Method Article

المعالجة سيفوبيرازون ماوس نموذج سريريا ذات صلة المطثية العسيرة سلالة R20291

DOI:

10.3791/54850

⸱

December 10th, 2016

 ,  ,  , 
1Department of Population Health and Pathobiology, North Carolina State University College of Veterinary Medicine, 2Department of Pathology and Laboratory Medicine, Lineberger Comprehensive Cancer Center, University of North Carolina School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويحدد هذا البروتوكول نموذج الفأر سيفوبيرازون من كلوستريديوم العدوى العسيرة (CDI) باستخدام سلالة سريريا ذات الصلة وراثيا لين العريكة، R20291. وفيما يلي تفصيل التركيز على رصد السريري المرض، C. التعداد البكتيري العسيرة السمية الخلوية السم، والتغيرات التشريحية المرضية في جميع أنحاء CDI في نموذج الفأر في البروتوكول.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المطثية العسيرة هو عامل ممرض معوي لاهوائي موجب الجرام ومكون للأبواغ يرتبط بزيادة المراضة والوفيات وبالتالي يشكل تهديدا عاجلا للصحة العامة. تكرار عدوى المطثية العسيرة (CDI) بعد العلاج الناجح بالمضادات الحيوية مرتفع ، ويحدث في 20-30٪ من المرضى ، مما يستلزم اكتشاف علاجات جديدة ضد هذا العامل الممرض. تؤدي النماذج الحيوانية الحالية ل CDI إلى معدلات وفيات عالية وبالتالي لا تقترب من مظاهر الأمراض المزمنة الخبيثة التي تظهر في البشر المصابين ب CDI. لتقييم العلاجات ضد المطثية العسيرة ، هناك حاجة إلى نموذج فأر يقترب من الأمراض البشرية باستخدام سلالة ذات صلة سريريا. يحدد هذا البروتوكول نموذج فأر سيفوبيرازون ل CDI باستخدام سلالة ذات صلة سريريا وقابلة للتتبع وراثيا ، R20291. يتم تفصيل تقنيات مراقبة الأمراض السريرية ، والعثر البكتيري المطثية العسيرة ، والسمية الخلوية السمية ، والتغيرات النسيجية المرضية في جميع أنحاء CDI في نموذج الفأر. بالمقارنة مع نماذج الفئران الأخرى من CDI ، فإن هذا النموذج ليس مميتا بشكل موحد عند الجرعة التي يتم إعطاؤها ، مما يسمح بملاحظة مسار سريري طويل من العدوى المتوافقة مع المرض البشري. لذلك ، يثبت نموذج الفأر السيفوبيرازون هذا من CDI منصة تجريبية قيمة لتقييم آثار العلاجات الجديدة على تحسين المرض السريري وعلى استعادة مقاومة الاستعمار ضد المطثية العسيرة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المطثية العسيرة هو اللاهوائية، إيجابية الجرام، تشكيل بوغ عصية أن يسبب تهدد الحياة الإسهال 1. ويرتبط C. عدوى العسيرة (CDI) مع زيادة معدلات الاعتلال والوفيات البشرية والنتائج في أكثر من 4.8 مليار $ في تكاليف الرعاية الصحية سنويا 1-4. في عام 2013، ومراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها تصنف C. صعب بمثابة خطر المقاومة للمضادات الحيوية عاجل، مشيرا إلى أنه يشكل تهديدا عاجلا للصحة العامة 1. حاليا، تعتبر العلاج بالمضادات الحيوية مع فانكومايسين وميترونيدازول مستوى الرعاية لCDI 5. للأسف، تكرار CDI بعد نجاح العلاج بالمضادات الحيوية عالية، وتحدث في 20-30٪ من ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بيان الأخلاقي:
وافقت اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في ولاية كارولينا الشمالية كلية جامعة ولاية الطب البيطري (NCSU) هذه الدراسة. وNCSU رعاية الحيوان واستخدام سياسة تطبق المعايير والمبادئ التوجيهية الواردة في قانون قانون والإرشاد الصحي بحوث رعاية الحيوان من عام 1985. مرافق حيوان مختبر في NCSU تلتزم المبادئ التوجيهية الواردة في دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. تم تقييم الأوضاع الصحية للحيوانات يوميا، وكانت الحيوانات تحتضر الموت الرحيم إنسانية من قبل CO 2 الخنق تليها تدابير الثانوية. الفنيين الحيوانات المدربة أو طبيب بيطري إجراء تربية الحيوانات في منشأة معتمدة AAALAC خلال هذه الدراسة....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أثناء دراسة التمثيل، وسابقة التجهيز من العمر 5 أسابيع C57BL / 6 الفئران WT مع سيفوبيرازون في مياه الشرب (0.5 ملغ / مل) لمدة 5 أيام، وسمح ليوم 2 تغسل مع مياه الشرب العادية. وقد تم الطعن الفئران مع 10 5 أبواغ C. صعب R20291 خلال أنبوب تغذية عن طريق الفم في يوم 0 (الشكل 1A). تم رصد الفئران لفقدان الوزن والعلامات السريرية (الخمول، وفقدان الشهية، والإسهال، والموقف منحنية) من CDI لمدة 14 يوما. أدى تحدي C57BL / 6 WT الف.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يميز هذا البروتوكول المسار السريري ، بما في ذلك فقدان الوزن ، والاستعمار البكتيري ، والسمية الخلوية السامة ، والتغيرات النسيجية المرضية في الجهاز الهضمي ، للفئران المعالجة بالمضادات الحيوية التي تواجهها جراثيم المطثية العسيرة R20291. هناك العديد من الخطوات الحاسمة داخل البروتوكول حيث يكون الاهتمام بالتفاصيل أمرا ضروريا. يعد الحساب الدقيق لقاح بوغ المطثية العسيرة أمرا بالغ الأهمية. ويستند هذا الحساب إلى تعداد مخزون الأبواغ الأصلي للمثثية العسيرة ، والذي ينبغي أن يكون متسقا على تعداد أبواغ متعددة.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه في هذا الوقت.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يود المؤلفون أن يشكروا تريفور لولي في معهد ويلكوم ترست سانجر لجراثيم المطثية العسيرة R20291 وجيمس س. جاي في كلية الطب البيطري بجامعة ولاية كارولينا الشمالية لخلايا فيرو ، وكلاهما مستخدم في هذه المخطوطة. تم إجراء علم الأنسجة الحيوانية في المرفق الأساسي لعلم الأنسجة الحيوانية LCCC في جامعة نورث كارولينا في تشابل هيل ، بمساعدة خاصة من تريسي رالي وأماندا براون. يتم دعم مركز LCCC لعلم الأنسجة الحيوانية جزئيا من خلال منحة الدعم الأساسي لمركز NCI (2P30CA016086-40) لمركز UNC Lineberger الشامل للسرطان. نود أيضا أن نشكر فنسنت يونغ وآنا سيكاتز وجانسي ليزلي وكاسي شوماخر على المناقشات المفيدة حول بروتوكول فحص السمية الخلوية لخلايا فيرو. يتم تمويل JAW من قبل منحة التدري....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
# 62 منظف مطهر Sporidicial Perisept  SSS Navigator48027سيتطلب هذا المنتج التخفيف على النحو الموصى به من قبل الشركة المصنعة
0.22 & mu ؛ مرشح mFisherbrand09-720-3بديل للوحة الترشيح للعينات الفردية التي تم اختبارها في فحص خلية Vero
0.25٪ Trypsin-EDTAGibco25200-056يحتاج إلى تسخينه في حمام مائي عند 37 درجة ؛ C قبل الاستخدام
0.4٪ Trypan BlueGibco15250-061
1٪ Peniciilin / StreptomycinGibco15070-063
10٪ معطل بالحرارة FBSGibco16140-071يحتاج إلى تسخينه في حمام مائي عند 37 درجة ؛ C قبل استخدام
حقنة بلاستيكية 1 مل ؛BD المستلزمات الطبية309628
1x PBSGibco10010-023
2 مل مايكرو الطرد المركزي برغي كابكورنينج430917
96 ثقافة خلية جيدة لوحة القاع المسطحةكوستار كورنينجCL3595
96 لوحة تصفية بئرميليبورMSGVS2210
لاصقThermoScientificAB-0558
Bacto AgarBecton Dickinson214010جزء من لوحات TCCFA (انظر أدناه)
Bacto Proteose PeptoneBecton Dickinson211684جزء من ألواح TCCFA (انظر أدناه)
CefoperazoneMP Bioworks199695
CefoxitineSigmaC47856جزء من ألواح TCCFA (انظر أدناه)
مجموعة المطثية العسيرة المضادة للسموممختبرات التكنولوجياT5000يستخدم كعنصر تحكم لفحص خلية
فيرو المطثية العسيرة توكسين قائمةالمختبرات البيولوجية152Cالتحكم الإيجابي في فحص خلية
فيرو D-cycloserineSigmaC6880جزء من لوحات TCCFA (انظر أدناه)
الماء المقطرGibco15230
DMEM 1x MediaGibco11965-092يحتاج إلى تسخينه في حمام مائي عند 37 درجة ؛ C قبل استخدام
الفركتوزفيشرL95500جزء من ألواح TCCFA (انظر أدناه)
مقياس الدمBright-Line ، SigmaZ359629
KH2< / sub>PO4< / sub>FisherP285-500جزء من لوحات TCCFA (انظر أدناه)
MgSO4< / sub> (اللامائية)SigmaM2643جزء من لوحات TCCFA (انظر أدناه)
ميليكس جي إس 0.22 مو ؛ مرشح mMillex-GSSLGS033SSمرشح لألواح TCCFA   ؛
Na2< / sub>HPO4< / sub>SigmaS-0876جزء من ألواح TCCFA (انظر أدناه) NaCl
FisherS640-3جزء من لوحات TCCFA (انظر أدناه) رقم
10 شفرة مشرط يمكن التخلص منهاMiltex، Inc4-410
لوحات PCRFisherbrand14230244
طبق بتري بلاستيكيKord-Valmark Brand2900
موزع خلية بلاستيكي معقم على شكل حرف LFisherbrand14-665-230
حقنة متدرجDymax CorporationT15469
TaurocholateSigmaT4009جزء من ألواح TCCFA (انظر أدناه)
الماء المقطر فائق النقاءInvitrogen10977-015
C57BL / 6J الفئرانمختبر جاكسون664يجب أن يكون عمر الفئران من 5 إلى 8 أسابيع
أوليمبوس BX43F مجهر ضوئيأوليمبوس علوم
DP27 كاميراأوليمبوس علوم الحياة
cellSens Dimension software أوليمبوس علوم
ختم الحياة الحياة

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Antibiotic Resistance Threats in the United States. , U.S.D.o.H.a.H. Services. Available from: http://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/ar-threats-2013-508.pdf (2013).
  2. Lessa, F. C., et al. Burden of Clostridium difficile Infection in the United States. New England Journal of Medicine. 372, 825-834 (2015).
  3. Gerding, D. N., Lessa, F.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cefoperazone Mouse ModelClostridium difficile InfectionBacterial EnumerationToxin CytotoxicityHistopathologic ChangesFecal Sample CollectionSpore Inoculum PreparationAnaerobic Chamber UseClinical Disease MonitoringColony Forming Units

Related Articles