يصف هذا البروتوكول طريقة جديدة للمقارنة 3D من نسيج عضلة القلب بكل القلب مع التصوير بالرنين المغناطيسي. تم تصميم هذا لتقييم دقيق للحقن داخل عضلة القلب في المنطقة الحدودية احتشاء نموذج الخنازير المزمن من احتشاء عضلة القلب.
مقالة منهجية
3D الجامع القلب تحليل الأنسجة عضلة القلب
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وتهدف علاجات التجدد القلب لحماية وإصلاح القلب جرح في المرضى الذين يعانون من أمراض نقص تروية القلب. عن طريق حقن الخلايا الجذعية أو البيولوجية الأخرى التي تعزز angio- أو تكون الأوعية في منطقة الحدود احتشاء (IBZ)، تم تحسين نضح الأنسجة، وعضلة القلب يمكن أن تكون محمية من مزيد من الضرر. لأقصى قدر من التأثير العلاجي، وافترض أن هذه المادة التجدد هو أفضل تسليمها إلى IBZ. وهذا يتطلب حقن دقيقة وأدى إلى تطوير تقنيات حقن جديدة. للتحقق من صحة هذه التقنيات الجديدة، قمنا بتصميم بروتوكول المصادقة على أساس تحليل الأنسجة عضلة القلب. ويشمل هذا البروتوكول كله القلب معالجة الأنسجة عضلة القلب التي تمكن مفصل ثنائي الأبعاد (2D) وثلاثي الأبعاد تحليل (3D) للتشريح القلب والحقن داخل عضلة القلب. في الخنازير، تم إنشاء احتشاء عضلة القلب عن طريق انسداد 90 دقيقة من الأمامي الأيسر النازل الشريان التاجي. بعد أربعة أسابيع، وMIXTتم حقن لدى عودتهم من هيدروجيل مع جسيمات أكسيد الحديد مغنطيسية مسايرة فائقة superparamagnetic (SPIOs) والخرز الفلورسنت في IBZ باستخدام نهج الشغاف الحد الأدنى الغازية. 1 ساعة بعد إجراء الحقن، والموت الرحيم الخنازير، وتم رفعه القلب وجزءا لا يتجزأ من الاغاروز (أجار). بعد تصلب أجار، أجريت التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI)، تشريح القلب، والتصوير مضان. بعد صورة مرحلة ما بعد المعالجة، تم إجراء التحليل 3D لتقييم دقة الاستهداف IBZ. يوفر هذا البروتوكول طريقة منظم وقابلة للتكرار لتقييم دقة استهداف الحقن داخل عضلة القلب في IBZ. بروتوكول يمكن استخدامها بسهولة عند الرغبة في معالجة ندبا و / أو التحقق من دقة حقن القلب كله.
المقدمة
وكان مرض نقص تروية القلب السبب الرئيسي في العالم للوفيات على مدى العقود الماضية 1. العلاج حادة بعد احتشاء عضلة القلب وتهدف إلى استعادة تدفق الدم الى عضلة القلب عن طريق رأب الوعاء التاجي أو التاجي تطعيم الشريان. في احتشاء شديدة، وقد أصاب مساحة كبيرة من عضلة القلب، وهذه الحالات غالبا ما تؤدي إلى فشل القلب الإقفاري (HF) 2. خيارات العلاج الحالية للتركيز HF على الوقاية والحفاظ على وظيفة القلب للمرضى HF، ولكن ليس على التجدد.
في العقد الماضي، وقد تم التحقيق علاجات التجدد القلب كخيار علاجي لHF 3. ويهدف هذا العلاج إلى تقديم البيولوجية، مثل الخلايا الجذعية أو عوامل النمو، مباشرة إلى عضلة القلب جرح للحث على إعادة التوعي، وحماية cardiomyocyte، والتمايز، والنمو 4. لأفضلتأثير علاجي، والافتراض بأن البيولوجية يجب أن يتم حقنه في المنطقة الحدودية احتشاء (IBZ) لتسهيل نضح الأنسجة جيد للبقاء البيولوجية وتأثير الأمثل إلى منطقة الهدف 5، 6. وقد تم تطوير تقنيات متعددة لأداء تحديد وتصور من IBZ لتوجيه الحقن داخل عضلة القلب 7، 8، 9، 10، 11. وبالاضافة الى تحديد وتصور من IBZ، يعتمد أيضا على تسليم المواد الحيوية والقسطرة الحقن المستخدمة. للتحقق من صحة دقة حقن تقنيات التسليم، لا بد من وضع طريقة دقيقة وقابلة للتكرار الكمي.
لقد قمنا بتطوير بروتوكول لكامل القلب معالجة الأنسجة عضلة القلب التي توفر ثنائي الأبعاد (2D) وثلاثة dimensio-نال (3D) التصوير، والتي يمكن استخدامها لدراسة نوعية وكمية الأهداف. ويشمل البروتوكول عملية التضمين وتحليل الصور الرقمية. في هذه الورقة، ونحن يبرهن على وجود بروتوكول لتقييم دقة استهداف الحقن داخل عضلة القلب في IBZ في نموذج الخنازير كبير من احتشاء عضلة القلب المزمن.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد أجريت التجربة في الجسم الحي وفقا لدليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية من قبل معهد مختبر أبحاث الحيوان مستعدة. وتمت الموافقة على التجربة من قبل اللجنة تجارب على الحيوانات المحلية.
1. إعداد حقن وتضمين الحل
- تحضير هلام عن طريق الحقن.
- إعداد 1 مل من ureido-بريميدونون (UPy) جل وفقا للبروتوكولات التي سبق وصفها، 12، 13.
- إضافة جسيمات أكسيد الحديد مغنطيسية مسايرة فائقة superparamagnetic (SPIOs) إلى حل للحصول على تركيز 15 ميكروغرام / مل ويقلب الخليط لمدة 5 دقائق لتوزيع موحد.
- إضافة ميكروبيدات الفلورسنت إلى حل للحصول على تركيز 10000 حبات / مل ويحرك الخليط لمدة 5 دقائق لتوزيع موحد.
- تخزين الخليط الناتج في درجة حرارة الغرفة في بيئة مظلمة. دافئة ودوامة أو ضجة رانه حل قبل وقت قصير من إجراء الحقن.
- إعداد الحل التضمين.
- بدء مع الاستفادة من المياه في درجة حرارة الغرفة وإضافة الاغاروز (أجار) إلى تركيز 4٪ بالوزن.
- الحرارة ببطء الحل لنقطة الغليان باستخدام فرن الميكروويف ويقلب في كثير من الأحيان أثناء التسخين. عند الوصول إلى نقطة الغليان، وتخزين والحفاظ على حل أجار فوق 70 درجة مئوية لمدة 2 ساعة للسماح للهواء المحبوس على السطح.
- السماح للأجار ليبرد في درجة حرارة الغرفة إلى درجة حرارة بين 50 و 60 درجة مئوية حتى وقت التضمين.
إجراء 2. حقن
- أداء تخدير (مضادات عدم اتساق نبضات القلب، العلاج المضاد للصفائح الدموية، ومسكنات للألم)، والتخدير، والوصول الوريدي، والتنبيب، كما هو موضح سابقا (14).
- أداء الحقن باستخدام القسطرة حقن داخل عضلة القلب (جدول المواد). لكل الحقن، 0.يتم حقن 2 مل من الخليط في بلعة واحدة على معدل ثابت من حوالي 0.3 مل / دقيقة باستخدام جهاز الحقن. وضع الحقن في مواقع مختلفة على طول IBZ 12.
- إدارة 0.2 مل / كغ (1.0 مليمول / مل) من دقيقة على أساس الجادولينيوم عامل تباين 15 قبل القتل الرحيم للحيوان.
- إدارة 20 مل من 7.5٪ كلوريد البوتاسيوم عن طريق الوريد إلى الموت ببطء الحيوان.
- وصول المنصف آمن بعد بروتوكول الخطوات من 8،2-8،3، كما وصفها Koudstaal وآخرون. 14. قطع الوريد الأجوف السفلي 5 سم من الأذين الأيمن وإزالة متدفق الدم مع جهاز الشفط. استئصال القلب وشطفه مع المياه المالحة 0.9٪ في درجة حرارة الغرفة.
3. إجراء التضمين
- إعداد القلب.
- إزالة التامور من القلب مع الحفاظ على الأذينين والبطينين سليمة. تشريح الشريان الأبهر الصاعد ± 1 سم فوق الصمام الأبهري باستخدام Klinkenbergمقص. قطع الوريد الأجوف السفلي ± 1 سم من الأذين، وتفعل الشيء نفسه بالنسبة للالأوردة الرئوية.
- خياطة قمة القلب في الجزء السفلي من وعاء من البلاستيك التضمين (17 × 15 × 15 سم، والعرض × العمق × H) باستخدام خياطة 2-0 لمنع التعويم للقلب خلال تضمينها (الشكل 1A).
- خياطة الجزء المتبقي من الشريان الأورطي إلى الحافات الحاوية باستخدام 2-0، والتأكد من أن يتركز القلب وعدم لمس جدران الحاوية (الشكل 1B).
الشكل (1): نظرة عامة تخطيطي وصورة من حاوية التضمين. (A) نظرة عامة تخطيطي لعملية التضمين. يتم تأمين القلب (الحمراء) في حاوية (الأزرق) باستخدام الخيوط الجراحية. بعد ملء القلب مع الحل أجار، يمتلئ الفضاء حول القلب. أخيرا،يتم وضع اثنين من أنابيب بلاستيكية جامدة (الأصفر) في حاوية، بجانب ولكن ليس لمس قلب، ليكون بمثابة إشارة أثناء التسجيل صورة. (B) صورة لقلب المضمون في حاوية التضمين. وفرضت الغرز إلى حافة الحاوية باستخدام المشابك البعوض. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
- تضمين القلب في هندسة نهاية الانبساط مثل.
ملاحظة: الوقاية من خلق فقاعة الهواء ضروري. إذا فقاعات الحالي في حل أجار الهواء كبير، والحفاظ على أجار عند 40 درجة مئوية، والسماح للفقاعات الهواء على السطح.- المشبك الأجوفية أدنى الوريد باستخدام المشابك البعوض. حقن ببطء آغار السائل باستخدام حقنة 50 مل في الأذين الأيمن عن طريق الوريد الأجوف متفوقة حتى يتم شغل كل من الأذين الأيمن والبطين تماما.
- المشبك الأوردة الرئوية باستخدام mosquitس المشابك. تمر بلطف حقنة أجار مليئة 50 مل retrogradely من خلال صمامات الأبهر. حقن ببطء الحل في البطين الأيسر (LV) حتى LV والأذين الأيسر تمتلئ تماما. بعد ملء LV، المشبك الشريان الأورطي للحفاظ على أجار في LV.
- صب آغار المتبقية في وعاء حتى يتم تغطية القلب تماما. وضع اثنين من أنابيب بلاستيكية جامدة داخل الحاوية تضمين لتكون بمثابة هياكل مرجعية لتسجيل صورة لاحق (الشكل 1A). تأكد من الأنابيب لا تلمس جدران الحاوية أو القلب.
- السماح للأجار يصلب في 2-7 ° C.
4. الحصول على الصور
- أداء عرضي خارج الحي فحوصات الرنين المغناطيسي للقلب مضمن في الحاوية.
- وضع الحاوية مع قلب جزءا لا يتجزأ من داخل لفائف الرأس (جدول المواد).
- Angulate شرائح موازية لقاع الإناء. استعمالنفس التوجه والتزوي في كل المجراة سابقا تسلسل MRI.
- لتصور عضلة القلب، إجراء استرداد معكوس-الموهن السائل (FLAIR) تسلسل مع المعلمات التالية: وقت التكرار [TR] الوقت / صدى [TE] = 10 ق / 140 مللي ثانية، وزاوية الوجه = 90 درجة، حجم بكسل = 0.5 X 0.5 مم، مجال الرؤية [فوف] = 169 س 169 مم، 320 × 320 مصفوفة، و 3 ملم سمك شريحة.
- لتصور احتشاء عضلة القلب، وإجراء أواخر الجادولينيوم تعزيز (إل جي) تسلسل مع المعلمات التالية: [TR] [/ TE] = 5.53 مللي / 1.69 مللي، وزاوية الوجه = 25 درجة، حجم بكسل = 1.0 X 1.0 ملم، [ فوف] = 169 س 169 مم، 176 × 176 مصفوفة، و 3 ملم سمك شريحة.
- لتصور SPIOs، إجراء T2 * التدرج -weighted تسلسل صدى مع المعلمات التالية: [TR] [/ TE] = 88.7 مللي / 15 TES موزعة بالتساوي مع مجموعة من 1،9 حتي 24،6 مللي، وزاوية الوجه = 15 درجة، بكسل حجم = 0.5 X 0.5 ملم، [فوف] = 169 س 169 مم، 320 × 320 مصفوفة، و 3 ملم سمك شريحة.
- بروسس الأنسجةيغنى
- تحويل الحاوية رأسا على عقب والسماح الجوي بين أجار وجوانب الحاوية لإزالة حل أجار الصلبة، بما في ذلك القلب، من الحاوية. إزالة قضبان البلاستيك من أجار الصلبة.
- قسم كتلة آغار تحتوي على القلب في شرائح 5 ملم من قمة إلى قاعدة للقلب باستخدام تقطيع اللحوم. الحفاظ على التزوي من قطع شرائح هي نفسها كما في الصور MR المكتسبة عن طريق خفض بالتوازي مع الجزء السفلي من كتلة آغار.
- وصمة عار على شرائح أجار (بما في ذلك القلب) لمدة 15 دقيقة في 1٪ بالوزن من 2،3،5-triphenyltetrazoliumchloride (TTC) الذائب في المياه المالحة 0.9٪ عند 37 درجة مئوية، وتصوير شرائح على كلا الجانبين من وجهة نظر عمودي (الشكل 2A). بعد ذلك، شطف بعناية شرائح في المياه المالحة 0.9٪.
ملاحظة: في هذه الدراسة، استخدمنا الإعداد دسلر مع عدسة / الهدف المناسب، ترايبود، والإضاءة موحدة. ومع ذلك، خدم الصور فقط كعنصر تحكم لتقييم المنطقة ندبة،ولذا فإننا يمكن أن تستخدم لإعداد مختلف.
- التصوير مضان
ملاحظة: اعتمادا على الإثارة وانبعاث موجات من ميكروبيدات الفلورسنت، وتحديد كتلة تصفية والإثارة الليزر المناسبة (على سبيل المثال، ميكروبيدات الحمراء المستخدمة هنا لها الإثارة وانبعاث موجات من 580 نانومتر و 605 نانومتر، على التوالي، وبالتالي، ليزر الإثارة المختارة وتم تعيين المرشحات ممر الموجة إلى 532 نانومتر، 580/30 نانومتر و 610/30 نانومتر، على التوالي).- حدد التصوير مضان وضع على الماسح الضوئي متغير واسطة. تعيين أنبوب مضخم إلى 430 V أو ما يعادلها وحجم بكسل إلى 100 × 100 ميكرون. حدد الليزر الإثارة (532 نانومتر) الأقرب إلى الطول الموجي الإثارة من ميكروبيدات الفلورسنت.
- لكتلة الفلتر الأول، حدد ممر الموجة مرشح (580/30 نانومتر) التي تتداخل مع الطول الموجي الانبعاثات من الخرز مضان حقن (القناة 1). اختر ممر الموجة مرشح لكتلة مرشح الثاني (610/30) خارج هالطول الموجي البعثة (قناة 2).
ملاحظة: يقدم كتلة مرشح الثاني كعنصر تحكم السلبية وإزالة السيارات ومضان مع الحفاظ على مواقع الحقن سليمة. - مسح جانبي شرائح أجار في وضع مضان من ماسح ليزر متغير وضع استخدام القناتين. تأكد من أن كل شريحة يتم فحص تماما، بما في ذلك الثقوب المرجعية.
5. بعد المعالجة
ملاحظة: الخطوة الأولى في صورة مرحلة ما بعد المعالجة هي تجزئة اليدوية للعضلة القلب باستخدام البرامج النصية في المنزل وضعت لتتبع لانهائي والحدود النخابية، فضلا عن مواقع الحقن. هذا هو نفسه لكل من التصوير بالرنين المغناطيسي والمسح الضوئي مضان.
- جزء من عضلة القلب في التصوير بالرنين المغناطيسي.
- جزء من الشغاف ولف بوردرس النخابية على FLAIR MRI تسلسل الصور.
- نسخ تجزئة LV من الخطوة 5.1.1 لبيانات شركة إل جي-MRI وقطاع ندبة على تسلسل إل جي MRI.
- نسخ تجزئة عضلة القلب من الخطوة 5.1.1 إلى T2 * بيانات -weighted وجزء من ترسبات SPIO في عضلة القلب LV.
- معالجة الصور مضان وأداء الانقسامات.
- تحميل الملفات التي تم الحصول عليها من الماسح الضوئي متغير الوضع وتقديم صورة منفصلة لكل شريحة القلب مستعرضة.
- الوجه شرائح التي تم مسحها ضوئيا في قاعدة لقمة التوجيه وفرز الصور مضان في كومة لكل القنوات التي توجه من قمة إلى القاعدة.
- جزء من الشغاف ولف بوردرس النخابية على الصور مضان.
- قطاع ندبة يدويا على الصور مضان واستخدام إل جي-MRI المسح الضوئي والصور لتأكيد ندبة التشكل.
- طرح كومة صورة القناة 2 من المكدس صورة القناة 1 إلى استبعاد لصناعة السيارات في مضان. قطعة يدويا ترسبات ميكروبيدات الفلورسنت واستخدام T2 * الصور للتأكيد.
- لنصنع او لنبتكرو3D الهندسة تشريحيا-الصحيحة، إجراء تسجيل جامدة من شرائح في كومة صورة تستند إلى هياكل المرجعية (الثقوب التي تم إنشاؤها بواسطة أنابيب جامدة). حساب وتخزين تطبيق الترجمة وتناوب كل صورة.
- تطبيق التحولات المخزنة على مداخن صورة والانقسامات. خطيا أقحم الإنقسامات من كلا الجانبين من الشرائح لإعادة بناء سمك شريحة الأصلي ولخلق نموذج 3D من البيانات.
6. تحليل
- إجراء قياسات 2D و / أو 3D المسافة بين المراكز من مواقع الحقن وIBZ لتقييم دقة الحقن. قياس المسافة على طول الحدود الشغاف من تجزئة LV. في الشكل 2C و2F، يشار مثالا للقياسات 2D و 3D بواسطة الخط الأحمر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الأنسجة التضمين
من خلال عملية التضمين، أنشئ هندسة نهاية الانبساطي الشبيهة. آغار الالتزام بنجاح إلى أنسجة القلب، مما يتيح للنسيج إلى أن شرائح في التزوي المطلوب مع سمك شريحة متساوية (الشكل 2A و 2C).
تقييم Scar- وموقع الحقن...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
كامل القلب معالجة الأنسجة القلبية 3D وفقا لهذا البروتوكول يوفر طريقة منظم تمكن تحليل 3D من احتشاء، وIBZ، وحقن تنفيذ فيما يتعلق تشريح القلب. حجم ملء القلب يعتمد على التحليل المطلوب. في هذه الدراسة، لتقييم دقة الحقن، ونحن تهدف إلى ملء القلب تشبه هندسة نهاية الانبساط قدر الإمكان. لتطبيق هذا، يتم تثبيت قمة LV إلى أسفل الحاوية ويتم تعبئة LV مع أجار في حين فرضت الأوردة الرئوية. عندما يتم تعبئة LV، يشد الشريان الأورطي كذلك، منع آغار من المتدفقة من LV وتقليد هندسة نهاية الانبساط قدر الإمك...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
فإن الكتاب أود أن أشكر مارليين جانسن، جويس فيسر، ومارتن فان Nieuwburg على المساعدة التي قدموها مع التجارب على الحيوانات. ونحن نعترف كثيرا مارتن Froeling وأنك واسينك على المساعدة التي قدموها مع التصوير بالرنين المغناطيسي.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.9٪ سالين | براون | ||
| أغاروز | روش التشخيص | العلمية متعددة الأغراض أجار | |
| الماسح الضوئي الفلوري الجزيئي الحيوي تايفون 9410 & nbsp ؛ | حاوية تضمين | ||
| بلاستيك ، الأبعاد 17 × 14.5 × 14 سم | |||
| م | |||
| Gadolinium | Gadovist | 1.0 مليمول / مل | |
| dS 32 قناة لفائف الرأس | Philips | أو ما شابه | |
| ذلك Matlab | Mathworks | لضمان التوافق 2015a أو أحدث | |
| قطاعة اللحوم | Berkel | ||
| Myostar قسطرة حقن | Biosense Webster | ||
| سوبر جزيئات أكسيد الحديد المغناطيسي | سينيريم | ||
| ثلاثي الفينيل-تيترازوليوم كلوريد | ميرك | ||
| UPy-PEG10k | |||
| فيكريل 2-0 | إيثيكون |
المراجع
- Nowbar, A. N., Howard, J. P., Ja Finegold,, Asaria, P., Francis, D. P. 2014 global geographic analysis of mortality from ischaemic heart disease by country, age and income: statistics from World Health Organisation and United Nations. Int J Cardiol. 174 (2), 293-298 (2014).
- Kannel, W. B., Belanger, A. J. Epidemiology of heart failure. Am Heart J. 121 (3), 951-957 (1991).
- Ibáñez, B., Heusch, G., Ovize, M., Van De Werf, F. Evolving therapies for myocardial ischemia/reperfusion injury. J Am Coll Cardiol. 65 (14), 1454-1471 (2015).
- Bartunek, J., Vanderheyden, M., Hill, J., Terzic, A. Cells as biologics for cardiac repair in ischaemic heart failure. Heart. 96 (10), 792-800 (2010).
- Orlic, D., Kajstura, J., et al. Bone marrow cells regenerate infarcted myocardium. Nature. 410 (6829), 701-705 (2001).
- Nguyen, P. K., Lan, F., Wang, Y., Wu, J. C. Imaging: Guiding the Clinical Translation of Cardiac Stem Cell Therapy. Circ Res. 109 (8), 962-979 (2011).
- Psaltis, P. J., Worthley, S. G. Endoventricular electromechanical mapping-the diagnostic and therapeutic utility of the NOGA XP Cardiac Navigation System. J Cardiovasc Transl Res. 2 (1), 48-62 (2009).
- Tomkowiak, M. T., Klein, A. J., et al. Targeted transendocardial therapeutic delivery guided by MRI-x-ray image fusion. Catheter Cardiovasc Interv. 78 (3), 468-478 (2011).
- Dauwe, D. F., Nuyens, D., et al. Three-dimensional rotational angiography fused with multimodal imaging modalities for targeted endomyocardial injections in the ischaemic heart. Eur Heart J Cardiovasc Imaging. 15 (8), 900-907 (2014).
- van Slochteren, F. J., van Es, R., et al. Multimodality infarct identification for optimal image-guided intramyocardial cell injections. Neth Heart J. 22 (11), 493-500 (2014).
- van Slochteren, F. J., van Es, R., et al. Three dimensional fusion of electromechanical mapping and magnetic resonance imaging for real-time navigation of intramyocardial cell injections in a porcine model of chronic myocardial infarction. Int J Cardiovasc Imaging. 32 (5), 833-843 (2016).
- Pape, aC. H., Bakker, M. H., et al. An Injectable and Drug-loaded Supramolecular Hydrogel for Local Catheter Injection into the Pig Heart. J Vis Exp. (100), (2015).
- Bastings, M. M. C., Koudstaal, S., et al. A fast pH-switchable and self-healing supramolecular hydrogel carrier for guided, local catheter injection in the infarcted myocardium. Adv Healthc Mater. 3 (1), 70-78 (2014).
- Koudstaal, S., Jansen of Lorkeers, S. J., et al. Myocardial infarction and functional outcome assessment in pigs. J. Vis. Exp. (86), (2014).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن