موت الخلايا المبرمج، أو ينظم موت الخلية 1، يساهم بطريقة ضرورية لصيانة وتطوير الأنسجة. ينظر معظم ببساطة، تصاريح موت الخلايا المبرمج الذين تتراوح أعمارهم بين، التالفة، أو الخلايا الزائدة ليتم التخلص منها دون ضرر للأنسجة المحيطة 2،3. مساهمة من موت الخلايا المبرمج للتوازن الأنسجة، مع ذلك، إلى حد كبير أكثر ديناميكية ومتنوعة. الخلايا الميتة بواسطة الخلايا تكتسب أنشطة جديدة متعددة، سواء يفرز والخلايا المرتبطة، والتي تمكنهم من التأثير على وظيفة الخلايا الحية المجاورة 4-10. الدراسات السابقة ركزت على قدرة خلايا أفكارك لقمع التهاب 11-16، ولكن الخلايا أفكارك أيضا تعدل مجموعة واسعة من الوظائف الخلوية، بما في ذلك أنشطة حيوية مثل بقاء 4،9،10، وانتشار 4،9،10، والتمايز 17، الهجرة 18، والنمو 19. وعلاوة على ذلك، لا تقتصر هذه الآثار على البالعات المهنية، مثل بلعمالصورة، بل تمتد إلى جميع أنواع وسلالات الخلايا تقريبا، بما في ذلك الخلايا عادة غير البلعمية، مثل الظهارية والخلايا البطانية 7،9،10،18-21.
استجابة محددة من الخلايا الحية المجاورة بعد التعرض لخلايا أفكارك تعتمد على عوامل متعددة تتعلق كلا من خلايا الاستجابة وقابلة للحياة الخلايا أفكارك أنفسهم. على سبيل المثال، على الرغم من أن التعرض للخلايا أفكارك يمنع انتشار كل الضامة الفئران والكلى القريبة الخلايا الظهارية أنبوبي (PTECs)، وهذه أنواع الخلايا اثنين تختلف بشكل كبير في استجابة بقائهم على قيد الحياة لخلايا أفكارك 4،6،9،10. خلايا أفكارك تعزيز بقاء الضامة، ولكن تحفز وفاة أفكارك من PTECs 4،6،9،10. تجدر الإشارة إلى أن استجابة لخلايا أفكارك قد تختلف حتى بين الاستجابة خلايا من نفس النسب، اعتمادا على الجهاز الخلية المجيب من أصل 10 (على سبيل المثال، PTECs الكلى مقابل الظهارية الثدييةخلايا) أو حالة تفعيل 22 (على سبيل المثال، العدلات). على العكس، قد الخلايا أفكارك تثير استجابات مختلفة في نفس الخلية تبعا لطبيعة أفكارك التحفيز 10،23 أو مرحلة موت الخلايا المبرمج 10،14.
ونظرا لdiverseness وتعقيد ردا على الخلايا أفكارك، يجب توخي الحرص الشديد في تشريح أحداث ومسارات إشارات مسؤولة عن أي نتيجة معينة. أولا، والاستجابات التي تتطلب التفاعل المادي المباشر بين خلايا قابلة للحياة وأفكارك يجب تفريقها عن تلك التي تسببها وسطاء للذوبان صدر أو الناتجة عن الخلية أفكارك 3،6-10. إذا كان مطلوبا التفاعل الجسدي، ثم تمايز مزيد من يجب أن يتم تنفيذ. قد تعتمد يشير الأحداث على الاعتراف بوساطة مستقبلات الخلية أفكارك، بغض النظر عن ابتلاع لاحقة، أو على امتصاص أكلة، مستقلة عن مستقبلات معينة التي تربط الخلية أفكارك 3-7،9،10،19. في الحالة الأخيرة، فإن الاستجابة ليست محددة لخلايا أفكارك، ويمكن أن تنجم عن أي مواد أكلة 4،6.
أهمية هذه الفروق يمكن مرة أخرى موضع تقدير من قبل المتناقضة ردود الضامة وPTECs الكلى. لكل أنواع الخلايا، والتعرض للخلايا أفكارك يغير من نشاط كيناز المؤيدة للبقاء AKT. تعديل يعتمد على التفاعل المادي، لأن الفصل بين الاستجابة والخلايا أفكارك عن طريق غشاء البولي 0.4 ميكرون يلغي استجابة 4،9،10،19. ومع ذلك، فإن رد PTECs هي مستقبلات بوساطة ومستقلة البلعمة، بينما هو الدافع وراء رد الضامة التي كتبها البلعمة 4،9،10،19. ومما يعزز هذا الاستنتاج من خلال حقيقة أن التعرض لحبات اللاتكس، حافزا أكلة محايد، ليس له أي تأثير على النشاط AKT في PTECs، ولكن يقلد تأثير خلايا أفكارك في الضامة 4،9.
"> وعلى الرغم من دراستها بشكل أقل، الخلايا الميتة التي نخر، أو عرضي موت الخلايا
1، كما تعدل وظيفة خلايا قابلة للحياة في مكان قريب
3-10،19. مثل الخلايا أفكارك، والخلايا الميتة تمارس تأثيرها من خلال مجموعة متنوعة من الآليات، ولا سيما تسرب محتويات الخلايا من خلال من تمزق غشاء الخلية
3،5،6،9،24. العديد من الخلايا، بما في ذلك PTECs والضامة، تمتلك مستقبلات غير منافسة متميزة للالخلايا الميتة التي تنخر
5،9. إشراك هذه المستقبلات يحرض يشير الأحداث التي في كثير من الأحيان عكس تلك الناجمة عن إشراك مستقبلات الخلايا أفكارك
4-10،19. على سبيل المثال، في PTECs، والخلايا الميتة زيادة الفسفرة من AKT، في حين أن انخفاض خلايا أفكارك الفسفرة
9،10،19. هنا، نحن تصف بروتوكول لتحديد أحداث الإشارات بين الخلايا التي يسببها في PTECs الكلى قابلة للحياة من خلال الاعتراف بوساطة مستقبلات PTECs أفكارك المجاورة 9،10،19. في حين أن البروتوكول هو محدد لخط الخلية PTEC خلد مشروط المعروفة باسم خلايا BU.MPT 9،10،19،25،26، أنها تتكيف بسهولة مع خطوط الخلايا التي هي غير الظهارية في المنشأ و / أو مشتقة من الأجهزة الأخرى من الكلى. الأهم من ذلك أن استخدام الخلايا أفكارك كحافز خلية يطرح بعض الصعوبات التجريبية الأصيلة غير موجودة مع بروابط القابلة للذوبان. وأهم هذه العناصر هو أن الخلايا أفكارك يجب إضافة وتعليق بدلا من أن تكون حلا. هذه الصعوبات، وكذلك استراتيجيات لتقليل أو الالتفاف عليها، ومناقشتها في البروتوكول. تقريبا كل الأساليب المذكورة في البروتوكول هي واضحة وموحدة لزراعة الخلايا. وميزة هذا البروتوكول تكمن في اهتمامها إلى آليات متعددة من الخلايا التي أفكارك تعدل نقل الإشارة داخل الخلايا الاستجابة. وتشمل هذه الآليات الربط عبر محددات السطح أو سد الجزيئات لمستقبلات معينة على إعادةsponding الخلية، وإطلاق سراح من وسطاء للذوبان، و / أو إشراك آلية البلعمة. يتم تضمين الخلايا الميتة في جميع التجارب للتأكد من أن النتائج هي محددة لطريقة موت الخلايا، وليس استجابة تعميمها على الخلايا الميتة. نهج دقيق، على النحو الموصى به في هذا البروتوكول، أمر بالغ الأهمية في فهمنا لتأثير توسيع أي وقت مضى أن الخلايا الميتة تمارس على جيرانهم الحية، سواء في الصحة والمرض.