مقالة منهجية

جيل من اللونين مستضد ميكروأرس للكشف في وقت واحد من مفتش والغلوبولين المناعي الأجسام المضادة الذاتية

DOI:

10.3791/54543

⸱

سبتمبر 15, 2016

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Multi-Organ Transplant Program, University Health Network, 2Institute of Medical Science, University of Toronto, 3Divison of Neurosurgery, University Health Network, 4Division of Cardiac Surgery, University Health Network

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نصف هنا طريقة لإنشاء مصفوفات مستضد دقيقة قابلة للتخصيص يمكن استخدامها للكشف المتزامن عن الأجسام المضادة الذاتية IgG و IgM في الدم من البشر والفئران. تسمح هذه المصفوفات بالكشف الكمي والإنتاجية العالية للأجسام المضادة ضد أي مستضدات أو حواتم ذات أهمية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأجسام المضادة الذاتية ، وهي أجسام مضادة ضد المستضدات الذاتية ، موجودة في العديد من الحالات المرضية ويمكن أن تكون بمثابة علامات لنشاط المرض. عادة ما يتم الكشف عن مستويات الأجسام المضادة الذاتية لمستضدات معينة باستخدام تقنية مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). ومع ذلك ، يمكن أن يستغرق فحص الأجسام المضادة الذاتية المتعددة باستخدام ELISA وقتا طويلا ويتطلب كمية كبيرة من عينة المريض. تقنية المصفوفة الدقيقة للمستضد هي طريقة بديلة يمكن استخدامها للكشف عن الأجسام المضادة الذاتية بطريقة متعددة الإرسال. في هذه التقنية ، يتم ترتيب المستضدات على شرائح مجهر مطلية بشكل خاص باستخدام مصفوفة دقيقة آلية. يتم فحص الشرائح بعينات مصل المريض ، وبالتالي تتم إضافة الأجسام المضادة الثانوية المسماة بالفلورسنت للكشف عن ارتباط الأجسام المضادة الذاتية في المصل بالمستضدات. يتم الكشف عن تفاعلات الأجسام المضادة الذاتية وقياسها كميا عن طريق مسح الشرائح باستخدام ماسح ضوئي يمكنه اكتشاف إشارات الفلورسنت. نصف هنا طرق إنشاء مصفوفات مستضد دقيقة مخصصة. تتم طباعة المصفوفات الحالية الخاصة بنا ب 9 دبابيس صلبة ويمكن أن تتضمن ما يصل إلى 162 مستضدا مرقطا في نسختين. يمكن تخصيص المصفوفات بسهولة عن طريق تغيير المستضدات في لوحة المصدر التي يستخدمها المصفوفة الدقيقة. لقد طورنا مخططا للكشف عن الأجسام المضادة الثانوية بلونين يمكنه التمييز بين تفاعلات IgG و IgM على نفس سطح الشريحة. تم تحسين نظام الكشف لدراسة ارتباط الأجسام المضادة الذاتية للإنسان والفئران.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأجسام المضادة الذاتية موجودة في العديد من الحالات المرضية ويمكن أن يكون لها نشاط ممرض مباشر1. يعد تحديد الأجسام المضادة الذاتية أمرا مهما لتشخيص أمراض معينة ، وتشخيص نتائج المرض ، ولتصنيف المرضى الذين قد يستفيدون من علاجات محددة2. عادة ما يتم تحديد الأجسام المضادة الذاتية في مصل المريض باستخدام تقنية ELISA. ومع ذلك ، فإن فحص مستضدات متعددة بهذه التقنية شاق ويستهلك كمية كبيرة من عينة المريض. لذلك هناك حاجة إلى تقنيات جديدة لتحديد الأجسام المضادة الذاتية على نطاق أوسع.

تقنية المصفوفة الدقيقة للمستضد هي تقنية بروتينية تسمح بتحديد الأجسام المضادة الذاتية بطريقة متعددةالإرسال 3. في الخطوة الأولى من هذه العملية ، يتم ترتيب مكتبة مستضد على سطح منزلق باستخدام مصفوفة دقيقة آلية. يتم فحص الشرائح بمصل مخفف ثم تضاف الأجسام المضادة الثانوية المسماة بالفلورسنت. يتم تصور تفاعلات الأجسام المضادة عن طريق مسح الشرائح باستخدام ماسح ضوئي للمصفوفة الدقيقة وقياسها كميا من خلال شدة الفلورسنت. توفر المصفوفات الدقيقة للمستضد مزايا متعددة مقارنة بتقنية ELISA في فحص الأجسام المضادة الذاتية: 1) تتطلب ميكرولترا فقط من المصل لتشكيل الأجسام المضادة الذاتية لمستضدات متعددة في وقت واحد ، 2) تستخدم المستضد باعتدال ، حيث يتم رصد نانولترات فقط من المستضد على المصفوفات ، 3) لقد عززت الحساسية3 مقارنة ب ELISA و 4) تسمح بالتزامن حتى الآن ، الكشف المنفصل عن أكثر من نمط إسوي واحد للجسم المضاد. تم استخدام المصفوفات الدقيقة للمستضد لتحديد الأجسام المضادة الذاتية في أمراض المناعة الذاتية مثل التهاب المفاصل الروماتويدي والتصلب المتعدد والذئبة الحمامية الجهازية4-6. في جميع هذه الأمراض الثلاثة ، تم الحصول على نظرة ثاقبة جديدة للتسبب في المرض من توصيف الأجسام المضادة الذاتية على نطاق واسع باستخدام المصفوفات.

هنا نصف بروتوكولا لإنشاء مصفوفات دقيقة للمستضد باستخدام شرائح مغلفة بالنيتروسليلوز. يمكن ترتيب مجموعة متنوعة من المستضدات بما في ذلك البروتينات والببتيدات ومحللات الخلايا على الشرائح باستخدام هذه التقنية. يمكن تخصيص المصفوفات بسهولة من خلال تضمين المستضدات ذات الأهمية في لوحة المصدر التي تحتوي على مكتبة المستضد. بالإضافة إلى ذلك ، نوضح كيف يمكن استخدام زوج من الأجسام المضادة الثانوية لفصل تفاعلات IgG و IgM على نفس سطح الشريحة. لقد قمنا الآن بتحسين هذه التقنية لقياس الأجسام المضادة الذاتية في كل من البشر والفئران.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تمييع المستضدات وتوليد مستضد ميكروأرس

  1. تمييع المستضدات في برنامج تلفزيوني لتركيز النهائي من 0.2 ملغ / مل. طباعة ما يصل إلى 162 مستضدات فريدة من نوعها في مكررة مع تكوين microarrayer مع 9 دبابيس. تشمل مفتش والغلوبولين المناعي المستضدات في المكتبة مستضد الضوابط الإيجابية. يشمل برنامج تلفزيوني فقط كوسيلة لمراقبة سلبية.
  2. إضافة 20 ميكرولتر من كل مستضد لوحة مصدر جيدا 384. إضافة مستضدات لوحة مصدر في الجماعات التي تعكس الإعداد لرأس الطباعة (على سبيل المثال، وترتيب المستضدات في مجموعات من 9 عندما تستخدم 9 دبابيس للطباعة).
  3. لوحة الغلاف مصدر احباط وتجميد في -80 درجة مئوية حتى جاهزة للطباعة المصفوفات.
  4. تنظيف دبابيس microarrayer الصلبة التي يحتضنها منهم في حمام sonicating مع الماء منزوع الأيونات لمدة 3 × 1 دقيقة. دبابيس مكان في الرف حتى يجف ثم ترتيب الدبابيس في رأس الطباعة ميكروأري. ل9 دبابيس، استخدام تكوين 3 × 3.
  5. microarrayer برنامج للطباعة تديرها وضع دبابيس الرقم على رأس الطباعة،عدد من الشرائح لطباعة، وعدد من منصات على كل شريحة، وعدد من البقع تكرار لكل مستضد. عادة، استخدم 9 دبابيس، 70 الشرائح، 2 منصات / الشرائح، و 2 البقع تكرار لكل مستضد. microarrayer برنامج ليصوتن المسامير في المياه بين مجموعات مختلفة من المستضدات.
  6. لوحة مصدر ذوبان الجليد ولوحة ثم الطرد المركزي لمدة 1 دقيقة في 100 × ز. وضع لوحة مصدر في بقعة معينة في microarrayer. إزالة قسم من رقائق أن تغطي المجموعة الأولى من مولدات المضادات التي سيتم طباعتها.
  7. ترتيب الشرائح غير مطبوع على سطح arrayer وبرنامج تشغيل الطباعة. طباعة الشرائح في RT مع الرطوبة وضعت على arrayer في 55-60٪ مع البناء في المرطب للآلة مجموعة.
  8. بعد طباعة كل مجموعة من المستضدات على كافة الشرائح، وقفة microarrayer. تغطية مولدات المضادات التي طبعت فقط مع رقائق (لمنع التبخر) وكشف المجموعة التالية من مولدات المضادات التي سيتم طباعتها. يواصل برنامج الطباعة.
  9. بعد وقد طبعت جميع مولدات المضادات، مصدر غطاء ررأكل مع قطعة جديدة من احباط وتجميد في -80 درجة مئوية. وضع الشرائح المطبوعة في مربع الشريحة وختم فراغ. ويمكن استخدام الشرائح في اليوم التالي أو بعد شهر واحد.

2. جس مستضد ميكروأرس مع المخفف سيرا

  1. وضع الشرائح في الإطارات باستخدام غرف الحضانة. إضافة 700 ميكرولتر من عرقلة العازلة (2.5٪ [المجلد / المجلد] الجنين مصل العجل (FCS)، 0.1٪ [المجلد / المجلد] توين 20 في برنامج تلفزيوني) على كل سطح صفيف.
  2. وضع فيلم لاصقة أكثر من إطار وضعها في حاوية مغلقة مع قطعة من النسيج الرطب. احتضان O / N عند 4 درجات مئوية على الكرسي الهزاز.
  3. تمييع عينات مصل 1: 100 في عرقلة العازلة. نضح عرقلة الحل من المصفوفات وإضافة 500 ميكرولتر من العينة المخففة على كل سطح صفيف.
  4. مع تغطية فيلم لاصق واحتضان لمدة 1 ساعة على 4 درجات مئوية مع هزاز.
  5. تمييع الأجسام المضادة الثانوية في عرقلة العازلة. للدراسات الإنسانية، وتمييع الأجسام المضادة مفتش و Cy3 المسمى الماعز مكافحة الإنسان إلى 0.33 ميكروغرام / مل وCy5 المسمى الماعز المضادة للهومان الغلوبولين المناعي الأجسام المضادة إلى 0.25 ميكروغرام / مل. للدراسات الماوس، وتمييع لو Cy3 المسمى الماعز المضادة للماوس مفتش الأضداد إلى 0.38 ميكروغرام / مل وCy5 المسمى الماعز المضادة للماوس الغلوبولين المناعي الأجسام المضادة إلى 0.7 ميكروغرام / مل.
  6. عينات نضح من المصفوفات وشطف السطوح مجموعة 4 مرات مع العازلة شطف (0.1٪ توين 20 في برنامج تلفزيوني). صب العازلة على الشرائح ونفض الغبار قبالة بسرعة.
  7. إضافة 700 ميكرولتر من عرقلة العازلة لغسل كل سطح مجموعة واحتضان 10 دقيقة في RT مع هزاز. كرر غسل خطوتين أكثر من مرة.
  8. إضافة 500 ميكرولتر من الأجسام المضادة الثانوية المخفف على كل سطح الشريحة، وتغطي مع فيلم لاصق. احتضان 45 دقيقة على 4 درجات مئوية مع هزاز.
  9. نضح مزيج الأجسام المضادة الثانوية من الشرائح وشطف 4 مرات على النحو الوارد أعلاه. غسل الشرائح 3 مرات مع 700 ميكرولتر من عرقلة العازلة / التخفيف على النحو الوارد أعلاه.
  10. إزالة الشرائح من الإطارات وضعها في معدن الرف الشريحة التي هي مغمورة في برنامج تلفزيوني. احتضان 20 دقيقة في RT مع الهز المداري. وضع في حاوية جديدة من برنامج تلفزيوني واحتضان 20 م آخرفي مع اهتزاز.
  11. مكان رف الشريحة في حاوية من الماء منزوع الأيونات 15 ثانية. وضع رف في حاوية جديدة للمياه واحتضان 15 ثانية أخرى.
  12. على الشرائح الجافة، مكان الرف الشريحة على محول لوحة ELISA في أجهزة الطرد المركزي وتدور في 220 x ج لمدة 5 دقائق على RT.
  13. وضع الشرائح في ضوء مربع محكم حتى على استعداد للمسح الضوئي.

3. المسح مستضد ميكروأرس وبيانات المصدرة لل

  1. الشرائح المسح الضوئي باستخدام ماسح ضوئي ميكروأري التي يمكن الكشف عن و Cy3 Cy5 الإشارات الفلورسنت. من أجل ضبط أنبوب مضخم (PMT) مستويات الماسح الضوئي، قبل مسح الشريحة التي تم بحثها فقط مع الأجسام المضادة الثانوية.
    ملاحظة: يجب أن يكون هذا الانزلاق المكتبة مستضد كامل مطبوع عليها بما في ذلك إيجابيا (مفتش والغلوبولين المناعي)، وكذلك الضوابط سلبية (PBS). ما قبل الفحص الفحص منخفض القرار الذي يسمح للمستخدم بسرعة للعثور على إعدادات PMT المثلى.
  2. تعيين القيم PMT بحيث ملامح الإنسان مفتش (على قناة و Cy3) وهمهمةوميزات الغلوبولين المناعي (على قناة Cy5) لديها مماثلة متوسط ​​كثافة مضان ناقص الخلفية (MFI-B) (عادة 40000). يتم تعيين مستويات PMT عن طريق الضغط على زر "الأجهزة". مجموعة مرة واحدة، والحفاظ على هذه الإعدادات PMT ثابت.
  3. مسح الشرائح التجريبية على قناتين عن طريق الضغط على زر "مسح". حفظ الصور الشريحة (كل القنوات) بعد كل فحص.
  4. تحميل الشرائح ليتم تحليلها في البرنامج ميكروأري باستخدام زر "ملف".
  5. تحميل ملف قائمة مجموعة الجينات (GAL) باستخدام زر "ملف". الملف غال لديه تخطيط مجموعة مع هويات ميزات مجموعة.
  6. وضع قالب مجموعة فوق الصورة الممسوحة ضوئيا بحيث صفائف ميزات تطابق قالب قدر الإمكان.
  7. محاذاة الميزات في جميع الكتل مع القالب عن طريق الضغط على زر "محاذاة". هذا البرنامج سوف تجد عموما الخطوط العريضة لملامح الدائرية ولكن بعض التعديلات اليدوية التي قد تكون ضرورية. هذه التعديلات يمكن عن طريق إدخال وضع الميزة. يقوم البرنامج ثم حساب مؤسسات التمويل الأصغر-B لكل من المستضدات.
  8. استخدم زر "ملف" لتصدير هذه النتائج كملف نصي.

4. تحليل البيانات صفيف مع تحليل أهمية ميكروأرس (SAM)

  1. تحميل ملفات نصية الفردية في التفوق وتحديد الأعمدة التي لها مؤسسات التمويل الأصغر-B للقنوات و Cy3 Cy5.
  2. حساب متوسط ​​للميزات مكررة.
  3. للحصول على أي سلبي MFI-B، استبدل رقم سالب مع 10. تحويل البيانات من خلال تقسيم الخام MFI-B في 100 وبعد ذلك عن طريق حساب قاعدة سجل 2.
  4. تحليل البيانات المحولة سجل مع تحليل أهمية ميكروأرس (SAM) كما هو موضح سابقا 7.
  5. لدراسة استخدام مجموعتين (على سبيل المثال، من الاصحاء مقابل المرضى)، والتسمية مجموعة واحدة "1" ومجموعة "2." استخدام من الدرجة الثانية، تحليل أونبايريد في SAM لتحديد المستضدات نشاطية أن لياليمختلفة ignificantly بين المجموعتين (قيمة ف <0.05).
  6. استخدام تجميع وتوليد الحرارة خريطة البرامج لجعل الصور لعرضها 8.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم ترتيب المستضدات في لوحة جيدا 384 وطباعتها على الشرائح من قبل microarrayer الروبوتية كما هو مبين في الشكل رقم 1 يبين الشكل 2 شرائح توضع في الإطار مع غرف حضانة وشريحة فحصها بعد المعالجة. ويبين الشكل 3 الشرائح الموجبة والسالبة السيطرة. وسبرت الشريحة السلبية فقط مع الأجسام المضادة الثانوية، وحققت في الشرائح مراقبة إيجابية مع المصل من المريض مع الذئبة الحمامية الجهازية. باستخدام اثنين من الأجسام الم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بروتوكول صفها هنا يسمح لتقدير حجم الأجسام المضادة باستخدام تقنية مستضد ميكروأري. ميكروأرس المستضد توفر العديد من المزايا ELISA التقليدية في الكشف عن الأجسام المضادة. أولا وقبل كل شيء، مجموعة متنوعة من مولدات المضادات بما في ذلك الأحماض النووية والبروتينات والببتيدات، ولست] خلية يمكن المحتشدة على الشرائح المغلفة النيتروسليلوز، وبالتالي السماح للفحص المضاعفة من الأجسام المضادة. وبالإضافة إلى ذلك، ميكروغرام فقط من المستضد ضرورية لتوليد صفائف منذ ورصدت nanoliters المستضد على كل شريحة....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A.C. تم دعمه من خلال زمالة ما بعد الدكتوراه من مؤسسة القلب والسكتة الدماغية في كندا وبرنامج التدريب في الطب التجديدي (المعاهد الكندية للبحوث الصحية). تم دعم F.Y.Y.H. من قبل برنامج التدريب في الطب التجديدي. تم تمويل هذا العمل بمنحة من Astellas Pharma Canada. نود أيضا أن نشكر الدكتور مارك مينينغيني (جامعة تورنتو) على استخدام ماسح Axon microarray الخاص به.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Ribosomal P0Diarect14100إلى 0.2 مجم / مل في PBS
البشري IgGJackson Immuno009-000-003مخفف إلى 0.2 مجم / مل في PBS
البشري IgMJackson Immune009-000-012مخفف إلى 0.2 مجم / مل في
ماوس PBS IgGSigma-AldrichI5381مخفف إلى 0.2 مجم / مل في ماوس PBS
IgMBiolegend401601يخفف إلى 0.2 مجم / مل في PBS
مزدوج الشريطة DNASigma-AldrichD1626مخفف إلى 0.2 مجم / مل في PBS
أحادي الشريطة DNASigma-AldrichD8899مخفف إلى 0.2 مجم / مل في PBS
microarrayerVirtekVersArray Chipwriter Proالعديد من أنواع المصفوفات مناسبة
دبابيس الطباعة الصلبةArrayit CorporationSSP015
برنامج للمصفوفة الدقيقة الروبوتيةVirtekChipwriter Pro & nbsp ؛
شرائح سريعة (2 وسادة)GVS Northa America10485317
إطار سريعGVS Northa America10486001
غرف حضانة سريعة (2 وسادة)GVS Northa America10486242
384 لوحة بئرWhatman7701-5101
ألواح السدادةVWR60941-062
أغطيةألواح رقائق معدنيةVWR60941-124
Tween-20Fisher ScientificBP337-500
مصل عجل الجنينInvitrogen12483020
Cy3 الماعز المضاد للإنسان IgGJackson Immune109-165-096استخدام مخزون العمل في 50٪ glyercol
Cy5 الماعز المضاد للإنسان IgMJackson Immuno109-175-129استخدام مخزون العمل في 50٪ glyercol
Cy3 الماعز استخدام مخزون العمل المضاد للفأر IgGJackson Immuno115-165-071في 50٪ glyercol
Cy5 الماعز المضاد للفأر IgMJackson Immune115-175-075استخدام مخزون العمل في 50٪ glyercol
Microarray Scannerالأجهزة الجزيئيةAxon 4200A
Microarray Softwareالأجهزة الجزيئيةGenepix 6.1
التجميعeisenlab.orgCluster 3.0
Heatmapeisenlab.orgTreeview 1.60
Microarray الإحصائيبرنامج جامعة ستانفوردSAM 4.0 (تحليل أهمية المصفوفات الدقيقة)
يخفف برنامج برنامج

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Naparstek, Y., Plotz, P. H. The role of autoantibodies in autoimmune disease. Annu Rev Immunol. 11, 79-104 (1993).
  2. Damoiseaux, J., Andrade, L. E., Fritzler, M. J., Shoenfeld, Y. Autoantibodies 2015: From diagnostic biomarkers toward prediction, prognosis and prevention. Autoimmun Rev. 14, 555-563 (2015).
  3. Robinson, W. H., et al. Autoantigen microarrays for multiplex characterization of autoantibody responses. Nature. medicine. 8, 295-301 (2002).
  4. Quintana, F. J., et al. Antigen microarrays identify unique serum autoantibody signatures in clinical and pathologic subtypes of multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105, 18889-18894 (2008).
  5. Hueber, W., et al. Antigen microarray profiling of autoantibodies in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 52, 2645-2655 (2005).
  6. Price, J. V., et al. Protein microarray analysis reveals BAFF-binding autoantibodies in systemic lupus erythematosus. J. Clin. Invest. 123, 5135-5145 (2013).
  7. Tusher, V. G., Tibshirani, R., Chu, G. Significance analysis of microarrays applied to the ionizing radiation response. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98, 5116-5121 (2001).
  8. Eisen, M. B., Spellman, P. T., Brown, P. O., Botstein, D. Cluster analysis and display of genome-wide expression patterns. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95, 14863-14868 (1998).
  9. Chruscinski, A., et al. Generation of Antigen Microarrays to Screen for Autoantibodies in Heart Failure and Heart Transplantation. PloS one. 11, e0151224(2016).
  10. Price, J. V., et al. Characterization of influenza vaccine immunogenicity using influenza antigen microarrays. PloS one. 8, e64555(2013).
  11. Singh, H., et al. Reactivity profiles of broadly neutralizing anti-HIV-1 antibodies are distinct from those of pathogenic autoantibodies. Aids. 25, 1247-1257 (2011).
  12. Porcheray, F., et al. Chronic humoral rejection of human kidney allografts associates with broad autoantibody responses. Transplantation. 89, 1239-1246 (2010).
  13. Haddon, D. J., et al. Mapping epitopes of U1-70K autoantibodies at single-amino acid resolution. Autoimmunity. 48, 513-523 (2015).
  14. Schroeder, H. W. Jr, Cavacini, L. Structure and function of immunoglobulins. J Allergy Clin Immunol. 125, S41-S52 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Antigen MicroarrayAutoantibody DetectionTwo color DetectionIgG IgM DetectionMicroarray PrintingSerum ProbingFluorescent ScanningPBS BlockingSecondary AntibodySlide Alignment

مقالات ذات صلة