يمكن استخدام مقايسة تثبيط النمو المؤجل لتقييم تأثير المنافسة بواسطة عزلة بكتيرية على أخرى. يتم قياس التثبيط عن طريق قياس منطقة التطهير حول العزلة المنتجة للمثبطات ، أو تقييمها نوعيا عن طريق تحديد المدى المرئي للتثبيط.
مقالة منهجية
نمو المؤجل تثبيط الفحص لتحديد تأثير مضادات الميكروبات المستمدة البكتيريا على المنافسة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يمكن أن يحدث الاستبعاد التنافسي في المجتمعات الميكروبية عندما تتفوق سلالة منتجة للمثبطات ، على سبيل المثال ، على منافستها على مغذيات أساسية أو تنتج مركبات مضادة للميكروبات لا يقاومها منافسها. نصف هنا مقايسة تثبيط النمو المؤجل ، وهي طريقة لتقييم قدرة بكتيريا واحدة على تثبيط نمو أخرى من خلال إنتاج مركبات مضادة للميكروبات أو من خلال التنافس على العناصر الغذائية. تم استخدام هذه التقنية للتحقيق في ارتباط عزلات الأنف مع استبعاد أنواع معينة من المجتمع. يمكن أيضا استخدام هذه التقنية للكشف عن منتجي المضادات الحيوية أو مضادات الميكروبات الجديدة المحتملة. يتم إجراء الفحص عن طريق زراعة السلالة المنتجة لمثبطات الاختبار أولا طوال الليل على لوحة أجار ، ثم رشها فوق سلالة منافس الاختبار واحتضانها مرة أخرى. بعد الحضانة ، يمكن قياس مدى التثبيط كميا ، من خلال حجم منطقة التطهير حول السلالة المنتجة للمثبط ، ونوعيا ، من خلال تقييم وضوح منطقة التثبيط. نقدم هنا بروتوكول مقايسة التثبيط المؤجل ، ونصف طرقا لتقليل التباين بين التجارب ، ونحدد مقياس وضوح يمكن استخدامه لتقييم درجة التثبيط نوعيا.
المقدمة
تتنافس البكتيريا التي تعيش في المجتمعات على المستوى بين الأنواع وغير المحددة على المساحة والمواد المغذية 6. يمكن أن تؤدي المنافسة بين الميكروبات في كثير من الأحيان إلى استبعاد أنواع أو سلالات معينة داخل المجتمع. يمكن أن يكون الاستبعاد بسبب التنافس على مستقبل أو عنصر غذائي معين ، أو إنتاج مركب مضاد للميكروبات من قبل أحد أفراد المجتمع 6.
الدراسات التي تبحث في الاستبعاد التنافسي كثيرا ما تدرس وجود وغياب الأنواع باستخدام تسلسل 16S rRNA 3،4،13. ومع ذلك ، فإن تباين السمات غير المحددة ، على سبيل المثال وجود أو عدم وجود إنتاج الببتيد المضاد للميكروبات ، يمكن أن يؤثر بشكل كبير على قدرة نوع واحد على تثبيط نوع آخر 1. نظرا لأن تسلسل 16S rRNA لا يمكنه التمييز بين سلالات من نفس النوع ، فلا يمكن تقييم تباين السمات غير النوعية. يمكن استخدام التقنية الموضحة هنا لتقييم إمكانات السلالات الفردية لاستبعاد البكتيريا الأخرى. تم استخدام هذه الطريقة سابقا لإظهار وجود علاقة إيجابية بين وجود البكتيريا المثبطة للمكورات العنقودية الذهبية وغياب المكورات العنقودية الذهبية في مجتمع الأنف 7.
يمكن لمقايسة تثبيط النمو المؤجل (المنافسة) تحديد إنتاج المركبات المضادة للميكروبات أو المنافسة المغذية بواسطة السلالة المثبطة. يمكنه أيضا اكتشاف التفاعلات الإيجابية ، حيث يؤدي وجود سلالة المثبط إلى تحسين نمو السلالة المنافسة. يمكن استخدام هذا الاختبار لإنشاء بيانات كمية (منطقة حجم المقاصة) والبيانات النوعية (درجة التثبيط) ، وكلاهما يمكن تراكبه على بيانات وجود أو عدم وجود نوع داخل المجتمع لإيجاد ارتباطات بين النمط الظاهري (السمة) والاستبعاد التنافسي 7.
البروتوكول
ويتم تكييف الطريقة التالية 7،8 لاختبار سلالات منافس مع السلالات المنتجة للالمانع.
ملاحظة: هذا البروتوكول يتضمن الجيل الهباء الجوي مع الثقافات البكتيرية. هذا لا يمكن إلا أن يؤديها في مكان معزول مع تنفيذ اعتبارات السلامة المعتمدة محليا. والرش للثقافة على لوحات أجار داخل مجلس الوزراء السلامة مستوى 2 لحد من التلوث من لوحات أجار والبيئة المحيطة. وهذا أيضا حماية باحث من استنشاق الهباء الجوي من البكتيريا رش، وهذا هو مصدر قلق كبير إذا كان الباحث يستخدم مستوى الاحتواء 2 الكائنات الحية. يجب ارتداء معدات الوقاية الشخصية المناسبة. المنطقة المحيطة طبق بتري هو أفضل مغطاة نسيج ماص المتاح. وينصح بعد رش التطهير باستخدام الأشعة فوق البنفسجية.
1. إعداد لوحات أجار
- إعداد ضخ القلب الدماغ (BHI) أجار وفقا لمانوتعليمات facturer و.
- الأوتوكلاف أجار بهي في درجة حرارة 121 مئوية، و 15 رطل لمدة 20 دقيقة، أو وفقا لتوصيات الأوتوكلاف الشركة المصنعة، لتعقيم.
- صب 15 مل aliquots من أجار BHI تعقيمها في أطباق بتري معقمة والسماح لها لتعيين.
ملاحظة: تأكد كل لوحة أجار لاستخدامها داخل ينشأ فحص من نفس الرصيد من أجار وأن هناك نفس القدر من أجار في كل لوحة. وهذا يحد من التقلبات في المواد الغذائية المتاحة ونشر المانع بين لوحات السماح المقارنة.
2. إعداد العقيمة مرق
- إعداد BHI مرق وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
- إضافة 10 مل aliquots من BHI إلى 28 زجاجات عالمية مل الزجاج.
- الأوتوكلاف مرق BHI في درجة حرارة 121 مئوية، و 15 رطل لمدة 20 دقيقة، أو وفقا لتوصيات الأوتوكلاف الشركة المصنعة، لتعقيم.
ملاحظة: تأكد من أن جميع مرق المستخدمة في فحص تنبع من نفس دفعة من التسليم مرقoclaved في نفس الوقت للحد من التباين في المواد الغذائية التي يمكن أن تسبب الاختلاف في النتائج.
3. إعداد العقيمة مبخر زجاجة (ق)
- تفكيك زجاجة vapourizer.
- رش 5٪ سطح عامل تنظيف فعال من خلال vapourizer للقضاء على الملوثات الداخلية، نقع الزجاجة vapourizer، غطاء وvapourizer في 5٪ سطح عامل تنظيف فعال بين عشية وضحاها.
يجب استخدام قفازات ومعدات الوقاية الشخصية المناسبة عند التعامل مع سطح نشط عامل التنظيف: ملاحظة. - تجفيف المرذاذ، غطاء وزجاجات معقمة تحت غطاء تدفق الهواء.
- ملء زجاجة مع 70٪ من الإيثانول، أعد vapourizer ورش بعض من الايثانول من خلال vapourizer.
- وضع غطاء على المرذاذ وتخزينها مع الايثانول داخل حتى الاستخدام.
- مباشرة قبل الاستخدام، جو معقم و مطهر شطف الزجاجة مع مرق BHI معقمة ورش مرق من خلال vapourizer.
ملاحظة: هذا يمنع قسم الشؤون المالية الإيثانولecting قيحة يضاف إلى زجاجة في القسم 6.3.
4. إعداد ثقافة البكتيرية بين عشية وضحاها (ق)
- خط منافس ومثبط سلالات على العقيمة لوحة بهي أجار واحتضان عند 37 درجة مئوية هوائيا لحوالي 18 ساعة (بين عشية وضحاها).
ملاحظة: هذه لوحة تنتج مخزون من البكتيريا التي يمكن استخدامها لمكررات متعددة ضمن نفس الأسبوع عند تخزينها في 4 درجات مئوية. - تطعيم 10 مل من مرق BHI العقيمة مع مستعمرة واحدة من سلالة بكتيرية منافس المطلوبة في غضون 28 مل زجاجة العالمية.
- احتضان زجاجة العالمية عند 37 درجة مئوية هوائيا بين عشية وضحاها عن طريق هز بسرعة 250 دورة في الدقيقة شاكر المداري.
5. بقعة الثقافة لعزل المانع المنتجة لل
- إعداد الثقافة بين عشية وضحاها (ق) كما هو موضح في القسم 4.
- ضمان لوحات أجار جافة تماما، مع عدم وجود التكثيف على الغطاء، وقبل التلقيح (على سبيل المثال التي يحتضنها جيش التحرير الشعبى الصينىالشركة المصرية للاتصالات لمدة 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية). هذا يمنع اللقاح من الانتشار عبر لوحة من موقع التلقيح.
- ماصة 25 ميكرولتر من الثقافة بين عشية وضحاها على مركز لوحات أجار. تجنب الاكتئاب تماما المكبس ماصة لمنع فقاعات الهواء التي تنشر الثقافة عبر أجار.
- السماح للثقافة حتى يجف في درجة حرارة الغرفة للحد من انتشار الثقافة. احتضان لوحات أجار عند 37 درجة مئوية هوائيا بين عشية وضحاها.
6. إعداد بخاخ اللقاح من سلالة اختبار منافس (ق)
- إعداد الثقافة بين عشية وضحاها كما هو موضح في الفقرة 4. تمييع بين عشية وضحاها ثقافة 10 أضعاف في BHI مرق لانتاج ما يقرب من 4 × 10 6 كفو مل -1، وتعليق OD 600 0.3 ± 0.05.
ملاحظة: سوف 10 التخفيف أضعاف لم يعط 4 × 10 6 كفو -1 مل لجميع الأنواع البكتيرية، وحساب معامل التخفيف اللازم من قبل انتشار طلاء التخفيفات المسلسل بين 1 × 10 -1 -1 × 10 -6. - صب ثقافة المخفف في بلاستيكية زجاجة عطر المرذاذ معقمة.
ملاحظة: يجب أن يكون الحجم الكلي أكثر مما هو ضروري لعدد من لوحات أجار يجري رش. ما يقرب من 250 ميكرولتر لكل لوحة هو مناسبة ل9 سم القطر طبق بيتري.
7. النمو المؤجلة تثبيط الفحص
- رش الثقافة من خلال كل من زجاجات المرذاذ للتأكد من أن يتم تحميل الثقافة في آلية رذاذ قبل الرش على أجار.
- من مسافة حوالي 15 سم فوق أجار، رش حوالي 250 ميكرولتر من ثقافة المخفف (3 رشاشات من نموذجي 50 مل المرذاذ) على سطح أجار بأكمله. احتضان لوحات أجار عند 37 درجة مئوية هوائيا بين عشية وضحاها. كرر لوحات أخرى مع نفس العدد من الرش.
8. تفسير المؤجلة نتائج إعاقة النمو الفحص
- قياس منطقة تثبيط نمو competi رشتور سلالة (الشكل 1A - C، "X" إلى "X") في ملليمتر، بطرح قطر بقعة مركزية من المانع والمنتج (الشكل 1A - C، "Y" إلى "Y").
ملاحظة: الشكل 1E يبين كيف يمكن تقديم هذه البيانات - تسجيل درجة وضوح للمناطق تثبيط.
ملاحظة: هذا يدل على درجة من تثبيط لوحظ. وتظهر الأمثلة في الشكل 1A - D، واقترح السلالات التي يمكن أن تستخدم لتوحيد في قسم النتائج تمثيلا. مقياس التالية يمكن استخدامها لوضوح التسجيل: درجة وضوح 0 لوصف منطقة تثبيط كامل للنمو السلالة منافس. والنتيجة من 1 لوصف منطقة تثبيط شبه كامل النمو، مع المستعمرات فقط الفردية الموجودة في منطقة المقاصة. وإذا كانت النتيجة 2 لوصف منطقة مرئية من انخفاض النمو، والنمو في هذه المنطقة هو يخدعطلاقة أو بالقرب متموجة ولكن انخفاض في كثافة من قبل> 50٪. والنتيجة من 3 لوصف للحد من نمو الحد الأدنى فقط، والنمو غير متكدسة وبنسبة أقل من 50٪، وهي منطقة لا تزال واضحة وقابلة للقياس. والنتيجة من 4 لوصف أي تثبيط واضح على النمو. إذا كانت النتيجة 5 لوصف أن نمو السلالة منافس وزاد في القرب من اختبار سلالة إنتاج المانع. انظر الشكل 1 للحصول على أمثلة. هذه الحسابات غير موضوعية للاختبارات.
9. مكررات
- كرر فحوصات على الأقل في ثلاث نسخ البيولوجي لتحديد استنساخ النتائج المتحصل عليها.
ملاحظة: إذا يتم تنفيذ مكررات في أيام مختلفة، أخذ قياسات ويسجل لوحات مباشرة بعد إزالة من الحضانة، وبعد ذلك إما لوحات تخزين عند 4 درجات مئوية أو التقاط صور عالية الجودة لوحات قبل التخلص منها. تخزين أو الصور من لوحات تمكن من السهل مقارنة النتائج بين أيام مختلفة، رله أهمية خاصة لتأكيد التسجيل استنساخه عبر أيام / التجارب. كن على علم أن تخزين لوحات لديه القدرة على تغيير النتائج.
ملاحظة: للحصول على واضحة لوحات الصور مكان تستقيم من دون غطاء على خلفية أسود غير لامع في مجال الاضاءة، واستخدام كاميرا عالية الدقة (≥8 MP) قادرة على التركيز على الأجسام القريبة من العدسة (وضع الماكرو). بدلا من ذلك، يمكن لبعض التصوير هلام مع العابرة للإضاءة المقرر أن الضوء الأبيض انتاج عالية الجودة والصور استنساخه للغاية.
النتائج
وينبغي أن تكون نتائج الفحص ملاحظتها أن هناك فرق في سلالة مضافين منافس قرب رصدت مركزيا سلالة إنتاج المانع (الشكل 1). ويمكن تفسير هذه الاختلافات كما تثبيط الكامل (الشكل 1A)، وتثبيط جزئي (1B الشكل و1C)، لا تثبيط (1D الشكل) أو ارتباط إيجابي. المختبر على نطاق واسع سلالات س. البشروية Tü3298 وس. البشروية Rp62A، وس. البشروية Rp62A وس. استخدمت الذهبية نيومان في أرقام 1B و1D على التوالي. نقترح أن هذه السلالات يمكن استخدامها لاختبار هذا البروتوكول.
اعتمادا على الأنواع التي تم اختبارها، وتثبيط الكامل وتثبيط جزئي هم على الأرجح نتيجة الببتيدات المضادة للميكروبات، والمضادات الحيوية أو غيرها من inhibito النمو إنتشاري التمرير التي تنتجها السلالة المنتجة للالمانع. كما تم ربط تثبيط جزئي إلى انخفاض توافر المواد الغذائية لسلالة منافس يرجع إلى امتصاص أو عزل من المواد الغذائية من قبل سلالة المانع 6.
مقارنة بين حجم منطقة تثبيط بين مختلف العزلات المنتجة المانع اختبارها ضد نفس السلالة منافس تشير الاختلافات في أي مما يلي: كمية مضادات الميكروبات التي تنتجها السلالة المنتجة للالمانع. قدرة المانع لنشر عبر وسائل الإعلام. نوع المانع إنتاج ومستوى المقاومة سلالة منافسا لمثبطات يتم إنتاجها. مقارنة بين حجم منطقة تثبيط بين سلالات مختلفة منافس اختبارها ضد نفس السلالة المنتجة للالمانع هي تدل على مستويات مقاومة سلالات منافسا لالمانع التي يتم إنتاجها.
سوف تختلف ithin الصفحات = "1"> النتائج اعتمادا على سلالة المثبطة المستخدمة وسلالة منافس المستخدمة. يجب تكرار استخدام نفس السلالة المثبطة ومنافس لها بشكل مثالي بنفس النتيجة الوضوح (هو موضح في القسم 8.2)، وهذا يدل استخدمت أسلوب جيد طوال الوقت.
إذا حدث التطبيق غير المناسب للبكتيريا لا ينبغي أن تستخدم لوحات. على سبيل المثال، إذا كانت الثقافة اختبار منافس هو أيضا تخفيف ومنطقة تثبيط تبدو أكبر ومع حافة أقل وضوحا من عادة لوحظ (الشكل 2A). هذا من شأنه أن يؤثر على مصداقية أية قياسات منطقة المقارنة. إذا لم تجفف بقعة سلالة إنتاج المانع تماما قبل الحضانة بين عشية وضحاها، ومن المرجح أن تنتشر وليس تشكيل بقعة محددة بشكل واضح (الشكل 2B)، الذي يصيب عادة قياسات منطقة ولكن يمكن أن تؤثر أيضا على وضوح التهديف سلالة المانع. إذا كانت سلالة منافسلا رش بالتساوي وهذا يمكن أن يؤدي إلى انتشار غير المتكافئ للبكتيريا (الشكل 2C). إذا يتركز الضغط منافس جدا فمن الممكن أن سلالة منافس قد تنمو على الجزء العلوي من سلالة المانع (الشكل 2C)، في الحالات القصوى يمكن أن يؤدي ذلك إلى بعض انقلاب الأدوار سلالة منافس / المانع.
الشكل 1: مجموعة من النتائج النوعية والكمية التي يمكن الحصول عليها من نمو المؤجل تثبيط فحص نتائج لتثبيط نمو يمكن أن تتراوح من (أ) تثبيط كامل (درجة 0)، (ب) تثبيط جزئي (درجة 1) (C) تثبيط جزئي (درجة 2) إلى (D) لا تثبيط (برصيد 4). وتشير العلامات حواف نمو سلالات المانع (Y) والحافة الخارجية من تثبيطمناطق (X). حجم منطقة مجموعة تثبيط من 0 ملم إلى أكثر من 10 ملم، كما هو مبين في (E)، مما يدل على قياسات لوحات صورت في A، يتم عرض B، C و D. نتائج لعزلات المكورات العنقودية الأخيرة (A ، C) أو المكورة العنقودية مختبر المشتركة يعزل س. البشروية Tü3298 (المانع) و س البشروية Rp62A (منافس) (B)، وس. البشروية Rp62A (المانع) و س الذهبية نيومان (منافس) (D). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: أمثلة على نتائج غير متناسقة بسبب سوء تقنية قد تظهر نتائج مختلفة من المتوقع إذا (A. ) سلالة منافس وتمييع للغاية، وكان (ب) المانع سلالة لم يجف تماما قبل الحضانة / لوحات لم تكن جافة أو (ج) إذا كان لا رش سلالة منافس بالتساوي وتركزت جدا. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
المناقشة
خطوة مهمة من هذا البروتوكول منافسة الأنواع البكتيرية التي يميزه عن الآخرين، هو الحضانة بين عشية وضحاها من المانع عزل قبل إضافة عزل منافس. يتطلب سلالة المانع هذه الفترة نمو لإنتاج مركبات المثبطة. كما مضافين سلالة منافس على قمة نفس المتوسطة، هذا الأسلوب يسمح للباحث لمراقبة الإمكانات الكاملة من سلالة المانع للتدخل في النمو من سلالة منافس. ونتيجة لذلك، يعكس هذا الاختبار ما يحدث مع الطبيعة؛ تم تأسيس عزلة واحدة تماما في محراب، والآخر يجب أن يكون قادرا على مواجهة أي متغيرات المثبطة لتكون قادرة على غزو بنجاح المتخصصة.
هناك شقان لهذا البروتوكول التي هي الأكثر احتمالا للتسبب نتائج خاطئة إذا أجريت بشكل غير صحيح. أولا، التعقيم غير كامل من زجاجات المرذاذ يمكن إدخال تلوث البكتيريا في الفحص. Incubation من مرق المستخدمة لشطف زجاجة المرذاذ في الخطوة 3.6 في وعاء معقم يمكن استخدامها لتأكيد الزجاجات وتعقيمها تماما. يغسل إضافية في مجال حلول مطهرة، مثل Virkon، ويمكن استخدامها قبل غسل في سطح عامل تنظيف فعال، هو موضح في الخطوة 3.2، إذا كنت بحاجة التعقيم إضافية.
والخطوة الثانية التي قد تسبب نتائج خاطئة تتلخص في تخفيف الضغط منافس (الخطوة 6.1). إذا تمييع هو ليس الأمثل، والقياسات واضحة من تثبيط قد لا يتم بسهولة تحديد. وكان محسن هذا الاختبار باستخدام مختلف العزلات الأنفية كما مثبط لانتاج سلالات عبر مجموعة واسعة من الأنواع إيجابية الجرام وسالبة الجرام مقابل S. الذهبية SH1000 كما 7،8 منافس سلالة. وبعد ذلك تم اختباره باستخدام مختلف العنقوديات المخثرة سلبية والمخثرة إيجابية، ومنافس والسلالات المنتجة المانع. عند اختبار أجناس أخرى غير تلك المذكورة أعلاه كمنافسسلالة، قد يكون من الضروري بعض تعظيم الاستفادة من تخفيف لقيحة.
إذا العشرات وضوح تتفاوت تفاوتا كبيرا بين تكرار، فإنه قد يكون من الضروري توحيد اللقاح منافس سلالة من خلال وضع لكثافة بصرية محددة. ومع ذلك، فإن هذا سوف يزيد من وقت الفحص يأخذ لاقامة، ومن المرجح أن تقلل من عدد من سلالات أنه من الممكن معالجة في التجربة. تعديل بصريا الثقافة إلى OD المناسب باستخدام معيار مكفارلاند قد توفر البديل السريع.
واحد الحد من هذا الأسلوب هو أنه يمكن تطبيقه فقط على البكتيريا زروع. هذا هو السبب في استخدام العديد من الدراسات 16S الريباسي تسلسل للتنبؤ التفاعلات استبعاد تنافسية 3،4،13. ومع ذلك، يمكن أن التقنيات الوراثية وmetagenomic يميز فقط أفراد المجتمع إلى مستوى الأنواع، و / أو لا تمثل بشكل خاص الاختلاف سمة ضمن النوع. فمن الممكن للكشف عن الجمعية من particulع الجينة التي تكود سمة مع وجود أو عدم وجود الأنواع البكتيرية 5، ولكن هذا يتطلب قبل معرفة الجين المرجح أن تكون مرتبطة مع استبعاد الأنواع.
وهناك اعتبار السلامة من هذه التقنية هو أنه نظرا للجيل الهباء الجوي من البكتيريا، ويمكن أن تستخدم إلا في المختبرات مع خزانة السلامة مستوى 2، أو مع احتياطات السلامة مماثلة. هناك تقنيات بديلة لاختبار المنافسة بين العزلات التي تمثل الاختلاف سمة ضمن النوع ولا تولد الهباء الجوي من البكتيريا. واحدة من هذه الطريقة هي في وقت واحد العداء فحص 2. في هذه الطريقة، وتنتشر على اللقاح من عزلة واحدة على لوحة أجار، ورصدت اللقاح عزل الثاني أو طعن على رأس مرة الأولى قد جفت. وهذا من شأنه إنتاج بيئة حيث سلالات هي في منافسة مباشرة (العداء في وقت واحد)، وكلاهما المتنافسة لإنتاج مركبات المثبطة ومسح العناصر الغذائية أولا. والميزه(ه) من المؤجل فحص تثبيط النمو خلال فحص العداء في وقت واحد هو أن عزل المانع يجب أن يكون دائما على ميزة تنافسية من إنشائها بشكل كامل قبل غزو عزل منافس. هذا هو أكثر تعبيرا عن ما يمكن أن يحدث في البيئة، كما هو الحال في معظم المنافذ، وسيتم إنشاء عزلة واحدة قبل أن يتم أضاف سلالة أخرى، بدلا من اثنين العزلات التي تضاف في نفس الوقت 8.
بديل آخر لتجنب توليد الهباء الجوي من البكتيريا سيكون لإضافة منافس عزل في أكبر أجار، التي يمكن أن سكب بدلا من رش على عزل المانع. ومع ذلك، فإن حجم رأس أجار أضاف بحاجة إلى أن ما يقرب من 3 مل لضمان التغطية حتى من لوحة. داخل هذا المجلد، فإن عزل منافس لا يكون المتزايد على نفس وسائل الإعلام مثل عزل المانع، لذلك لن تعاني من انخفاض المواد المغذية. ان منافس أيضا لا تكون على اتصال مباشر مع أي المركبات المثبطة الاتحاد الوطني للعمالايل أنها تنتشر في الجزء العلوي أجار. لا يمكن وصف مثل هذا الفحص كما تثبيط المؤجلة أو العداء في وقت واحد.
وقد سبق أن استخدم طريقة مماثلة لتقييم مستويات المقاومة باسيتراسين بين S. السريري يعزل الذهبية 10. والفرق الرئيسي بين البروتوكول وصفها هنا والتي وصفت من قبل 10 سنوات، وهذا الأخير سلالات منافس السرية فقط كما الحساسة (كاملة الوضوح inhibition- تصبح النتيجة 0) أو المقاومة (جزئي دون وضوح inhibition- يسجل 1-5). لذا يمكن أن تستخدم أيضا المؤجلة فحص تثبيط النمو للكشف عن مستويات المقاومة لمنتجي الأدوية المضادة للميكروبات معينة، أو حتى للبحث عن مضادات الميكروبات جديدة فعالة ضد الجراثيم المقاومة للعقاقير المتعددة.
وقد أشير إلى أن البكتيريا المضيف يمكن التلاعب بها للقضاء على أعضاء غير مرغوب فيه من المجتمع البكتيري 9. تطبيق corynebacteria أو العنقودياتylococcus وقد ثبت البشروية بالفعل للقضاء على س. الاستعمار الذهبية في فتحتي الأنف في نسبة كبيرة من السكان 11،12. وبالتالي قد يؤدي الدراسات إلى سلالات محددة يمكن استبعاد تنافسية أعضاء غير مرغوب فيه من النباتات المضيفة، من خلال تقنيات مثل واحد هو موضح هنا، إلى العلاجات المستقبلية.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
ويتم تمويل المجلس المشترك للبلديات من قبل جائزة BBSRC-IPA مع شركة يونيليفر بي (BB / L023040 / 1). ويتم تمويل HAG من قبل وزارة في المملكة العربية السعودية من التعليم العالي دكتوراه دراسية ل.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مرق ضخ قلب الدماغ | Lab M | lab049 | وسائط غنية للأغراض العامة |
| أجار | ميرك ميليبور | 101614 | |
| أطباق بتري | Sarstedt | 82.1473.001 | |
| مبخر عطر بلاستيكي | غير معروف | - | ارتفاع 10 سم مع زجاجة رذاذ بلاستيكية شفافة بقطر 3.5 سم مع غطاء ، تم شراؤها من قسم السفر في السوبر ماركت |
| زجاجات | لم تعد قيد الإنتاج ، SLS BOT5006 بديل | زجاجة أسطوانية زجاجية 28 مل (قطر ~ 280 مم ، ارتفاع 850 مم) ، قاع مسطح مع غطاء لولبي بلاستيكي | |
| Decon 90 | Decon ؛ | عامل تنظيف السطح النشط |
المراجع
- Bolnick, D. I., et al. Why intraspecific trait variation matters in community ecology. Trends Ecol Evol. 26 (4), 183-192 (2011).
- Christensen, G. J. M., et al. Antagonism between Staphylococcus epidermidis and Propionibacterium acnes and its genomic basis. BMC Genomics. 17 (152), (2016).
- Faust, K., et al. Microbial co-occurrence relationships in the human microbiome. PloS Comput Biol. 8 (7), (2012).
- Frank, D. N., Feazel, L. M., Bessesen, M. T., Price, C. S., Janoff, E. N., Pace, N. R. The Human nasal microbiota and Staphylococcus aureus carriage. PLoS One. 5 (5), e10598(2010).
- Fredheim, E. G., Flaegstad, T., Askarian, F., Klingenberg, C. Colonisation and interaction between S. epidermidis and S. aureus in the nose and throat of healthy adolescents. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 34, 123-129 (2015).
- Hibbing, M. E., Fuqua, C., Parsek, M. R., Peterson, S. B. Bacterial competition: surviving and thriving in the microbial jungle. Nat Rev Microbiol. 8, 15-25 (2010).
- Libberton, B., Coates, R. E., Brockhurst, M. A., Horsburgh, M. J. Evidence that intraspecific trait variation among nasal bacteria shapes the distribution of Staphylococcus aureus. Infect Immun. 82 (9), 3811-3815 (2014).
- Libberton, B., Horsburgh, M. J., Brockhurst, M. A. The effects of spatial structure, frequency dependence and resistance evolution on the dynamics of toxin-mediated microbial invasions. Evol appl. 8, 738-750 (2015).
- Liu, C. M., et al. Staphylococcus aureus and the ecology of the nasal microbiome. Sci Adv. 1, e1400216(2015).
- Nascimento, J. S., Ceotto, H., Nascimento, S. B., Giambiagi-deMarval, M., Santos, K. R., Bastos, M. C. Bacteriocins are alternative agents for control of multiresistant staphylococcal strains. Lett Appl Microbiol. 42, 215-221 (2006).
- Park, B., Iwase, T., Liu, G. Y. Intranasal application of S. epidermidis prevents colonization by methicillin-resistant Staphylococcus aureus in mice. PLoS One. 6 (10), e25880(2011).
- Uehara, Y., et al. Bacterial interference among nasal inhabitants: eradication of Staphylococcus aureus from nasal cavities by artificial implantation of Corynebacterium sp. J Hosp Infect. 44, 127-133 (2000).
- Wos-Oxley, M. L., et al. A poke into the diversity and associations within human anterior nare microbial communities. ISME J. 4, 839-851 (2010).
إعادة الطباعة والأذونات
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن