نحن تصف بروتوكول هنا لعزل الجزر سليمة من الفئران حديثي الولادة. تم هضمها بنكرياسات جزئيا مع كولاجيناز، تليها الغسيل وقطف اليد. ويمكن الحصول على 80 مجموعات جزيرة في البنكرياس من الفئران الوليدة، والتي هي مناسبة لعدة دراسات خلايا البنكرياس - 20.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
عزل فعال من الجزر وظيفية من الأطفال حديثي الولادة البنكرياس ماوس
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وراسخة وبروتوكولات جزيرة العزلة القائمة على نضح من بنكرياسات الثدييات الكبيرة. وتجرى هذه البروتوكولات بسهولة في العديد من المختبرات نظرا لحجم كبير من القناة البنكرياسية التي تسمح للحقن كولاجيناز جاهزة ونضح الأنسجة لاحق. في المقابل، جزيرة العزلة من بنكرياسات صغير، مثلها في ذلك مثل الفئران حديثي الولادة، يمثل تحديا لنضح هو غير قابل للتحقيق في بنكرياسات الصغيرة بسهولة. نحن هنا وصف الإجراء بسيط مفصل أن يسترد أعداد كبيرة من الجزر من الفئران الوليدة بمساعدة البصرية. تم هضمها تشريح حديثا بنكرياسات كله مع 0.5 ملغ / مل كولاجيناز الرابع الذائبة في هانكس "محلول الملح المتوازن (HBSS) عند 37 درجة مئوية، في أنابيب microcentrifuge. تم استغلالها أنابيب بانتظام للمساعدة في تشتيت النسيج. عندما فرقت معظم الأنسجة في مجموعات صغيرة حوالي 1 ملم، وكانت تغسل لست] 3-4 مرات مع وسائل الإعلام والثقافة مع المصل 10٪ بقري جنيني (FBS). مجموعات خلايا البنكرياس،تخلو من الأنسجة عنيبية التعرف عليها، ومن ثم يمكن استردادها تحت تشريح المجسام. هذه الطريقة للشفاء 20-80 الصغيرة والجزر الكبيرة الحجم في البنكرياس من الماوس ولدوا حديثا. هذه الجزر هي مناسبة لفحوصات المصب أكثر يمكن تصورها، بما في ذلك إفراز الأنسولين، التعبير الجيني، والثقافة. وقدم مثالا على فحص إفراز الأنسولين للتحقق من صحة عملية العزل. الخلفية الوراثية ودرجة الهضم هي أكبر العوامل التي تحدد العائد. ويفضل تقدم طازجة حل كولاجيناز مع ارتفاع النشاط، كما أنها تساعد في عزلة الغدد الصماء الإفرازية. وجود الكاتيونات [الكالسيوم (الكالسيوم 2+) والمغنيسيوم (مغ 2+)] في كل الحلول ومصل بقري جنيني في غسل / ضرورية لمحصول جيد من الجزر مع السلامة المناسبة وسائل الاعلام اختيار. وهناك نطاق تشريح مع تباين جيد والتكبير يساعد أيضا.
المقدمة
يعد عزل جزر البنكرياس النقية أمرا ضروريا لفحص إفراز الأنسولين المحفز بالجلوكوز (GSIS) لخلايا بيتا ولزرع الجزر الصغيرة من المتبرعين بالجثث 1-3. من الضروري أيضا إنشاء تعبير جيني للغدد الصماء في خلايا الجزيرة 4 ، 5. لهذا الغرض ، تم وضع بروتوكولات مفصلة للسماح بعزل جزر البنكرياس عن البنكرياس الكبير (6 والمراجع الواردة فيه). تعتمد هذه الطرق على التروية الأنزيمية لفصل الأسينار عن أنسجة الجزر ، إلى جانب فصل التدرج والانتقاء اليدوي. وبالتالي ، يمكن إجراء عزل الجزر من البنكرياس الكبير بسهولة في معظم المختبرات. من ناحية أخرى ، لا يوجد بروتوكول مفصل خطوة بخطوة للسماح بعزل الجزر الصغيرة جدا عن البنكرياس التي لا يمكن فتحها.
من المهم دراسة التعبير الجيني ووظيفة جزر حديثي الولادة. الجزر الصغيرة حديثة الولادة لها خصائص مختلفة عن البالغين في إفراز الأنسولين والقدرة على الانتشار 7 ، 8. ومع ذلك ، فإن عزل الجزر الصغيرة عن المولودة حديثا ، وخاصة الفئران يمثل تحديا بسبب صغر حجم البنكرياس المولود حديثا. يمنع الحجم عملية التروية المعتادة عند حقن الكولاجيناز من خلال قناة البنكرياس. في الواقع ، قدمت العديد من الأوراق دراسات على هذا المنوال ، مع إجراءات العزل بمساعدة الإنزيم أو غير الإنزيم 7 ، 9 ، 10. ومع ذلك ، فإن الوصف التفصيلي لعملية عزل الجزيرة بالمساعدة البصرية يفتقر إلى 7 ، 9 ، مما يجعل إجراء دراسات مماثلة تحديا لمعظم الباحثين.
لقد استكشفنا العديد من الحالات المختلفة التي تنتج جزرا عالية الجودة من الفئران حديثي الولادة. نقدم هنا بروتوكولا من المتوقع أن يساعد الباحثين على معرفة التفاصيل الأساسية في عملية عزل الجزر. ينطبق هذا البروتوكول على بنكرياس الفئران حتى عمر أسبوعين ، وبعد ذلك يمكن إجراء التروية لعزل الجزر الروتينية. يمكن استخدام الجزر مباشرة لإفراز الأنسولين ومقايسات التعبير الجيني.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
استخدام الحيوانات يتبع الإجراءات المنصوص عليها في بروتوكول M / 11/181 التي وافق عليها فاندربيلت المؤسسات ورعاية الحيوان واستخدام اللجنة لقو. تم شراء CD1 أو CBA / BL6 الفئران من الباعة التجارية وعبروا في منشأة الحيوان فاندربيلت للحصول على الفئران حديثي الولادة.
1. إعداد الفئران، سهم حلول ومعدات
- لالصليب الماوس: انشاء عبر الماوس وتسجيل مواعيد توصيل للمساعدة في تخطيط التجريبية. الفئران CD1 عادة ما تلد حول يوم 19 بعد التزاوج. استخدام CD1 أو CBA / BL6 يعبر الحصول على CD1 أو CBA / BL6 حديثي الولادة، على التوالي. Intercrosses بين الخطين الاستفادة من الإناث والذكور CD1 CBA / BL6.
- للسهم كولاجيناز: تزن 200 ملغ كولاجيناز النوع الرابع برصيد عالية الدقة. نقل إلى أنبوب الطرد المركزي 50 مل. تذوب في 40 مل HBSS مع الكالسيوم 2+ / المغنيسيوم 2+ (1.26 و 0.5 ملم على التوالي) لجعل 5 ملغ / مل محلول المخزون.
- السماح كولاجيناز لحل ل~ 30 دقيقة مع اهتزاز لطيف. قسامة والحفاظ على حل المجمدة في -20 درجة مئوية والأوراق المالية، والتي تبقى نشطة لمدة سنة على الأقل.
- الأوتوكلاف لتعقيم عدة أزواج من ملاقط، مقصات، ونصائح P20 للتشريح وقطف جزيرة.
- للسهم الجلوكوز 1 M: وزن 9 ز الجلوكوز في أنبوب الطرد المركزي 50 مل، إضافة 50 مل RPMI 1640 وسائل الإعلام إلى حل الجلوكوز. نضع في 4 درجات مئوية حتى استخدامها، ولكن ليس أكثر من 6 أشهر.
2. حلول العمل
ملاحظة: يوم من العزلة جزيرة، وإعداد الكواشف التالية.
- لنوع كولاجيناز حل رابعا العمل: ذوبان الجليد وتمييع الأسهم كولاجيناز على الجليد. الاستغناء 0.15 الأسهم مل في كل microfuge أنبوب مل 1.7. إضافة 1.35 مل HBSS مع الكالسيوم 2+ / المغنيسيوم 2+. عكس الأنبوب 5 مرات. ترك على الجليد لمدة 15 دقيقة.
- تدور بسرعة عالية لمدة 3 دقائق في microcentrifuge. نقل طاف لأنبوب جديد. ترك على الجليد حتى الاستخدام. تجاهل أنبوب مع الحطام غير قابلة للذوبان.
- لكامل RPMI 1640 وسائل الإعلام: إضافة 2.5 مل 1 M جلوكوز، 50 مل الحرارة المعطل FBS و 5 مل الأسهم 100X القلم بكتيريا إلى 500 مل RPMI 1640 وسائل الإعلام. ترك على الجليد حتى الاستخدام.
3. عزل البنكرياس والهضم
- الموت ببطء حديثي الولادة مع isoflurane، تليها قطع الرأس وفقا لبروتوكولات المعتمدة.
- وضع الماوس مع بطنها مواجهة. رذاذ مع الايثانول 70٪ لتعقيم.
- رفع الجلد حتى البطن مع ملاقط وقطع الجلد والعضلات طبقات طوليا على طول خط الوسط مع زوج من مقص، من منطقة الأعضاء التناسلية إلى القفص الصدري. هذا يفتح تجويف البطن لفضح جميع الأعضاء الداخلية.
- نقل جميع الأعضاء الداخلية إلى صحن 100 سم مع زوج من ملاقط. تحديد موقع البنكرياس، الذي يقع على بعد الجهاز المنتشرة مع جزء الظهرية أن يتمسك المعدة والطحال وجزء بطني أن يتمسك الاثني عشر (11).
- إضافة HBSS في طبق لغمر الأجهزة. في الحل، وأنسجة البنكرياس لم يعد التمسك الاثني عشر والمعدة، أو الطحال. فمن التعرف عليها بسهولة تحت نطاق تشريح بسبب لونه الأبيض المعتاد. استخدام زوج من ملاقط لقشر أنسجة البنكرياس بعيدا عن الأنسجة المحيطة بها، ونقلها إلى طبق جديد 60 ملم مع HBSS.
- قطع كل البنكرياس مع مقص الى قطع أصغر من 5 ملم عبر أي أبعاد. نقل إلى أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. ما يصل الى خمسة بنكرياسات (الذين تقل أعمارهم عن P7) يمكن هضمها في أنبوب واحد. بالنسبة للفئران P8-P16، استخدام أنبوب واحد في البنكرياس.
- إضافة 0.5 - حل العمل 1 مل كولاجيناز لكل أنبوب (0.2 مل لكل البنكرياس P1-P7 استخدام 0.5 مل لكل البنكرياس P8-P16). ترك الأنبوب في الحاضنة 37 درجة مئوية لمدة تصل إلى 15 دقيقة. عكس الأنبوب مرتين كل دقيقة.
- بعد ~ 5 دقائق، والاستفادة من أنبوب لمراقبة حالة هضم أنسجة البنكرياس. مواصلة عملية الهضم حتى أكثر من البنكرياسيبدو الأنسجة مجموعات الخلايا كما مجزأة، مع قطر <2 مم. سوف تظهر المحللة غائم، والذي يرجع إلى وضعها الطبيعي انحلال ذاتي خلية عنيبية.
4. المحللة الغسل
- تدور المحللة في 500 x ج لمدة 10 ثانية في microcentrifuge. إزالة طبقة طاف مع pipetman P1،000. يجب أن تظهر طاف العكرة ولكن خالية من مجموعات الخلايا. لا تستخدم الطموح، والتي قد نضح بسرعة بعيدا شظايا الأنسجة في الجزء السفلي بسبب وجود بعض الحمض النووي لزجة.
- إضافة 1 مل RPMI 1640 وسائل الإعلام كاملة. الاستفادة من أنبوب بلطف إلى resuspend والمحللة مجزأة. عكس صعودا وهبوطا 10 مرات. كرر الخطوة 4.1.
- كرر الخطوة 4.2 مرتين أخريين أو حتى يظهر طاف واضح. اعادة تعليق أجزاء البنكرياس غسلها في 1 مل كاملة RPMI 1640 وسائل الإعلام.
5. جزيرة العزلة
ملاحظة: للحصول على أعداد صغيرة من بنكرياسات، ومن ناحية اختيار المباشرة على النحو التالي (5.1) يمكن استخدامها لISOL جزيرةأوجه. لأعداد كبيرة من بنكرياسات (> 6)، ويفضل الطريقة الموضحة في 5.2.
- مباشر ناحية قطف:
- نقل المحللة من الخطوة 4.3 إلى صحن 60 ملم. إضافة 5 مل كاملة RPMI 1640 وسائل الإعلام. يجمع تحت المجهر تشريح.
- إعداد الإضاءة الحقل مشرقة على المجهر. ضبط شدة الضوء إلى ~ 50٪ من الطاقة القصوى. تحت هذا الشرط، تظهر الجزر كما قليلا مجموعات الوردي، في حين أن خلايا عنيبية مجموعات على شكل غير النظامية، والظلام (الشكل 1A). ينصح التكبير من ~ 50X (الجمع بين قوة الهدف وعدسة المجهر) لتقديم أفضل وسيلة لجزر تصور وافتتاح طرف الماصة في وقت واحد لاختيار.
- التقاط الجزر مع P20 ماصة مع تجنب التجمعات عنيبية. كسور الاستغناء الجزر التخصيب إلى طبق جديد 60 ملم مع RPMI وسائل الإعلام كاملة (الشكل 1B).
- تكرار عملية قطف اليد مرتين أكثر. ترك الجزر النقية في 60 الجديدطبق ملم مع 4 مل وسائل الاعلام RPMI كاملة (الشكل 1C).
- الطرد المركزي التدرج:
- إعداد أنبوب الطرد المركزي 15 مل التي تم تحميلها مسبقا مع 2 مل polysucrose والصوديوم دياتريزوات في كثافة 1.077 غرام / مليلتر. ترك الأنبوب على الجليد حتى الاستخدام.
- نقل تعليق من الخطوة 4.3 على الجزء العلوي من polysucrose والصوديوم حل دياتريزوات مع ماصة باستور. لا تخل الطبقة السفلية. الأنسجة من ما يصل الى 10 المولود حديثا أو 2 P17 بنكرياسات يمكن تحميلها في كل أنبوب 15 مل.
- تدور الأنبوب في ~ 600 x ج في البديل الدوار لمدة 15 دقيقة على 4 درجات مئوية. استخدام إعدادات قبالة الفرامل.
- بعد الطرد المركزي، ونقل وسائل الإعلام وطبقات البيني (لاحظ أنه في ظل ظروف التشغيل المثالية، سوف يكون موجودا في الجزر في الطور البيني بين polysucrose والثقافة وسائل الإعلام بعد الطرد المركزي) إلى جديد 15 مل أنبوب. إضافة 10 مل سائل الإعلام، مزيج بلطف ولكن بدقة.
- تدور أسفل جزء التخصيب جزيرةفي 300 x ج لمدة 5 دقائق. إزالة وسائل الإعلام غسل. تكرار غسل واحد لمزيد من الوقت مع وسائل الاعلام RPMI كاملة. الكريات Resuspend في 4 مل وسائل الإعلام، والتي في معظمها يحتوي على الجزر والقنوات (1D الشكل).
- ومن ناحية اختيار الجزر على النحو المبين في القسم 5.1.
6. فحوصات هيئة التأمين في الفشوت المعزولة
- احتضان الجزر من الخطوة 5.1.4 في وسائل الإعلام RPMI كاملة لمدة 2 ساعة في 37 درجة مئوية نسيج الثقافة الحاضنة.
- استخدام ماصة لإزالة RPMI تحت المجهر تشريح. إضافة 3 مل من محلول KRB مع 2.8 ملي الجلوكوز إلى لوحة 3. دوامة 10 مرات لغسل الجزر. إزالة حلول KRB.
- تكرار عملية الغسيل مرة واحدة. احتضان الجزر مع 3 مل من محلول KRB عند 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة في حاضنة.
- قسامة 1 مل KRB في كل بئر من لوحة ال 12 أيضا. قبل تدفئة الأسهم KRB ولوحة إلى 37 درجة مئوية في حاضنة.
- يغسل الجزر مرتين مع درجة حرارة ما قبل KRB كما في 6.2. عبرفر 10 الجزر إلى كل بئر من لوحات ما قبل تحسنت. احتضان في حاضنة 37 درجة مئوية.
- بعد 45 دقيقة، وسحب 50 ميكرولتر من طاف. ويتضمن هذا الحل الأنسولين يفرز تحت الجلوكوز القاعدية.
- إضافة 32 ميكرولتر 500 ملي الجلوكوز. دوامة لوحة 20 مرات لخلط الحل. احتضان في حاضنة 37 درجة مئوية. دوامة لوحة 5 مرات مرة واحدة كل 5 دقائق.
- بعد 45 دقيقة، وسحب 50 ميكرولتر طاف. هذا هو الأنسولين يفرز تحت ارتفاع نسبة الجلوكوز.
- نقل جميع الجزر إلى أنبوب 1.5 مل. تجميد في -20 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. ذوبان الجليد في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. تكرار عملية التجميد والذوبان.
- إضافة 0.5 مل 70٪ من الإيثانول مع 20 ملم حمض الهيدروكلوريك. ترك بين عشية وضحاها. هذا هو الانسولين اليسار في الجزر.
- استخدام ELISA التقليدية لفحص مستويات الانسولين، التي سبق وصفها 3.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تحت الظروف المثلى، يمكن أن الطريقة المعروضة تسفر 20-80 الجزر من البنكرياس كل فأر صغير. يعتمد هذا العدد على خلفية وراثية، وعمر الفئران، وحجم الجزر التي سيتم استردادها. بين يشيع استخدامها، CD1 خارج لدت وC57BL / 6J الفئران الأصيلة تنتج أقل الجزر مع حجم أصغر من الهجينة بين CD1 وC57BL / 6 أو B6CBAF1 التجارية / J الفئران تفعل. ومن ناحية المباشرة اختيار عموما قدم عدد أصغر من الجزر، من المحتمل بسبب استبعاد من الجزر الصغيرة التي يمكن أن يكون من الصعب التعرف...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا، ونحن نقدم بروتوكول خطوة بخطوة على عزلة جزيرة من بنكرياسات التي هي صغيرة جدا لنضح التقليدية. ومن المتوقع أن تسفر عن الجزر جاهزة لجميع الدراسات القائمة على جزيرة مثل تنقية خلايا بيتا، تحليل التعبير الجيني، جزيرة نضوج خلايا بيتا، والانتشار، استجابات التوتر الخلية، وبقاء الخلية، والتمثيل الغذائي، وصيانة التأمين الحكومية الوظيفية وغيرها. وسيكون هذا، لعلمنا، أول بروتوكول البصري المفصل الذي يوجه الباحثين الجدد لأداء عزل خلايا البنكرياس من الفئران حديثي الولادة. من دون هذه م...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح مالية متنافسة للعمل الموصوف.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل بمنحة من NIDDK (DK065949 ل GG). نشكر الدكتورة بريندا إم جارفيس وجيف دوريا جونيور على قراءة المخطوطة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| كولاجيناز النوع الرابع | سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، MO | C5138 | |
| 1x HBSS مع Ca2 + < / sup> / Mg2 + < / sup> | Mediatech / Cellgro ، Manassas ، VA | MT21020CV | إذا تم الحصول على HBSS مع Ca2 + < / sup> / Mg2 + < / sup> ، يمكن إضافة CaCl 2 < / sub > و MgSO4< / sub > إلى 1.26 و 0.5 ملي مولار ، على التوالي. |
| RPMI 1640 w / o glucose | Thermo Fisher Scientific / Life Technologies ، Waltham ، MA | 11879-020 | يجب إضافة الجلوكوز إلى مستويات محددة حتى لا يتداخل مع الاستخدام اللاحق للجزيرة. |
| الجلوكوز | سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، MO | G-7021 ؛ | |
| محلول عديد السكروز ودياتريزوات الصوديوم | Sigma Aldrich ، سانت لويس ، MO | Histopaque-10771 | |
| Stereoscope | Carl-Zeiss ، Oberkochen ، ألمانيا | Stemi2000 | |
| Stereoscope | Leica ، Wetzlar ، ألمانيا | Leica M165 | |
| أجهزة الطرد المركزي | الدقيقة Eppendorf ، Hauppauge ، NY | جهاز طرد مركزي 5417C | |
| طرد مركزي | Eppendorf، Hauppauge ، NY | أجهزة الطرد المركزي 5810R | |
| 15-mL أنابيب الطرد المركزي | VWR ، Radnor ، PA | 89039-666 | |
| 50-ML أنابيب الطرد المركزي | VWR ، Radnor ، PA | 89039-658 | |
| التوازن الدقيق | VWR ، Radnor ، PA | VWR-225AC | |
| أنابيب الطرد الدقيق | VWR ، Radnor ، PA | 87003-294 | |
| Pipetman P1000 | Fisher Scientific ، ؛ Waltham ، MA | F123602 | |
| Pipetman P20 | Fisher Scientific ، ؛ والثام ، ماساتشوستس | F123600 | |
| طبق 100 × 15 مم | VWR ، رادنور ، بنسلفانيا | 25384-088 | |
| طبق 60 × 15 مم | VWR ، Radnor ، PA | 25384-168 | |
| 12 بئر ألواح | VWR ، Radnor ، PA | 665-180 | |
| علمية دقيقة مقص ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا | 14080-11 | ||
| علمية دقيقة ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا | 5708-5 | ||
| CD1 الفئران | تشارلز ريفر مختبرات ، ويلمينتون ، ماساتشوستس & nbsp ؛ | CD-1 | |
| C57BL / 6J | مختبر جاكسون ، فارمنجتون ، CT & nbsp ؛ | C57BL / 6J | |
| B6CBAF1 / J | مختبر جاكسون ، فارمنجتون ، CT & nbsp ؛ | B6CBAF1 / J |
المراجع
- Matsumoto, S., et al. Improvement of pancreatic islet cell isolation for transplantation. Proc (Bayl Univ Med Cent). 20 (4), 357-362 (2007).
- Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation. J Vis Exp. (50), (2011).
- Zhao, A., et al. Galphao represses insulin secretion by reducing vesicular docking in pancreatic beta-cells. Diabetes. 59 (10), 2522-2529 (2010).
- Planas, R., et al. Gene expression profiles for the human pancreas and purified islets in type 1 diabetes: new findings at clinical onset and in long-standing diabetes. Clin Exp Immunol. 159 (1), 23-44 (2010).
- Tonne, J. M., et al. Global gene expression profiling of pancreatic islets in mice during streptozotocin-induced beta-cell damage and pancreatic Glp-1 gene therapy. Dis Model Mech. 6 (5), 1236-1245 (2013).
- London, N. J., Swift, S. M., Clayton, H. A. Isolation, culture and functional evaluation of islets of Langerhans. Diabetes Metab. 24 (3), 200-207 (1998).
- Rorsman, P., et al. Failure of glucose to elicit a normal secretory response in fetal pancreatic beta cells results from glucose insensitivity of the ATP-regulated K+ channels. Proc Natl Acad Sci U S A. 86 (12), 4505-4509 (1989).
- Hellerstrom, C., Swenne, I. Functional maturation and proliferation of fetal pancreatic beta-cells. Diabetes. 40 (Suppl 2), 89-93 (1991).
- Blum, B., et al. Functional beta-cell maturation is marked by an increased glucose threshold and by expression of urocortin 3. Nat Biotechnol. 30 (3), 261-264 (2012).
- Hegre, O. D., et al. Nonenzymic in vitro isolation of perinatal islets of Langerhans. In Vitro. 19 (8), 611-620 (1983).
- Dolenšek, J., Rupnik, M. A., Stožer, A. Structural similarities and differences between the human and the mouse pancreas. Islets. 7 (1), e102445(2015).
- White, J., White, D. C. Source Book of Enzymes, Source Book of Enzymes. , C.R.C. Press. (1997).
- Bock, T., Pakkenberg, B., Buschard, K. Genetic background determines the size and structure of the endocrine pancreas. Diabetes. 54 (1), 133-137 (2005).
- Bouwens, L., Rooman, I. Regulation of pancreatic beta-cell mass. Physiol Rev. 85 (4), 1255-1270 (2005).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
