هذه الطريقة على حبة لوصفها الأجسام المضادة مع جزيئات صغيرة يمكن وصفها من كمية صغيرة من الأجسام المضادة مباشرة من وسائل الاعلام الخلية. هذا الأسلوب هو متوافق مع أمين والكيمياء ثيول، ويمكن التعامل مع عينات متعددة في نفس الوقت، يدويا أو باستخدام منصات الآلي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الأجسام المضادة وصفها مع الأصباغ نيون عن طريق المغناطيسي البروتين والبروتين الخرز G
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الأجسام المضادة المسمى مع جزيئات صغيرة مثل الأصباغ الفلورية، والأدوية السامة للخلايا، واستشفاف المشعة هي أدوات أساسية في البحوث الطبية الحيوية، المناعي، ومؤخرا كعوامل علاجية. الأساليب التقليدية للأجسام المضادة وسم مع جزيئات صغيرة تتطلب تنقية الأجسام المضادة في تركيز عال نسبيا، تنطوي على خطوات غسيل الكلى متعددة وحدت الإنتاجية. ومع ذلك، العديد من التطبيقات، بما في ذلك مجال الأجسام المضادة المخدرات تقارن (ADCS)، وسوف تستفيد من وسائل جديدة من شأنها أن تسمح بوضع العلامات على أجسام مضادة مباشرة من وسائل الاعلام الخلية. هذه الأساليب قد تسمح الأجسام المضادة إلى أن عرض في فحوصات ذات الصلة من الناحية البيولوجية، على سبيل المثال، بوساطة مستقبلات الأجسام المضادة استيعاب فحص في حالة ADCS. هنا، نحن تصف (الطريقة على حبة) الطريقة التي يمكن وصفها كميات صغيرة من الأجسام المضادة مباشرة من وسائل الاعلام الخلية. هذا النهج يستخدم قدرة عالية المغناطيسي البروتين والبروتين G الخرز تقارب لالتقاط الأجسام المضادةمن وسائل الإعلام خلية يليه وضع العلامات مع جزيئات صغيرة باستخدام إما أمين أو الكيمياء ثيول وشطف لاحق من الأجسام المضادة المسمى. أخذ الأصباغ الفلورية كبديل عن جزيئات صغيرة، ونحن لشرح وضع العلامات على حبة من ثلاثة أجسام مختلفة الماوس مباشرة من وسائل الإعلام خلية باستخدام كل من أمين وثيول وضع العلامات الكيمياء. تقارب ملزم عالية من الأجسام المضادة لبروتين ألف والبروتين G يضمن استرداد عالية، فضلا عن نقاء عالية من الأجسام المضادة المسمى. وبالإضافة إلى ذلك، استخدام الخرز المغناطيسي يسمح عينات متعددة ليتم التعامل معها يدويا، وبالتالي تحسين كبير وضع العلامات الإنتاجية.
المقدمة
الأجسام المضادة المسمى مع جزيئات صغيرة ربما تكون الكواشف المستخدمة الأكثر شيوعا في 1،2 علم الأحياء. وتستخدم الأجسام المضادة المسمى مع الأصباغ الفلورية والبيوتين على نطاق واسع في مجال التصوير، المناعية، التدفق الخلوي، البقع الغربية، ومناعي بين التطبيقات الأخرى 3-6. الأجسام المضادة رديولبلد 3،7 يجد استخدام واسع النطاق في مجال التصوير والعلاج، والأجسام المضادة المسمى مع الأدوية السامة للخلايا (ADCS) هي التي تقدم خيارات جديدة لعلاج السرطان، وسبق أن وافق اثنان ADCS للاستخدام العلاجي 8. على الرغم من استخدامها واسعة النطاق، ظلت الطرق للأجسام المضادة وصفها دون تغيير مفاجئ وعادة ما تنطوي على ت....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. الأجسام المضادة القبض على سعة عالية البروتين المغناطيسي (أ) أو البروتين المغناطيسي الخرز G
- بشكل موحد إعادة تعليق الخرز المغناطيسية التي تهز لطيف. إبقاء الزي تعليق عندما aliquoting الخرز.
- إضافة 50 ميكرولتر من الطين حبة لأنبوب microcentrifuge 1.5 مل. ضع في الوقوف المغناطيسي لمدة 10 ثانية. إزالة بعناية المخزن المؤقت التخزين.
- إضافة 250 ميكرولتر من العازلة ملزم الأجسام المضادة.
- خلط ووضع في موق....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويرد التخطيطي لوصفها الأجسام المضادة مع جزيئات صغيرة باستخدام قدرة عالية المغناطيسي البروتين والبروتين G حبات في الشكل 1. الأجسام المضادة القبض على البروتين المغناطيسي الخرز G يمكن أن يكون المسمى مع جزيئات صغيرة، على سبيل المثال الأصباغ الفلورية، وذلك باستخدام إما الكيمياء أمين التي تصف الأمينات الأولية من الأحماض الأمينية ليسين أو باستخدام الكيمياء ثيول التي تصف في خفض التجولات في المنطقة المفصلي من الأجسام المضادة. تقارب بين الأج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وكان الهدف من هذه الدراسة هو تطوير طريقة لتسمية الأضداد، موجودة في وسائل الإعلام خلية في تركيزات منخفضة، مع مجموعة متنوعة من الجزيئات الصغيرة. هذه طريقة تسمح لعدد كبير من الأجسام المضادة، خلال المراحل المبكرة من اكتشاف الأجسام المضادة، ليكون المسمى مع جزيئات صغيرة وفحص باستخدام فحص بيولوجيا. واحدة من هذه مقايسة هو بوساطة مستقبلات الأجسام المضادة استيعاب فحص حيث قد تختلف داخليا بين الأجسام المضادة حتى مع الانتماءات الملزمة مماثلة. وبالتالي، فمن المهم لفحص الأجسام المضادة خصيصا لخصا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
المؤلفون هم موظفون في شركة Promega.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Magne Protein A Beads | Promega Corporation | G8781 | |
| ماغني بروتين G الخرز | شركة Promega Corporation | G7471 | |
| AlexaFluor 532-SE (Succinimidyl Ester) | Life Technologies | A20001 | |
| AlexaFluor 532-ME (Malemide) | Life Technologies | A10255 | |
| AlexaFluor 647-ME (Maleimide) | Life Technologies | A20347 | |
| Fluorescein-ME (Maleimide) | Life Technologies | F-150 | |
| حامل مغناطيسي | Promega | Z5332 |
المراجع
- Colwill, K., Graslund, S. Renewable Binder Working Group. A roadmap to generate renewable protein binders to the human proteome. Nat Methods. 8 (7), 551-558 (2011).
- Silverstein, A. M. Labeled antigens and antibodies: the evolution of magic markers and magic bullets.<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
