبر ربط إرفاق antibodi القبضوفاق لأقراص أمين ورق السيلولوز functionalized المجموعة. وأكد وجود أجسام مضادة أسر أرنب مكافحة الإنسان ثيوسيانات مفتش-فلوريسئين (FITC)، وذلك باستخدام مضان تصوير الجزيئي. تم تقييم النشاط ملزمة الأرنب مكافحة الإنسان مفتش-FITC إلى الماعز المضادة للأرنب مفتش أيضا الركيزة البيروكسيداز. تمت دراسة تأثير تركيزات مختلفة من بريودات الصوديوم، غلوتارالدهيد، والأجسام المضادة القبض عليه. تم إجراء اختبار التطبيق من الأجسام المضادة القبض يجمد بنجاح من خلال الكشف عن مفتش المصل.

1. مسمار أمين المجموعات الوظيفية على السليلوز ورقة أقراص

1. إعداد قطعة واحدة من الورق مربع مع البعد من 1 سم × 1 سم، و 100 أقراص الورق المصنوع من الصف رقم (1) ورقة السليلوز التي يبلغ قطرها 6.0 مم (ورق الترشيح متوسط ​​التدفق) باستخدام لكمة ثقب.
2. لاشتقاق -NH ₂ المجموعات على أقراص الورق، وخلط 1 مل و 10 مل وكالة الأنباء الجزائرية الأسيتون في زجاجة 50 مل في غطاء الدخان. إضافة أقراص الورق إلى الطازجة خليط APS الكاشف، واحتضان لمدة 5 ساعة مع التحريك المداري (200 دورة في الدقيقة) في درجة حرارة الغرفة ^(32).
   تحذير: التعامل مع وكالة الأنباء الجزائرية والأسيتون في غطاء الدخان.
3. صب حل الزائدة من زجاجة 50 مل في وعاء النفايات العضوية.
4. إضافة 10 مل من الاسيتون للزجاجة، وتخلط جيدا وصب تماما لإزالة أي APS غير المتفاعل وغيرها من الشوائب. كرر هذه الخطوة مرتين.
5. نشر أقراص رقة على منشفة ورقية ومكان في C فرن 110 درجة لمدة 3 ساعة. السماح للأقراص رقة لتبرد. تخزين الأقراص في أنبوب 50 مل الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة.
6. استخدام تحويل فورييه الطيفي بالأشعة تحت الحمراء (FTIR) للتحقق من تطعيم مجموعات أمين على ورقة مربع السليلوز، كما هو موضح أدناه (الشكل 3A).
   1. تشغيل الكمبيوتر وفتح أداة FTIR الطيفي.
   2. فتح البرنامج لFTIR الطيفي.
   3. انتقل إلى 'قياس → تهيئة. المستطيلات ل"BS: كي بي آر"،: سوف "مصباح الأشعة تحت الحمراء" و "الليزر" يتحول إلى اللون الأخضر عند الانتهاء من التهيئة.
   4. اختيار "بيانات" أسفل المستطيلات، واختر '٪ النفاذية'، 'هاب-Genzel'، '45'، '4.0'، و 'الحد الأدنى: 400، الحد الأقصى: 4000' ل 'الوضع القياس'، 'Apodization'، ' لا. من المسح '،' القرار '، و' المدى (سم-1).
   5. انقر على "قياس".
   6. اختر "ملف البيانات" للبيانات الخلفية. كتابةمن أهمية هذه التصريحات.
   7. انقر على "BKG" للحصول على خط الأساس للخلفية.
   8. إصلاح ورقة مربع على صاحب العينة الفيلم.
   9. اختر "ملف البيانات" للبيانات العينة. كتابة تعليق.
   10. انقر على "عينة" للحصول على الأطياف للعينة.
   11. إغلاق التطبيق الطيفي FTIR وإيقاف تشغيل الكمبيوتر.
7. كرر الخطوات المذكورة أعلاه (الخطوات 1،1-1،6) للتحضير-أمين functionalized الصف رقم 113 السليلوز ورقة مربع، وأقراص (تدفق سريع ورق الترشيح)، والحصول على أطياف FTIR لورقة مربع الصف رقم 113 (الشكل 3B).

2. التساهمية الشلل من الأجسام المضادة على functionalized أمين-السليلوز ورقة أقراص

الشكل 1. التساهمية تجميد الأجسام المضادة من قبل اثنين من أساليب مختلفة.A. الأجسام المضادة يجمد على السليلوز أقراص الورق functionalized أمين عن طريق الأكسدة بريودات. تم أكسدة مخلفات الكربوهيدرات التي كتبها بريودات الصوديوم لإنتاج المجموعات الوظيفية ألدهيد. ثم، تم تحميل الأجسام المضادة المؤكسد على السليلوز أقراص الورق functionalized أمين. ب. وثم يجمد الأجسام المضادة على أقراص ورق السيلولوز functionalized أمين من خلال غلوتارالدهيد. كانت مغمورة أمين functionalized أقراص ورق السيلولوز في 0.05٪ محلول غلوتارالدهيد لتقديم مجموعة ألدهيد إلى أقراص الورق. بعد الغسيل، وتحميل الأجسام المضادة على ألدهيد functionalized أقراص الورق. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

1. لشل حركة الأجسام المضادة على السليلوز أقراص الورق functionalized أمين عن طريق الأكسدة بريودات (الشكل 1A).
   1. مزيج 1 ميكرولتر من 2.5 ملي perioda الصوديومالشركة المصرية للاتصالات مع 2 ميكرولتر من 0.1 ملغ / مل أرنب المضادة للبشرية مفتش-FITC و 7 ميكرولتر من 100 ملي درجة الحموضة 5.5 عازلة خلات في أنبوب 1.5 مل، واحتضان الخليط في الظلام لمدة 30 دقيقة.
      ملاحظة: اتبع هذه النسبة حجم لإعداد الأجسام المضادة أكثر المؤكسد إذا لزم الأمر. تغيير نسبة حجم لتحسين تركيز بريودات الصوديوم والأرانب مكافحة الإنسان مفتش-FITC.
   2. تمييع الحل الضد أعلاه مع 30 ميكرولتر من 50 ملي الفوسفات المالحة العازلة (PBS، ودرجة الحموضة 7.4) إلى الحجم النهائي من 40 ميكرولتر.
   3. إعداد ثلاث مرشح المتوسطة تدفق أقراص الورق أمين-functionalized وثلاثة تدفق سريع أقراص الورق functionalized أمين (كما هو موضح في القسم 1).
      1. تحميل 5 ميكرولتر من بريودات الصوديوم أكسدة أرنب مكافحة الإنسان مفتش-FITC على كل أسطوانة ورق الترشيح المتوسط ​​تدفق و 8 ميكرولتر على كل أسطوانة ورقة مرشح تدفق سريع. حافظ على هذه الأقراص ورقة في الظلام لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
   4. يغسل كل من القرص ورقة مع 0.2 مل من غسل برتقاليإيه (50 ملي تريس العازلة مع 0.15 M كلوريد الصوديوم و 0.05٪ السطحي، ودرجة الحموضة 7.4). تكرار غسل ثلاث مرات.
   5. تصوير الصور مضان من خلال تصوير الجزيئي مضان لتحديد وجود أجسام مضادة في كل السليلوز ورقة القرص ^32. استخدام أقراص رقة بيضاء (تعامل مع نفس تركيز الأجسام المضادة في حالة عدم وجود بريودات الصوديوم) كعنصر تحكم (الشكل S1 إلى الشكل S3).
      ملاحظة: للحصول على تحسين التجريبية، تغيير التركيز من معلمة واحدة يحتاج إلى أن يكون الأمثل وتحديد تركيزات جميع المعلمات الأخرى. وكثافة عالية مضان يزيد من كمية من الأجسام المضادة القبض على أن يجمد على أقراص رقة السليلوز.
2. لشل حركة الأجسام المضادة على أمين أقراص ورق السيلولوز functionalized من خلال غلوتارالدهيد (الشكل 1B).
   1. إضافة ثلاثة APS تعامل المتوسطة تدفق أقراص ورق الترشيح وتدفق سريع أقراص ورق الترشيح الثلاثة (ديسcribed في القسم 1) إلى 2 مل من 50 ملي برنامج تلفزيوني (الرقم الهيدروجيني 7.4) الذي يحتوي على 0.05٪ غلوتارالدهيد لمدة 1 ساعة، مع التحريك المداري في درجة حرارة الغرفة.
      تحذير: التعامل مع غلوتارالدهيد في غطاء الدخان.
   2. وضع ثلاثة أقراص في كل من اثنين من 1.5 مل أنابيب الطرد المركزي. إضافة 1 مل من الماء (DI) منزوع الأيونات إلى كل أنبوب ويهز الأنابيب لمدة 10 ثانية. إزالة المياه من خلال الشفط مع ماصة. كرر مرتين أخريين لإزالة أي غلوتارالدهيد غير المتفاعل.
   3. تحميل 5 ميكرولتر من 25 ميكروغرام / مل أرنب مكافحة الإنسان مفتش-FITC (التقاط الأجسام المضادة) على كل المتوسطة تدفق القرص ورقة مرشح functionalized ألدهيد، وإضافة 8 ميكرولتر على كل تدفق سريع القرص ورقة مرشح functionalized ألدهيد. احتضان في الظلام لمدة حوالي 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ثم، إضافة 10 ميكرولتر من 50 ملي برنامج تلفزيوني (الرقم الهيدروجيني 7.4) إلى كل أسطوانة ورقة دون إزالة الأجسام المضادة واحتضان لمدة 40 دقيقة للتفاعل الأمينات ألدهيد.
   4. غسل أقراص الورق مع 0.2 مل من غسل العازلة على رأس منشفة ورقية. تكرارغسل مرتين.
   5. تصوير الصور مضان من خلال تصوير الجزيئي مضان للتأكد من وجود أجسام مضادة في كل السليلوز ورقة القرص ^33. استخدام أقراص رقة بيضاء كمجموعة تحكم.
      ملاحظة: في الشكل (4)، '0' لتقف على القرص الورق الفارغ الذي تعامل مع نفس التركيز من FITC الأجسام المضادة في حالة عدم وجود غلوتارالدهيد. في الشكل 5A، تم علاج الأقراص ورقة بيضاء مع غلوتارالدهيد، ولكن تم تحميل أي الأجسام المضادة FITC على أقراص الورق.
3. تجفيف أقراص الورق (من أقسام 2.1 و 2.2) عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة.
4. منع أقراص الورق مع 15 ميكرولتر من عرقلة العازلة (10٪ منزوع الدسم مسحوق الحليب في 50 العازلة ملي تريس، ودرجة الحموضة 7.4، 0.15 م كلوريد الصوديوم) لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
5. تحميل 5 ميكرولتر و 8 ميكرولتر من البيروكسيديز مترافق الماعز المضادة للأرنب مفتش في برنامج تلفزيوني (1: 10000) على متوسط ​​تدفق وتدفق سريع أقراص ورق الترشيح، على التوالي. احتضان ل30 دقيقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة.
6. غسل أقراص الورق مع 0.2 مل من غسل العازلة على رأس منشفة ورقية. تكرار غسل ثلاث مرات.
   ملاحظة: ليس من الضروري إزالة غسل العازلة كما لا تتأثر النتائج وفقا المخزن المؤقت.
7. تحميل مزيج 10 ميكرولتر من 3،3 '، 5،5'-tetramethylbenzidine (TMB) ومحلول فوق أكسيد الهيدروجين على كل أسطوانة.
8. التقاط صور للأقراص الورق مع الكاميرا الرقمية أو الهواتف الذكية بعد 5 دقائق من الحضانة.
   ملاحظة: في الشكل 5B، '0' وتقف على أقراص الورق التي كانت تعامل مع غلوتارالدهيد، تليها تحميل المترافقة في غياب FITC الضد الضد HRP (حصان الفجل البيروكسيديز).

إليسا 3. الورقية للكشف مفتش

الشكل 2. تمثيل تخطيطي للELISA الورقية FOويجمد ص مفتش الكشف. التقاط الأجسام المضادة تساهميا على أقراص رقة السليلوز functionalized ألدهيد من خلال غلوتارالدهيد. تم حظر أقراص رقة السليلوز مع عازلة تمنع. ثم أضاف الهدف مفتش للأقراص، تليها تحميل الأجسام المضادة إشارة HRP مترافق. وأخيرا، تم تحميل حل تمب وخليط بيروكسيد الهيدروجين على كل أسطوانة ورقة للقراءة اللون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

1. إضافة 5 مل من محلول غلوتارالدهيد 0.05٪ (المعد في 50 العازلة ملي برنامج تلفزيوني، ودرجة الحموضة 7.4) لزجاجة 20 مل. تزج 15 متوسطة تدفق أقراص ورق الترشيح-functionalized أمين في هذا الحل وإبقاء لمدة 1 ساعة مع اهتزاز عند درجة حرارة الغرفة.
   1. وفي الوقت نفسه، كرر الخطوة 3.1 لإعداد 15 ألدهيد functionalized تدفق سريع أقراص الورق مرشح آخر.
      الحذر: التعامل مع غلوتارالدهيد في الدخانالغطاء.
2. لإزالة غلوتارالدهيد غير المتفاعل من أقراص الورق، ووضع 15 متوسطة تدفق أقراص ورق الترشيح في أنبوب الطرد المركزي 15 مل، و15 التدفق السريع أقراص ورق الترشيح في أنبوب آخر الطرد المركزي 15 مل. إضافة 5 مل من الماء DI إلى كل أنبوب ويهز الأنابيب لمدة 10 ثانية. إزالة المياه من خلال الشفط مع ماصة. كرر مرتين لإزالة أي غلوتارالدهيد غير المتفاعل.
3. تجفيف أقراص الورق في 37 درجة مئوية الفرن.
4. إضافة 5 ميكرولتر و 8 ميكرولتر من 0.025 ملغ / مل الأجسام المضادة جزء الماوس مفتش-FC إلى كل من متوسط ​​التدفق ورقة الترشيح تدفق سريع أقراص، على التوالي، واحتضان لمدة 20 دقيقة.
5. إضافة 10 ميكرولتر من 50 ملي برنامج تلفزيوني (الرقم الهيدروجيني 7.4) إلى كل أسطوانة ورقة دون إزالة الأجسام المضادة واحتضان لمدة 40 دقيقة للتفاعل الأمينات ألدهيد.
6. غسل أقراص الورق مع 0.2 مل من غسل العازلة على رأس منشفة ورقية. تكرار غسل ثلاث مرات.
7. تجفيف أقراص رقة في الفرن عند 37 درجة مئوية.
8. منع أقراص رقة ثإيث 15 ميكرولتر من عرقلة العازلة لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
9. يغسل كل أسطوانة ورقة مع 0.2 مل من غسل العازلة على رأس منشفة ورقية. تكرار غسل ثلاث مرات.
10. تشغيل معايير مفتش.
    1. تحميل 10 ميكرولتر من تركيزات مختلفة مفتش (على سبيل المثال، 0، 10، 125، 250، و 500 نانوغرام / مل في برنامج تلفزيوني) على كل أسطوانة في ثلاث نسخ. احتضان لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
11. غسل أقراص الورق مع 0.2 مل من غسل العازلة على رأس منشفة ورقية. تكرار غسل ثلاث مرات.
12. تحميل 10 ميكرولتر من الأجسام المضادة HRP مترافق الماوس مفتش-FC جزء (1: 10000، 10 ملي برنامج تلفزيوني، ودرجة الحموضة 7.4)، واحتضان لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
13. غسل أقراص الورق مع 0.2 مل من غسل العازلة على رأس منشفة ورقية. تكرار غسل ثلاث مرات.
    ملاحظة: ليس من الضروري إزالة غسل العازلة كما لا تتأثر نتائج من خلال وجود العازلة.
14. تحميل مزيج 10 ميكرولتر من تمب وبيروكسيد الهيدروجين على كل أسطوانة.
15. تصور أك جميع أقراص الورق مع الكاميرا الرقمية أو الهواتف الذكية بعد 5 دقائق من الحضانة.
    ملاحظة: في الشكل 6A، '0' لتقف على أقراص رقة تعامل مع تجميد التقاط الأجسام المضادة، والحل الضد HRP / TMB دون مفتش المصل.
16. تحليل كثافة كل قرص الورق في صورة من صورة J.
    1. تحويل الصور الملتقطة في خطوة 3.15 إلى تنسيق ". TIF.
    2. فتح 'صورة J' البرمجيات.
    3. انتقل إلى 'ملف → فتح'، واختيار صورة لتحليلها.
    4. اختر زر شكل "البيضاوي".
    5. انتقل إلى 'صورة → → نوع 32 بت.
    6. انتقل إلى 'تحرير → المقلوب ".
    7. انتقل إلى 'تحليل → التدبير.
    8. نسخ وتحليل البيانات في جدول بيانات.

الشكل 3. تحويل فورييه الأشعة تحت الحمراء (FTIR) أطياف غير المعالجة أو المعالجة APS-فلتر المتوسط تدفق ورقة مربع (A) وتدفق سريع مرشح ورقة مربع (B). A. كان الأطياف لغير المعالجة مرشح المتوسطة تدفق رقة مربع مماثلة لتلك التي من وكالة الأنباء الجزائرية تعامل مرشح المتوسطة تدفق ورقة مربع. الزيادة في شدة على عصابات 902-1،170 سم -1 و1،210-1،500 سم -1 لورقة مربع تعامل APS-تنتمي إلى سي-O-السليلوز والتشوهات CH الجماعات SiOC-H، على التوالي. الزيادة من العصابات في 1650 سم -1 و 2885 سم -1 ينتمي إلى الانحناء لل-NH 2 و CH 2 الاهتزازات من شاردة المالحة بروبيل، على التوالي. ب. ونسبت القمم مميزة في 972 إلى 1180 سم -1 مجموعة إلى سي-O-سي وSO-مالسندات llulose. كان سبب الذروة في 1003 سم -1 من خلال التداخل من السندات سي-O-سي وCO تمتد من السليلوز. عرض كل النتائج التي APS تم زرعها بنجاح على أوراق السليلوز مربع. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

تم تحديد وجود مجموعات وظيفية أمين على أوراق مربع السليلوز من قبل FTIR ويبين الشكل 3 الأطياف FTIR من دون علاج أو تعديل أو متوسطة تدفق وتدفق سريع أوراق الترشيح مربع. كانت هناك ثلاث خطوات المشاركة في التعديل الكيميائي للaminoalkyl الجماعات، وذلك باستخدام وكالة الأنباء الجزائرية على أسطح السليلوز. خطوة واحدة شملت التحلل من وكالة الأنباء الجزائرية لتوفير المشتقات silanol وكالة الأنباء الجزائرية. الخطوة الثانية شملت امتصاص للمشتقات وكالة الأنباء الجزائرية تحلل على ألياف السيليلوز من خلال الرابطة الهيدروجينية مجموعات OH من حydrolyzed وكالة الأنباء الجزائرية مشتق وألياف السليلوز. الخطوة الثالثة شملت التكثيف للمشتقات وكالة الأنباء الجزائرية كثف، والتي أدت إلى تطعيم للمشتقات وكالة الأنباء الجزائرية على سطح ألياف السليلوز من خلال الترابط سي OC وتشكيل سي-O-سي الجسور siloxane 34. كما هو مبين في الشكل 3A، وزيادة الفرقة في 1650 سم -1 يعزى إلى الانحناء للجماعات NH 2 وزيادة قدرها الفرقة في 2885 سم -1 المقابلة لCH 2 الاهتزازات شاردة بروبيل سيلاني. لتصفية المتوسطة تدفق رقة مربع الأصلي، والعصابات في 902-1،170 سم -1 و1،210-1،500 سم -1 يتفق مع الاهتزازات من السندات COC الجسور غليكوزيدية وCH الاهتزازات تمتد. بعد علاج ورقة مربع مع وكالة الأنباء الجزائرية، والزيادة في كثافة في هذه الاعراض الفرقة اثنين يدل على أنهم ينتمون إلى سي-O-السليلوز والتشوهات CH الجماعات SiOC-H، على التوالي. على غرار المتوسطة فلوريدا آه تصفية ورقة مربع، وأطياف لتعديل تدفق سريع مرشح ورقة مربع زادت أيضا في كثافة في 1650 سم -1 ل-NH 2، ويرجع ذلك إلى التعديل الكيميائي مع وكالة الأنباء الجزائرية (الشكل 3B). ونسبت القمم مميزة قوية في 972 إلى 1180 سم -1 مجموعة إلى سي-O-سي والسندات SO-السليلوز. وكانت أعلى قمة في 1003 سم -1 نظرا للتداخل من السندات سي-O-سي وCO تمتد من السليلوز 34. هي سبب السندات مميزة في نطاق الطول الموجي بين 1188 و 1510 سم -1 لAPS تعامل رقة مربع من الاهتزازات من السندات انبا الجسور غليكوزيدية وCH الاهتزازات تمتد. عرضت تمتد السندات الاهتزاز CH 2 في 2،800-2،980 سم -1 وأعلى قمة كان في 2932 سم -1 لوكالة الأنباء الجزائرية تعامل رقة مربع. في الختام، وكالة الأنباء الجزائرية يمكن المطعمة تساهميا إلى رقم 1 ورقم 113 أوراق الترشيح مربع.

الآثار البيئية-together.within الصفحات = "1">
الرقم 4. ردود الإسفار لتركيزات مختلفة من غلوتارالدهيد في تجميد مفتش-FITC على أقراص الورق (الطريقة ب) إعدادات لمضان تصوير الجزيئي: الإثارة، 488 نانومتر، والانبعاثات، 530 نانومتر، القرار، و 100 ميكرومتر ج: الإسفار ردا على 0، 0.001٪، 0.005٪، 0.01٪ و 0.050٪ غلوتارالدهيد ب: استجابة الإسفار إلى 0، 0.050٪، 0.100٪، 0.250٪ و 0.500٪ غلوتارالدهيد. وكان تركيز مفتش-FITC على كل أسطوانة 0.01 ملغ / مل. أدت زيادة في تركيز غلوتارالدهيد إلى حد أقصى قدره 0.05٪ في زيادة كمية التحميل من مفتش-FITC. تركيزات غلوتارالدهيد فوق 0.05٪ وانخفضت كمية تحميل مفتش-FITC. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذاالشكل.

الرقم 5. استجابة الإسفار (A) ونتيجة اللونية (ب) من تركيزات مختلفة من مفتش-FITC على يجمد مفتش-FITC متوسطة تدفق وتدفق سريع أقراص ورق الترشيح (الطريقة ب) إعدادات لمضان تصوير الجزيئي: الإثارة ، 488 نانومتر، والانبعاثات، 530 نانومتر، والقرار، 100 ميكرون. # 1 يمثل الصف رقم (1)، متوسط ​​تدفق القرص ورق الترشيح، ورقم 113 يمثل الصف رقم 113 تدفق سريع القرص ورق الترشيح. وعولج أقراص الورقة المعدلة وكالة الأنباء الجزائرية مع 0.05٪ غلوتارالدهيد أولا. ثم، تم تحميل تركيزات مختلفة من مفتش-FITC على غلوتارالدهيد تعديل أقراص الورق. زيادة تركيز تحميل مفتش-FITC زيادة مبلغ يجمد مفتش-FITC على أقراص الورق. ومع ذلك، فإن زيادة تركيزات يجمد مفتش-FITC لم تتحسن قدرة ملزمة للمستضد. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

ويرد العمل الأساسية اللازمة لتجميد التساهمية من الأجسام المضادة على السليلوز أقراص الورق functionalized أمين في الشكل 1. وقد ثبتوا الأرنب مكافحة الإنسان مفتش-FITC تساهميا على أقراص رقة السليلوز. وأشار مضان من أقراص الورقة تجميد الأجسام المضادة للأقراص الورق، وكانت كثافة مضان يتناسب طرديا مع تركيز الأجسام المضادة يجمد. كان البيروكسيد الماعز مترافق المضادة للأرنب مفتش ثم تطبيقها لتحديد قدرة ملزم من الأجسام المضادة يجمد. ويمكن لمجموعات الأمينات الثانوية ومجموعة ألدهيد تتفاعل مع بعضها البعض لتشكل قاعدة شيف، الذي استخدم في bioconjugation 35. وكانت تستخدم أيضا هنا لتجميد التساهمية من القبض علىالأجسام المضادة. في طريقة ألف (الشكل 1A)، وقدم -NH 2 إلى أقراص ورق السيلولوز واستمد -CHO من الأرنب مكافحة الإنسان مفتش-FITC عن طريق أكسدة المنطقة التيسير من الأجسام المضادة مع بريودات الصوديوم. في نفس الطريق، كما تم تحليل آثار تركيزات مختلفة من بريودات الصوديوم والأجسام المضادة-FITC. كما هو مبين في الشكل S1 والشكل S2، بريودات الصوديوم من تركيزات 0-1 ملم والأرنب مكافحة الإنسان مفتش-FITC ،016-0،16 ملغ / مل يكن لها أثر يذكر على أكسدة مفتش 0.08 ملغ / مل أرنب مكافحة الإنسان -FITC. زيادة كمية الأجسام المضادة التي كان لا بد تساهميا إلى أقراص الورق مع زيادة تركيز الأجسام المضادة القبض 0-،075 ملغ / مل (الشكل S3A).

ولوحظ وجود تغير لون خافت الذي تم فيه تحديد قدرة ملزم من قبل فحص البيروكسيديز. قد يكون هذا بسبب استخدامبريودات الصوديوم الزائدة، والذي يتفاعل مع الأجسام المضادة القبض على ويسبب فقدان النشاط ملزم. ومن المرجح أن بريودات الصوديوم لا يمكن غسلها تماما بعيدا عن الأقراص ورقة. وهذا ما أكده مبدأ بسيط وهو أن حل بريودات الصوديوم يوفر اللون الأصفر عند مزجه مع حل purpald. لذلك، تم تحميل الأجسام المضادة أكسدة بريودات على أقراص الورق والمحتضنة لمدة 1 ساعة. تم غسلها الأقراص رقة ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني (التي تحتوي على 0.05٪ توين-20)، ثم أضيف حل purpald لهذه الأقراص. أظهرت أقراص رقة اللون الأرجواني على الفور، مشيرا إلى وجود جماعات ألدهيد من الأجسام المضادة أكسدة بريودات. هذا اللون الأرجواني تغير إلى اللون الأصفر في غضون 10 دقيقة، والتي أكدت وجود بريودات الصوديوم على أقراص الورق.

بدلا من ذلك، تم استخدام غلوتارالدهيد عبر ربط الأسلوب (أسلوب B، الشكل 1B) لربط جروب أمينملاحظة من أقراص رقة المعالجة وكالة الأنباء الجزائرية والأجسام المضادة. تم ضبط تركيزات غلوتارالدهيد (الشكل 4) والأرنب مكافحة الإنسان مفتش-FITC (الشكل 5A) التي تم تحميلها على أقراص ورق السليلوز. كما هو مبين في الشكل (4)، وصلت كثافة مضان بحد أقصى 0.05٪ من غلوتارالدهيد، وهو ما يعني أن تحميل أرنب مكافحة الإنسان مفتش-FITC أصبحت مشبعة على القرص ورق السيلولوز في هذا التركيز. ولم زيادة في تركيز غلوتارالدهيد إلى 2.5٪ لا تظهر زيادة في كمية الأرانب مكافحة الإنسان مفتش-FITC على أقراص رقة السليلوز (الشكل S4). زيادة كثافة مضان أيضا مع زيادة تركيزات أرنب مكافحة الإنسان مفتش-FITC التي تم تحميلها على أقراص الورق (الشكل 5A). أما اللون الأزرق وضعت فور إضافة تمب حل الركيزة وبيروكسيد الهيدروجين خليط إلى أقراص الورق، والتي تحتوي على peroxidasالبريد الأجسام المضادة كشف مترافق (الشكل 5B). وبالإضافة إلى ذلك، عرقلة العازلة التي تحتوي على 10٪ منزوع الدسم ظهر مسحوق حليب للاحتفاظ كفاءة عرقلة بعد 15 يغسل (الشكل S5). وقد تم اختيار أسلوب B لاختبار التطبيق من الأجسام المضادة يجمد، كما يتجلى ذلك تعزيز النشاط ملزم إلى هدفه. وبالتالي، تم استخدام 0.025 ملغ تركيز / مل من الأجسام المضادة لالتقاط كشف مفتش.

الشكل 6. منحنيات المعايرة لتحديد مفتش كتبها الورقية ELISA # 1 يمثل الصف رقم (1)، متوسط تدفق القرص ورق الترشيح، ورقم 113 يمثل الصف رقم 113 تدفق سريع القرص ورق الترشيح. ويعرض لوحة العلوي وقراءات لون المتوسطة تدفق (رقم 1) وسريع التدفق (# 113) أقراص ورق السيلولوز مع تركيز مختلفة من مفتش. لوحة أسفليقدم B نتيجة ELISA لتراكيز مختلفة من مفتش. استخدمت يثلث لتحديد الانحراف المعياري (SD). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

واستخدمت الماعز المضادة للماوس مفتش-FC التقاط جزء الأجسام المضادة، مفتش مصل، والماعز المضادة للماوس مفتش-FC جزء الأجسام المضادة مترافق برنامج الصحة الإنجابية للمقايسة شطيرة. كما هو مبين في الشكل (6) والشكل S6، وتركيز مفتش المصل 0-500 نانوغرام / مل كان على علاقة خطية مع شدة اللونية عندما حضنت كل خطوة لمدة 1 ساعة. في الشكل S6، كان التغير في اللون مع تركيزات مختلفة من مفتش واضح لمدة 1 ساعة من الحضانة. ومع ذلك فإن النتائج الحضانة 10 دقيقة لا تظهر تغيرا واضحا في شدة اللون مع تركيزات مختلفة من مفتش. وهكذا، فإن السناتوركان itivity هذا ELISA الورقية مناسبة لتطوير عملية اختبار نقطة من الرعاية.

شخصية S1. وتباينت ردود مضان لتركيزات مختلفة من بريودات الصوديوم (الطريقة A). تركيزات مختلفة من بريودات الصوديوم مع الأرنب مكافحة الإنسان مفتش-FITC بتركيز 0.016 ملغ / مل واستخدامها لدراسة النشاط الأجسام المضادة الأكسدة. عن طريق زيادة تركيز بريودات الصوديوم، وكمية تحميل مفتش-FITC زيادة وصلت إلى الحد الأقصى عند 0.25 ملم. ولوحظ أن تركيزات الصوديوم بريودات التي كانت أعلى من هذا لم يزد مبلغ يجمد مفتش-FITC. استخدمت يثلث لتحديد الانحراف المعياري (SD). يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الرقم S2. استجابة مضانالصورة لتركيزات مختلفة من الأرانب مكافحة الإنسان مفتش-FITC (الطريقة A). وكان تركيز بريودات الصوديوم 0.25 ملم في حل لدراسة النشاط الأجسام المضادة الأكسدة، وتركيز النهائي من الأرانب مكافحة الإنسان مفتش-FITC على كل أسطوانة كان 0،016 ملغ / مل. عندما تم إصلاح تركيز بريودات الصوديوم، وكان تركيز مفتش-FITC تأثير يذكر على أكسدة مفتش-FITC. استخدمت يثلث لتحديد الانحراف المعياري (SD). يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل S3. واستخدمت استجابة مضان ونتيجة اللونية من تحميل تركيزات مختلفة من الأرانب أكسدة مكافحة الإنسان مفتش-FITC على أقراص الورق (الطريقة A). للأكسدة بريودات الصوديوم، 0.08 ملغ / مل من مفتش-FITC و 0.25 ملي بريودات الصوديوم. وكان التخفيف من-البيروكسيديز مترافق المضادة للأرنب مفتش1: 50000. زيادة تركيز تحميل مفتش-FITC على أقراص رقة السليلوز زيادة كمية يجمد مفتش-FITC، ولكن لم يكن لديها تأثير على هدف ملزم. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل S4. وكان رد مضان لتركيزات عالية من غلوتارالدهيد في تجميد مفتش-FITC على أقراص رقة السليلوز (الطريقة ب) تركيز مفتش-FITC على كل أسطوانة 0.01 ملغ / مل. تركيزات غلوتارالدهيد التي كانت أعلى من 0.25٪ لا يزيد من كمية يجمد مفتش-FITC على أقراص رقة السليلوز. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل S5. تأثير عدد مرات الغسيل. ج: كان. هينج ثلاث مرات ب: غسل 15 مرة. الأجسام المضادة القبض ثبتوا على ورقة السليلوز مربع لا تزال لديها قدرة ملزمة جيدة إلى أهدافهم، على الرغم من أن ورقة مربع وvortexed 15 مرة. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل S6. إليسا نتيجة لمفتش الورقية. وبالنسبة للتركيزات مفتش 0-500 نانوغرام / مل، والنتائج من ساعة واحدة من الحضانة هي أفضل من نتائج من 10 دقيقة من الحضانة. لتركيزات عالية من IgG و 10 دقيقة من الوقت ما يكفي للحضانة. استخدمت يثلث لتحديد الانحراف المعياري (SD). يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الرقم S7. مسح المجهر الإلكتروني (SEM) وصور من ورق الترشيح المتوسطة تدفق في تكبير مختلفة. ج: 85X وباء: 20،000X. كان يعمل الحقل المجهر انبعاث الإلكترون (FE-SEM) التي تعمل على 5 كيلو فولت لتحديد مورفولوجيا الجسيمات. ألياف السليلوز هي عبر ربط بشكل عشوائي. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الرقم S8. الصور SEM من ورق الترشيح تدفق سريع في تكبير مختلفة. ج: 100X و B: 20،000X. كان يعمل الحقل المجهر انبعاث الإلكترون (FE-SEM) التي تعمل على 5 كيلو فولت لتحديد مورفولوجيا الجسيمات. ألياف السليلوز هي عبر ربط بشكل عشوائي. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.