مقالة منهجية

دراسة اندوبلازمية شبكية والميتوكوندريا التفاعلات التي كتبها في الموقع القرب من ربط الفحص في خلايا ثابتة

DOI:

10.3791/54899

⸱

ديسمبر 10, 2016

 , 
1Lund University Diabetes Centre, Lund University, 2INSERM UMR-1060, CarMeN Laboratory, Lyon 1 University, INRA U1235, INSA of Lyon, Rockefeller and Charles Merieux Lyon-Sud Medical Universities

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا، نحن تصف الإجراء لتصور وقياس مع حساسية عالية التفاعلات الذاتية بين الشبكة الإندوبلازمية والميتوكوندريا في الخلايا الثابتة. يتميز البروتوكول والأمثل في الموقع قرب ربط فحص استهداف إينوزيتول 1،4،5-ثلاثي مستقبلات / التنظيم الجلوكوز البروتين 75 / قناة أنيون / cyclophilin مجمع تعتمد على الجهد D في واجهة غشاء المرتبطة الميتوكوندريا.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التفاعلات الهيكلية بين الشبكية الإندوبلازمية (ER) والأغشية الميتوكوندريا ، في المجالات المعروفة باسم الأغشية المرتبطة بالميتوكوندريا (MAM) ، هي محاور حاسمة للإشارات الخلوية ومصير الخلية. على وجه الخصوص ، تسمح مواقع التلامس بين العضيات هذه بنقل الكالسيوم من ER إلى الميتوكوندريا من خلال قناة الأنيون المعتمدة على الجهد (VDAC) / البروتين المنظم بالجلوكوز 75 (GRP75) / الإينوزيتول 1،4،5-مستقبلات ثلاثي الفوسفات (IP3R) مركب توجيه الكالسيوم. في حين أن هذه المقصورة تحت الخلوية تخضع لفحص مكثف في كل من الظروف الفسيولوجية والمرضية ، لا توجد طريقة بسيطة وحساسة لتحديد الكمية الداخلية من ملامسة الميتوكوندريا ER في الخلايا. وبالمثل ، فإن MAMs هي هياكل ديناميكية للغاية ، ولا يوجد نهج مناسب لمتابعة تعديلات تفاعلات الميتوكوندريا ER دون الإفراط في التعبير عن البروتين. هنا ، نبلغ عن بروتوكول محسن يعتمد على استخدام مقايسة ربط القرب في الموقع لتصور وتحديد تفاعلات الميتوكوندريا ER الداخلية في الخلايا الثابتة باستخدام القرب الوثيق بين بروتينات غشاء الميتوكوندريا الخارجي (VDAC1) وغشاء ER (IP3R1) في واجهة MAM. يمكن أيضا إجراء تجارب ربط القرب المماثلة في الموقع مع أزواج الأجسام المضادة GRP75 / IP3R1 و cyclophilin D / IP3R1. يوفر هذا الاختبار العديد من المزايا مقارنة بإجراءات التصوير الأخرى ، حيث إنه محدد للغاية وحساس ومناسب للاختبار متعدد الحالات. لذلك ، يجب أن يكون استخدام مقايسة ربط القرب في الموقع مفيدا لفهم اللوائح الفسيولوجية لتفاعلات الميتوكوندريا ER بشكل أفضل ، بالإضافة إلى دورها في السياقات المرضية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الميتوكوندريا والشبكة الإندوبلازمية (أوروبا) ليست العضيات مستقلة في الخلية، لكنها تتفاعل هيكليا ووظيفيا في مواقع الاتصال الذي يعرف بأنه أغشية الشبكة الإندوبلازمية المرتبط الميتوكوندريا (MAM). في الواقع، MAMs تتوافق مع المناطق التي الرئيسي يعارضها أغشية ER والميتوكوندريا عن كثب، والسماح التفاعلات بين البروتينات من كلا الجانبين. ومع ذلك، فإن أغشية هذه العضيات لا تلتحم في هذه المناطق، حتى أنها تحافظ على كياناتها المنفصلة. وMAMs تلعب دورا حاسما في الكالسيوم (الكالسيوم 2+) ونقل فوسفورية من ER إلى الميتوكوندريا، مما يؤثر استقلاب الطاقة وبقاء الخلية 1-3.

وتصور العلاقة بين لائحة والميتوكوندريا الأول في 1970s مع المجهر الإلكتروني. ومنذ ذلك الحين، انتقال المجهر الإلكتروني 4،5، والإلكترون التصوير المقطعي 6،7 أو المناعية توطين ER والميتوكوندريا الخاصة fluorophoreق / البروتينات الفلورية 8 استخدمت تقليديا لدراسة التفاعلات-ER الميتوكوندريا. ويستند أداة أخرى مفيدة لتحليل MAM على استخدام تجزئة التحت خلوية. وهو يتيح للعزل كسور MAM بواسطة تنبيذ فائق الفرق بالإضافة إلى التدرج Percoll 9. ومع ذلك، فإن المنتج النهائي يحتوي على كسور MAM المخصب، بدلا من كسور نقية. وإجمالا، فإن هذه الاستراتيجيات ليست حساسة بشكل خاص و / أو الكمية، وأنها ليست قابلة بسهولة إلى غربلة واسعة. بدلا من ذلك، برزت طرق الوراثية باستخدام linkers محرض المخدرات الفلورسنت بين عضية، لكنها لا تسمح لتحليل التفاعلات عضية في مستويات التعبير الذاتية للبروتينات 10.

وبناء على اكتشاف Szabadkai للمجمع IP3R / GRP75 / VDAC في MAM 11، قمنا بتطوير الأسلوب الكمي لتحليل التفاعلات-ER الميتوكوندريا. استخدمنا في ligati قرب الموقععلى الفحص لكشف وتحديد التفاعلات بين VDAC1 وIP3R1، اثنين من البروتينات عضية سطح تشارك في كا 2+ -channeling مجمع في واجهة MAM في الخلايا الثابتة 12. باختصار، نحن سبر VDAC1 في الغشاء الخارجي الميتوكوندريا (الماوس مكافحة VDAC1 الأجسام المضادة الأولية) وIP3R1 في غشاء ER (أرنب مكافحة IP3R1 الأجسام المضادة الأولية) (الشكل 1، لوحة أ). ثم، وأضاف نحن على حد سواء لمكافحة فأر ومفتش المضادة للأرنب (تحقيقات الماوس والقرب أرنب ربط الفحص)، والتي يتم تصريفها إلى ملحقات النوكليوتيد التكميلية وفقا للفحص. إذا اثنين من البروتينات المستهدفة هي على مسافة أقل من 40 نانومتر، يمكن للأليغنوكليوتيد هجن مع oligos موصل وأضاف في وقت لاحق للسماح بتشكيل قالب دائري الحمض النووي (الشكل 1، لوحة ب). هو ligated هذا الجزيء DNA دائري وتضخيمها، وخلق منتج الحمض النووي المفرد الذين تقطعت بهم السبل تعلق تساهمي إلى واحدة من تحقيقات القرب (الشكل 1، لوحة ج) 6، ربط القرب والتضخيم يمكن القيام به، مما أدى إلى كشف لاحقا بسبب التهجين تكساس [أليغنوكليوتيد الحمراء المسمى المسابير (الشكل 1، لوحة د ). وتمثل كل نقطة الفلورسنت التفاعلات بين VDAC1 / IP3R1، مما يسمح للالكمي لفي الموقع التفاعلات ER-الميتوكوندريا في الخلايا الفردية.

figure-introduction-1
الشكل 1: رسم توضيحي تخطيطي للكشف عن التفاعلات اندوبلازمية شبكية-الميتوكوندريا من قبل في الموقع القرب من ربط الفحص. أ) الأجسام المضادة الماوس الأولية الموجهة ضد VDAC1 والأجسام المضادة أرنب الأولية الموجهة ضد IP3R1 يمكن ربط الحواتم في القرب في واجهة MAM، ب) إضافة زوج من تحقيقات ربط القربالموجهة ضد الماوس ومفتش أرنب. وتعلق هذه التحقيقات جدائل الحمض النووي التي يمكن أن تشكل نماذج لربط من oligos الموصل. ج) حبلا الحمض النووي دائرية شكلت بعد ربط يمكن تضخيمها ود) تصور بواسطة المجهر بمثابة نقطة الفلورسنت باستخدام تكساس أليغنوكليوتيد] وصفت الأحمر. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

تشبه في التجارب فحص الموقع قرب ربط يمكن القيام بها مع الزوج GRP75 / IP3R1 من الأجسام المضادة، وكذلك cyclophilin D (CypD) / الأجسام المضادة IP3R1، معتبرا أن تبين CypD للتفاعل مع مجمع IP3R / GRP75 / VDAC في واجهة MAM 12-14.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إعداد حلول

  1. إعداد 10٪ الفورمالديهايد في برنامج تلفزيوني (قليل الملح) عن طريق تمييع 5.5 مل من 37٪ الفورمالديهايد في 14.5 مل من برنامج تلفزيوني. إعداد 1 M الجلايسين، ودرجة الحموضة 8.0، عن طريق إذابة 3.8 غرام من الجلايسين في 50 مل من برنامج تلفزيوني. تمييع هذا الحل للحصول على 100 ملي الجلايسين في برنامج تلفزيوني 1X.
  2. تحضير 0.1٪ تريتون-X100 في برنامج تلفزيوني 1X. إعداد 20x والمالحة سترات الصوديوم (SSC) باستخدام 3.0 M كلوريد الصوديوم و 0.30 سترات M صوديوم أعدت في منطقة عازلة الماء منزوع الأيونات مع 7.0 درجة الحموضة عند 25 درجة مئوية. تمييع هذا المخزن المؤقت ل1X و 0.01x باستخدام الماء منزوع الأيونات.

2. تثبيت للخلايا

ملاحظة: استخدمنا خط خلية سرطانة الكبد HuH7 في هذه الدراسة، ولكن هذه الطريقة تنطبق على غيرها من الثقافات خلية ملتصقة.

  1. لوحة الخلايا HuH7 (مثقف في DMEM 1 جم / لتر جلوكوز، على أن تستكمل مع 10٪ مصل العجل الجنين و 0.01٪ الأسهم البنسلين ستربتومايسين) في 150،000 الخلايا في غير المصقول طبق من الزجاج السفلي 35 ملم. عند العمل على الخلية الأوليةالثقافات، واستخدام الأطباق المغلفة الكولاجين.
  2. في اليوم التالي، وإزالة ثقافة المتوسط. غسل الخلايا مع 1 مل من برنامج تلفزيوني ونضح. إصلاح الخلايا عن طريق إضافة 1 مل من الفورمالديهايد بنسبة 10٪ واحتضان لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT) في إطار التحريض.
  3. وقف رد فعل مع 1 مل من 1 M الجلايسين ومزيج من قبل التناوب. إزالة الحل محطة والتفاعل وغسل الخلايا عن طريق إضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني 1X. تستنهض الهمم بالتناوب ونضح. إضافة 1 مل من 100 ملي الجلايسين إلى الخلايا واحتضان لهم لمدة 15 دقيقة في RT في إطار التحريض، ثم نضح.
    ملاحظة: بروتوكول يمكن أن يتوقف هنا، ويمكن تأجيل الخطوات التالية ليوم آخر. في هذه الحالة، إضافة 1 مل من 100 ملي الجلايسين والحفاظ على 4 درجات مئوية، وإذا لزم الأمر.

3. Permeabilization من الخلايا

  1. إضافة 1 مل من 0.1٪ تريتون-X100 في برنامج تلفزيوني 1X، واحتضان لمدة 15 دقيقة في RT في إطار التحريض، ثم نضح. ويمكن زيادة هذا الوقت حضانة تصل إلى 15-20 دقيقة عند العمل على الثقافيه الخلية الأوليةوفاق (على سبيل المثال، خلايا الكبد الفئران الأولية). غسل الخلايا عن طريق إضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني 1X. نضح.

4. حجب

  1. إضافة 40 ميكرولتر من عرقلة الحل لكل عينة (المقدمة من عدة)؛ ويمكن زيادة هذا الحجم من أجل تغطية العينة. احتضان الأطباق لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في غرفة الرطوبة.
  2. اضغط على عرقلة الحل الخروج من الأطباق. حاول الحصول على كميات المتبقية متساوية لكل شريحة، لأن هذا سوف يؤثر التكاثر. لا تدع العينات الجافة!

5. الأجسام المضادة الابتدائية

  1. تمييع الأجسام المضادة الأولية في برنامج تلفزيوني 1X وإضافة حل للأطباق (VDAC1 الماوس الأضداد: 1/100، IP3R1 أرنب الأجسام المضادة: 1/500). بدلا من ذلك، GRP75 أو CypD الأجسام المضادة (سواء الأجسام المضادة الماوس المستخدمة في 1/500) يمكن استخدامها بدلا من VDAC1.
  2. احتضان بين عشية وضحاها في غرفة الرطوبة في 4 درجات مئوية. تغسل الشرائح مرتين باستخدام تريس مخزنة المالحة مع 0.01٪ توين (TBS-T).
6. القرب من ربط الفحص تحقيقات

  1. وتقدم القرب تحقيقات ربط فحص من قبل عدة. اختيار تحقيقات وفقا لنوع من الأجسام المضادة الأولية.
  2. إعداد اثنين قرب ربط فحص تحقيقات 1: 5 في مخفف الأجسام المضادة. يسمح هذا المزيج على الجلوس لمدة 20 دقيقة في RT. إضافة إلى قرب ربط حل فحص التحقيق المخفف. احتضان الأطباق في غرفة الرطوبة قبل ساخنة لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية. غسل الأطباق مرتين مع TBS-T.

7. من ربط

  1. استخدام في الموقع كشف كاشف تكساس عدة الحمراء.
  2. تمييع الأسهم ربط 5X (التي قدمها مجموعة) 1: 5 في المياه عالية النقاء وتخلط جيدا. تمييع يغاز في حل 1X ربط (التي قدمها عدة) 01:40 ودوامة. الانتظار لإضافة يغاز حتى قبيل بالإضافة إلى العينات.
  3. إضافة هذا الحل إلى كل عينة (40 ميكرولتر لأطباق الزجاج السفلي 35 ملم)، واحتضان الشرائح في شام الرطوبة قبل ساخنةنوفمبر لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. تغسل الشرائح مرتين مع TBS-T.

8. التضخيم

ملاحظة: كن حذرا، الكواشف الحساسة للضوء.

  1. تمييع الأسهم 5X التضخيم (التي قدمها مجموعة) 1: 5 في المياه عالية النقاء. إزالة البلمرة من الفريزر باستخدام كتلة تجميد (-20 درجة مئوية). تمييع البلمرة (التي قدمها عدة) 1:80 في حل التضخيم 1X ودوامة. إضافة البلمرة فورا قبل استخدام الخليط.
  2. إضافة هذا الحل إلى كل عينة (40 ميكرولتر لأطباق الزجاج السفلي 35 ملم). احتضان الشرائح في غرفة الرطوبة قبل ساخنة لمدة 100 دقيقة عند 37 درجة مئوية. اضغط على حل التضخيم، البلمرة من الشرائح.

9. غسل النهائي

  1. تغسل الشرائح في غسل العازلة 1X SSC لمدة 2 دقيقة. تغسل الشرائح العازلة في غسل SSC 0.01x لمدة 2 دقيقة. السماح للأطباق الجافة في RT في الظلام.

10. إعداد للتصوير

  1. تركيب الشرائح باستخدام حجم الحد الأدنى من المتوسط ​​المتصاعدة التي تحتوي دابي (مائية ولا يصلب)، وضمان عدم وجود فقاعات الهواء ننشغل تحت غطاء زلة. طلاء الأظافر يمكن أن تستخدم لاغلاق الحواف. انتظر حوالي 15 دقيقة قبل تحليل باستخدام مضان أو المجهر متحد البؤر (الإثارة: 594 نانومتر، والانبعاثات: 624 نانومتر، والتكبير: 63X).
  2. بعد التصوير، وتخزين الشرائح في -20 درجة مئوية في الظلام.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بناء على خبرتنا باستخدام هذا البروتوكول، يمكن أن نوصي بأمان هذه الطريقة لتصور وتقدير من التفاعلات-ER الميتوكوندريا في الخلايا الثابتة. ، وتظهر الصور التمثيلية للفي التفاعلات خارج الموقع قرب ربط-تصور فحص-ER الميتوكوندريا في الخلية خط HuH7 سرطانة الكبد، وذلك باستخدام عدة أزواج من الأجسام المضادة. كما هو مبين في الشكل 2 بواسطة المجهر الفلورسنت، وتمثل كل نقطة حمراء على التفاعل بين اثنين من البروتينات المستهدفة، وتظهر ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بشكل جماعي ، تشير دراساتنا إلى أن مقايسة ربط القرب في الموقع هي حقا استراتيجية ذات صلة لمتابعة وتحديد تفاعلات الميتوكوندريا الداخلية ER في الخلايا الثابتة ، دون الحاجة إلى استخدام الفلوروفورات الخاصة بالعضية أو البروتينات الفلورية. تم تكييف الاستخدام المحدد للأجسام المضادة VDAC1 / IP3R1 لدراسة تفاعلات الميتوكوندريا ER في خلايا HuH7. ومع ذلك ، يمكن استخدام الأشكال الإسوية البديلة ل VDAC و IP3R ، اعتمادا على نوع الخلية. في هذه الحالة ، يجب التحقق من صحة الأجسام المضادة عن طريق التألق المناعي قبل تجارب فحص ربط القر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر جميع الناس في مختبرنا الذي ساهم في تحسين والتحقق من صحة البروتوكول. وأيد هذا العمل من قبل INSERM وكالة أبحاث وطنية (وكالة الاستخبارات الوطنية-09-JCJC-0116 وكالة الاستخبارات الوطنية-11-BSV1-033-02). وأيد ET خلال شهادة الدكتوراه من قبل زمالة بحثية من الوزارة الفرنسية للتعليم العالي والبحوث.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

Softwares< / قوي>برنامج ImageJ

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الفورمالديهايدسيجماF-8775
جلايسينسيجماG-8898
تريتونسيجماT8532
35 مم أطباق ثقافة القاع الزجاجيشركة MatTeK CorporationP35G-0-14-C
حجبSigmaDUO-92004 أو DUO-92002المتوفرة في مجسات Duolink PLA ،
الجسم المضاد Sigma VDAC1Abcamab14734
IP3R1-H80 الجسم المضادسانتا كروزsc28614
CypD الجسم المضادAbcamab110324
Grp75 الجسم المضادسانتا كروزsc13967
TBS 10xeuromedexET220تمييع للحصول على 1x
Tween 100xeuromedex2001-Bمخفف في TBS للحصول على 0,01٪
مجسات جيش التحرير الشعبى الصينى ماوس ناقصسيجماDUO-92004ثنائي الارتباط ، مجسات سيجما
جيش التحرير الشعبى الصينى أرنب PLUSسيجماDUO-92002ثنائي الارتباط ،
كواشف الكشف عن سيجما دولينك الأحمرسيجماDUO-92008ثنائي الارتباط ، حل ربط
سيجما سيجماDUO-92008جزء من كواشف الكشف عن Duolink أحمر ، سيجما
ليجاسسيجماDUO-92008جزء من كواشف الكشف عن Duolink باللون الأحمر ،
حل تضخيمسيجما سيجماDUO-92008جزء من كواشف الكشف عن Duolink باللون الأحمر ، سيجما
بوليميرازسيجماDUO-92008جزء من كواشف الكشف عن Duolink الأحمر ، Sigma
Duolink Mounting MediumSigmaDUO80102Duolink ، Sigma
Blob-finderBlobFinder هو برنامج موزع بحرية يمكنه إجراء حسابات على الخلايا من صور المجهر الفلوري. يمكن تنزيل هذا البرنامج مجانا من مركز تحليل الصور في جامعة أوبسالا الذين طوروا البرنامج وتم دعم العمل من قبل مشروع الاتحاد الأوروبي FP6 ENLIGHT و Olink Bioscience. http://www.cb.uu.se/~amin/BlobFinder/index_files/Page430.htm
برنامجيمكن تنزيله مجانا من: http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html
محلول < td colspan = "4" >

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bravo-Sagua, R., et al. Organelle communication: signaling crossroads between homeostasis and disease. The international journal of biochemistry & cell biology. 50, 55-59 (2014).
  2. Giorgi, C., et al. Mitochondria-associated membranes: composition, molecular mechanisms, and physiopathological implications. Antioxidants & redox signaling. 22, 995-1019 (2015).
  3. Phillips, M. J., Voeltz, G. K. Structure and function of ER membrane contact sites with other organelles. Nature reviews. Molecular cell biology. 17, 69-82 (2016).
  4. Cosson, P., et al. The RTM resistance to potyviruses in Arabidopsis thaliana: natural variation of the RTM genes and evidence for the implication of additional genes. PLoS One. 7, 39169(2012).
  5. Mannella, C. A. Structure and dynamics of the mitochondrial inner membrane cristae. Biochim Biophys Acta. 1763, 542-548 (2006).
  6. Csordas, G., et al. Structural and functional features and significance of the physical linkage between ER and mitochondria. The Journal of cell biology. 174, 915-921 (2006).
  7. Mannella, C. A., Buttle, K., Rath, B. K., Marko, M. Electron microscopic tomography of rat-liver mitochondria and their interaction with the endoplasmic reticulum. Biofactors. 8, 225-228 (1998).
  8. Rizzuto, R., et al. Close contacts with the endoplasmic reticulum as determinants of mitochondrial Ca2+ responses. Science. 280, 1763-1766 (1998).
  9. Wieckowski, M. R., Giorgi, C., Lebiedzinska, M., Duszynski, J., Pinton, P. Isolation of mitochondria-associated membranes and mitochondria from animal tissues and cells. Nat Protoc. 4, 1582-1590 (2009).
  10. Csordas, G., et al. Imaging interorganelle contacts and local calcium dynamics at the ER-mitochondrial interface. Mol Cell. 39, 121-132 (2010).
  11. Szabadkai, G., et al. Chaperone-mediated coupling of endoplasmic reticulum and mitochondrial Ca2+ channels. J Cell Biol. 175, 901-911 (2006).
  12. Tubbs, E., et al. Mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane (MAM) integrity is required for insulin signaling and is implicated in hepatic insulin resistance. Diabetes. 63, 3279-3294 (2014).
  13. Paillard, M., et al. Depressing Mitochondria-Reticulum Interactions Protects Cardiomyocytes From Lethal Hypoxia-Reoxygenation Injury. Circulation. 128, 1555-1565 (2013).
  14. Rieusset, J., et al. Disruption of calcium transfer from ER to mitochondria links alterations of mitochondria-associated ER membrane integrity to hepatic insulin resistance. Diabetologia. 59, 614-623 (2016).
  15. Allalou, A., Wahlby, C. BlobFinder, a tool for fluorescence microscopy image cytometry. Computer methods and programs in biomedicine. 94, 58-65 (2009).
  16. Theurey, P., et al. Mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes allow adaptation of mitochondrial metabolism to glucose availability in the liver. Journal of molecular cell biology. , (2016).
  17. de Brito, O. M., Scorrano, L. Mitofusin 2 tethers endoplasmic reticulum to mitochondria. Nature. 456, 605-610 (2008).
  18. Soderberg, O., et al. Direct observation of individual endogenous protein complexes in situ by proximity ligation. Nature methods. 3, 995-1000 (2006).
  19. De Pinto, V., Messina, A., Lane, D. J., Lawen, A. Voltage-dependent anion-selective channel (VDAC) in the plasma membrane. FEBS letters. 584, 1793-1799 (2010).
  20. Kaul, S. C., Taira, K., Pereira-Smith, O. M., Wadhwa, R. Mortalin: present and prospective. Experimental gerontology. 37, 1157-1164 (2002).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

VDAC1 IP3R1 GRP75 IP3R1 Cyclophilin D IP3R1

مقالات ذات صلة