Method Article

والطريقة غير الغازية ومن الناحية الفنية غير كثيفة للتحريض وPhenotyping التجريبية البكتيرية والالتهاب الرئوي في الفئران

DOI:

10.3791/54508

⸱

September 28th, 2016

 , 
1Immunity, Inflammation and Disease Laboratory, National Institute of Environmental Health Sciences (NIEHS), National Institutes of Health

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد وصفت العديد من الطرق في الأدب لنمذجة الالتهاب الرئوي الجرثومي في الفئران. هنا، نحن تصف غير الغازية، وغير مكلفة، طريقة سريعة لإحداث الالتهاب الرئوي عن طريق الطموح (أي استنشاق) من اللقاح البكتيري pipetted في البلعوم. طرق المصب لتقييم الاستجابة المناعية الفطرية الرئوية هي أيضا مفصلة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

على الرغم من أن الالتهاب الرئوي المكتسب من المجتمع لا يزال يمثل مشكلة صحية عامة رئيسية، ونماذج الفئران من الالتهاب الرئوي البكتيري قد سهلت مؤخرا التقدم قبل السريرية كبيرة في فهمنا للالمرضية الخلوية والجزيئية الكامنة. والنماذج الحية الماوس التقاط علم وظائف الأعضاء المتكاملة ومرونة الاستجابة دفاع المضيف في بطريقة لم تكشف من قبل، فيفو النهج السابق مبسطة بديلة. وقد وصفت العديد من الطرق في الأدب للتلقيح داخل الرئة من البكتيريا في الفئران، بما في ذلك هباء، والتسليم داخل الأنف، بطريق الفم إقناء؛ إدخال القنية القصبة الهوائية في ظل ظروف "العمياء" وتصور، وعبر الجلد إقناء؛ إدخال القنية القصبة الهوائية. كل الطرق لها المزايا النسبية والقيود. هنا، نحن تصف بالتفصيل طريقة غير الغازية، من الناحية الفنية غير كثيفة، وغير مكلفة، وسريع للتسليم داخل القصبة الهوائية من البكتيريا التي ينطوي الطموح (أي استنشاق) عن طريق الماوسلقيحة المعدية pipetted في البلعوم وهو تحت التخدير العام. هذه الطريقة يمكن استخدامها لتسليم الرئوي من مجموعة واسعة من العوامل البيولوجية والكيميائية غير الكاوية، وسهلة نسبيا للتعلم، حتى بالنسبة للمختبرات لديهم خبرة سابقة الحد الأدنى للإجراءات الرئوية. بالإضافة إلى وصف طريقة الالتهاب الرئوي التنفسي، ونحن نقدم أيضا إجراءات خطوة بخطوة لمعايرة اللاحقة في الجسم الحي الاستجابة المناعية الفطرية الرئوية من الفأرة، على وجه الخصوص، وأساليب لقياس إزالة البكتيريا والاستجابة المناعية الخلوية من مجرى الهواء المصاب. هذا نهج متكامل وبسيط لتقييم التهاب رئوي يسمح للتقييم السريع والقوي للتأثير التلاعب الوراثية والبيئية على الحصانة الفطرية الرئوية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لا يزال المجتمع المكتسبة الالتهاب الرئوي هو السبب الرئيسي للوفاة من العدوى في الولايات المتحدة، مع تغير ضئيل عموما في معدلات الوفيات على مدى السنوات ال 40 الماضية على الرغم من التحسينات في التطعيم واستراتيجيات المضادات الحيوية 1،2. وعلى الرغم من عدم إحراز تقدم ملموس على مستوى الصحة العامة، في السنوات الأخيرة تم إحراز تقدم كبيرة في فهمنا للالمرضية الجزيئية والخلوية من الالتهاب الرئوي، مع العديد من هذه الخطوات جعل الأمام ممكن عن طريق استخدام نماذج الماوس من التهاب في الرئتين. وقابلية الإستطراق الوراثي للفأرة، والتشابه من الفئران وجهاز المناعة البشرية، ومجموعة واسعة من الكواشف المناعية التي تستهدف الفئران التي أصبحت متا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أجريت جميع التجارب وفقا لقانون رعاية الحيوان وسياسة دائرة الصحة العامة الأميركية على الرعاية الإنسانية واستخدام الحيوانات المختبرية بعد مراجعة من قبل رعاية الحيوان واستخدام اللجنة لعلوم الصحة البيئية.

1. إعداد ك. الرئوية الثقافة

الحذر: تنفيذ جميع الخطوات في 2 (BSL2) هود مستوى السلامة الحيوية أو غيرها من مجال معين BSL2 وتجاهل النفايات في المبادئ التوجيهية BSL2 المعهد.

  1. للنمو تعليق ك. الرئوية،....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أصيب C57BL / 6 الفئران مع 2000 كفو من ك. الرئوية 43816 (النمط المصلي 2) عن طريق الفم والبلعوم التطلع إلى الرئتين. عند هذه الجرعة، والفئران عادة ما تبدأ في إظهار أعراض سريرية 12-24 ساعة بعد العدوى بما في ذلك الخمول، والفراء تكدرت، وفقدان الوزن من 5-10٪ (الشكل 2A). في غضون 48-72 ساعة بعد الإصابة، وكثير من الفئران تظهر أعراض المرض والاعتلال التي عادة ما تسبق بمعدل فقدان الوزن 20٪ والنتائج في المواقف منحنية مع انخفاض النشاط وا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نماذج الفئران من الالتهاب الرئوي الجرثومي، في شراكة مع استهداف الجينات وفي التدخلات البيولوجية والدوائية الجسم الحي، وقدمت أفكارا هامة في الاستجابة دفاع المضيف الرئوية. وقد تقدما كبيرا ولا سيما في فهمنا للكيموكينات وجزيئات الالتصاق التي تحكم توظيف العدلات إلى المجال الجوي المصاب 10،11. وفي النماذج الحية من الالتهاب الرئوي، على عكس النهج القائم على خلية أو بديلة، وقد وفرت أيضا أفكارا رئيسية في الغدد الصماء الاتصالات التي تحدث بين الرئة.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل برنامج البحوث الداخلية للمعاهد الوطنية للصحة ، المعهد الوطني لعلوم الصحة البيئية (Z01 ES102005).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Klebsiella pneumoniae ، النمط المصلي 2ATCC43816
مرق الصويا الترابطيBecton Dickenson211825
Excel Safelet IV القسطرة ، 18 جم × 1 1/4 "كلافلين للمعدات الطبيةMEDC-031122
Hema 3 Solution 1Fisher23-122-937
Hema 3 Solution 2Fisher23-122-952
Hema 3 FixativeFisher23-122-929
27 & frac12; محاقن قياس السلفيشر14-826-87
جامعي بلازما الهيبارين الليثيومفيشر2675187
موزعات يمكن التخلص منها على شكل حرف Lمختبر ScientificDSC
1x PBS ، درجة الحموضة 7.4محضرة داخلياغيرمتوفرةالماء المقطر (5 لتر) ، كلوريد الصوديوم (40 غرام) ، كلوريد الصوديوم (1 غ) ، Na2HPO4 (5.75 g), KH2PO4 (1 g)     
مخزن تحلل ACKمعد داخلياn / aNH4< / sub>Cl (4.145 جم) ، KHCO3< / sub> (0.5 جم) ، EDTA (18.6 مجم) ، يصل إلى 500 مل بالماء المقطر ودرجة الحموضة إلى 7.4

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mizgerd, J. P. Acute lower respiratory tract infection. N Engl J Med. 358 (7), 716-727 (2008).
  2. Waterer, G. W., Rello, J., Wunderink, R. G. Management of community-acquired pneumonia in adults. Am J Respir Crit Care Med. 183 (2), 157-164 (2011).
  3. Mizgerd, J. P., Skerrett, S. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Bacterial PneumoniaMouse ModelOropharyngeal AspirationPulmonary Innate ImmunityBacterial ClearanceLung InfectionHost Defense ResponseBronchoalveolar LavageTissue HomogenizationCFU Quantification

Related Articles