مقالة منهجية

الناجم المحفزة الجيل الخلايا الجذعية من خلايا الدم عن طريق سينداي الفيروسات والطرد المركزي

DOI:

10.3791/54650

⸱

ديسمبر 21, 2016

 ,  , 
1CiSTEM Laboratory, Convergent Research Consortium for Immunologic Disease, Seoul St. Mary's Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea, 2Division of Rheumatology, Department of Internal Medicine, Seoul St. Marys Hospital, Institute of Medical Science, College of Medicine, The Catholic University of Korea

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< ص الفئة = 'jove_content'>نقترح بروتوكولا لإعادة برمجة خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMCs) إلى خلايا جذعية مستحثة متعددة القدرات (iPSCs). عن طريق طلاء خلايا الدم المنقولة على لوحات المغلفة بالمصفوفة مع الطرد المركزي, يتم تحفيز iPSCs بنجاح من الخلايا العائمة. تقترح هذه التقنية بروتوكول إعادة برمجة بسيط وفعال لخلايا مثل PBMCs و CBMCs.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أثبتت التطورات الأخيرة من صنع الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة (hiPSCs) أن الخلايا الجسمية الناضجة يمكن ان يعود الى وجود دولة المحفزة غير متمايزة. الآن، ويتم إعادة برمجة مع أنواع مختلفة من الخلايا الجسدية للبالغين: الكيراتينية والخلايا البول، والخلايا الليفية، الخ وعادة ما فعلت التجارب المبكرة مع الخلايا الليفية الجلدية. ومع ذلك، وهذا يتطلب إجراء العمليات الجراحية الغازية للحصول على الخلايا الليفية من المرضى. لذلك، فإن الخلايا تعليق، مثل خلايا الدم والبول، واعتبرت مثالية لإعادة البرمجة وذلك بسبب سهولة الحصول على الخلايا الأولية. هنا، ونحن التقرير بروتوكول كفاءة لتوليد IPSC من خلايا الدم وحيدات النوى المحيطية (PBMCs). بواسطة الطلاء وPBMCs transduced متسلسل ل، لوحة باستخدام الطرد المركزي الجديدة المغلفة المصفوفة، يمكن هذا البروتوكول بسهولة توفير المستعمرات التوجيهية. هذا الأسلوب ينطبق أيضا على خلايا وحيدة النواة دم الحبل السري (CBMCs). وتقدم هذه الدراسة بروت بسيطة وفعالةocol لإعادة برمجة PBMCs وCBMCs.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكانت الخلايا الجذعية واحدة من المواد الأكثر جاذبية في العلاج السريري لمشاركة عدة عقود 1. خصائص جذابة للخلايا الجذعية تعدد القدرات والقدرة على تجديد الذات. في عام 1981، تم عزل أول الخلايا الجذعية الجنينية (المجالس الاقتصادية والاجتماعية) من جنين فأر 2. ومع ذلك، عندما تم تطبيق هذه التقنية لأجنة بشرية، واجهت العديد من القضايا الأخلاقية.

في عام 2006، عندما برمجة الدكتور ياماناكا وفريقه أول خلية المحفزة من الخلايا الجسدية الماوس، استعاد مجال الخلايا الجذعية إمكانية ووانتعشت الفائدة 3. من خلال تقديم العديد من العوامل المحددة، وكانت الخلايا الجذعية المحفزة بنجاح "التي يسببها" من الخلايا الجسدية للبالغين، ووهكذا اسمه "الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها (iPSCs)." في عام 2007، تم تطبيق هذا الأسلوب على الخلايا البشرية 4، مما أسفر عن الخلايا التي تحتوي على الخصائص الدقيقة من المجالس الاقتصادية والاجتماعية ولكن أيا من النقاش الأخلاقي. من الناحية النظرية، الجذعخدمات العملاء يمكن أن تتولد من أي نوع من الخلايا التي تم الحصول عليها من أي فرد أو المريض. iPSCs-مريض معين ترتفع كأداة المحتملة التي يمكن محاكاة الظواهر المرض والظروف جينية من كل مريض على حدة. عن طريق تحرير الجينات أو غيرها من الوسائل التي يمكن عكس حالة المسببة للأمراض، iPSCs المريض محددة يمكن أيضا أن تستخدم في الطب الشخصية 5. وعلاوة على ذلك، فإن أقل المرتبطة iPSCs مع الرفض المناعي لأن لديهم نفس الهوية المناعية مثل المانحة، مما يجعل لصناعة السيارات في زرع أكثر جدوى 6. وبالتالي، أصبحت iPSCs منصة الواعدة في مجال النمذجة المرض، وفحص المخدرات، والعلاجات التجدد. ونظرا لهذه الفوائد، وتحسين البروتوكولات التي يمكن أن تعطي أنقى وزيادة الغلة في أقل قدر من الوقت من مصدر خلية أصغر هي دائما تحت التطوير. أحد الاعتبارات الرئيسية في العثور على البروتوكول الأكثر كفاءة لتطبيقها في المستقبل هو نوع من الخلايا الأولية. معظم أوائل IPSC الجيل بروتوهي الأمثل العواميد لخلايا ملتصقة منذ خطوط التوجيهية الأصلية استميلت من الخلايا الليفية الجلد 4. ومع ذلك، فإن العزلة وإعداد هذه الخلايا هي كثيفة العمالة. أيضا، وعزل الخلايا الليفية الجلد وتشمل العمليات الجراحية الغازية التي يمكن أن تصبح أحد أوجه القصور الرئيسية لتطبيقها على نطاق أوسع.

لذلك، لاستخدام المزيد من iPSCs، لا بد من مصدر الخلية مع اكتساب مريحة. ويعتبر الدم كمصدر للخلايا المثالي منذ تم الحصول عليها من خلال إجراء بدلا مينيملي 7-9. في هذه الدراسة، قمنا بتطوير تعديل بسيط لتوليد hiPSCs من خلايا الدم وحيدات النوى المحيطية (PBMCs) البروتوكول. دون عملية التوسع صعبة من نوع خلية معينة، مثل الخلايا CD34 +، وخلايا الدم الكامل أو PBMCs كانت مطلية بشكل متسلسل على لوحات المغلفة مصفوفة بواسطة الطرد المركزي بعد تنبيغ مع فيروس سينداي التي تحتوي على عوامل ياماناكا. خفضت هذه الطريقة الوقت اللازم لمرفق من الخلايا العائمة transduced وانخفض فقدان الخلايا المعاد برمجتها التي لم تكن قادرة على تولي بمفردهم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بيان الأخلاق: وافق هذا البروتوكول الدراسة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية للجامعة الكاثوليكية في كوريا (KC12TISI0861).

1. عزل خلايا الوحيدات من الدم

  1. عزل خلايا الوحيدات (يوم -5)
    1. الحصول على ما لا يقل عن 10 مل من الدم النقي من سحب الدم في أنبوب إعداد الخلية (CPT).
    2. نقل الدم إلى أنبوب جديد مخروطي 50 مل وتمييع مع معقمة الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) في نسبة 1: 4.
      ملاحظة: نسبة أعلى من تخفيف يمكن استخدامها لأعلى نقاء.
    3. إضافة 10 مل من وسائل الاعلام كثافة التدرج إلى أنبوب مخروطي 50 مل الجديد وطبقة بعناية الدم المخفف على رأس وسائل الإعلام التدرج الكثافة. أجهزة الطرد المركزي في 750 x ج لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT) بدون فرامل الطرد المركزي.
    4. نقل بعناية الطبقة الشهباء إلى أنبوب مخروطي 50 مل الجديد، إضافة 30 مل من برنامج تلفزيوني للأنبوب، وغسل الخلايا.
    5. الطرد المركزي الخلايا في 515 x ج لمدة 5 دقائق على RT.
    6. تجاهل برنامج تلفزيوني و resuspend الخلايا في 0.5 مل من وسائل الاعلام خلايا الدم.
    7. عد الخلايا ولوحة 1 × 10 6 خلايا لكل بئر من 24 لوحة جيدا. إضافة إلى برنامج تلفزيوني الآبار المحيطة بها لمنع التبخر.
    8. استقرار الخلايا لمدة 5 أيام في 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2 قبل تنبيغ. إضافة 0.5 مل إضافية من وسائل الإعلام خلية دماء جديدة في الأيام 3-4 من دون إزعاج الخلايا.

2. تنبيغ من سينداي الفيروسات

  1. تنبيغ (يوم 0)
    1. جمع ونقل خلايا الدم إلى أنبوب مخروطي 15 مل ونعدهم باستخدام عدادة الكريات.
    2. إعداد 3 × 10 5 خلايا لكل التنبيغ وأجهزة الطرد المركزي الخلايا في 515 x ج لمدة 5 دقائق على RT.
    3. تجاهل طاف بواسطة الشفط وresuspend الخلايا في 0.5 مل من وسائل الاعلام خلايا الدم.
    4. نقل الخلايا إلى بئر من لوحة غير المغلفة 24-جيدا.
    5. ذوبان الجليد الخليط سينداي الفيروس في الجليد وإضافته إلى سوخلايا سبينديد. إضافة فيروس سينداي الى الخلايا بناء على توصيات الشركة الصانعة.
    6. ختم لوحة مع فيلم الختم وأجهزة الطرد المركزي أنه في 1150 x ج لمدة 30 دقيقة عند 30 درجة مئوية.
    7. بعد الطرد المركزي، واحتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية في CO 2 بين عشية وضحاها (O / N) 5٪.
  2. نقل الخلية إلى مصفوفة المغذية (يوم 1)
    1. في اليوم التالي، ومعطف 24 لوحة جيدا مع vitronectin. تمييع الحل vitronectin في برنامج تلفزيوني لتركيز / مل النهائي 5 ميكروغرام. إضافة 1 مل من vitronectin إلى بئر من 24 لوحة جيدا واحتضان ذلك في RT لا يقل عن 1 ساعة. إزالة طلاء الحل قبل الاستخدام. لوحات مغلفة يمكن تخزينها في RT لمدة 3 أيام.
    2. نقل عن وسائل الإعلام التي تحتوي على الخلايا والفيروس إلى المغلفة جيدا.
    3. جمع الخلايا المتبقية مع 0.5 مل إضافية من وسائل الإعلام خلية دماء جديدة وإضافتها إلى الخلية التي تحتوي أيضا.
    4. أجهزة الطرد المركزي لوحة في 1150 x ج لمدة 10 دقيقة في 35 درجة مئوية.
    5. بعد المائةrifugation، وإزالة طاف، إضافة 1 مل من وسائل الاعلام التوجيهية، والحفاظ على الخلايا عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2 O / N.
  3. نقل الخلية الثانية (يوم 2)
    1. معطف الآبار من 24 لوحة جيدا جديدة مع 5 ميكروغرام / مل vitronectin، كما هو موضح في الخطوة 2.2.1. استخدام بئر واحدة من لوحة لكل ترنسدوكأيشن.
    2. نقل تعليق خلية من اللوحة الأولى إلى لوحة vitronectin المغلفة حديثا.
      ملاحظة: إذا لم يكن هناك حاجة، يمكن التخلص منها خلايا تعليق. الإجراء المنصوص عليه في الخطوة 2.3 يمكن أن تتكرر 2-3 مرات مع الخلايا تعليق. إذا سوف تتكرر الخطوات، حصاد الخلايا.
    3. وفي الوقت نفسه، إضافة 1 مل من وسائل الاعلام التوجيهية للبئر من لوحة الأولى، لصيانة، واحتضان ذلك عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2 O / N.
    4. الحفاظ على خلايا تعلق عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2 وإجراء تغيير وسائل الاعلام اليومي مع وسائل الاعلام التوجيهية جديدة. سوف تظهر المستعمرات في أيام 14-21 بعد تنبيغ.
    5. Centrifugالبريد لوحة مطلية حديثا تحتوي على خلايا تعليق في 1150 x ج و 35 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة.
    6. بعد الطرد المركزي، واحتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2 O / N.
    7. في اليوم التالي، وإزالة طاف واستبدالها مع وسائل الاعلام التوجيهية جديدة.
      ملاحظة: الإجراء المذكور في الخطوة 2.3 يمكن أن تتكرر 2-3 مرات مع الخلايا تعليق. إذا سوف تتكرر الخطوات، حصاد الخلايا في طاف وكرر الخطوة 2.3.
    8. الحفاظ على خلايا المرفقة مع التغييرات وسائل الإعلام اليومية حتى يتم التوصل إلى 80٪ confluency.

3. إعادة برمجة الصيانة خلية

  1. صيانة مبكرة بعد ثقافة 24 لوحة جيدا
    1. بعد 7-10 أيام تنبيغ، وبمجرد أن الخلايا هي متكدسة، وإعداد، طبق vitronectin المغلفة من عيار 60 ملم. تمييع الحل vitronectin في برنامج تلفزيوني لتركيز / مل النهائي 5 ميكروغرام. إضافة 1 مل من vitronectin إلى الطبق واحتضان ذلك في RT لا يقل عن 1 ساعة.
    2. غسلالخلايا مع برنامج تلفزيوني وإضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني / 1 ملم EDTA لفصل الخلايا.
    3. احتضان لهم عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2 لمدة 2 دقيقة.
    4. حصاد الخلايا وأجهزة الطرد المركزي لهم في 250 x ج و RT لمدة 2 دقيقة. إزالة طاف و resuspend الخلايا في 3 مل من وسائل الاعلام التوجيهية جديدة.
    5. لوحة كل الخلايا معلق على المغلفة حديثا طبق من عيار 60 ملم.
    6. إضافة 10 ملي RHO كيناز إلى الخلايا والمحافظة عليها عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2 حتى الخلايا هي 80٪ متموجة.
  2. انقسام لظهور مستعمرة (إعداد استنساخ فرعي)
    1. إعداد، طبق المغلفة vitronectin 100 ملم، كما هو موضح في الخطوة 3.1.2.
    2. غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني وإضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني / 1 ملم EDTA لفصل الخلايا.
    3. احتضان لهم عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2 لمدة 2 دقيقة.
    4. حصاد الخلايا وأجهزة الطرد المركزي لهم في 250 x ج و RT لمدة 2 دقيقة.
    5. عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات وإعداد 1 × 10 4 خلايا في طبق.
    6. الطرد المركزي الخلايا في 250 x ج و RT لمدة 2 دقيقة.
    7. و resuspend 1 × 10 4 الخلايا في 6 مل من وسائل الاعلام التوجيهية، لوحة لهم على طبق المغلفة 100 ملم، وإضافة 10 ملي RHO كيناز إلى وسائل الإعلام.
    8. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2 لمدة أسبوع حتى تظهر مستعمرات كبيرة.
      ملاحظة: صيانة وتوسيع المستعمرات لاستنساخ فرعي. استنساخ فرعي وعادة ما يتم في أقل من 5 فقرات.
  3. مستعمرة اختيار باستخدام مستعمرة IPSC فصل الحل
    1. وقبل أسبوع من قطف مستعمرة، والبذور 1 × 10 4 خلايا في، طبق المغلفة vitronectin 100 ملم، كما ذكر في الخطوة 3.2.7.
    2. إعداد، طبق المغلفة vitronectin 60 ملم وذلك بإضافة 2 مل من محلول vitronectin وتفرخ على RT لمدة لا تقل عن 1 ساعة.
    3. من خلال مراقبة من خلال المجهر (40X أو 100X التكبير)، بمناسبة المستعمرات مع حدود واضحة باستخدام قلم علامة. إزالة حل vitronectin من لوحة جديدة في الخطوة 3.3.2 وإضافة 6 ملمن IPSC وسائل الإعلام تستكمل مع 10 ملي RHO كيناز.
    4. إزالة مستنبت من خلايا وغسلها مع 3 مل من برنامج تلفزيوني.
    5. إضافة 1 مل من مستعمرة IPSC حل فصل واحتضان لهم لمدة 30 ثانية في RT.
    6. إزالة الحل من لوحة واحتضان ذلك على RT لمدة 30 ثانية إضافية.
    7. باستخدام ماصة P200، رسم 200 ميكرولتر من وسائل الاعلام من لوحة وفصل المستعمرات المستهدفة من قبل pipetting. نقل المستعمرات المنتشرة على طبق جديد 100 ملم.
    8. احتضان والحفاظ على الخلايا عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2.
      ملاحظة: بعد الحصول على مستعمرة IPSC نقية، تمت المحافظة على الخلايا حتى وصلوا إلى مرور وقد تم 10. توصيف بعد لا يقل عن 10 الممرات. وترد التخفيفات الأجسام المضادة والمعلومات التمهيدي في الجدولين 1 و 2.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويعرض هذا البروتوكول طريقة بسيطة لإعادة برمجة PBMCs معزولة من الدم. باستخدام مزيج من الطلاء المسلسل والطرد المركزي، تم إنشاؤها iPSCs بنجاح. مع هذا الأسلوب، يمكن أن تتولد iPSCs مع كمية صغيرة من خلايا الدم كاملة دون عزل أو توسيع نوع خلية معينة. ولدت لنا بنجاح iPSCs من خلايا فقط 1X10 4 في لوحة الثقافة زنزانة صغيرة.

قبل برمجة، تم عزل خلايا ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

منذ الخلايا الجذعية الجنينية (المجالس الاقتصادية والاجتماعية) وأظهرت العديد من أوجه القصور، ويتطلب ضرورة وجود أداة بديلة. لذلك، جاءت تطور الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها (iPSCs) من خلال ياماناكا تحت الاضواء الدولية. وكان ما يقرب من عقد من الزمان منذ اكتشف ياماناكا أن تعدد القدرات يمكن أن يتسبب ذلك بإضافة أربعة فقط الجينات في الخلايا الجسدية للبالغين. منذ iPSCs هي "يتسبب" من الخلايا الجسمية الناضجة، فإنها يمكن أن تهرب من القضايا الأخلاقية التي كانت ذات يوم القلق المتع...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل بمنحة من برنامج أبحاث العلوم الأساسية من خلال المؤسسة الوطنية للبحوث في كوريا (NRF) ، بتمويل من وزارة العلوم وتكنولوجيا المعلومات والاتصالات والتخطيط المستقبلي (2013R1A1A1076125).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي>Plasticware< / قوي>
100 مم طبقTPP & nbsp ؛93100
6 آبار لوحةTPP92006
50 مل أنبوب كورنيكالSPL50050
15 مل أنبوب كورنيكالSPL50015
10 مل ماصة فالكون يمكن التخلص7551
5 مل ماصة فالكون7543
12 بئر لوحةTPP92012
24 بئر لوحةTPP92024
< قوي > PBMC مواد العزل < / قوي>
DPBSLife Technologies14190-144
FicollGE Healthcare17-1440-03
StemSpanSTEMCELL Technologies9805وسائط خلايا
الدم CC110STEMCELL Technologies8697الدم ملحق الوسائط الخلوية (100x)
CytoTune-iPSC Sendai Reprogramming KitLife TechnologiesA16518
TeSR-E8 MediaSTEMCELL Technologies5940iPSC media
VitronectinLifeTechnologies A14700
ROCK InhibitorSigma AldrichY0503
TrypLE Express (TrypLE)Life Technologies12604-039
ReleSRSTEMCELL Technologies12604-039حل فصل
<مواد مراقبة الجودة القوية> القوية < / قوي
>18 مم غطاء زجاجيمتفوقHSU-0111580
4٪ ParaformaldyhydeTech & الابتكارBPP-9004
Triton X-100BIOSESANG9002-93-1
ألبومين مصل الأبقار مختبر ناقلاتSP-5050 
الأجسام المضادة للجسم المضاد ل SSEA4MilliporeMAB4304
الأجسام المضادة المضادةOct4 سانتا كروزSC9081
الأجسام المضادة TRA-1-60MilliporeMAB4360
الأجسام المضادة ل Sox2Biolegend630801
المضادة TRA-1-81 الأجسام المضادةMilliporeMAB4381
الأجسام المضادة Klf4Abcamab151733
Alexa Fluor 488 الماعز المضاد للفأر IgG (H + L) الأجسام المضادةالمسبار الجزيئيA11029
Alexa Fluor 594 الماعز المضاد للأرانب IgG (H + L) الأجسام المضادةالمسبار الجزيئيA11037
DAPIالمسبار الجزيئيD1306
إطالة كاشف الذهب المضاد للتلاشيInvitrogenP36934
زجاج منزلق ، مطلي & nbsp ؛هيون إيل لاب ميتHMA-S9914
TrizolInvitrogen15596-018
الكلوروفورمسيجما ألدريتش366919
إيزوبريبيل كحولميليبور109634
الإيثانولدوكسان64-17-5
RevertAid First Strand cDNA SynthesisKit Thermo ScientficK1622
i-Taq DNA PolymeraseiNtRON BIOTECH25021
UltraPure 10X TBE Buffer  لايف تكنولوجيز15581-044
تحميل نجمةداين بيوA750
Agaroseسيجما ألدريتش9012-36-6
1 كيلو بايت (+) علامة سلم الحمض النوويEnzynomicsDM003
الفوسفاتيز القلويةميليبورSCR004
قاعدة تريسفيشر ScientificBP152-1شطف عازلة
كلوريد الصوديومDuchefa BiochemieS0520.1000Rinse Buffer
Tween-20BIOSESANGT1027Rinse Buffer
AcidDuksan1129Rinse
منها < TD Colspan = "4" >< قوي >iPSC توليد ومواد الاستزراع < / strong> المستعمرة Buffer

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Serra, M., Brito, C., Correia, C., Alves, P. M. Process engineering of human pluripotent stem cells for clinical application. Trends Biotechnol. 30 (6), 350-359 (2012).
  2. Martin, G. R. Isolation of a pluripotent cell line from early mouse embryos cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (12), 7634-7638 (1981).
  3. Takahashi, K., Yamanaka, S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 126 (4), 663-676 (2006).
  4. Takahashi, K., et al. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors. Cell. 131 (5), 861-872 (2007).
  5. Chun, Y. S., Byun, K., Lee, B. Induced pluripotent stem cells and personalized medicine: current progress and future perspectives. Anat Cell Biol. 44 (4), 245-255 (2011).
  6. Seki, T., Fukuda, K. Methods of induced pluripotent stem cells for clinical application. World J Stem Cells. 7 (1), 116-125 (2015).
  7. Churko, J. M., Burridge, P. W., Wu, J. C. Generation of human iPSCs from human peripheral blood mononuclear cells using non-integrative Sendai virus in chemically defined conditions. Methods Mol Biol. 1036, 81-88 (2013).
  8. Loh, Y. H., et al. Reprogramming of T cells from human peripheral blood. Cell Stem Cell. 7 (1), 15-19 (2010).
  9. Ohmine, S., et al. Induced pluripotent stem cells from GMP-grade hematopoietic progenitor cells and mononuclear myeloid cells. Stem Cell Res Ther. 2 (6), (2011).
  10. Mae, S., et al. Monitoring and robust induction of nephrogenic intermediate mesoderm from human pluripotent stem cells. Nat Commun. 4, 1367(2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة