تنص المادة التالية سهلة وتقنية استنساخه لخلق فعالية نموذج الفأر المستدام للالحوفي نقص الخلايا الجذعية (LSCD). هذا نموذج حيواني مفيد في اختبار ومقارنة فعالية من العلاجات لأمراض الخلايا الجذعية الحوفي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إجراء ميكانيكي بسيط لإنشاء الحوفي نقص الخلايا الجذعية في الفأر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الحوفي نقص الخلايا الجذعية (LSCD) هو حالة من عطل أو فقدان الخلايا الجذعية الظهارية الحوفي، وبعد ذلك يتم استبدال ظهارة القرنية مع الملتحمة. المرضى الذين يعانون من عيوب المتكررة القرنية، الألم والالتهاب، وفقدان الرؤية.
سابقا، وقد وصفت نموذج الفئران من LSCD وبالمقارنة مع اثنين من نماذج أخرى. وكان الهدف هو إنتاج نموذج الفأر ثابت من LSCD أن كلا يحاكي النمط الظاهري في البشر وتستمر لفترة كافية لتجعل من الممكن لدراسة الفيزيولوجيا المرضية المرض وتقييم علاجات جديدة. هنا، يتم وصف هذه التقنية في مزيد من التفاصيل.
وقد تم تصميم أداة الآلية مع لدغ الدورية لإزالة الصدأ حلقات من سطح القرنية أو لتسهيل السرير الظفرة في المرضى. وهو جهاز مناسبة لإنشاء نموذج LSCD المطلوب. وهي متوفرة بسهولة، وسهلة الاستخدام وأداة مع طرف على ما يرام التي تجعلها مناسبة للعمل على عيون صغيرة، كمافي الفئران. تطبيقه يمنع الصدمات النفسية التي لا داعي لها للعين وأنها لا تؤدي إلى إصابات غير المرغوب فيها، في كثير من الأحيان هو الحال مع نماذج إصابة الكيميائية. وعلى عكس مكشطة حادة، فإنه يزيل ظهارة مع الغشاء القاعدي. في هذا البروتوكول، ومتآكل المنطقة الحوفي مرتين، وبعد ذلك تم حلق ظهارة القرنية بأكملها من حوف إلى حوف. لتجنب الإصابة سدى، والحرص على عدم فرشاة سطح القرنية بمجرد إزالة ظهارة بالفعل.
المقدمة
مطلوب ظهارة القرنية للحفاظ على وضوح وسلامة القرنية. يتجدد باستمرار طوال الحياة عن طريق الخلايا الجذعية الظهارية المقيمين في واحد حوف منطقة ضيقة عند تقاطع القرنية والملتحمة. هذه الخلايا الجذعية الحوفي تجديد الذات تلعب دورا حاسما في تجديد ظهارة القرنية، سواء بشكل طبيعي وبعد الاصابة. ونضوب جزئي أو كامل من هذه الخلايا الجذعية يؤدي إلى تقرحات القرنية المتكررة، والألم، تندب القرنية واتساع الأوعية الدموية، وظهور الخلايا الكأسية، وإذا تركت دون علاج، والعمى القرنية. وتعرف هذه الحالة باسم الحوفي نقص الخلايا الجذعية (LSCD) ويمكن أن يكون مجهول السبب. وراثي. أو مكتسبة بسبب الإصابات الكيميائية أو الحرارية، وارتداء العدسات اللاصقة على المدى ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
كافة الإجراءات التي أجريت على الحيوانات تتوافق مع جمعية البحوث في تصريحات الرؤية وطب العيون للاستخدام الحيواني في مجال البحوث الرؤية. استخدمت أربعة عشر أربع إلى الذكور / الإناث C57BL / 6J الفئران نوع البرية القديمة ستة أشهر: عشرة الفئران لنموذج الإصابة والأربعة الحيوانات التحكم (القرنيات المعافين).
1. إعداد الحيوان
- تخدير الفأر مع حقنة داخل الصفاق من 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 5 ملغم / كغم من خليط زيلازين. بعد التخدير اتخذت تأثير، قرصة أخمص القدمين إلى تأكيد عمق التخدي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
في غضون شهر بعد أداء هذه التقنية، وضعت 100٪ من القرنيات اتساع الأوعية الدموية السطحية (الشكل 1A. تم التقاط الصور مع كاميرا متصلة المصباح الشقي تحت حقل مشرق والكوبالت مرشح الأزرق). في 18/20 (90٪) من العيون، وتشارك اتساع الأوعية الدموية على سطح القرنية كله (الشكل 1A). في 2/20 (10٪)، وقد لوحظ اتساع الأوعية الدموية في ثلاثة من أربعة أجزاء القرنية، لكنه لا يزال صلت إلى مركز القرنية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
توضح هذه المقالة تقنية استنساخه وبسيطة نسبيا لخلق نموذج الفأر من LSCD. هناك عدة جوانب هامة من هذا الطراز التي تستحق الملاحظة. أولا، نماذج خلافا التي تستخدم المواد الكيميائية 11، 12، وإصابة ينطوي في المقام الأول ظهارة السطحية (والغشاء القاعدي)، مع الحد الأدنى من الضرر للسدى القرنية الأساسي أو الهياكل داخل العين الأخرى. وبالتالي، ليس هناك سوى التهاب محدود وتندب، وكلاهما يمكن أن تعقيد الإجراءات وجعلها أكثر صعوبة لتقييم نتائج أي تدخلات تستهدف الخلايا الجذعية الحوفي. دراسة ح.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
الكتاب أشكر روث Zelkha، MS، لمساعدتها السخية في مجال التصوير. وأيد هذا البحث من قبل برنامج السريرية التنمية العلماء جائزة K12EY021475 إلى ME، منح R01 EY024349-01A1 إلى ARD، الأساسية منحة EY01792 من المعهد الوطني للعيون، المعاهد الوطنية للصحة، ومنحة غير المقيد من البحوث للوقاية من العمى. ARD هو حاصل على جائزة التطوير المهني من البحوث للوقاية من العمى.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| لدغ دوارة: مزيل حلقة الصدأ AlgerBrush II | شركة رومكس الدولية ، كليرووتر ، فلوريدا | 16-141 | لدغ 0.5 مم. متاح أيضا من شركات أخرى. |
| المجهر الجراحي | وايلد هيربروج ، سويسرا | وايلد M691 | |
| كاميرا رقمية | نيكون ، تايلاند | ||
| نيكون FS-2 مصباح شق | نيكون ، اليابان | ||
| النسيلة المضاد ل CK12 الأجسام المضادة | سانتا كروز بلوتكنولوجي ، كاليفورنيا ، | SC-17101 | 1: 100 تركيز |
| أحادي النسيلة المضاد للجسم المضاد | TROMA-I-S ، أيوا سيتي ، IA | AB_531826 | تركيز 1:50 |
المراجع
- Afsharkhamseh, N., et al. Stability of limbal stem cell deficiency after mechanical and thermal injuries in mice. Exp. Eye Res. 145, 88-92 (2015).
- Dorà, N. J., Hill, R. E., Collinson, J. M., West, J. D.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
