مقالة منهجية

نموذج في المختبر لدراسة التحول الخلوي من هربس كابوزي ساركوما

8K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/54828

⸱

أغسطس 25, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Division of Pediatric Infectious Diseases, University of Minnesota Medical School, 2Vaccine and Gene Therapy Institute, Oregon Health and Science University

في هذه المقالة

ملخص

ساركوما كابوزي (KS) ورم الناجمة عن العدوى بالفيروس النمطان الإنسان هربس-8/KS هربس (هف-8/كشف). نموذج الثقافة غشائي خلية الموصوفة هنا مناسبة فريدة لدراسة الآليات التي تحول كشف الخلايا المضيفة.

الملخص

ساركوما كابوزي (KS) هو ورم غير عادية تتألف من تكاثر المغزل الخلايا التي يتم تهيئتها بواسطة عدوى خلايا بطانية (EC) مع كشف، ويطور في أغلب الأحيان في الإعداد للكبت المناعي. على الرغم من عقود من البحث، لا يزال العلاج الأمثل من كانساس غير المحددة بوضوح والنتائج السريرية غير مواتية وبخاصة في الأماكن المحدودة الموارد. الآفات KS تحركها تولد الأوعية المرضية، والتهاب مزمن، وأونكوجينيسيس، وقد وضعت في المختبر خلية ثقافة نماذج مختلفة لدراسة هذه العمليات. KS ينشأ من الخلايا المصابة بكشف أصل غشائي، حيث توفر خلايا الجماعة الأوروبية-النسب في المختبر أنسب البدائل للسلائف الخلية المغزل. ومع ذلك، نظراً لأن الجماعة الأوروبية لها عمر محدود في المختبر ، واليات النمطان تستخدمهم كشف أقل كفاءة من تلك الفيروسات الورمية الأخرى، لقد كان من الصعب تقييم عمليات التحول في التعليم الابتدائي أو خلد تيلوميراسي ec. ولذلك، وضع نموذج رواية ثقافة تستند إلى المفوضية الأوروبية بسهولة يدعم التحول بعد الإصابة مع كشف. التعبير حمل خارج الرحم من جينات فيروس الورم الحليمي البشري النوع 16 E6 و E7 يسمح للثقافة الموسعة لمطابقة العمر ومرور وهمية وكشف-المصابين بالمفوضية الأوروبية ويدعم تطوير حقاً تحولت (أي، ورمي) النمط الظاهري في الثقافات الخلية المصابة . وسهلت هذا النموذج أصعب واستنساخه بدرجة عالية من كانساس اكتشاف عدة مسارات إشارات أساسية ذات الإمكانات العالية للترجمة إلى إعدادات السريرية.

المقدمة

ساركوما كابوزي (KS) هو ورم أنجيوبروليفيراتيفي تنسيق المتعددة التي تؤثر على المواقع عن طريق الجلد والأغشية المخاطية الحشوي أن يطور الأكثر شيوعاً في الإعداد لقمع المناعة المتقدم1. وقد وصف النماذج الوبائية الأربعة: الكلاسيكية، وشكل من أشكال كسول عادة ما تؤثر على كبار السن من تراث البحر الأبيض المتوسط والشرق الأوسط؛ علاجية المنشأ، الناجمة عن المعالجة بالأدوية المثبطة للمناعة بعد زرع الأعضاء؛ هذا الوباء، تعريف الإيدز مرض سرطان؛ والمتوطنة، شكلاً مستقلاً عن فيروس نقص المناعة البشرية مشتركة في الأطفال في المناطق الموبوءة في أفريقيا. ومع ظهور أنظمة العقاقير المضادة للفيروسات الرجعية تركيبة فعالة لعلاج فيروس نقص المناعة البشرية، أقل بكثير عادة يتم تشخيص KS الوباء في البلدان النامية. ومع ذلك، تظل النماذج العدوانية سريرياً المتوطنة والوبائية بين الأكثر شيوعاً تشخيص السرطان في العديد من البلدان الأفريقية2،،من34. ولذلك، يعتبر تحديد أدوية فعالة تستهدف المرضية لعلاج كانساس أولوية بحثية.

الأشيع، تتميز الآفات KS neovascularization واسعة النطاق ولكن غير طبيعية حيث تشكل المغزل خلايا المنشأ الأوروبية شبكات الأوعية الدموية متقطع5. تسمح هذه السفن غير طبيعي ("الشقوق الأوعية الدموية") التسرب من الكريات الحمراء، التي تعطي الآفات لون مميز. بالإضافة إلى ذلك، تتضمن الآفات الكريات البيضاء العديدة التي تميز الالتهاب المزمن (أي الخلايا الليمفاوية والضامة وخلايا البلازما). لقد وصف انحدار آفات كانساس بعد إعادة تشكيل المناعة، مما يوحي بأن سمات KS آفة فرط التكاثري وورم حقيقي6،،من78،9.

KS هربس (كشف)، المسبّب كانساس، حددت في عام 199410. منذ آنذاك كثيرة في المختبر خلية الثقافة-تم تطوير نماذج لتمكين الدراسات المرضية، بما في ذلك الخلايا اكسبلانتيد من المواد خزعة الورم والابتدائية أو المفوضية الأوروبية تعرب عن تيلوميراسي المصابين بكشف في المختبر11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18-أي من النماذج المتاحة حاليا ويجمل كانساس وورم المكروية تماما، ولكن جميعا أسهمت بمعرفة قيمة لفهم بل لكشف العدوى. خلافا الأخرى المعروفة ورمي الإنسان هربس فيروس ابشتاين-بار (EBV)، كشف عدم سهولة تحويل الخلايا في الثقافة عقب حيثياته العدوى19،،من2021، 22. ومع ذلك، تم التغلب على هذا القيد من ترانسدوسينج EC البشرية الأولية أما مختلطة الأصل ميكروفاسكولار أو اللمفاوية مع E6 واكتب E7 جينات من فيروس الورم الحليمي البشري 16 قبل الإصابة بكشف23،24 . التعبير عن هذه المسرطنة خارجية يزيد بشكل كبير احتمال تحويل لكشف في المختبر جزئيا بإتاحة المزيد من تثبيط الشبكية البروتين و p5323،24. أتاح هذا الأسلوب توصيل المفوضية الأوروبية مختبرات متعددة لتحديد التعديلات الرئيسية في المضيف التعبير الجيني في الخلايا التي هي الناجمة عن كشف العدوى والتي تظهر لتسهيل KS خلية البقاء على قيد الحياة وانتشار25،26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31 , 32-البروتوكولات المبينة في هذا التقرير مباشرة واستنساخه بدرجة عالية، وسوف تسفر عن توليد العمر ومرور مطابقة المفوضية الأوروبية كشف المصابين والمصابات موك عناصر التحكم التي يمكن أن يكون مثقف لأطول بكثير من الخلايا الأولية وسوف السماح بالتحقيق في آليات النمطان تستخدمهم كشف. على الرغم من أن البروتوكول يتضمن أسلوباً لإنتاج نوع المتوحش كشف من انصباب الابتدائي سرطان الغدد الليمفاوية الخلية خط BCBL-1، E6/E7-خلد الجماعة الأوروبية أيضا عرضه للعدوى مع باكميد المؤتلف المستمدة كشف BAC1630. يتم وصف بروتوكولات من أجل إعداد BAC16 في أماكن أخرى33،34.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: ينبغي إجراء جميع الإجراءات المبينة في هذا البروتوكول في ظروف BSL-2-

1-"إعداد الأوراق المالية كشف"

  1. TNE إعداد المخزن المؤقت: حل ملغ 292.24 يدتا في ddH 2 س وتقديمهم إلى 225 مل، وضبط لدرجة الحموضة 8. حل ملغ 605.7 تريس في ddH 2 س وتقديمهم إلى 225 مل، وضبط لدرجة الحموضة 8. الجمع بين الحلول يدتا وتريس، إضافة ز 4.38 كلوريد الصوديوم، ضبط الحجم النهائي إلى 500 مل، وتصفية تعقيم، وتخزينها في 4 درجات مئوية .
  2. الثقافة كشف الإيجابية، السلبية EBV انصباب الابتدائي سرطان الغدد الليمفاوية الخلية خط BCBL-1 في حاضنة هوميديفيد في 37 درجة مئوية بالإضافة إلى 5% CO 2 في ربمي تستكمل مع 10% معطل الحرارة الجنيني البقري المصل (FBS) ومضادات الميكروبات إلى حوالي 1 1.2 × 10 6 خلايا كل مل.
  3. للحث على كشف الإنتاج، تقسيم الثقافات 1:2 مع متوسطة جديدة وإضافة Phorbol 12-ميريستاتي 13-خلات (سلطة النقد الفلسطينية) بتركيز نهائي من 20 نانوغرام/مليلتر واحتضان الثقافات لمدة 5 أيام. وكبديل لذلك، يعامل الخلايا مع بوتيرات الصوديوم (قبض؛ 0.1 ملم) لمدة 3 أيام للحث على النسخ المتماثل الفيروسية الحال.
  4. حصاد الجسيمات الفيروسية، الطرد المركزي أولاً ثقافة طافية على 300 غرام x لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة لبيليه الخلايا ونقل سوبيرناتانتس إلى أنابيب جديدة.
  5. لزيادة توضيح المادة طافية لتجنب نقل الحطام الخلوية، الطرد المركزي في 2,500 س ز لمدة 10 دقائق في 4 ° C.
    ملاحظة: كبديل للطرد المركزي عالية السرعة توضيحاً لثقافة سوبيرناتانتس، الترشيح عن طريق 0.45 عقيمة يمكن إجراء تصفية ميكرومتر. وقد لاحظنا انخفاض ملحوظ في عيار استخدام الترشيح؛ ولذلك، نقوم بشكل روتيني الطرد المركزي والخطوة الثانية بدلاً من ذلك.
  6. المقبل، تراكب 5 مل محلول السكروز 25% في المخزن المؤقت TNE مع حوالي 30 مل ثقافة أوضح طافية في أنابيب أولتراسينتريفوجي 6-
  7. الطرد المركزي موازنة الأنابيب في 75,000 س ز 2 ح في 4 درجات مئوية تحت الفراغ.
  8. صب الثقافة طافية ولطخة حافة كل أنبوبة لإزالة قدر حل المادة طافية والسكروز قدر الإمكان، ثم ريسوسبيند بيليه الفيروسات، التي قد لا تكون مرئية في 150 ميليلتر من المخزن المؤقت TNE.
  9. تجمع كل حراكه الفيروس، يخلط جيدا، وتجميد 25 ميليلتر مختبرين في-80 درجة مئوية .

2. توصيل من المفوضية الأوروبية مع E6 و E7 جينات فيروس الورم الحليمي

ملاحظة: نستخدم قوارير زراعة الأنسجة القياسية بشكل روتيني لزراعة الأولية الجماعة الأوروبية. ومع ذلك، إذا كان يتم الحصول على النمو غير مرضية من المفوضية الأوروبية ثم استخدام قوارير الثقافة التجارية ينبغي النظر.

  1. الثقافة الأولية البشرية عن طريق الجلد microvascular أو اللمفاوية المفوضية الأوروبية في حاضنة هوميديفيد في 37 درجة مئوية بالإضافة إلى 5% CO 2 في الجماعة الأوروبية النمو المتوسطة (EGM؛ يحتوي على المفوضية الأوروبية المتوسطة القاعدية [EBM] تستكمل مع "بوليتكيت" EGM-2 [تحتوي على FBS، الهيدروكورتيزون وعامل النمو تنتجها الخلايا الليفية البشرية-ب وعامل نمو الأوعية الدموية في المفوضية الأوروبية، مثل الأنسولين عامل النمو-1، حمض الأسكوربيك، البشرية عامل النمو الظهارية، والمضادات الحيوية والهيبارين]) في قارورة ثقافة خلية T75 إلى ما يقرب من 50% التقاء.
  2. لتوصيل، خلايا الثقافة لكسسن PA317 16E6E7 24 ، 35 في حاضنة هوميديفيد في 37 درجة مئوية بالإضافة إلى 5% CO 2 في دميم وتستكمل مع 10% FBS ومضادات الميكروبات في T150 خلية ثقافة قارورة حتى هم روافد 90% تقريبا. ثم احتضانها بين عشية وضحاها في 16 مل متوسطة.
  3. توضيح المتوسطة PA317 من سينتريفوجينج على 300 غرام x لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة-
  4. إزالة اجتماع فريق الخبراء من الخلايا الثقافة وتراكب المفوضية الأوروبية مع 12 مل الوسط PA317 أوضح واحتضانها ل 4 h.
    ملاحظة: سينتريفوجينج 16 مل متوسطة مكيفة على 300 غرام x لنتائج دقيقة 5 في بيليه مدمجة التي لا تشعر بالقلق إزاء إزالة اللاحقة حذراً من 12 مل لتوضيح المادة طافية. ومع ذلك، إذا نقل الخلايا 16E6E7 لكسسن PA317 إلى الابتدائي EC الثقافات مصدر قلق (خط خلية التعبئة والتغليف وسوف تتفوق بسرعة المفوضية الأوروبية)، ثم الترشيح من المادة طافية مكيفة من خلال عامل تصفية 0.45 ميكرومتر قبل نقل يمكن تنفيذ-
  5. استبدال 6 مل الوسط PA317 EGM الطازجة واحتضان بين عشية وضحاها.
  6. "ريفيد المفوضية الأوروبية" مع 12 مل EGM الطازجة واحتضان h. 48 مزيد من
  7. بدون ثقافة الجماعة الأوروبية، إزالة المتوسطة ويغسل مع 12 مل من برنامج تلفزيوني دون الكاتيونات، وأضف 3 مل حل الانفصال الانزيمية التجارية (مثلاً، تريبل) واحتضانها في 37 درجة مئوية للحد الأدنى 3
    8. نقل تعليق خلية إلى أنبوب مخروطي 15 مل
  8. والطرد المركزي في ز 300 x لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ريسوسبيند بيليه الخلية الناتجة في EGM الطازجة وتقسم بالتساوي إلى 3 قوارير x T75 مع وحدة تخزين نهائي لمل 12 اجتماع فريق الخبراء في قارورة.
  9. لتحديد للجماعة الأوروبية ترانسدوسيد مع E6 و E7، إضافة G418 إلى تركيز نهائي 200 ميكروغرام/مل للممرات اثنين، يمكن بعدها مطلي للإصابة أو تجميدها في نيتروجين سائل الجماعة الأوروبية ترانسدوسيد-

3. العدوى "الجماعة الأوروبية ترانسدوسيد" بكشف

  1. في اليوم الذي يسبق الإصابة بحصاد المفوضية الأوروبية بالهضم الأنزيمي باستخدام الحل الانفصال الانزيمية التجارية كما هو موضح أعلاه. ريسوسبيند بيليه الخلية في 1 مل من اجتماع فريق الخبراء. استخدام 5 ميليلتر من الخلايا لتحضير 1/10 إضعاف في تريبان الأزرق. عد الخلايا الحية باستخدام هيموسيتوميتير والبذور 2.5 × 10 5 خلايا حية في 2 مل من اجتماع فريق الخبراء في بئر في 6 لوحات جيدا.
  2. اليوم من العدوى، إزالة EGM وتغسل الخلايا مع 3 مل من برنامج تلفزيوني مع الكالسيوم والمغنيسيوم في البئر، وثم إضافة 2 مل EBM.
    ملاحظة: من الضروري استخدام EBM بدلاً من اجتماع فريق الخبراء خلال العدوى، كما سوف تمنع الهيبارين في EGM ملزمة جسيمات الفيروسية والإصابة اللاحقة بهدف الجماعة الأوروبية.
    3. إضافة الأسهم فيروس ميليلتر 5 إلى 20 لكل بئر
  3. لتصيب الخلايا مع كشف، ودوامه لوح لمزج. لإضافة الخلايا المصابة وهمية بحجم المخزن المؤقت TNE متساوية لكل بئر.
  4. الطرد المركزي لوحات في 400 غ س لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة واحتضان ثم اللوحات في 37 درجة مئوية للحد الأدنى 90
  5. إذا كان الهدف من هذه الدراسة التحقيق في الأحداث المبكرة التي تتطلب متزامن التهاب فيروسي، مثلاً، الأحداث المبكرة في حيثياته العدوى، إزالة العدوى الفيروسية عند هذه النقطة. شطف وريفيد الخلايا مع 2 مل EGM الطازجة. وبخلاف ذلك، إضافة 2 مل EGM واحتضان الثقافات بين عشية وضحاها.
  6. ريفيد الخلايا مع 2 مل EGM اليوم بعد الإصابة وبعد ذلك مرة كل يومين-
  7. عندما تكون الخلايا حوالي 90% روافد، حصادها بالهضم الأنزيمي باستخدام الحل الانفصال الانزيمية التجارية كما هو موضح أعلاه، ثم تجمع الخلايا من ثلاثة آبار في T75، مشيراً إلى عدد إجمالي المرور ومرور ما بعد الإصابة.
    8. قم بتوسيع
  8. وهمية وكشف-المصابين بالمفوضية الأوروبية مع تقسيمات 1:3 للممرات أكثر اثنين على الأقل في الوقت الذي يمكن استخدامه في تجارب الخلايا أو تجميدها في نيتروجين سائل.
    ملاحظة: كما هو الحال مع تقسيم للجماعة الأوروبية ترانسدوسيد مع E6 و E7، صون الثقافات من الخلايا المصابة وهمية وكشف يجب تقسيمها قبل التوصل إلى التقاء (~ 85 إلى 90%).

4. "تأكيد الإصابة" بكشف طريق الفلورة

ملاحظة: الكشف كشف الكمون المرتبطة النووية مستضد (LANA-1/ORF73) يوفر مقياس كمي موثوق للعدوى. الأجسام المضادة-LANA متوفرة تجارياً.

  1. في اليوم السابق لتلطيخ، آبار لوحة اثنين كل منهما مع موك-كشف-إصابة أو الجماعة الأوروبية على لوحة 24-جيدا في 1 × 10 5 خلايا كل جيدا في 1 مل EGM واحتضان بين عشية وضحاها.
  2. الخلايا يغسل مرتين مع 500 ميليلتر من برنامج تلفزيوني بالإضافة إلى الكالسيوم وماجنيسيوم. أغسل لمدة 30 ثانية على منصة هزاز.
  3. في غطاء دخان خارجياً-فينتيلاتيد، إصلاح الخلايا مع 500 ميليلتر من بارافورمالدهيد 4% لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة-
  4. يغسل خلايا ثلاث مرات مع 500 ميليلتر من المخزن المؤقت للمياه والصرف الصحي (0.1% X-100 تريتون زائد مصل الماعز 0.02 في المائة في برنامج تلفزيوني بالإضافة إلى الاتصالات)-
  5. كتلة الخلايا مع 500 ميليلتر من مصل الماعز 2% في المخزن المؤقت للمياه والصرف الصحي لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة-
  6. يغسل خلايا ثلاث مرات مع 500 ميليلتر من المخزن المؤقت للمياه والصرف الصحي-
  7. تسمية بئر واحدة من موك-كشف-إصابة أو تضعف الجماعة الأوروبية مع 200 ميليلتر من جسم الابتدائي 01:100 في المخزن المؤقت للمياه والصرف الصحي لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة على الروك. احتضان بئرين المتبقية في 200 ميليلتر من المخزن المؤقت للغسيل فقط.
  8. يغسل خلايا ثلاث مرات مع 500 ميليلتر من المخزن المؤقت للمياه والصرف الصحي-
  9. تسمية جميع الآبار الأربعة مع 200 ميليلتر من جسم الثانوي المخفف 1: 100 في المخزن المؤقت للمياه والصرف الصحي لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة على الروك.
  10. يغسل خلايا ثلاث مرات مع 500 ميليلتر من المخزن المؤقت للمياه والصرف الصحي-
  11. لكل بئر تطبيق 20 ميليلتر من تصاعد DAPI تحتوي على المتوسط وساترة وتقييم التلوين باستخدام مجهر فلوري مقلوب.
  12. تحديد نسبة العدوى من الخلايا المصابة بكشف عن طريق العد عدد الأنوية LANA إيجابية في الخلايا على الأقل 200. العدوى مع المؤتلف يمكن أيضا رصد كشف Bac16 عن طريق مراقبة ثقافات للتعبير عن التجارة والنقل-

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

مورفولوجية EC الابتدائي الكلاسيكي توصف بأنها "حجر cobble"، ولا يتم تبديل هذا التشكل بالتعبير عن فيروس الورم الحليمي E6 و E7 الجينات (الشكل 1A). تعبير الجينات E6 و E7 وحدها لا الحث النمط الظاهري تحول؛ وهكذا، الخلايا عرضه للاتصال بتثبيط ويتوقف بتقسيم عند التوصل إلى التقاء في الثقافة. لكن سوف الخلايا تتكاثر وتنمو لالتقاء تريبسينيزيشن وريبلاتينج في أقل كثافة، مما يسمح للحفاظ على الثقافات العمر ومرور مطابقة لاستخدامها كعناصر تحكم إصابة صورية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

أونكوجينيسيس هو عملية متعددة الخطوات التي تلتف ضمانات هامة داخل الكائن حي36. نظراً لعدم وجود آفات KS على طول طائفة التهاب مزمن الطويلا صحيح، يتطلب توضيح بعض العمليات الفيزيولوجية المرضية بكشف وساطة إجراء بعض الدراسات في نماذج الثقافة الخلية التي تدعم التحول9. تجدر الإشارة إلى أن فقدان الاتصال تثبيط ومرسى-تعتمد على النمو، تعمل يدل على التحول الخلوي، لا تتطور سهولة عقب العدوى الأولية الجماعة الأوروبية أو EC خلد خارجية التعبير عن تيلوميراسي. ولذلك، بينما لا الخص النموذجية ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

شكر وتقدير

وأيد هذا العمل قبل HD068322 K12 (SCM)؛ R01 CA179921 و P51 OD011092 للمركبات؛ وجائزة 14PRE20320014 من جمعية القلب الأمريكية (س. ب).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
خلايا BCBL-1برنامج كاشف المعاهد الوطنية للصحة الإيدز3233
خلايا PA317ATCCCRL-2203
الخلايا البطانية الجلدية الدقيقة لحديثي الولادةLonzaCC-2505
EBM-2 Basal MediumLonzaCC-3156
EGM-2 BulletKitLonzaCC-3162
anti-KSHV LANA / ORF 73Advanced التقنيات الحيوية13-210-100
TrypLE TM< / sup>Express ، بدون فينول أحمرThermoFisher12604013
RPMI
DMEM
PBS مع الكالسيوم والمغنيسيوم

المراجع

  1. Bhutani, M., Polizzotto, M. N., Uldrick, T. S., Yarchoan, R. Kaposi sarcoma-associated herpesvirus-associated malignancies: epidemiology, pathogenesis, and advances in treatment. Sem. Onc. 42 (2), 223-246 (2015).
  2. Dedicoat, M., Vaithilingum, M., Newton, R. Treatment of Kaposi's sarcoma in HIV-1 infected individuals with emphasis on resource poor settings. The Cochrane database. (3), CD003256(2003).
  3. Robey, R. C., Bower, M. Facing up to the ongoing challenge of Kaposi's sarcoma. Curr. Op. Inf. Dis. 28 (1), 31-40 (2015).
  4. Sasco, A. J., et al. The challenge of AIDS-related malignancies in sub-Saharan Africa. PLOS ONE. 5 (1), e8621(2010).
  5. Grayson, W., Pantanowitz, L. Histological variants of cutaneous Kaposi sarcoma. Diag. Path. 3, 31(2008).
  6. Cattelan, A. M., et al. Regression of AIDS-related Kaposi's sarcoma following antiretroviral therapy with protease inhibitors: biological correlates of clinical outcome. Euro. J. Can. 35 (13), 1809-1815 (1999).
  7. Yuan, D., et al. Use of X-Chromosome Inactivation Pattern to Analyze the Clonality of 14. Female Cases of Kaposi Sarcoma. Med. Sci. Mon. Bas. Res. 21, 116-122 (2015).
  8. Gill, P. S., et al. Evidence for multiclonality in multicentric Kaposi's sarcoma. PNAS. 95 (14), 8257-8261 (1998).
  9. Douglas, J. L., Gustin, J. K., Moses, A. V., Dezube, B. J., Pantanowitz, L. Kaposi Sarcoma Pathogenesis: A Triad of Viral Infection, Oncogenesis and Chronic Inflammation. Trans. Biomed. 1 (2), (2010).
  10. Chang, Y., et al. Identification of herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-associated Kaposi's sarcoma. Science. 266 (5192), New York, N.Y. 1865-1869 (1994).
  11. Moses, A. In vitro endothelial cell systems to study Kaposi sarcoma. Kaposi Sarcoma: A Model of Oncogenesis. (Chapter 4), (2010).
  12. McAllister, S. C., Moses, A. V. Endothelial Cell- and Lymphocyte-Based In Vitro Systems for Understanding KSHV Biology. Kaposi Sarcoma Herpesvirus: New Perspectives. 312 (Chapter 8), 211-244 (2007).
  13. Lagunoff, M., et al. De Novo Infection and Serial Transmission of Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus in Cultured Endothelial Cells. J. Virol. 76 (5), 2440-2448 (2002).
  14. Benelli, R., Repetto, L., Carlone, S., Parravicini, C. Establishment and characterization of two new Kaposi's sarcoma cell cultures from an AIDS and a non-AIDS patient. Res. Virol. 145, 251-259 (1994).
  15. Simonart, T., et al. Iron as a potential co-factor in the pathogenesis of Kaposi's sarcoma? Int. J. Can. 78 (6), 720-726 (1998).
  16. An, F. Q., et al. Long-Term-Infected Telomerase-Immortalized Endothelial Cells: a Model for Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus Latency In Vitro and In Vivo. J. Virol. 80 (10), 4833-4846 (2006).
  17. Myoung, J., Ganem, D. Generation of a doxycycline-inducible KSHV producer cell line of endothelial origin: Maintenance of tight latency with efficient reactivation upon induction. J. Virol. Meth. 174 (1-2), 12-21 (2011).
  18. Lunardi-lskandar, Y., et al. Tumorigenesis and metastasis of neoplastic Kaposi's sarcoma cell line in immunodeficient mice blocked by a human pregnancy hormone. Nature. 375 (6526), 64-68 (1995).
  19. Cesarman, E. Gammaherpesvirus and lymphoproliferative disorders in immunocompromised patients. Can. Let. 305 (2), 163-174 (2011).
  20. Jones, T., et al. Direct and efficient cellular transformation of primary rat mesenchymal precursor cells by KSHV. J. Clin. Inves. 122 (3), 1076-1081 (2012).
  21. Aguirre, A. J., Robertson, E. S. Epstein-Barr Virus Recombinants from BC-1 and BC-2 Can Immortalize Human Primary B Lymphocytes with Different Levels of Efficiency and in the Absence of Coinfection by Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus. J. Virol. 74 (2), 735-743 (2000).
  22. Flore, O., et al. Transformation of primary human endothelial cells by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus. Nature. 394 (6693), 588-592 (1998).
  23. Moses, A. V., et al. Long-term infection and transformation of dermal microvascular endothelial cells by human herpesvirus 8. J. Virol. 73 (8), 6892-6902 (1999).
  24. Halbert, C. L., Demers, G. W., Galloway, D. A. The E7 gene of human papillomavirus type 16 is sufficient for immortalization of human epithelial cells. J. Virol. 65 (1), 473-478 (1991).
  25. Moses, A. V., et al. Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus-Induced Upregulation of the c-kit Proto-Oncogene, as Identified by Gene Expression Profiling, Is Essential for the Transformation of Endothelial Cells. J. Virol. 76 (16), 8383-8399 (2002).
  26. McAllister, S. C., et al. Kaposi sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) induces heme oxygenase-1 expression and activity in KSHV-infected endothelial cells. Blood. 103 (9), 3465-3473 (2004).
  27. Raggo, C., et al. Novel cellular genes essential for transformation of endothelial cells by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus. Can. Res. 65 (12), 5084-5095 (2005).
  28. McAllister, S. C., Hanson, R. S., Manion, R. D. Propranolol Decreases Proliferation of Endothelial Cells Transformed by Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus and Induces Lytic Viral Gene Expression. J. Virol. 89 (21), 11144-11149 (2015).
  29. Rose, P. P., Bogyo, M., Moses, A. V., Früh, K. Insulin-like growth factor II receptor-mediated intracellular retention of cathepsin B is essential for transformation of endothelial cells by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus. J. Virol. 81 (15), 8050-8062 (2007).
  30. Botto, S., Totonchy, J. E., Gustin, J. K., Moses, A. V. Kaposi Sarcoma Herpesvirus Induces HO-1 during De Novo Infection of Endothelial Cells via Viral miRNA-Dependent and -Independent Mechanisms. mBio. 6 (3), e00668(2015).
  31. Mansouri, M. Kaposi sarcoma herpesvirus K5 removes CD31/PECAM from endothelial cells. Blood. 108 (6), 1932-1940 (2006).
  32. Mansouri, M., Rose, P. P., Moses, A. V., Fruh, K. Remodeling of Endothelial Adherens Junctions by Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus. J. Virol. 82 (19), 9615-9628 (2008).
  33. Brulois, K. F., et al. Construction and manipulation of a new Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus bacterial artificial chromosome clone. J. Virol. 86 (18), 9708-9720 (2012).
  34. Myoung, J., Ganem, D. Generation of a doxycycline-inducible KSHV producer cell line of endothelial origin: Maintenance of tight latency with efficient reactivation upon induction. J. Virol. Meth. 174 (1-2), 12-21 (2011).
  35. Prudhomme, J. G., Sherman, I. W., Land, K. M. Studies of Plasmodium falciparum cytoadherence using immortalized human brain capillary endothelial cells. Int. J. Parasit. 26 (6), 647-655 (1996).
  36. Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of Cancer: The Next Generation. Cell. 144 (5), 646-674 (2011).
  37. Walker, L. R., Hussein, H. A. M., Akula, S. M. Disintegrin-like domain of glycoprotein B regulates Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus infection of cells. J. Gen. Virol. 95 (Pt 8), 1770-1782 (2014).
  38. Dai, L., et al. Sphingosine Kinase-2 Maintains Viral Latency and Survival for KSHV-Infected Endothelial Cells. PLOS ONE. 9 (7), e102314-e102319 (2014).
  39. Yoo, J., et al. Opposing Regulation of PROX1 by Interleukin-3 Receptor and NOTCH Directs Differential Host Cell Fate Reprogramming by Kaposi Sarcoma Herpes Virus. PLoS Path. 8 (6), e1002770(2012).
  40. Sharma-Walia, N., et al. COX-2/PGE2: molecular ambassadors of Kaposi's sarcoma-associated herpes virus oncoprotein-v-FLIP. Oncogenesis. 1 (4), e5(2012).
  41. Dimaio, T. A., Gutierrez, K. D., Lagunoff, M. Latent KSHV Infection of Endothelial Cells Induces Integrin Beta3 to Activate Angiogenic Phenotypes. PLoS Path. 7 (12), e1002424(2011).
  42. Wu, Y. H., et al. The manipulation of miRNA-gene regulatory networks by KSHV induces endothelial cell motility. Blood. 118 (10), 2896-2905 (2011).
  43. Alcendor, D. J., Knobel, S., Desai, P., Zhu, W. Q., Hayward, G. S. KSHV Regulation of Fibulin-2 in Kaposi's Sarcoma: implications for tumorigenesis. Am. J. Path. 179 (3), 1443-1454 (2011).
  44. Poole, L. J., et al. Altered Patterns of Cellular Gene Expression in Dermal Microvascular Endothelial Cells Infected with Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus. J. Virol. 76 (7), 3395-3420 (2002).
  45. Toth, Z., et al. Epigenetic Analysis of KSHV Latent and Lytic Genomes. PLoS Path. 6 (7), e1001013(2010).
  46. Damania, B., et al. Comparison of the Rta/Orf50 transactivator proteins of gamma-2-herpesviruses. J. Virol. 78 (10), 5491-5499 (2004).
  47. Koon, H. B., et al. Phase II trial of imatinib in AIDS-associated Kaposi's sarcoma: AIDS Malignancy Consortium Protocol 042. J. Clin. Onc. 32 (5), 402-408 (2014).
  48. Koon, H. B., et al. Imatinib-induced regression of AIDS-related Kaposi's sarcoma. J. Clin. Onc. 23 (5), 982-989 (2005).
  49. Cao, W., et al. Imatinib for highly chemoresistant Kaposi sarcoma in a patient with long-term HIV control: a case report and literature review. Cur. Onc. 22 (5), 395(2015).
  50. Botto, S., Totonchy, J. E., Gustin, J. K., Moses, A. V. Kaposi Sarcoma Herpesvirus Induces HO-1 during De Novo Infection of Endothelial Cells via Viral miRNA-Dependent and -Independent Mechanisms. mBio. 6 (3), e00668(2015).
  51. Pantanowitz, L., et al. C-Kit (CD117) expression in AIDS-related, classic, and African endemic Kaposi sarcoma. App. Imm. & Mol. Morph. 13 (2), 162-166 (2005).
  52. Poole, L. J., et al. Altered Patterns of Cellular Gene Expression in Dermal Microvascular Endothelial Cells Infected with Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus. J. Virol. 76 (7), 3395-3420 (2002).
  53. Desnoyer, A., et al. Expression pattern of the CXCL12/CXCR4-CXCR7 trio in Kaposi sarcoma skin lesions. Brit. J. Derm. , 1-12 (2016).
  54. Dai, L., et al. Role of heme oxygenase-1 in the pathogenesis and tumorigenicity of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus. Oncotarget. 7 (9), 10459-10471 (2016).
  55. Chisholm, K. M., et al. β-Adrenergic receptor expression in vascular tumors. Modern Pathology. 25 (11), 1446-1451 (2012).
  56. Gerber, H. P., et al. Vascular endothelial growth factor regulates endothelial cell survival through the phosphatidylinositol 3'-kinase/Akt signal transduction pathway. Requirement for Flk-1/KDR activation. J. Biol. Chem. 273 (46), 30336-30343 (1998).
  57. Billstrom Schroeder,, Christensen, M. R., Worthen, G. S. Human cytomegalovirus protects endothelial cells from apoptosis induced by growth factor withdrawal. J. Clin. Virol. 25 (Suppl 2), S149-S157 (2002).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

KSHV E6 E7

مقالات ذات صلة