مقالة منهجية

نموذج الفئران من المجموعة الثانية العقدية المهبلية الاستعمار

DOI:

10.3791/54708

⸱

نوفمبر 16, 2016

 , 
1Department of Pediatrics, Division of Host-Microbe Systems & Therapeutics, University of California San Diego School of Medicine, 2Department of Biology and Center for Microbial Sciences, San Diego State University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

والغرض من هذا البروتوكول هو تقليد مجموعة بشرية الثانية العقدية (GBS) الاستعمار المهبل في نموذج الفئران. ويمكن استخدام هذا الأسلوب لتحقيق الاستجابة المناعية والعوامل البكتيرية المساهمة في GBS استمرار المهبلي، وكذلك لاختبار الاستراتيجيات العلاجية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

العقدية القاطعة للدر (المجموعة الثانية العقدية، GBS)، هو إيجابية الجرام، المستعمر بدون أعراض في الجهاز الهضمي البشري والقناة المهبلية من 10 - 30٪ من البالغين. في الأفراد المناعة للخطر، بما في ذلك حديثي الولادة، والنساء الحوامل، وكبار السن، قد GBS التبديل إلى الممرض الغازية تسبب تعفن الدم والتهاب المفاصل والالتهاب الرئوي، والتهاب السحايا. لأن GBS هي العوامل المسببة للأمراض البكتيرية الرائدة في مجال حديثي الولادة، وتتألف الوقاية الحالية من أواخر فحص الحمل للGBS الاستعمار المهبل واللاحقة العلاج بالمضادات الحيوية الفترة المحيطة بالولادة من الأمهات GBS إيجابية. عبء المهبل GBS الثقيل هو أحد عوامل الخطر بالنسبة للأمراض الأطفال حديثي الولادة والاستعمار. للأسف، لا يعرف إلا القليل عن البلد المضيف والعوامل البكتيرية التي تشجع أو تسمح GBS الاستعمار المهبل. يصف هذا البروتوكول تقنية لإنشاء المستمر GBS الاستعمار المهبل باستخدام واحدة-β استراديول ما قبل المعالجة وأخذ العينات اليومية لتحديد مبناها البكتيريةد. ذلك مزيدا من التفاصيل أساليب لإدارة العلاجات أو الكواشف من فوائد إضافية وجمع المهبل السائل غسل وأنسجة الجهاز التناسلي. وهذا نموذج الفأر يعزز فهم التفاعل GBS المضيف ضمن بيئة المهبل، والتي سوف تؤدي إلى الأهداف العلاجية المحتملة للسيطرة الاستعمار المهبل الأمهات أثناء الحمل ومنع انتقال العدوى إلى الأطفال حديثي الولادة المعرضين للخطر. كما سيكون من مصلحة لزيادة فهمنا للتفاعلات البكتيريا في استضافة العامة في القناة المهبلية الإناث.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

العقدية القاطعة للدر، المجموعة الثانية العقدية (GBS)، هو، البكتيريا إيجابية الجرام مغلفة التي غالبا ما تكون معزولة من الأمعاء والجهاز البولي التناسلي من البالغين الأصحاء. في 1970s، ظهرت GBS وكيلا للوفيات حديثي الولادة المعدية، مع أكثر من 7000 حالة من حالات مرض حديثي الولادة سنويا 1. المبكر بداية GBS مرض (التخلص من الذخائر المتفجرة) ويحدث في الساعات أو الأيام الأولى من الحياة، ويطرح نفسه هو الالتهاب الرئوي أو ضيق في التنفس، وغالبا ما يتطور إلى تسمم الدم، في حين أن المرض تأخر ظهور (اللد) تستتبعه بعد عدة أشهر، ويقدم مع تجرثم الدم، والتي في كثير من الأحيان التقدم إلى التهاب السحايا 2. اعتبارا من عام 2002، ومراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها توصي الفحص الشامل لGBS الاستعمار المهبل في أواخر الحمل والوقاية باستخدام المضادات الحيوية الولاد (IAP) لأمهات GBS الإيجابية 1. وعلى الرغم من الحد من المرض المبكر بداية إلى ما يقرب من 1000 حالة في الولايات المتحدة بسبب سنويا لIAP،يبقى GBS السبب الرئيسي للتسمم في حديثي الولادة في وقت مبكر الحدوث، وتأخر ظهور قوع يبقى بمنأى 1. سواء في الرحم، أثناء العمل، أو حتى في الحالات المتأخرة من البداية، تعرض الرضع لGBS يتطلب البقاء على قيد الحياة، مستعرضة من خلال عدد من البيئات المضيفة والحواجز، والتهرب المناعي، وفي حالة التهاب السحايا، عبور بالدم درجة عالية من التنظيم حاجز الدماغ 2. المنبع من هذه التفاعلات خبيثة داخل الوليد هو الاستعمار الأولي من القناة المهبلية الأمهات. الأم GBS معدلات الاستعمار المهبلية تتراوح 8-18٪ في البلدان المتقدمة والنامية، وبمعدل متوسط يقدر ب 12.7٪ 3،4. GBS استعمار القناة المهبلية أثناء الحمل قد يكون ثابتا، متقطعة، أو عابرة في الطبيعة بين النساء الفردية 5. ومن المثير للاهتمام، ويرتبط والأمهات العمر> 36 عاما مع الاستعمار المستمرة 6. عوامل الخطر البيولوجية والاجتماعية والاقتصادية العديدة لGBS الاستعمار المهبلتم تحديدها. وتشمل العوامل البيولوجية الهضمي الاستعمار GBS وغياب الملبنة في الأمعاء. ومع ذلك، كما تم المرتبطة العرق، السمنة، والنظافة، والنشاط الجنسي مع GBS النقل المهبل 7.

على الرغم من اشتهر يسبب العدوى حديثي الولادة، يسبب GBS أيضا مجموعة متنوعة من الالتهابات الأمهات على حد سواء الفترة المحيطة بالولادة وبعد الولادة. يتم زيادة GBS النقل في النساء مع تقديم المهبل 8، وفي بعض الحالات، قد يكون حتى الكيان المرض 9. بالإضافة إلى ذلك، GBS صعود الجهاز التناسلي أثناء الحمل قد يؤدي إلى عدوى داخل السلى أو شريوأمنيونيتيس 10. وعلاوة على ذلك، في ما يصل إلى 3.5٪ من حالات الحمل، GBS نشر إلى المثانة البولية أن يسبب عدوى المسالك البولية أو الجرثومية عديمة الأعراض (11). ويرتبط الجرثومية GBS خلال فترة الحمل مع زيادة خطر الاصابة بالحمى أثناء الولادة، شريوأمنيونيتيس، الولادة المبكرة، وprematurالبريد تمزق الأغشية 12. معا، ويرتبط وجود GBS داخل القناة المهبلية لالتهابات أنسجة المضيف متعددة، والقدرة على القضاء على GBS من هذا المتخصصة أمر حتمي بالنسبة للصحة الأمهات والأطفال حديثي الولادة.

حتى وقت قريب، والغالبية العظمى من عمل دراسة التفاعلات GBS مع الجهاز عنقي مهبلي اقتصر على نماذج الخلايا في المختبر 13-15. وقد كشفت هذه التجارب في المختبر العوامل البكتيرية التي تعتبر مهمة للالتزام، بما في ذلك البروتينات السطحية مثل هذه الشعرة وسيرين الغنية يكرر 17،18، وكذلك النظم التنظيمية اثنين من عناصر 15،19 واستجابة النسخي العالمية للظهارة المهبل ل GBS 19. ومع ذلك، لتوضيح كامل التفاعلات المضيف ميكروب داخل القناة المهبلية، وهذا نموذج حيوان قوي أمر ضروري. أظهر العمل في وقت مبكر أن GBS يمكن استردادها من القناة المهبلية من الفئران الملقحة 20،21 والجرذان <سوب> 22 في كل الظروف الحوامل وغير الحوامل. في عام 2005، كان على غرار المدى القصير GBS الاستعمار المهبل في الفئران لدراسة فعالية انزيم فج التحللي لعلاج GBS المهبلية خلال فترة 24 ساعة 23. بعد عدة سنوات، وقد وضعت على المدى الطويل GBS الاستعمار المهبل نموذج الفأر لدراسة العوامل المضيفة والبكتيرية التي تحكم GBS المثابرة. وقد حدد هذا النموذج العديد من العوامل التي تسهم في GBS الاستعمار، بما في ذلك الزوائد سطح 17،18 وGBS أنظمة اثنين من عناصر 19،24. وقد ساهم هذا النموذج على تحديد آليات الاستجابة المضيف 19،25، وكان يستخدم لاختبار العديد من الاستراتيجيات العلاجية، بما في ذلك الببتيدات المناعية 26 و البروبيوتيك 27. هذا البروتوكول يعطي التوجيهات اللازمة لتطعيم GBS في القناة المهبلية الماوس وتتبع فيما بعد الاستعمار وجمع عينات لإجراء المزيد من التحليلات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد وافق كل عمل الحيوانية مكتب مختبر رعاية الحيوان في جامعة ولاية سان دييغو وأجرى بموجب المعايير البيطرية مقبولة. إناث الفئران، سن 8-16 أسابيع استخدمت، لتطوير هذا الأسلوب.

1. إعداد وداخل الصفاق حقن β استراديول

  1. قياس من β استراديول (0.5 ملغ / الماوس) على وزن الورق أثناء ارتداء معدات الوقاية الشخصية المناسبة (PPE). تنبيه: β استراديول يمكن استيعابها من خلال الجلد والأغشية المخاطية.
  2. نقل بيتا استراديول إلى أنبوب مخروطي 15 مل ودوامة حتى تتم إزالة كافة كتل وβ استراديول هو مسحوق ناعم. وضع زيت السمسم (100 ميكرولتر / الماوس) في حقنة 10 مل. حقنة فلتر زيت السمسم في أنبوب مخروطي 15 مل تحتوي على β استراديول باستخدام فلتر 0.45 ميكرون. دوامة أنبوب مخروطي 15 مل حتى β استراديول هو تعليق متجانسة في زيت السمسم.
  3. وضع وβ-ESتعليق tradiol إلى حقنة 10 مل جديدة. مع 18 G، 1 في. إبرة، قسامة 100 ميكرولتر من تعليق في الحقن السلين 1 مل. تحضير حقنة واحدة لكل الماوس. وضع جديد، معقم 26 G، ½ الإضافية. إبرة في كل حقنة السلين.
  4. إدارة 0.5 ملغ من β استراديول علقت في 100 ميكرولتر من زيت السمسم (5 ملغ / مل) إلى كل فأر 24 ساعة قبل التلقيح البكتيرى. حقن كل فأر داخل التجويف البريتوني، في الأرباع أسفل البطن، فقط إلى اليمين أو اليسار من خط الوسط، كما هو موضح سابقا 28.
    ملاحظة: لا تنظيف أو لقطة من موقع الحقن ضروري.

2. المهبلي التلقيح مع GBS

  1. يوم واحد قبل التلقيح، وتنمو ثقافة السائل بين عشية وضحاها 5 مل من سلالة GBS الاهتمام، مثل A909 (المصلي الأولى أ)، في تود هيويت مرق (THB) عند 37 درجة مئوية.
  2. ثقافة فرعية ثقافة GBS بين عشية وضحاها في حجم 01:10 في THB الطازجة واحتضان عند 37 درجة مئوية. زراعةالبكتيريا إلى مرحلة منتصف السجل (OD 600 = 0،4-0،5). ملاحظة: هذا وعادة ما تأخذ 2-3 ساعة، اعتمادا على سلالة من GBS.
  3. نقل ثقافة فرعية إلى العقيمة 15 مل أنبوب وبيليه البكتيريا المخروطية في 3000 × ز لمدة 5 دقائق. نضح طاف. resuspend الكرية الجرثومي في 200 ميكرولتر من العقيمة مخزنة المالحة الفوسفات (PBS).
  4. باستخدام بيليه معلق، وجلب 3-5 مل من برنامج تلفزيوني (1 مل لكل 10 الفئران) بالضبط OD 600 = 0.4 في أنبوب جديد ثقافة 5 مل. وسوف يكون هذا التركيز من ~ 1 × 10 8 وحدات تشكيل مستعمرة (كفو) / مل. نقل إلى أنبوب مخروطي 15 مل الجديد وإعادة بيليه البكتيريا في 3000 × ز لمدة 5 دقائق. نضح طاف.
  5. Resuspend وبيليه في برنامج تلفزيوني في 10/01 حجم الأصلي. على سبيل المثال، إذا تم مكعبات 3 مل من OD 600 = 0.4، resuspend ثم في 300 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. ملاحظة: هذا هو تعليق النهائي البكتيري (~ 1 × 10 9 كفو / مل) المستخدمة للتلقيح الحيوان.
  6. Reserve 50 ميكرولتر من هذا التعليق لتخفيف المسلسل والطلاء على أجار THB لتحديد اللقاح المحدد.
  7. تطعيم كل فأر مع 10 ميكرولتر من تعليق البكتيرية النهائي بحيث يدار أن 1 × 10 7 كفو لكل الماوس.
    1. لتطعيم، وكبح جماح الماوس يدويا عن طريق تأمين الجلد المترهل في القفا من الرقبة بين الإبهام معالج والسبابة ثم شل حركة الذيل، كما هو موضح سابقا 28.
    2. وضع 10 ميكرولتر من GBS أعدت في الخطوة 2.6 إلى هلام 200 ميكرولتر ماصة تحميل طرف. إدراج غيض من 5 إلى 10 مم في تجويف المهبل والاستغناء عن 10 ميكرولتر من اللقاح.
      ويفضل جل نصائح تحميل أكثر القياسية نصائح-200 ميكرولتر للحد من خطر الصدمة الجهاز أو الإصابة، لا سيما في الفئران الأصغر سنا أو أصغر: ملاحظة.
    3. مباشرة بعد التلقيح، والإفراج عن القفا من الرقبة ورفع النهاية الخلفية من الفأرة، ورفع الماوس من ذيله وثALKING الكفوف الأمامية على سطح صلب ل~ 1 دقيقة.
    4. تفقد البصر فتحة المهبل لأي ارتداد اللقاح. إذا لوحظ ارتجاعي، يمكن استخدام معلومات سرية جديدة ماصة للتلاعب أو توسيع فتحة المهبل، مما يسهل امتصاص من ارتجاع في التجويف. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يستنشق ارتجاعي عبر ماصة وإعادة تلقيح.
      ملاحظة: إذا إدارة وكلاء موضعي، والكائنات بروبيوتيك، أو البروتينات من الفائدة، ويجوز إعطاء حجم ما يصل الى 20 ميكرولتر في منطقة عازلة فيزيولوجي في القناة المهبلية.

3. ينظف المهبل التجويف لتحديد GBS تحميل

  1. إعداد واحد أنبوب الطرد المركزي الصغيرة 1.5 مل في الماوس عن طريق إضافة 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. فقط قبل ينظف، قبل الرطب مسحة في برنامج تلفزيوني.
  2. كبح الماوس كما هو موضح في الخطوة 2.7.1 وتضاف مسحة 10 مم في تجويف المهبل. تناوب بلطف مسحة 4 مرات في اتجاه عقارب الساعة و 4 مرات عكس اتجاه عقارب الساعة، وتطبيق ضغط طفيف على جدار المهبل.
  3. نقل مسحة إلى أنبوب microcentrifuge 1.5 مل مع 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. قبل الطلاء، ودوامة أنبوب microcentrifuge ل~ 15 ثانية للافراج عن البكتيريا من مسحة. متسلسل تمييع كل عينة في برنامج تلفزيوني ولوحة 20 ميكرولتر من التخفيفات 1:10 من خلال 1: 10000 على لوحات المتوسطة أجار التفاضلية إعداد فقا لتعليمات الشركة الصانعة. احتضان لوحات عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. سوف تظهر المستعمرات GBS إما ردي مشرق أو بنفسجي فاتح اللون. سيتم مستعمل النباتات المحلية الأخرى، أو سوف تظهر كما المستعمرات أزرق، أبيض، أو رمادي.

4. جمع السائل المهبلي الغسل

  1. كبح الماوس كما هو موضح في الخطوة 2.7.1. باستخدام 200 ميكرولتر هلام تحميل ماصة، الماصة 20 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في تجويف المهبل. الماصة بلطف وحدة التخزين بالكامل صعودا وهبوطا 4 مرات داخل التجويف، ثم سحب وحدة التخزين بالكامل في نفس طرف ماصة. ملاحظة: إذا كان السائل غسل سميكا مع المخاطية، معيار 200 ميكرولتر ماصةيمكن استخدامها لجمع السائل غسل النهائي.
  2. إذا إنقاذ السائل غسل لتحليل خلوى أو كفو الكمي، موزعة في أنبوب microcentrifuge 0.7 مل. إذا تحديد مرحلة الشياع، موزعة على الأقل 5 ميكرولتر من السائل غسل على شريحة زجاجية ومراقبة الخلايا تحت التكبير 100X على المجهر الضوئي. ملاحظة: للحصول على أمثلة من مراحل داقية، انظر الشكل 1.

5. تشريح الأنسجة والتجانس

  1. لكل الماوس، وإعداد ثلاثة أنابيب 2 مل سقف المسمار (واحد لكل الأنسجة: المهبل وعنق الرحم، والرحم). ملء كل أنبوب مع وافرة (0،4-0،5 غرام) 1.0 مم حبات زركونيا لتغطية الجزء السفلي على شكل مخروطي للأنبوب.
  2. الأوتوكلاف أنابيب مستعدة قبل جمع الأنسجة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة 121 مئوية، وخاصة إذا كان قياس الحمولة الجرثومية. إضافة 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني العقيمة إلى كل أنبوب. وزن كل أنبوب بعد التعقيم وسجل للرجوع إليها في المستقبل لحساب تعافى وزن الأنسجة.
  3. التضحية الماوس باستخدام أساليب المؤسسية المعتمدة مثل CO 2 الخنق وخلع عنق الرحم. رش أسفل البطن بطني مع 70٪ ETOH. مع مقص العقيمة، وفتح تجويف بطني حوضي، ورفع الجلد مرة أخرى وعضلات البطن، وتهجير الأمعاء بحيث يتعرض الجهاز التناسلي.
  4. تعقيم مقص مع 70٪ ETOH، محو نظيفة إذا لزم الأمر، وقطع كل من قرون الرحم منتصف طولها ما بين جسم الرحم والمبايض. باستخدام مقص وملقط، والدهون الحشوية منفصل، الأغشية، والمثانة البولية بعيدا عن الجهاز التناسلي، والانتقال caudally.
  5. تعقيم مقص كما هو موضح في الخطوة 5.4. قطع مستعرض المهبل أقرب إلى الفرج ممكن لفصل الجهاز التناسلي من الجسم. رفع وإزالة الجهاز التناسلي سليمة ووضعه في طبق بتري معقمة.
  6. باستخدام شفرة حلاقة جديدة، فصل الرحم من عنق الرحم في قطع عرضية واحدة. تعقيم شفرة حلاقة مع 70٪ETOH، ثم فصل عنق الرحم من المهبل في قطع عرضية واحدة. ملاحظة: لن يكون هناك الحد الأدنى من أنسجة الرحم لا تزال تعلق على عنق الرحم. سيكون هناك كمية ضئيلة من الأنسجة المهبلية لا تزال تعلق على عنق الرحم.
  7. باستخدام ملقط معقم، ونقل كل من الأنسجة في كل أنابيب 2 مل من التي تحتوي على برنامج تلفزيوني والمجانسة الخرز. تنظيف ملقط مع 70٪ ETOH بين التعامل مع كل الأنسجة.
  8. تزن كل 2 مل أنبوب سقف المسمار وطرح الوزن الأصلي من أنبوب لتحديد وزن الأنسجة. تختلف الأوزان الأنسجة عادة ما بين 20 - 100 ملغ. بإحكام اغلاق أنابيب سقف المسمار وتجانس الأنسجة لمدة 1 دقيقة على السرعة القصوى في الخالط الأنسجة.
  9. لتحديد الحمولة الجرثومية، متسلسل تمييع 25 ميكرولتر من جناسة الأنسجة والتخفيفات لوحة 1:10 من خلال 1: 10000 على لوحات المتوسطة أجار التفاضلية. احتضان لوحات كما هو موضح في الخطوة 3.3. لتخزين العينات لتقدير خلوى، وتجميد الخليط الأنسجة في -20 ° C.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خلال تطوير هذا النموذج، لوحظ متعددة بشأن العوامل التي تؤثر على مدة GBS الاستعمار المهبل. لتحديد مرحلة كيف داقية في الآثار التلقيح GBS استمرار البكتيرية، ونظموا الفئران في يوم من التلقيح عن طريق السائل غسل المهبل. ويوضح الشكل 1 المراحل الأربع لدورة داقية الماوس، على النحو الذي يحدده الرطب جبل المهبل السائل غسل، وهي طريقة راسخة 29. تم تقسيم الفئران إلى مجموعات على أساس هذه المرحلة الأولية، وتمت مراقبة GBS استمرار مع مرور ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لتعزيز النهوض فهم التفاعلات GBS مع كل من المضيف والميكروبات الأخرى في سياق المضيف، مطلوب نموذج حيواني. يصف هذا العمل الجوانب التقنية لإنشاء GBS الاستعمار المهبل في الفئران. هذا البروتوكول يحقق> 90٪ الاستعمار من الفئران من دون استخدام التخدير لتطعيم البكتيريا أو لجمع عينات مسحة،-مثبطات المناعة لتمكين الاستعمار، المهبل قبل الغسل، أو مضافة إلى رشاقته اللقاح. وعلاوة على ذلك، وهذا النموذج يوضح استنساخ قوي، مع تقلب متواضع بين التجريبي في كل من طول GBS استمرار وعبء البكتيرية. نتائج تم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر مدير vivarium والموظفين في جامعة ولاية سان دييغو على الدعم في تربية. خلال هذا العمل ، تم دعم K.A.P. بمنحة ARCS وزمالة من مؤسسة إيناموري. يتم دعم KSD بمنحة R01 ، NS051247 ، من المعاهد الوطنية للصحة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
زيت السمسم سيجما ألدريتشS3547-250ML
& beta ؛ -Estradiol   ؛سيجما ألدريتشE8875-1Gتنبيه: ارتداء معدات الوقاية الشخصية المناسبة. يمكن امتصاص استراديول من خلال الجلد والأسطح المخاطية.
200 مو ؛ ل هلام تحميل ماصة نصائح   ؛الولايات المتحدة الأمريكية العلمية1252-0610
مسحات الإحليل التناسلي ، المعقمة ، مسحات ألجينات الكالسيومبيوريتان25-801 A 50
CHROMagar StrepBDRG InternationalSB282
Todd Hewitt BrothHardy Diagnostics7161C
18 G ، إبر 1.5 بوصةBD305199
26 G ، 0.5 بوصة إبرBD305111
10 مل محاقنBD309604
1 مل محاقنBD309659
0.45 & mu مرشحات حقنة م PVDFWhatman6900-2504
محلول الملح المخزن بالفوسفات من Dulbecco 1xCorning21-031-CV

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Verani, J. R., McGee, L., Schrag, S. J. Prevention of perinatal group B streptococcal disease--revised guidelines from CDC. MMWR. Recomm. Rep. 59 (RR-10), 1-36 (2010).
  2. Maisey, H. C., Doran, K. S., Nizet, V. Recent advances in understanding the molecular basis of group B Streptococcus virulence. Expert Rev. Mol. Med. 10, e27(2008).
  3. Regan, J. A., Klebanoff, M. A., Nugent, R. P. The epidemiology of group B streptococcal colonization in pregnancy. Vaginal Infections and Prematurity Study Group. Obstet. Gynecol. 77 (4), 604-610 (1991).
  4. Stoll, B. J., Schuchat, A. Maternal carriage of group B streptococci in developing countries. Pediatr. Infect. Dis. J. 17 (6), 499-503 (1998).
  5. Brzychczy-Wloch, M., et al. Dynamics of colonization with group B streptococci in relation to normal flora in women during subsequent trimesters of pregnancy. New Microbiol. 37 (3), 307-319 (2014).
  6. Manning, S. D., Lewis, M. A., Springman, A. C., Lehotzky, E., Whittam, T. S., Davies, H. D. Genotypic diversity and serotype distribution of group B streptococcus isolated from women before and after delivery. Clin. Infect. Dis. 46 (12), 1829-1837 (2008).
  7. Le Doare, K., Heath, P. T. An overview of global GBS epidemiology. Vaccine. 31 (Suppl 4), D7-D12 (2013).
  8. Jensen, N. E., Andersen, B. L. The prevalence of group B streptococci in human urogenital secretions. Scand. J. Infect. Dis. 11 (3), 199-202 (1979).
  9. Honig, E., Mouton, J. W., van der Meijden, W. I. Can group B streptococci cause symptomatic vaginitis? Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 7 (4), 206-209 (1999).
  10. Muller, A. E., Oostvogel, P. M., Steegers, E. A., Dorr, P. J. Morbidity related to maternal group B streptococcal infections. Acta Obstet. Gynecol. Scand. 85 (9), 1027-1037 (2006).
  11. Ulett, K. B., et al. Diversity of group B streptococcus serotypes causing urinary tract infection in adults. J. Clin. Microbiol. 47 (7), 2055-2060 (2009).
  12. Kessous, R., et al. Bacteruria with group-B streptococcus: is it a risk factor for adverse pregnancy outcomes? J. Matern. Fetal. Neonatal. Med. 25 (10), 1983-1986 (2012).
  13. Jelìnková, J., Grabovskaya, K. B., Rýc, M., Bulgakova, T. N., Totolian, A. A. Adherence of vaginal and pharyngeal strains of group B streptococci to human vaginal and pharyngeal epithelial cells. Zentralbl. Bakteriol. Mikrobiol. Hyg. A. 262 (4), 492-499 (1986).
  14. Zarate, G., Nader-Macias, M. E. Influence of probiotic vaginal lactobacilli on in vitro adhesion of urogenital pathogens to vaginal epithelial cells. Lett. Appl. Microbiol. 43 (2), 174-180 (2006).
  15. Johri, A. K., et al. Transcriptional and proteomic profiles of group B Streptococcus type V reveal potential adherence proteins associated with high-level invasion. Infect. Immun. 75 (3), 1473-1483 (2007).
  16. Park, S. E., Jiang, S., Wessels, M. R. CsrRS and environmental pH regulate group B streptococcus adherence to human epithelial cells and extracellular matrix. Infect. Immun. 80 (11), 3975-3984 (2012).
  17. Sheen, T. R., Jimenez, A., Wang, N. Y., Banerjee, A., van Sorge, N. M., Doran, K. S. Serine-rich repeat proteins and pili promote Streptococcus agalactiae colonization of the vaginal tract. J. Bacteriol. 193 (24), 6834-6842 (2011).
  18. Wang, N. Y., et al. Group B streptococcal serine-rich repeat proteins promote interaction with fibrinogen and vaginal colonization. J. Infect. Dis. 210 (6), 982-991 (2014).
  19. Patras, K. A., et al. Group B Streptococcus CovR regulation modulates host immune signalling pathways to promote vaginal colonization. Cell. Microbiol. 15 (7), 1154-1167 (2013).
  20. Furtado, D. Experimental group B streptococcal infections in mice: hematogenous virulence and mucosal colonization. Infect. Immun. 13 (5), 1315-1320 (1976).
  21. Cox, F. Prevention of group B streptococcal colonization with topically applied lipoteichoic acid in a maternal-newborn mouse model. Pediatr. Res. 16 (10), 816-819 (1982).
  22. Ancona, R. J., Ferrieri, P. Experimental vaginal colonization and mother-infant transmission of group B streptococci in rats. Infect. Immun. 26 (2), 599-603 (1979).
  23. Cheng, Q., Nelson, D., Zhu, S., Fischetti, V. A. Removal of group B streptococci colonizing the vagina and oropharynx of mice with a bacteriophage lytic enzyme. Antimicrob. Agents Chemother. 49 (1), 111-117 (2005).
  24. Faralla, C., et al. Analysis of two-component systems in group B Streptococcus shows that RgfAC and the novel FspSR modulate virulence and bacterial fitness. mBio. 5 (3), e00870-e00814 (2014).
  25. Patras, K. A., Rösler, B., Thoman, M. L., Doran, K. S. Characterization of host immunity during persistent vaginal colonization by. Group B Streptococcus. Mucosal Immunol. 8 (6), 1339-1348 (2015).
  26. Cavaco, C. K., et al. A novel C5a-derived immunobiotic peptide reduces Streptococcus agalactiae colonization through targeted bacterial killing. Antimicrob. Agents Chemother. 57 (11), 5492-5499 (2013).
  27. Patras, K. A., Wescombe, P. A., Rösler, B., Hale, J. D., Tagg, J. R., Doran, K. S. Streptococcus salivarius K12 limits group B Streptococcus vaginal colonization. Infect. Immun. 83 (9), 3438-3444 (2015).
  28. Shimizu, S. Routes of administration. The Laboratory Mouse. Chapter. 32, Elsevier Press. Amsterdam, Netherlands. 534-535 (2004).
  29. Caligioni, C. S. Assessing reproductive status/stages in mice. Curr. Protoc. Neurosci. 48, A.4I.1-A.4I.8 (2009).
  30. Furr, P. M., Hetherington, C. M., Taylor-Robinson, D. The susceptibility of germ-free, oestradiol-treated, mice to Mycoplasma hominis. J. Med. Microbiol. 30 (3), 233-236 (1989).
  31. Mosci, P., et al. Mouse strain-dependent differences in estrogen sensitivity during vaginal candidiasis. Mycopathologia. 175 (1-2), 1-11 (2013).
  32. Poisson, D. M., Chandemerle, M., Guinard, J., Evrard, M. L., Naydenova, D., Mesnard, L. Evaluation of CHROMagar StrepB: a new chromogenic agar medium for aerobic detection of Group B Streptococci in perinatal samples. J. Microbiol. Methods. 82 (3), 238-242 (2010).
  33. Carey, A. J., et al. Infection and cellular defense dynamics in a novel 17beta-estradiol murine model of chronic human group B streptococcus genital tract colonization reveal a role for hemolysin in persistence and neutrophil accumulation. J. Immunol. 192 (4), 1718-1731 (2014).
  34. Randis, T. M., et al. Group B Streptococcus beta-hemolysin/cytolysin breaches maternal-fetal barriers to cause preterm birth and intrauterine fetal demise in vivo. J. Infect. Dis. 210 (2), 265-273 (2014).
  35. Gendrin, C., et al. Mast cell degranulation by a hemolytic lipid toxin decreases GBS colonization and infection. Sci Adv. 1 (6), e1400225(2015).
  36. Santillan, D. A., Rai, K. K., Santillan, M. K., Krishnamachari, Y., Salem, A. K., Hunter, S. K. Efficacy of polymeric encapsulated C5a peptidase-based group B streptococcus vaccines in a murine model. Am. J. Obstet. Gynecol. 205 (3), e1-e8 (2011).
  37. De Gregorio, P. R., Juárez Tomás, M. S., Nader-Macìas, M. E. Immunomodulation of Lactobacillus reuteri CRL1324 on Group B Streptococcus Vaginal Colonization in a Murine Experimental Model. Am. J. Reprod. Immunol. 75 (1), 23-35 (2016).
  38. Whidbey, C., et al. A streptococcal lipid toxin induces membrane permeabilization and pyroptosis leading to fetal injury. EMBO Mol. Med. 7 (4), 488-505 (2015).
  39. Santillan, D. A., Andracki, M. E., Hunter, S. K. Protective immunization in mice against group B streptococci using encapsulated C5a peptidase. Am. J. Obstet. Gynecol. 198 (1), e1-e6 (2008).
  40. Cheng, Q., Fischetti, V. A. Mutagenesis of a bacteriophage lytic enzyme PlyGBS significantly increases its antibacterial activity against group B streptococci. Appl. Microbiol. Biotechnol. 74 (6), 1284-1291 (2007).
  41. De Gregorio, P. R., Juárez Tomás, M. S., Leccese Terraf, M. C., Nader-Macìas, M. E. In vitro and in vivo effects of beneficial vaginal lactobacilli on pathogens responsible for urogenital tract infections. J. Med. Microbiol. 63 (Pt 5), 685-696 (2014).
  42. De Gregorio, P. R., Juárez Tomás, M. S., Leccese Terraf, M. C., Nader-Macìas, M. E. Preventive effect of Lactobacillus reuteri CRL1324 on Group B Streptococcus vaginal colonization in an experimental mouse model. J. Appl. Microbiol. 118 (4), 1034-1047 (2015).
  43. Carey, A. J., et al. Interleukin-17A Contributes to the Control of Streptococcus pyogenes Colonization and Inflammation of the Female Genital Tract. Sci. Rep. 31 (6), 26836(2016).
  44. Hickey, D. K., Patel, M. V., Fahey, J. V., Wira, C. R. Innate and adaptive immunity at mucosal surfaces of the female reproductive tract: stratification and integration of immune protection against the transmission of sexually transmitted infections. J. Reprod. Immunol. 88 (2), 185-194 (2011).
  45. Boskey, E. R., Telsch, K. M., Whaley, K. J., Moench, T. R., Cone, R. A. Acid production by vaginal flora in vitro is consistent with the rate and extent of vaginal acidification. Infect. Immun. 67 (10), 5170-5175 (1999).
  46. Meysick, K. C., Garber, G. E. Interactions between Trichomonas vaginalis and vaginal flora in a mouse model. J. Parasitol. 78 (1), 157-160 (1992).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

GBS

مقالات ذات صلة