يصف هذا البروتوكول تطبيق التصوير المقطعي جنبا إلى جنب الفلورسنت الأشعة تحت الحمراء القريبة (NIRF) التصوير والجزئي حسابها (microCT) لتصور thromboemboli الدماغي. هذا الأسلوب يسمح للتقدير حجم عبء الجلطة والتطور. تقنية التصوير NIRF يتصور fluorescently المسمى خثرة في الدماغ المستأصل، في حين أن تقنية microCT يتصور خثرة داخل الحيوانات الحية باستخدام الذهب النانوية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التصوير نيون المشتركة القريبة من تحت الحمراء والتصوير المقطعي مايكرو لتصور مباشرة الشلل Thromboemboli
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
التصوير خثرة المباشر يتصور السبب الجذري للاحتشاء الانسداد التجلطي. أن تكون قادرة على خثرة صورة يسمح مباشرة التحقيق أفضل بكثير من السكتة الدماغية من الاعتماد على القياسات غير المباشرة، وسوف يكون أداة بحث قوية الأوعية الدموية وقوية. نحن نستخدم هذا النهج التصوير الضوئي التي تصف الجلطة الدموية مع الجزيئية علامة التصوير خثرة - مسبار Cy5.5 الفلورسنت الأشعة تحت الحمراء القريبة (NIRF) مرتبط تساهميا إلى خيوط الفيبرين من الجلطة بفعل الأنزيمية، يشابك الفيبرين من تنشيط XIIIa عامل التخثر خلال عملية نضوج جلطة. يستخدم النهج القائم التصوير المقطعي المحسوبة الدقيقة (microCT) جزيئات الذهب التي تسعى خثرة (AuNPs) functionalized لاستهداف المكون الرئيسي للجلطة: الفيبرين. وتصف هذه الورقة بروتوكول مفصلة للمجتمعة في الجسم الحي microCT وخارج الحي NIRF التصوير thromboemboli في نموذج الفأر من السكتة الدماغية الصمية. وتبين لنا أن في الجسم الحي </ م> microCT وAuNPs-غليكول الشيتوزان المستهدفة الفيبرين (أكذوبة-GC-AuNPs) يمكن استخدامها لتصور كل من الجلطات الدماغية والجلطة الدموية الموقع صمي. وصفنا أيضا استخدام في الجسم الحي القائم microCT التصوير خثرة المباشرة لمراقبة متسلسل الآثار العلاجية للمنشط نسيج الجلطات بوساطة المنشط. بعد جلسة التصوير الأخيرة، علينا أن نظهر من خارج الحي NIRF تصوير مدى وتوزيع thromboemboli المتبقية في الدماغ. وأخيرا، نحن تصف صورة الكمية تحليل البيانات التصوير microCT وNIRF. تقنية الجمع بين التصوير خثرة المباشر تتيح طريقتين مستقلة التصور الجلطة يمكن مقارنتها: مجال إشارة الفلورسنت ذات الصلة خثرة على فيفو السابقين NIRF التصوير مقابل حجم الجلطة الدموية hyperdense microCT في الجسم الحي.
المقدمة
وسيكون أحد في 6 أشخاص إصابة بسكتة دماغية في مرحلة ما من حياتهم. السكتة الدماغية هي حتى الآن نوع السكتة الدماغية الأكثر شيوعا، وتشكل نحو 80 في المئة من جميع حالات السكتة الدماغية. لأن thromboemboli تسبب معظم هذه الجلطات الدماغية، وهناك اهتمام متزايد في مجال التصوير خثرة المباشر.
وتشير التقديرات إلى أن حوالي 2000000 خلايا المخ تموت خلال كل دقيقة من وسط انسداد الشريان الدماغي 1، مما أدى إلى شعار "الوقت هو الدماغ". التصوير المقطعي (CT) دراسات يمكن القيام به بسرعة، وتتوفر على نطاق واسع. لهذا السبب، لا تزال CT التصوير من خيار لتشخيص وعلاج السكتة الدماغية ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد تم استعراض جميع الإجراءات الحيوانية موضح في هذا البروتوكول والموافقة عليها من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان مستشفى Ilsan جامعة دونغ وأجرى وفقا للمبادئ والإجراءات المبينة في دليل المعاهد الوطنية للصحة للرعاية واستخدام الحيوانات.
1. إعداد خارجيا تكونت جلطة إعتبر مع الإسفار علامة (الشكل 1)
- تخدير الماوس في غرفة تحريض باستخدام 3٪ الأيزوفلورين مختلطة مع 30٪ من الأكسجين (1.5 لتر / دقيقة 100٪ الأكسجين). ضمان عمق كاف من التخدير من خلال مراقبة قوة العضلات ويؤكد عدم وجود منعكس قرصة أخمص قدميه.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
صور الأساس microCT، حصلت في الجسم الحي بعد إدارة أكذوبة-GC-AuNP (10 ملغ / مل، 300 ميكرولتر) في 1 ساعة بعد السكتة الدماغية الصمية، تصور بوضوح الجلطة الدماغية في MCA - ACA منطقة التشعب من الشريان السباتي الداخلي البعيدة (الشكل 6 ). وأظهرت المتابعة التصوير microCT أي تغيير في خثرة البقر مع العلاج المالحة. ومع ذلك، والمعاملة مع منشط البلاسمينوجين النسيجي أظهرت حل التدريجي للخثرة البقرة (السهام الزرقاء في الشكل 6).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
أثبتنا استخدام اثنين من تقنيات التصوير الجزيئي التكميلية للتصوير خثرة المباشر في نماذج تجريبية من السكتة الدماغية الصمية: الليفين استهدف الذهب جسيمات متناهية الصغر (أكذوبة-GC-AuNP) في الجسم الحي التصوير القائم على microCT، وFXIIIa المستهدفة التحقيق التصوير الضوئي لالسابقين فيفو التصوير الفلورسنت.
بعد الوريد من أكذوبة-GC-AuNPs، أصبحت الجلطة الدموية مرئية للCT عن الهياكل كثيفة، والناجمة عن الجسيما.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
DE.K.، JY.K، CH.A، وKK هي أصحاب براءات الاختراع للجسيمات متناهية الصغر من الذهب المستهدفة الفيبرين (10-1474063-0000، الكورية للملكية الفكرية مكتب). الكتاب المتبقية ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل كوريا الرعاية الصحية والتكنولوجيا R & مشروع التطوير، وزارة الصحة والرعاية الاجتماعية (HI12C1847، HI12C0066)، وبرنامج الحيوية والعلوم الطبية التنمية (2010-0019862) وبرنامج مختبر الأبحاث العالمية الخاضعة للتفتيش (جبهة الخلاص الوطني، 2015K1A1A2028228) من مؤسسة البحوث الوطنية، بتمويل من الحكومة الكورية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| < قوية > آلات < / قوية > | |||
| microCT | NanoFocusRay ، جيونجو ، كوريا | NFR نظام التصوير Polaris-G90 | |
| NIRF | Roper-Scientific ، Tucson ، AZ | coolsnap-Ez | |
| Laser Doppler مقياس الجريان | Perimed ، ستوكهولم ، السويد | نظام PeriFlux 5000 | |
| مجهر جراحي | Leica Microsystems ، سيول ، كوريا | EZ4HD | |
| آلة التخدير الاستنشاقية | PerkinElmer ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية | XGI-8 | |
| Software< / قوي > | |||
| NFR التحكم | NanoFocusRay ، JeonJu ، كوريا | NFR Polaris-G90 | microCT برنامج التحكم |
| Lucion | Infinitt ، سيول ، كوريا | Lucion | 3D تقديم برنامج التصوير |
| مخطط المختبر 7 | ADnstruments ، كولورادو ، الولايات المتحدة الأمريكية | مخطط المختبر 7 | rCBF |
| ImageJ برنامج | Wanye Rasband ، المعاهد الوطنية للصحة ، الولايات المتحدة الأمريكية | 1.49d | تحليل التصوير |
| الأجهزة / الأدوات | |||
| مضخة التسريب | هارفارد ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية | مضخة 22 (55-2226) | |
| بطانية حرارية | منزلية Panlab ، برشلونة ، إسبانيا | HB101 | |
| كي الجيب | دايجونج ، سيول ، كوريا | DJE-39 | |
| ماتريكوس الدماغ | تيد بيلا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | 15003 | القسم الإكليلي |
| PE-50 أنابيب | ناتسومي ، طوكيو ، اليابان | SP-45 (PE-50) | معرف 0.58 مم OD 0.96 مم |
| PE-10 أنابيب | Natsume ، طوكيو ، اليابان | SP-10 (PE-10) | معرف 0.28 مم OD 0.61 مم |
| 30 مقياس إبرة | sungshim-medical ، سيول ، كوريا | ||
| حقنة | CPL-Medical ، أنسان ، كوريا | 1 و 3 سم مكعب | |
| شاش | باناميديك ، تشونان ، كوريا | ||
| الشريط | سكوتش ، سيول ، كوريا | 3M-810 | |
| ملقط صغير | أدوات العلوم الدقيقة ، فانكوفر ، كندا | & nbsp ؛ 11253-27 | Dumont #L5 |
| المقص الصغير | ، فانكوفر ، كندا | 15000-03 | Vannas Spring |
| Scissor | Fine Science Tools ، فانكوفر ، كندا | 14084-08 | 8.5 سم |
| خياطة حريرية سوداء | Ailee ، بوسان ، كوريا | SK6071 ، SK728 | 6-0 و 7-0 |
| Recodes< / strong> | |||
| meloxicam | يوهان ، سيول ، كوريا | ||
| مرهم بيطري | نوفارتيس ، بازل ، سويسرا | ||
| 10٪ بوفيدون اليود (بيتادين) | فيرسون ، تشون آن ، كوريا | ||
| FeCl 3< / sub> | سيجما ، ميسوري ، الولايات المتحدة الأمريكية | 157740-5G | |
| TTC | Amresco ، أوهايو ، الولايات المتحدة | الأمريكية 0765-100g | |
| Isoflurane | Hana-Pham ، Gyeonggi ، كوريا | Ifran | 100 مل |
| PBS | Welgene ، Daegu ، كوريا | LB001-02 | 500 مل |
| جزيئات | التوليف | ||
| C15 عامل | التوليف | ||
| منشط البلازمينوجين للأنسجة | Boehringer Ingelheim ، Biberach ، ألمانيا | rtPA (أكتيليز) | 20 مجم |
| محلول ملحي عادي | Daihan Pham ، سيول ، كوريا | 48N3AF3 | 20 مل |
المراجع
- Saver, J. L. Time is brain--quantified. Stroke. 37 (1), 263-266 (2006).
- Latchaw, R. E., et al. Recommendations for imaging of acute ischemic stroke: a scientific statement from the American Heart Association. Stroke. 40 (11), 3646-3678 (2009).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
