مقالة منهجية

التحقيق استنادا التدخل-RNA من وظيفة من حرارة صدمة بروتين 27 خلال شفاء القرنية طلائي الجرح

DOI:

10.3791/54280

⸱

سبتمبر 27, 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Ophthalmology, Saevit Eye Hospital, 2Department of Ophthalmology, University of Ulsan College of Medicine, Asan Medical Center

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا ، نقدم بروتوكولا لاستخدام بروتين الصدمة الحرارية 27 (HSP27) الحمض النووي الريبي الصغير المتداخل لتقييم وظيفة HSP27 أثناء التئام الجروح الظهارية للقرنية. تداخل الحمض النووي الريبي هو أفضل طريقة لضرب التعبير الجيني بشكل فعال للتحقيق في وظيفة البروتين في أنواع الخلايا المختلفة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد الحمض النووي الريبي المتداخل الصغير (siRNA) من بين أكثر طرق تداخل الحمض النووي الريبي استخداما لإسكات جينات ترميز البروتين على المدى القصير. siRNA هو ازدواج RNA اصطناعي تم إنشاؤه لاستهداف نسخة mRNA على وجه التحديد للحث على تدهوره وقد تم استخدامه لتحديد مسارات جديدة في العمليات الخلوية المختلفة. توجد تقارير قليلة بخصوص دور بروتين الصدمة الحرارية الفسفرية 27 (HSP27) في التئام الجروح الظهارية للقرنية. هنا ، تم تقسيم الخلايا الظهارية للقرنية البشرية المستنبتة إلى مجموعة مشوشة من التحكم في siRNA ومجموعة منقولة siRNA خاصة ب HSP27. ثم تم إجراء فحوصات الجرح الاتجاهي الناجم عن الخدش ، والنشاف الغربي ، وقياس التدفق الخلوي. نستنتج أن HSP27 له أدوار في التئام الجروح الظهارية للقرنية والتي قد تنطوي على موت الخلايا المبرمج للخلايا الظهارية والهجرة. هنا ، يتم توفير أوصاف خطوة بخطوة لإعداد العينة وبروتوكول الدراسة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخلايا الظهارية القرنية (CECS) يتم تسليط مستمر في فيلم المسيل للدموع، في حين يتم استبدالها في وقت واحد من قبل خلايا من حوف والقرنية الطبقات القاعدية الظهارية. يمكن 1 مختلف الضغوطات خارجي تحفز الخلايا والتقشر من CECS. 2 بروتينات الصدمة الحرارية (شركائنا HSPs) يتم حفظها للغاية ويمكن تقسيمها إلى عائلتين وفقا لحجم الجزيئي. وتضم 3 أسرة أكبر HSP HSP90، HSP70، وHSP60، وتضم الأسرة الصغيرة HSP27. 4 ومن المعروف أن الفسفرة من HSP27 للعب دورا هاما في بقاء الخلية ومطلوب للهجرة الخلايا بسبب دور هذا البروتين في إعادة الأكتين 5-7 لذلك، حاولنا لاختبار الدور المحتمل للHSP27 الفسفرة في الهجرة لجنة الانتخابات المركزية وموت الخلايا المبرمج في نموذج في المختبر من التئام الجروح الظهارية.

تدخل الحمض النووي الريبي (رني) باستخدام إما صغيرة أو قصيرة الرنا التدخل (سيرنا) له جنرال الكتريكالفائدة nerated في كل الأحياء الأساسية والتطبيقية، كما يحتمل أن يسمح للتعبير عن أي الجينات في المصالح أن طرقت إلى أسفل. 8 وهنا، كنا سيرنا HSP27 محددة لتقييم مساهمة HSP27 لالتئام الجروح لجنة الانتخابات المركزية وموت الخلايا المبرمج. طرق رني التقليدية لجين تدق إلى أسفل في الخلايا تستخدم الدوبلكس RNA الاصطناعية، من بينهم اثنان معدلة أليغنوكليوتيد] 21-مير التي يمكن تجميعها لإنشاء الرناوات siRNAs. ورني سيرنا التي استخدمناها في هذه الدراسة هي طريقة بسيطة وفعالة للغاية ل transfect الخلايا، وهذا كاشف يعمل مع مختلف خطوط الخلايا خلد. في هذه الدراسة، ونحن لشرح الطرق المستخدمة لهذا التحليل، بما في ذلك فحص الناجم عن الصفر الجرح الاتجاه، النشاف الغربي، سيرنا ترنسفكأيشن الفحص، الفحص المناعي، والتدفق الخلوي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخط 1. خلية

  1. الثقافة 10 6 خلايا خلدت التيلوميراز الإنسان القرنية الطلائية (HCECs) في لوحة 6 جيدا (الكثافة: 1039.9 خلية / ملم 2) في الحاضنة 37 درجة مئوية مع CO 2 جو 5٪ باستخدام متوسط النمو ظهارة الشعب الهوائية (BEGM) حتى أن تصل إلى 95٪ التقاء.

2. الغربية تحليل وصمة عار بعد إنشاء طلائي الجروح خدش

  1. خط العقيمة 200 ميكرولتر ماصة على سطح بئر متموجة HCECs مثقف أربع مرات في طبق في خزانة السلامة البيولوجية (الدرجة الثانية، نوع A2)، واحتضان HCECs بشكل منفصل في الحاضنة 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2 جو ل1، 5، 10، 30، 60، و 120 دقيقة.
  2. استخدام واحد لوحة 6 جيدا لمدة ستة عينات مختلفة وفقا لفترة حضانة بعد إصابة الظهارية القرنية.
  3. غسل جرح الطبقات الوحيدة HCEC ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني 1X ثم قم بإضافة 2.0 مل BEGM إلى كل بئر.
  4. فصل HCECs باستخدام 2مل 0.25٪ حمض التربسين ethylenediaminetetraacetic (EDTA) لكل بئر لمدة 5 دقائق، الطرد المركزي في 900 x ج لمدة 5 دقائق في أنبوب 15 مل، ونضح التربسين-EDTA باستخدام ماصة 1 مل.
  5. تعليق HCECs مع 1 مل برنامج تلفزيوني 1X ونقلها إلى أنبوب 1.5 مل.
  6. الطرد المركزي HCECs في 10000 x ج لمدة 15 ثانية، ونضح برنامج تلفزيوني 1X باستخدام ماصة 1 مل.
  7. و resuspend HCECs في 100 العازلة تحلل الجليد الباردة ميكرولتر (10 ملم تريس، 10 مم كلوريد الصوديوم، 2 ملي EDTA، 25 مم ناف، 2 مم نا 3 VO 4، 1 ملم phenylmethanesulfonyl فلوريد [PMSF]، مثبطات الأنزيم البروتيني [1 ميكرومتر pepstatin A، 1 ميكرومتر leupeptin، و 0.1 ميكرومتر أبروتينين] و 0.5٪ تريتون X-100 [درجة الحموضة 7])، ومزجها جيدا.
  8. احتضان الخلايا لمدة 30 دقيقة على الجليد للحث على تحلل الخلية.
  9. لست] أجهزة الطرد المركزي في 4 درجات مئوية في 10000 x ج لمدة 15 دقيقة، ثم نقل supernatants إلى الطازجة 1.5 مل أنابيب (90 مكل) وتخزينها في -80 درجة مئوية.
  10. تحديد مجموع تركيزات بروتين الخلية لست] باستخدام العلاقات العامة برادفوردفحص otein 9.
  11. تحميل 30 ميكروغرام البروتين الكلي الخلية إلى 10٪ أو 12٪ هلام الأكريلاميد لدوديسيل الصوديوم وكبريتات إس دي إس بايج (SDS-PAGE)، ثم electrophoretically نقل فصل العصابات البروتين لمرشحات النيتروسليلوز مع 200 مللي أمبير الحالية لمدة 1 ساعة على 4 درجات C لاستخدامها في المقايسات لطخة غربية.
  12. كتلة النيتروسليلوز مرشح الأغشية مع 5٪ حليب منزوع الدسم في مخزنة المالحة تريس، مع توين 20 (TBST) لمدة 1 ساعة، إضافة الأجسام المضادة أرنب الأساسي ضد HSP27 غير فسفرته (1: 1000 تمييع) أو الأساسي الضد الأرنب بولكلونل ضد فسفرته HSP27 (1 : 1000 تمييع) في 5٪ الزلال المصل البقري (BSA)، واحتضان الأغشية بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية على شاكر.
  13. كشف عصابات مناعيا باستخدام الفجل-البيروكسيديز مترافق الماعز أضداد الأرانب (1: 10،000 تمييع) في 5٪ BSA بعد الغسيل لمدة 10 دقيقة 3 مرات مع TBST.
  14. احتضان الغشاء في غرب الكواشف مينول النشاف (6-7 ملتر لكل 10 سم × 5 سم غشاء) لمدة 1 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  15. إزالة غشاء من حل كاشف، إزالة السائل الزائد مع منشفة ماصة، ووضعه في حامية ورقة من البلاستيك.
  16. العمل في غرفة مظلمة مع الضوء الآمن، وضع غشاء المشمولة في شريط كاسيت فيلم مع الجانب البروتين مواجهة.
  17. وضع فيلم الأشعة السينية على رأس الغشاء وفضح لمدة 1 دقيقة.

3. سيرنا ترنسفكأيشن الفحص 10

  1. HCECs الثقافة في 5 × 5 10 خلايا جيدا / في لوحة 6 جيدا في الحاضنة 37 درجة مئوية مع CO 2 جو 5٪ باستخدام BEGM حتى تصل إلى 95٪ التقاء.
  2. تمييع كاشف ترنسفكأيشن (2.5 أو 7.5 ميكرولتر) مع 100 ميكرولتر خفض سيرم لترنسفكأيشن (كان عامل التخفيف 41 أو 14.3) وحل HSP27 محددة وسارعت تحكم سيرنا في 100 ميكرولتر خفض سيرم لإنشاء 10 أو 50 نانومتر من HSP27 محددة وسارعت سيرنا السيطرة.
  3. مزيج 100 μ؛ ل حل سيرنا مع 100 ميكرولتر المخفف كاشف ترنسفكأيشن (نسبة 1: 1)، واحتضان الخليط لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  4. إضافة المجمعات سيرنا الدهون في الخلايا. ثم بعد 4 وسائل الاعلام التغيير ساعة لاستكمال BEGM واحتضان الخلايا لمدة 2 أيام عند 37 درجة مئوية.
  5. تحليل خلايا transfected من قبل النشاف الغربي، كما هو موضح من أقسام 4،1-4،7.

4. ويسترن صمة عار الفحص مقابل transfected سيرنا خلايا 11

  1. استخراج HSP27 محددة وسارعت السيطرة HCECs-transfected سيرنا في خزانة السلامة البيولوجية باستخدام 100 ميكرولتر العازلة تحلل الجليد الباردة (10 ملي تريس، 10 مم كلوريد الصوديوم، 2 مم ثنائي أمين الإيثيلين رباعي حمض الخل (EDTA)، 25 ملي ناف، 2 مم نا 3 VO 4، 1 ملم فلوريد phenylmethanesulfonyl (PMSF)، مثبطات الأنزيم البروتيني، و 0.5٪ تريتون X-100، ودرجة الحموضة 7).
  2. احتضان الخلايا لمدة 30 دقيقة على الجليد للحث على تحلل الخلية.
  3. لست] بيليه في 10000 x ج لمدة 15 دقيقة ثم نقل supernatants إلى حوض 1.5 مل جديدةوفاق (90 ميكرولتر قسامات) وتخزينها في -80 درجة مئوية.
  4. تحديد تركيز البروتين في الخلية لست] استخدام البروتين مقايسة برادفورد. 9
  5. عينات الحمل مع كميات متساوية من البروتين الكلي خلية على 10٪ أو 12٪ هلام الأكريلاميد، إخضاع هلام لSDS-PAGE، وelectrophoretically نقل العصابات البروتين فصلها لمرشحات النيتروسليلوز مع 200 مللي أمبير الحالية لمدة 1 ساعة على 4 درجات مئوية ل استخدام في فحوصات لطخة غربية.
  6. كتلة مرشح النيتروسليلوز الأغشية مع 5٪ حليب منزوع الدسم في مخزنة المالحة تريس، مع توين 20 (TBST) لمدة 1 ساعة، إضافة الأجسام المضادة الأولية ضد فسفرته وغير فسفرته HSP27 (1: 1000 تمييع)، فسفرته AKT (1: 1000 تمييع)، غير فسفرته AKT (1: 1000 تخفيف، وتستخدم كعلامة بقاء الخلية)، المصاحب بي سي إل 2 X البروتين (1: 1000 تخفيف، كما تستخدم بروتين الموالية لأفكارك)، وغليسيرألدهيد نازعة 3-الفوسفات (GAPDH؛ (1) : 200 التخفيف، وتستخدم كعنصر تحكم التحميل) في 5٪ الزلال المصل البقري (BSA)، واحتضان الأغشية بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية على شاكر.
  7. كشف عصابات مناعيا باستخدام الفجل-البيروكسيديز مترافق الماعز أضداد الأرانب (1: 10،000 تمييع) في 5٪ BSA بعد الغسيل 3 مرات مع TBST، 10 دقيقة كل غسل.
  8. احتضان الغشاء في غرب الكواشف مينول النشاف (6-7 مل لكل 10 سم × 5 سم غشاء) لمدة 1 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  9. إزالة غشاء من حل كاشف، إزالة السائل الزائد مع منشفة ماصة، ووضعه في حامية ورقة من البلاستيك.
  10. العمل في غرفة مظلمة مع الضوء الآمن، وضع غشاء المشمولة في شريط كاسيت فيلم مع الجانب البروتين مواجهة.
  11. وضع فيلم الأشعة السينية على رأس الغشاء وفضح لمدة 1 دقيقة.

5. خدش الناجم عن الاتجاه إصابة الفحص تقييم هجرة الخلية 12

  1. في خزانة السلامة البيولوجية، وجعل الجرح عن طريق سحب طرف ماصة معقمة على سطح بئر الثقافات متموجة منHSP27 محددة، transfected سيرنا أو مشوشة السيطرة HCECs-transfected سيرنا.
  2. مباشرة بعد اصابة، وغسل الخلايا مرتين مع 1X الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) والمحافظة عليها في الثقافات BEGM في الحاضنة 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2 الغلاف الجوي لمدة 24 ساعة بعد اصابة.
  3. تصوير الصور HCEC باستخدام مجهر تستقيم في التكبير 100X 24 ساعة بعد اصابة وتنفيذ خلفية سوى بالارض باستخدام تصفية القيادة في صورة برامج التحليل.
  4. باستخدام الأمر تحديد القياسات، وتحديد مجال الاهتمام (الهيئة العربية للتصنيع) مع نفس الشكل المضلع الحجم التي يمكن أن تغطي عموديا من اقصاه الى اقصاه الجرح الأولي، وتحديد ثلاثة الهيئة العربية للتصنيع مختلفة في منطقة الجرحى من كل عينة.
  5. العد تلقائيا عدد الخلايا في كل حقل باستخدام عدد / الحجم خيارات القائمة التدبير.

6. تحليل التدفق الخلوي من موت الخلايا المبرمج

  1. ثقافة HSP27 محددة، transfected سيرنا والسيطرة الصورةHCECs تحتوي كل منها على 10 نانومتر سيرنا الجمهورية الاسلامية الايرانية-transfected بتركيز 5 × 5 10 خلايا / جيد في 6 لوحات جيدا حتى خلايا تصل إلى 95٪ التقاء في الحاضنة 37 درجة مئوية مع CO 2 جو 5٪ في BEGM.
  2. فصل HCECs باستخدام 2 مل 0.25٪ التربسين-EDTA لكل بئر لمدة 5 دقائق، الطرد المركزي في 900 x ج لمدة 5 دقائق في أنبوب 15 مل، ونضح التربسين-EDTA باستخدام ماصة 1 مل.
  3. غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني الباردة ثم resuspend الخلايا في 1X العازلة (0.1 M HEPES / هيدروكسيد الصوديوم [درجة الحموضة 7.4] و 1.4 M كلوريد الصوديوم، و 25 ملي CaCl 2) ملزمة بتركيز 10 6 خلية / مل.
  4. نقل 100 ميكرولتر تعليق الخلية (1 × 10 5 خلايا) في أنبوب ثقافة 5 مل.
  5. إضافة 5 ميكرولتر فلوريسئين-ثيوسيانات مترافق Annexin V و 5 ميكرولتر يوديد propidium.
  6. دوامة بلطف الخلايا واحتضان لهم لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
  7. إضافة 200 ميكرولتر من العازلة ملزمة 1x إلى كل أنبوب وتحليل الخلايا عن طريق تدفق جytometer حدود 1 ساعة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التعبير عن HSP27 فسفرته زيادة كبيرة في 5 و 10 و 30 دقيقة بعد الصفر اصابة شخص مقارنة مع HCECs المعافين 13. وكشف تحليل لطخة غربية أن التعبير عن فسفرته HSP27 وفسفرته AKT كانت كل خفضت بشكل ملحوظ، في حين تم زيادة التعبير عن باكس كبير في HCECs-transfected سيرنا HSP27 معينة (الشكل 1A-E). تم تخفيض التعبير HSP27 فسفرته بنسبة 30٪ و 40٪ في 10 نانومتر و 50 نانومتر من HSP27 محددة الخلايا transfected سيرنا، على التوالي، مقارنة مع سيطر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه الدراسة الحالية ، قمنا بتقييم الدور المحتمل ل HSP27 في الجرح الظهاري للقرنية باستخدام مناهج في المختبر . تضمنت الخطوات الحاسمة تعداء siRNA لضربة الصدمة HSP27 لمراقبة وظيفة HSP27 في الخلايا المعرضة للإجهاد. والجدير بالذكر أن دور HSP27 تم الكشف عنه من خلال هذه التجارب في هجرة الخلايا الظهارية وموت الخلايا المبرمج أثناء التئام الجروح الظهارية للقرنية. على عكس الدراساتالسابقة 10 التي استخدمت siRNA الخاص بالفئران HSP27 لنقل خلايا العضلات الملساء الوعائية ، استخدمنا تقنية تعداء siRNA لتعديل التعبير ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم مصالح مالية أو في ملكية أي مواد أو أساليب المشار إليها في هذه الدراسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذه الدراسة من قبل منحة بحثية طالب (13-14) من جامعة كلية للطب أولسان، سيول، كوريا ومنحة (2014-464) من معهد اسان لعلوم الحياة، سيول، كوريا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
خزانة السلامة البيولوجيةCHC LAB Co.Ltd,  دايجون، جمهورية كوريا CHC-777A2-06الفئة الثانية ، النوع A2   ؛
الشبح RNAi™ siRNAThermo Fisher Scientific, Inc., Walthham, MARNAi siRNA; scrembled control-siRNA و HSP27-specific siRNA
BEGMTMLonza, Inc., Walkersville, MDCC-3171, CC4175وسط نمو ظهارة الشعب الهوائية 
مثبط البروتياز  Sigma-Aldrich، Inc.، سانت لويس، ميزوريP8340 ، P76261 &# 956 ؛ م بيبستاتين أ ، 1 &# 956 ؛ M Leupeptin, 0.1 &# 956; م اختبار بروتين البروتينين
برادفورد مختبرات Bio-Rad ، هرقل ، CA# 500-0001فحص بروتين برادفورد   ؛
مرشحات النيتروسليلوز Amersham ، Little Chalfont ، المملكة المتحدةRPN3032Dغشاء النشاف الغربي
HSP27   ؛Abcam Inc., Cambridge, MAab123511: 1,000 تخفيف (إجمالي HSP27)
الفسفورة HSP27 (Ser85)Abcam Inc., Cambridge, MAab55941: 1,000 تخفيف HSP27 تم فسفرته في Ser85
Lipofectamine® < / sup>RNAiMAX reagent  Invitrogen، Carlsbad، CA13-778-075كاشف الإرسال
Phosphorylated Akt (Ser473)تقنية إشارات الخلية، Danvers، MAرقم 40601: 1,000 تخفيف Akt تم فسفره في Ser473 (علامة بقاء الخلية)
غير مفسفرة Akt & nbsp ؛تقنية إشارات الخلية ، دانفرز ، ماجستيررقم 40611: 1،000 تخفيف (إجمالي Akt) بروتين
X المرتبط ب Bcl-2   ؛تقنية إشارات الخلية ، دانفرز ، ماساتشوستسرقم 40621: 1،000 (علامة بروتين مضادة لموت الخلايا المبرمج)
GAPDHسانتا كروز للتكنولوجيا الحيوية ، سانتا كروز ، كاليفورنيارقم 40631: 1،000 علامة التحكم في التحميل (جين التدبير المنزلي)
الفجل الحار الأجسام المضادة للماعز المقترنة ببيروكسيدازThermo Fisher Scientific، Inc. ، Waltham ، MANCI1460KR1: 10،000 تخفيف
OPTI-MEMInvitrogen ، Carlsbad، CA31985متوسط مصل مخفض للتعداء
برنامج تحليل الصورOlympus، Inc.، طوكيو، اليابانImage-Pro Plus 5.0
مسحوق الحليب منزوع الدسم Carl Roth GmbH + Co. KG ، Karlstruhe ، ألمانياT145.2
Tris Amresco LCC، Inc. Solon، OHNo-0497
كلوريد الصوديوم  Amresco LCC، Inc. Solon، OHNo-0241
ستة ألواح ثقافة الآبارThermo Fisher Scientific، Inc.، Waltham، MA140675قطر 35.00 مم / بئر
24 بئر طبق زراعةThermo Fisher Scientific، Inc.، Waltham، MA142475
شاكر المداريN-Bioteck، Inc. ، سيول ، كوريا الجنوبيةNB1015
ألبومين مصل الأبقارسانتا كروز للتكنولوجيا الحيوية، سانتا كروز ، كاليفورنياsc-2323   ؛
BDFACSCantoTM< / sup> IIBD Biosciences ، Franklin Lakes ، NJFlow
cytometry X-ray FilmKodak ، روتشستر ، نيويورككاسيت الأشعة السينية الطبية مع شاشة Green 400   ؛
كاشف اللومينول الغربي النشافسانتا كروز التكنولوجيا الحيوية ، سانتا كروز ، كاليفورنياsc-2048   ؛
مجموعة الكشف عن موت الخلايا المبرمج FITC Annexin V IBD Biosciences ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي556547

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dua, H. S., Gomes, J. A., Singh, A. Corneal epithelial wound healing. Br. J. Ophthalmol. 78 (5), 401-408 (1994).
  2. Estil, S., Primo, E. J., Wilson, G. Apoptosis in shed human corneal cells. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 41 (11), 3360-3364 (2000).
  3. Guay, J., et al. Regulation of actin filament dynamics by p38 map kinase-mediated phosphorylation of heat shock protein 27. J. cell. Sci. 110, Pt 3 357-368 (1997).
  4. Park, J. W., et al. Differential expression of heat shock protein mRNAs under in vivo glutathione depletion in the mouse retina. Neurosci. Lett. 413 (3), 260-264 (2007).
  5. Rane, M. J., et al. Heat shock protein 27 controls apoptosis by regulating Akt activation. J. Biol. Chem. 278 (30), 27828-27835 (2003).
  6. Shin, K. D., et al. Blocking tumor cell migration and invasion with biphenyl isoxazole derivative KRIBB3, a synthetic molecule that inhibits Hsp27 phosphorylation. J. Biol. Chem. 280 (50), 41439-41448 (2005).
  7. Jain, S., et al. Expression of phosphorylated heat shock protein 27 during corneal epithelial wound healing. Cornea. 31 (7), 820-827 (2012).
  8. Alekseev, O. M., Richardson, R. T., Alekseev, O., O'Rand, M. G. Analysis of gene expression profiles in HeLa cells in response to overexpression or siRNA-mediated depletion of NASP. Reprod. Biol. Endocrinol. 7, 45(2009).
  9. Park, H. Y., Kim, J. H., Lee, K. M., Park, C. K. Effect of prostaglandin analogues on tear proteomics and expression of cytokines and matrix metalloproteinases in the conjunctiva and corea. Exp. Eye. Res. 94 (1), 13-21 (2012).
  10. Voegeli, T. S., Currie, R. W. siRNA knocks down Hsp27 and increases angiotensin II-induced phosphorylated NF-kappaB p65 levels in aortic smooth muscle cells. Inflamm. Res. 58 (6), 336-343 (2009).
  11. Shi, B., Isseroff, R. R. Arsenite pre-conditioning reduces UVB-induced apoptosis in corneal epithelial cells through the anti-apoptotic activity of 27 kDa heat shock protein (HSP27). J. Cell. Physiol. 206 (2), 301-308 (2006).
  12. Shen, E. P., et al. Comparison of corneal epitheliotrophic capacity among different human blood-derived preparations. Cornea. 30 (2), 208-214 (2011).
  13. Song, I. S., et al. Heat shock protein 27 phosphorylation is involved in epithelial cell apoptosis as well as epithelial migration during corneal epithelial wound healing. Exp Eye Res. 118 (1), 36-41 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

siRNA SDS

مقالات ذات صلة