مقالة منهجية

الخلايا الدبقية الصغيرة بمثابة جهاز الاستشعار البيولوجي الأب البديل لتحديد الجسيمات النانوية العصبية

DOI:

10.3791/54662

⸱

أكتوبر 25, 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Minneapolis Veterans Affairs Health Care System, 2Department of Food Science and Nutrition, University of Minnesota, 3Biomedical Informatics and Computational Biology Program, University of Minnesota, 4Minnesota Obesity Center, University of Minnesota

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
تستخدم < p class = 'jove_content'>Microglia (الخلايا المناعية في الدماغ) كجهاز استشعار حيوي بديل لتحديد كيفية تأثير الجسيمات النانوية على السمية العصبية. نصف سلسلة من التجارب المصممة لفحص استجابة الخلايا الدبقية الصغيرة للجسيمات النانوية وتعرض الخلايا العصبية تحت المهاد للطافية من الخلايا الدبقية الصغيرة المنشطة لتحديد السمية العصبية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
يمكن للجسيمات النانوية الموجودة في ملوثات الهواء

أن تغير ملامح الناقلات العصبية وتزيد من الالتهاب العصبي وتغير وظائف الدماغ. لذلك ، فإن الاختبار الموصوف هنا سيساعد في توضيح دور الخلايا الدبقية الصغيرة في الالتهابات العصبية والأمراض التنكسية العصبية. يوفر استخدام الخلايا الدبقية الصغيرة ، وهي الخلايا المناعية المقيمة في الدماغ ، كجهاز استشعار حيوي بديل نظرة ثاقبة جديدة حول كيفية توسط الاستجابات الالتهابية في الإهانات العصبية. هنا ، نستخدم خط خلايا الخلايا الدبقية الصغيرة الفئران الخالد ، المسمى BV2 ، ونصف طريقة للتعرض للجسيمات النانوية باستخدام الجسيمات النانوية الفضية (AgNPs) كمعيار. نصف كيفية تعريض الخلايا الدبقية الصغيرة للجسيمات النانوية ، وكيفية إزالة الجسيمات النانوية من المادة الطافية ، وكيفية استخدام المادة الطافية من الخلايا الدبقية الصغيرة المنشطة لتحديد السمية ، باستخدام بقاء الخلايا تحت المهاد كمقياس. بعد التعرض ل AgNP ، تم التحقق من صحة تنشيط BV2 microglial باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بإنزيم عامل نخر الورم ألفا (TNF-α). تم ترشيح المادة الطافية لإزالة AgNP والسماح للسيتوكينات والعوامل المفرزة الأخرى بالبقاء في الوسائط المكيفة. ثم تعرضت الخلايا تحت المهاد للطافية من الخلايا الدبقية الصغيرة المنشطة AgNP وتم تحديد بقاء الخلايا العصبية باستخدام مقايسة الفلورسنت القائمة على الريزازورين. هذه التقنية مفيدة لاستخدام الخلايا الدبقية الصغيرة كمؤشر حيوي بديل للالتهاب العصبي وتحديد تأثير الالتهاب العصبي على أنواع الخلايا الأخرى.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التلوث البيئي، وتحديدا تلك التي جسيمات متناهية الصغر (NP) مجموعة (1 - 20 نانومتر القطر)، وقد تم ربط السمنة وغيرها من الأمراض العصبية بسبب القدرة على عبور حاجز الدم في الدماغ 1-3. التعرض المرتفع للتلوث قد تحفز التهاب في الجهاز العصبي المركزي بما في ذلك منطقة ما تحت المهاد 1. واحد آلية المحتملة التي يحدث هذا يمكن أن يكون من خلال جسيمات متناهية الصغر التي يسببها تفعيل الخلايا الدبقية الصغيرة (الدماغ الخلايا المناعية) 4. وقد استخدمت الدراسات السابقة في النماذج الحية لدراسة آثار تلك المصادر على صحة الدماغ والتي تستغرق وقتا طويلا، ومكلفة، ولا تجيب بشكل مباشر على سؤال عن كيفية التأثير على مصادر القدرة النووية الخلايا الدبقية الصغيرة. الخلايا الدبقية الصغيرة تلعب دورا متعدد الأوجه في الجهاز العصبي المركزي، بما في ذلك صيانة المكروية الدماغ والتواصل مع توضيح الخلايا العصبية عن طريق الإفراج عن عوامل يفرز والسيتوكينات. اعتمادا على المحفزات، الخلايا الدبقية الصغيرة يمكن تفعيلها لالعلاقات العامة M1س للالتهابات أو دولة M2 المضادة للالتهابات. على سبيل المثال، تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة M1 تطلق السيتوكينات الموالية للالتهابات مثل عامل نخر الورم ألفا (TNF-α)، في حين تفعيلها M2 إطلاق الخلايا الدبقية الصغيرة السيتوكينات المضادة للالتهابات بما في ذلك انترلوكين 4 (IL-4). للتحقق من صحة بديل لدينا في جهاز الاستشعار البيولوجي في المختبر لتحديد السمية العصبية من ملوثات الهواء، قمنا بقياس استجابة دبقية إلى 20 الفضة النانوية نانومتر (AgNPs). والهدف من هذه المقالة هو شرح طريقة خط خلية دبقية في المختبر يمكن أن تستخدم كعلامة جهاز الاستشعار البيولوجي بديلة لاختبار استجابة الدبقية الفئران لمصادر القدرة النووية وكيف دبيقي تفعيل يؤثر على الخلايا المهاد. يهدف على المدى الطويل تطبيق هذا النموذج التحقق من صحة هو لاختبار آثار الملوثات في العالم الحقيقي على صحة الدماغ والأمراض العصبية التنكسية. ونحن نقدم وصفا مفصلا لفي المختبر 96-جيدا شكل فحص لقياس تفعيل دبقية وبقاء الخلية المهاد بعد التعرض لهيئة التصنيع العسكري roglial سائل الإعلام مكيفة.

تقرر تفعيل دبقية بعد التعرض AgNP باستخدام انزيم TNF-α المناعي المرتبط مقايسة (ELISA). لتحديد تأثير تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة في خلايا المخ تحت المهاد البصري، وإزالة AgNPs من طاف دبقية (وسائل الإعلام مكيفة) باستخدام جهاز الترشيح. يحتفظ الجهاز الترشيح السيتوكينات في حين باستثناء AgNPs على أساس الحجم. لفترة وجيزة، تم جمع طاف من الخلايا الدبقية الصغيرة تعامل مع أو بدون AgNPs، تضاف إلى المرشحات، وطرد في 14000 x ج لمدة 15 دقيقة. كنا بعد ذلك قادرين على تحديد تأثير السيتوكينات يفرز دبقية على بقاء الخلية المهاد. تم تحديد سمية الخلايا بعد التعرض لوسائل الإعلام مكيفة (التي تحتوي على السيتوكينات) عن طريق فحص القائم على ريسازورين كما هو موضح سابقا 5،6. عملية الأيض خلايا نشطة تحد ريسازورين وتنتج إشارة الفلورسنت يتناسب مع عدد من خلايا قابلة للحياة 7.

الإقليم الشمالي "> هناك العديد من المزايا من استخدام هذه التقنية على الآخرين (مثل ثقافة مشتركة، الاجهزة العابر جيدا، أو في التجارب المجراة). نموذجنا يوفر القدرة على تفعيل مباشرة الخلايا الدبقية الصغيرة وتحديد ما إذا كانت العوامل يفرز سامة للخلايا العصبية 8 . البروتوكول الحالي يستخدم خلدت الخلايا الدبقية الصغيرة BV2 حفز مع النانوية قطرها 20 نانومتر، وتخليد خلايا المخ تحت المهاد البصري الفئران (المعين mHypo-A1 / 2) 9 لتحديد استجابة لاحقة. وفي الوقت الذي تم تحسين هذا البروتوكول لهذه الشروط محددة، وأساليب يمكن أن يكون تعديلها لاستخدامها في نماذج أخرى من موت الخلايا التي يسببها دبيقي، أو مع أنواع أخرى من الخلايا بما في ذلك الخلايا الدبقية الصغيرة الابتدائية والخلايا العصبية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. دبقية الصيانة خلية ثقافة

  1. خلية ثقافة المتوسط ​​الدافئة (Dulbecco لتعديل النسر المتوسط؛ DMEM) تستكمل مع المصل 10٪ بقري جنيني (FBS) و 1٪ البنسلين / الستربتومايسين / النيوميسين (PSN) إلى 37 درجة مئوية.
  2. الحصول على الأوراق المالية المجمدة من الخلايا الدبقية BV2 في مرور 18 - 25 من تخزين في -80 درجة مئوية. بسرعة ذوبان الجليد الخلايا في 37 ° C حمام الماء.
  3. نقل بلطف الخلايا إلى 75 سم 2 قارورة تنفيس تحتوي على وسائل الإعلام ثقافة 10 مل الخلية.
  4. احتضان قارورة في 5٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية. وسائل الاعلام نضح بعد 24 ساعة واستبدالها مع وسائل الإعلام الجديدة. تنمو الخلايا حتى ما يقرب من 70-80٪ confluency.

2. العد والخلايا تصفيح

  1. في حمام مائي 37 ° C، DMEM الدافئة وحل 1X-التربسين- EDTA.
  2. وسائل الإعلام نضح من الخلايا وإضافة 500 ميكرولتر من التربسين. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 2-5 دقيقة.
  3. استخدام مكشطة، إزالة الخلايا من القارورة وتعليق في 5 ملمن DMEM. تمر الخلايا من خلال مصفاة 70 ميكرومتر في أنبوب 50 مل ثلاث مرات.
  4. عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات والبذور 8000 خلية / جيدا في الأسود الجدران أسفل لوحة واضحة في الحجم النهائي من 200 ميكرولتر DMEM تستكمل مع FBS 10٪ و 1٪ PSN. احتضان لوحة في 5٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
  5. إزالة DMEM القديمة واستبدالها مع 200 ميكرولتر من DMEM حرارة تستكمل مع 1٪ PSN إلى المصل تجويع الخلايا الدبقية الصغيرة. احتضان لوحة في 5٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.

3. تفعيل الخلايا الدبقية الصغيرة

  1. في أنابيب منفصلة، ​​وتمييع AgNPs (0.01، 0.05 أو 0.1 ميكروغرام / مل)، ومركبة / مراقبة محايدة (سيترات الصوديوم، 0.04 ملم) في DMEM المصل خالية تستكمل مع 1٪ PSN لتركيزات العمل النهائية.
  2. إزالة 100 ميكرولتر من وسائل الإعلام من كل بئر واستبدالها مع 100 ميكرولتر من مجمع العلاج المناسب.
  3. احتضان لوحة في 5٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.

4. فايltering وسائل الإعلام مكيفة

  1. جمع 200 ميكرولتر من طاف وسائل الإعلام من كل بئر ونقل إلى تصفية (الوزن الجزيئي قطع من 10 كيلو دالتون) مع أنبوب جمع (1،5-2 قدرة مل).
  2. أجهزة الطرد المركزي في 14000 x ج في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة.
  3. تجاهل التدفق من خلال (طاف مع الجسيمات) ووضع فلتر رأسا على عقب في أنبوب المجموعة الجديدة.
  4. أجهزة الطرد المركزي في 1000 x ج في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 دقيقة.
    ملاحظة: أدى وسائل الإعلام التي تمت تصفيتها (التي تحتوي على السيتوكينات يفرز) ويتركز ستة أضعاف.
  5. تبرزي حجم من التركيز إلى 400 ميكرولتر مع DMEM جديدة تستكمل مع FBS 10٪ و 1٪ PSN وتخزينها على الجليد.
    ملاحظة: لضمان إزالة AgNPs المتبقية من وسائل الاعلام التي تمت تصفيتها، وتوليد تركيز AgNP استنادا إلى ذروة مميزة في حوالي 390-420 نانومتر 10. لفترة وجيزة، وإعداد aliquots من AgNPs غير المرشحة (0، 0.01، 0.025، 0.05، 0.1، و 0.2 ميكروغرام / مل كما هو موضح في الخطوة 3.1) وتصفيتهاالسيطرة على السيارة (سيترات الصوديوم، 0.04 ملم) في DMEM المصل خالية. قسامة 50 ميكرولتر من العينات والمعايير التي تمت تصفيتها إلى الأسود محصنة أسفل لوحة واضحة. باستخدام مقياس الطيف الضوئي، وقياس الامتصاصية في 390-410 نانومتر، ومقارنة القراءات لمنحنى التركيز AgNP. إذا عينات تصفيتها لها نفس القيمة الامتصاصية كما العينة السيطرة على السيارة، فإنه يمكن أن يفترض إزالة AgNPs المتبقية.
  6. استخدام نصف من وسائل الإعلام التي تمت تصفيتها لتحديد التعليمات التالية TNF-α إفراز من عدة متاحة تجاريا.

5. المهاد الصيانة خلية ثقافة

  1. الدافئة DMEM زراعة الخلايا المتوسطة تستكمل مع FBS 10٪ و 1٪ PSN إلى 37 درجة مئوية.
  2. الحصول على الأوراق المالية المجمدة من المهاد الخلايا في مرور 18 (mHypo-A1 / 2) - 25 تخزينها في 80 درجة مئوية. بسرعة ذوبان الجليد الخلايا في 37 ° C حمام الماء.
  3. نقل بلطف الخلايا إلى 75 سم 2 قارورة تنفيس تحتوي على وسائل الإعلام ثقافة 10 مل الخلية.
  4. احتضان قارورة في 5٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية. وسائل الاعلام نضح بعد 24 ساعة واستبدالها مع وسائل الإعلام الجديدة. تنمو الخلايا حتى ما يقرب من في 70-80٪ confluency.

6. تحديد المهاد سمية خلية

  1. DMEM الدافئة وحل 1X-التربسين- EDTA في حمام مائي 37 درجة مئوية.
  2. وسائل الإعلام نضح من خلايا المخ تحت المهاد البصري وإضافة 500 ميكرولتر من التربسين. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 2-5 دقيقة. إزالة الخلايا من قارورة باستخدام مكشطة كما هو موضح أعلاه في الخطوة 2.
  3. عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات ولوحة خلايا المخ تحت المهاد البصري في 5000 خلية / جيدا في الأسود الجدران أسفل لوحة واضحة في الحجم النهائي من DMEM 200 ميكرولتر تستكمل مع FBS 10٪ و 1٪ PSN واحتضان بين عشية وضحاها في 5٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية .
  4. إزالة 100 ميكرولتر من وسائل الإعلام القديمة باستخدام pipetter متعدد القنوات وإضافة 100 ميكرولتر من وسائل الإعلام مكيفة تتركز المفلتر وذلك لتركيز النهائي من 1X.
  5. احتضان لوحة في 5٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
  6. إضافة 221؛ لتر من كاشف ريسازورين واحتضان لوحة لمدة 20 دقيقة في 5٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية.
  7. باستخدام مقياس الطيف المتعدد، مضان سجل (560 نانومتر EX / 590 نانومتر EM) لقياس بقاء الخلية. عن النتائج وحدات مضان النسبي (RFU).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتبين لنا أن وظيفة الخلايا الدبقية الصغيرة بمثابة جهاز الاستشعار البيولوجي البديل للاستجابة المخ لالنانوية باستخدام بروتوكول أعلاه. وتشمل نتائجنا قياس التأثيرات السامة لتفعيل دبقية على المصب موت الخلايا العصبية الشكل 1 يدل على سير العمل في بروتوكول لتنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة وتحديد ما إذا كان السيتوكينات يفرز تقلل قابلية الخلايا العصبية المهاد. تم زيادة إفراز TNF-α بشكل ملحوظ بعد التعرض AgNP (الشكل 2). عندما تت...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تدعم الدراسات الحديثة أن التعرض البيئي يساهم في السمنة والأمراض التنكسية العصبية الأخرى 11،12. ومع ذلك ، فإن التقنيات المستخدمة في الدراسات السابقة تستغرق وقتا طويلا ومكلفة. تعد الاعتبارات الاقتصادية ، وأنظمة التوصيل ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية ، والقضايا الأخلاقية مع الاستخدام المكثف للنماذج الحيوانية في الجسم الحي ، وصعوبة ترجمة النتائج إلى نصائح صحية ذات مغزى ، بعض التحديات الرئيسية التي أعاقت التقدم في دراسة السمية العصبية الناجمة عن NP 13. لذلك ، أصبح استخدام المستشعر الحيوي البدي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين أي تضارب للكشف عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذا العمل من قبل وزارة شؤون المحاربين القدامى الأمريكية BLR & D IK2 BX001686 (إلى TAB) ، ومنح من جامعة مينيسوتا للأغذية الصحية ، ومعهد الحياة الصحية (إلى CMD و JPN و TAB) ومؤسسة مينيسوتا للأبحاث الطبية والتعليم القدامى (إلى TAB). نشكر الدكتورين فيليب مارامبو (معهد فينشتاين للبحوث الطبية ، مانهاست ، نيويورك) و Weihua Zhao (مستشفى ميثوديست ، هيوستن ، تكساس) لتوفير خط خلايا BV2.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي > خلايا / كواشف < / قوي >
خط الخلايا الدبقية الصغيرة للفأر (BV2) مجموعةخط الخلايا Interlab (جنوة ، إيطاليا)ATL03001
خلية ما تحت المهاد للفأر البالغ mHypoA-1 / 2 & nbsp ؛شركة Cellutions Biosystems Inc.CLU172
دولبيكو s النسر المعدل s متوسطInvitrogen10313-039
مصل الأبقار الجنينية مختبرات PAAA15-751
البنسلين / الستربتومايسين / نيومايسينثيرمو فيشر العلمي15640-055
التربسين-EDTAثيرمو فيشر العلمي25200056
الجسيمات النانوية الفضية (20 نانومتر)سيجما ألدريتش730793

Prestoكاشف بقاء الخلية الزرقاء		InvitrogenA13262
الفأر TNF- & ألفا. إليزا ماكس ديلوكسBiolegend430904
عديدات السكاريد الدهنيةسيجما ألدريتشL4391
سترات الصوديومسيجما-ألدريتشS4641
NameCompanyCatalog NumberComments
Equipment
96 واط ، بوليسترين أسود ، معالجة بزراعة الخلايا ، مع غطاء ،Thermo Fisher Scientific165305
Amicon Ultra-0.5 مع غشاء Ultracel-10EMD MilliporeUFC501008
SpectraMax M5 أجهزة جزيئية متعددة الأوضاعM5
فالكون 50 مل جهاز طرد مركزي مخروطي أنابيبCorning، Inc
14-432-22
مصافي خلية الصقر 70 & مو ؛ mCorning، Inc08-771-2
جهاز طرد مركزي منضدية 5430Eppendorf22620560
خط وحدة تصفية طرد مركزي معقمة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Block, M. L., Calderon-Garciduenas, L. Air pollution: mechanisms of neuroinflammation and CNS disease. Trends Neurosci. 32, 506-516 (2009).
  2. Brochu, P., Bouchard, M., Haddad, S. Physiological daily inhalation rates for health risk assessment in overweight/obese children, adults, and elderly. Risk Anal. 34, 567-582 (2014).
  3. Jerrett, M., et al. Traffic-related air pollution and obesity formation in children: a longitudinal, multilevel analysis. Environ Health. 13, 49(2014).
  4. Kraft, A. D., Harry, G. J. Features of microglia and neuroinflammation relevant to environmental exposure and neurotoxicity. Int J Environ Res Public Health. 8, 2980-3018 (2011).
  5. Duffy, C. M., et al. Role of orexin A signaling in dietary palmitic acid-activated microglial cells. Neurosci Lett. 606, 140-144 (2015).
  6. Butterick, T. A., et al. Use of a caspase multiplexing assay to determine apoptosis in a hypothalamic cell model. J Vis Exp. , (2014).
  7. Xiao, J., et al. Monitoring of cell viability and proliferation in hydrogel-encapsulated system by resazurin assay. Appl Biochem Biotechnol. 162, 1996-2007 (2010).
  8. Blasi, E., Barluzzi, R., Bocchini, V., Mazzolla, R., Bistoni, F. Immortalization of murine microglial cells by a v-raf/v-myc carrying retrovirus. J Neuroimmunol. 27, 229-237 (1990).
  9. Belsham, D. D., et al. Ciliary neurotrophic factor recruitment of glucagon-like peptide-1 mediates neurogenesis, allowing immortalization of adult murine hypothalamic neurons. FASEB J. 23, 4256-4265 (2009).
  10. Paramelle, D., et al. A rapid method to estimate the concentration of citrate capped silver nanoparticles from UV-visible light spectra. Analyst. 139, 4855-4861 (2014).
  11. Wei, Y., et al. Chronic exposure to air pollution particles increases the risk of obesity and metabolic syndrome: findings from a natural experiment in Beijing. FASEB J. , (2016).
  12. Levesque, S., Surace, M. J., McDonald, J., Block, M. L. Air pollution & the brain: Subchronic diesel exhaust exposure causes neuroinflammation and elevates early markers of neurodegenerative disease. J Neuroinflammation. 8, 105(2011).
  13. Block, M. L., et al. The outdoor air pollution and brain health workshop. Neurotoxicology. 33, 972-984 (2012).
  14. Carson, M. J., Crane, J., Xie, A. X. Modeling CNS microglia: the quest to identify predictive models. Drug Discov Today Dis Models. 5, 19-25 (2008).
  15. Valdearcos, M., et al. Microglia dictate the impact of saturated fat consumption on hypothalamic inflammation and neuronal function. Cell Rep. 9, 2124-2138 (2014).
  16. Perry, V. H., Holmes, C. Microglial priming in neurodegenerative disease. Nat Rev Neurol. 10, 217-224 (2014).
  17. Block, M. L., Hong, J. S. Chronic microglial activation and progressive dopaminergic neurotoxicity. Biochem Soc Trans. 35, 1127-1132 (2007).
  18. Vincenti, J. E., et al. Defining the Microglia Response during the Time Course of Chronic Neurodegeneration. J Virol. 90, 3003-3017 (2015).
  19. Grabert, K., et al. Microglial brain region-dependent diversity and selective regional sensitivities to aging. Nat Neurosci. 19, 504-516 (2016).
  20. Lull, M. E., Block, M. L. Microglial activation and chronic neurodegeneration. Neurotherapeutics. 7, 354-365 (2010).
  21. Oeckinghaus, A., Hayden, M. S., Ghosh, S. Crosstalk in NF-kappaB signaling pathways. Nat Immunol. 12, 695-708 (2011).
  22. Gifford, J. C., et al. Thiol-modified gold nanoparticles for the inhibition of Mycobacterium smegmatis. Chem Commun (Camb). 50, 15860-15863 (2014).
  23. Colella, M., Lobasso, S., Babudri, F., Corcelli, A. Palmitic acid is associated with halorhodopsin as a free fatty acid. Radiolabeling of halorhodopsin with 3H-palmitic acid and chemical analysis of the reaction products of purified halorhodopsin with thiols and NaBH4. Biochim Biophys Acta. 1370, 273-279 (1998).
  24. Sherry, B., Jue, D. M., Zentella, A., Cerami, A. Characterization of high molecular weight glycosylated forms of murine tumor necrosis factor. Biochem Biophys Res Commun. 173, 1072-1078 (1990).
  25. PubChem Compound Database. , National Center for Biotechnology Information. https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/104755 (2004).
  26. Koenigsknecht-Talboo, J., Landreth, G. E. Microglial phagocytosis induced by fibrillar beta-amyloid and IgGs are differentially regulated by proinflammatory cytokines. J Neurosci. 25, 8240-8249 (2005).
  27. McCarthy, R. C., et al. Characterization of a novel adult murine immortalized microglial cell line and its activation by amyloid-beta. J Neuroinflammation. 13, (2016).
  28. Schauer, J. J., et al. Source apportionment of airborne particulate matter using organic compounds as tracers. Atmos Environ. 30, 3837-3855 (1996).
  29. Kleeman, M. J., et al. Source apportionment of fine (PM1.8) and ultrafine (PM0.1) airborne particulate matter during a severe winter pollution episode. Environ Sci Technol. 43, 272-279 (2009).
  30. Borm, P. J., et al. The potential risks of nanomaterials: a review carried out for ECETOC. Part Fibre Toxicol. 3, (2006).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

BV2 TNF alpha ELISA

مقالات ذات صلة