ووصف إجراءات مفصلة لتركيب لأزيد المسمى I-125 وradiolabeling من dibenzocyclooctyne (DBCO) -group مترافق، جزيئات الذهب 13 نانومتر الحجم باستخدام خالية من النحاس فوق رد فعل.
Method Article
ووصف إجراءات مفصلة لتركيب لأزيد المسمى I-125 وradiolabeling من dibenzocyclooctyne (DBCO) -group مترافق، جزيئات الذهب 13 نانومتر الحجم باستخدام خالية من النحاس فوق رد فعل.
هنا ، نعرض بروتوكولا مفصلا للتخليق الإشعاعي لمجموعة اصطناعية أزيد تحمل علامة 125I وتطبيقها على وضع العلامات الإشعاعية الفعالة لجزيئات الذهب النانوية الوظيفية في مجموعة DBCO باستخدام تفاعل نقر خال من النحاس. تم إجراء اليود المشع للسلائف المستنة (2) باستخدام [125I] NaI و chloramine T كمؤكسد في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. بعد تنقية HPLC للمنتج الخام ، تم الحصول على أزيد منقى 125علامة I (1) بإنتاجية كيميائية إشعاعية عالية (75 ± 10٪ ، ن = 8) ونقاء كيميائي إشعاعي ممتاز (>99٪). لتخليق الجسيمات النانوية الذهبية ذات العلامات الإشعاعية بحجم 13 نانومتر ، تم تحضير جزيئات الذهب النانوية الوظيفية DBCO (3) باستخدام بوليمر البولي إيثيلين جلايكول الثيول. أعطى تفاعل النقر الخالي من النحاس بين 1 و 3 125جسيما نانويا ذهبيا مسمى I (4) بأكثر من 95٪ من العائد الكيميائي الإشعاعي كما هو محدد بواسطة كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة الراديوية (radio-TLC). تشير هذه النتائج بوضوح إلى أن طريقة الوسم الإشعاعي الحالية باستخدام تفاعل نقر خال من النحاس معزز بالإجهاد ستكون مفيدة في وضع العلامات الراديوية الفعالة والمريحة للمواد النانوية المحتوية على مجموعة DBCO.
تم تطبيق تفاعل النقر الخالي من النحاس الذي يتم تعزيزه بالسلالة بين الأزيدات والسيكلوكتين على نطاق واسع على وضع العلامات المتعامد الحيوي الفعال لمجموعة واسعة من الجزيئات الحيوية والمواد النانوية والأشخاص الأحياء1-7. نظرا لخصوصية الموقع الممتازة ومعدل التفاعل السريع لتفاعل الاقتران هذا ، فقد تم استخدامه أيضا لتصنيع أجهزة التتبع ذات العلامات الإشعاعية. تم إعداد عدد قليل من مجموعات الأطراف الاصطناعية المصنوعة من الأزيد أو DBCO التيتحمل علامة F لوضع العلامات في المختبر على أنواع مختلفة من السرطانات التي تستهدف الببتيدات والأجسام المضادة ، وكذلك للتصوير الموجه مسبقا للأورام في الجسم الحي 8-13. بالإضافة إلى هذه الأمثلة ، تم تطبيق نفس تفاعل الاقتران على وضع العلامات على النظائر المشعة للمواد النانوية لدراسات التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني (PET)14-16.
< p class = 'jove_content'> لعدة عقود ، تم استخدام اليود المشع في البحوث الطبية الحيوية والتجارب السريرية من خلال التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني (124I) ، والتصوير المقطعي المحوسب بإصدار فوتون واحد (SPECT) (123I ، 125I) ، وعلاج سرطان الغدة الدرقية (131I) 17-21. لذلك ، فإن الطريقة الفعالة لوضع العلامات على اليود المشع مهمة بشكل أساسي لمختلف التحقيقات ، بما في ذلك دراسات التصوير الجزيئي ، وتحليل توزيع أعضاء الجزيئات الحيوية ، وتحديد العلامات الحيوية ، وتطوير الأدوية. يمكن استخدام استراتيجية تفاعل النقر الخالي من النحاس في وضع العلامات على اليود المشع. ومع ذلك ، لم يتم التحقيق في هذا التطبيق على نطاق واسع مثل 18جزيئا حيويا مسمى F22-23. هنا ، سوف نقدم بروتوكولا خطوة بخطوة لتخليق أزيد 125علامة I للوسم الإشعاعي للجزيئات المشتقة من مجموعة DBCO. وستشمل الإجراءات الواردة في هذا التقرير اليود المشع للسلائف المستعدنة، وخطوات التنقية باستخدام HPLC، واستخراج الطور الصلب. نظهر أيضا وضع العلامات الإشعاعية الفعالة لجزيئات الذهب النانوية بحجم 13 نانومتر المعدلة من مجموعة DBCO باستخدام الأزيد 125الذي يحمل علامة I. سيساعد البروتوكول التفصيلي في هذا التقرير الكيميائيين الاصطناعيين على فهم منهجية جديدة للوسم الإشعاعي لتخليق المنتجات ذات العلامات الإشعاعية.Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
تحذير: الشكل المؤكسد من اليود المشع متقلبة جدا ويجب التعامل مع الدروع الرصاص كافية وقارورة الرصاص. ينبغي تنفيذ جميع الخطوات الإشعاعية في غطاء محرك السيارة التي تم تصفيتها الفحم جيد التهوية، وتحتاج إلى مراقبة من قبل أجهزة الكشف الإشعاعي الإجراءات التجريبية.
1. إعداد مواد كيميائية وخرطوشة عكس المرحلة للتحضير لأزيد المسمى I-125
2. Radiosynthesis مجموعة الترقيعي أزيد المسمى I-125
3. تجميع الذهب النانوية DBCO-مجموعة مترافق
4. Radiolabeling من DBCO-المعدلة مجموعة الذهب النانوية عبر خالية من النحاس انقر على رد الفعل
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
تم تنفيذ رد فعل radioiodination من السلائف stannylated (2) خارج باستخدام 150 من MBq [125 I] ناي، حمض الخليك، والكلورامين تي في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة لتقديم المنتج رديولبلد (1). بعد تنقية HPLC التحضيرية للخليط الخام، تم الحصول على المنتج المطلوب مع 75 ± 10٪ (ن = 8) من العائد الإشعاعية. وكشف التحليل HPLC أن نقاء الإشعاعية المنتج المسمى I-125 وكان أكثر من 99٪ (الشكل 2)،...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
بشكل عام، كان العائد الإشعاعية لوحظ من المنقى 125 المسمى أنا أزيد (1) 75 ± 10٪ (ن = 8). انجزت radiolabeling مع 50-150 من MBq النشاط الإشعاعي، والنتائج الإشعاعية تتفق تماما. إذا [125 I] ناي (ر 1/2 = 59.4 د) أن خضع التحلل الإشعاعي لأكثر من شهر كان يستخدم في رد فعل radioiodination، وقد لوحظ أن العائد الإشعاعية من 1 أن انخفاضا طفيفا (53-65٪). ولذلك، فمن المستحسن أن [125 I] ناي استخدامها في أقرب وقت ...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
تم دعم هذا العمل بمنح من المؤسسة الوطنية للبحوث في كوريا ، بتمويل من حكومة جمهورية كوريا ، (رقم المنحة 2012M2B2B1055245 و 2012M2A2A6011335) ومن قبل مركز RI-Biomics التابع للمعهد الكوري لأبحاث الطاقة الذرية.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| الكلورامين T trihydrate | Sigma | 402869 | |
| [125I]NaI in aq. NaOH | Perkin-Elmer | NEZ033A010MC | |
| ميتابيسلفيت الصوديوم | سيجما | S9000 | |
| حمض الفورميك | سيجما | 251364 | |
| Sep-Pak tC18 plus خرطوشة | المياه | WAT036800 | |
| ثنائي ميثيل سلفوكسيد ؛ | سيجما | D2650 | |
| الأسيتون | سيجما | 650501 | |
| الإيثانول | سيجما | 459844 | |
| الذهب (الثالث) كلوريد ثلاثي الهيدرات | سيجما | 520918 | |
| توين 20 & nbsp ؛ | Sigma | P1379 | |
| DBCO PEG SH (MW 5,000) | NANOCS | PG2-DBTH-5K | |
| TLC هلام السيليكا 60 F254 | Merck | ||
| Analytical HPLC | Agilent | 1290 Infinity | رقم الموديل |
| Preparative HPLC | Agilent | 1260 Infinity | رقم الموديل |
| عمود الطور العكسي C18 | التحليلي Agilent | Zorbax Eclipse XDB-C18 | |
| Preparative C18 عمود الطور العكسي | Agilent | PrepHT XDB-C18 | |
| الماسح الضوئي اللاسلكي TLC | Bioscan | AR-2000 | رقم الموديل |
| معاير جرعة النظائر المشعة | Capintec، Inc | CRC -25R معاير الجرعة | رقم الموديل |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission