مقالة منهجية

والاستشعار القائمة على أبتمر لUnchelated الجادولينيوم (III)

DOI:

10.3791/55216

⸱

يناير 9, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Chemistry and Biochemistry, California State University, East Bay

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم وصف استخدام جزيئات بولي ديوكسي نيوكليوتيد (44-mer aptamer) لاستشعار أيون الجادولينيوم (III) غير المخلب في محلول مائي. يتم الكشف عن وجود الأيون من خلال زيادة انبعاث مضان المستشعر.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = 'jove_content'> يتم توضيح طريقة لتحديد وجود أيون الجادولينيوم ثلاثي التكافؤ غير المخلب (Gd3+) في المحلول المائي. غالبا ما يكون Gd3+ موجودا في عينات من عوامل التباين القائمة على الجادولينيوم نتيجة لتفاعلات غير مكتملة بين الترابط والأيون ، أو كمنتج تفكك. نظرا لأن الأيون سام ، فإن اكتشافه له أهمية حاسمة. هنا ، يتم وصف تصميم واستخدام جهاز استشعار قائم على aptamer (Gd-sensor) ل Gd3+. ينتج المستشعر تغييرا مضنوعا استجابة لزيادة تركيزات الأيون، وله حد للكشف في النطاق النانومولار (~ 100 نانومتر مع نسبة إشارة إلى ضوضاء تبلغ 3). يمكن إجراء الاختبار في مخزن مؤقت مائي عند درجة الحموضة المحيطة (~ 7 - 7.4) في صفيحة دقيقة مكونة من 384 بئرا. المستشعر غير متفاعل نسبيا تجاه أيونات المعادن الأخرى ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية مثل أيونات الصوديوم والبوتاسيوم والكالسيوم ، على الرغم من أنه ليس خاصا ب Gd3+ على اللانثانيدات ثلاثية التكافؤ الأخرى مثل اليوروبيوم (III) والتيربيوم (III). ومع ذلك ، لا توجد اللانثانيدات بشكل شائع في عوامل التباين أو الأنظمة البيولوجية ، وبالتالي يمكن استخدام المستشعر لتحديد Gd3+ غير المخلب بشكل انتقائي في الظروف المائية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد أدت الأهمية المتزايدة للتصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) في التشخيص السريري، والذي يحد من حساسية الكامنة في أسلوب في النمو السريع للبحث في تطوير عوامل رواية القائم على الجادولينيوم المقابل (GBCAs) 1. GBCAs هي الجزيئات التي تدار لتحسين جودة الصورة، وأنها عادة ما يكون التركيب الكيميائي للأيون الثلاثي الجادولينيوم (ش ج 3+) منسقة ليجند polydentate. هذا complexation له أهمية حاسمة كما unchelated ش ج 3+ غير سامة. وقد تورط في تطوير تليف النظامية كلوي في بعض المرضى الذين يعانون من أمراض الكلى أو الفشل 2. ونتيجة لذلك، والكشف عن أيون حر مائي غير فعال في ضمان سلامة GBCAs. وجود unchelated ش ج 3+ في حلول GBCA غالبا ما يكون نتيجة رد فعل غير مكتمل بين يجند وأيون، تفكك المجمع، أو displacemenر من قبل غيرها من الكاتيونات المعدنية البيولوجية 3.

ومن بين العديد من التقنيات المستخدمة حاليا لتحديد وجود ش ج 3+، أولئك الذين يعتمدون على اللوني و / أو الطيف رتبة أعلى من حيث التنوع وتطبيق 4. بين مواطن القوة لديهم هي حساسية عالية ودقة، والقدرة على تحليل مختلف المصفوفات عينة (بما في ذلك المصل البشري 5 والبول والشعر 6، 7 مياه الصرف الصحي، وتركيبات وكيل النقيض 8)، والكمي في وقت واحد من عدة ش ج 3+ المجمعات (قائمة من الدراسات قبل 2013 الموضح في مراجعة شاملة من قبل Telgmann وآخرون.) (4). لكن العائق الوحيد هو أن العديد من هذه الأساليب تتطلب أدوات القياس (مثل إضافة بالحث مطياف البلازما الشامل) 4 أن بعض المختبرات قد لا يكون الوصول إليها. في سياق اكتشاف GBCA الرواية في البحث ومستويات إثبات صحة مفهوم، عelatively أكثر ملاءمة، والسريع، وفعالة من حيث التكلفة طريقة القائم الطيفية (مثل امتصاص الأشعة فوق البنفسجية فيس أو مضان) قد يكون بمثابة بديل قيمة. مع هذه التطبيقات في الاعتبار، وقد وضعت الفلورسنت القائم على أبتمر الاستشعار عن مائي ش ج 3+ 9.

وأبتمر (ش ج-أبتمر) هو 44 قاعدة طويلة واحد الذين تقطعت بهم السبل جزيء الحمض النووي مع تسلسل معين من القواعد التي كانت معزولة من خلال عملية التطور المنهجي للبروابط كتبها تخصيب الأسي (سيليكس) 9. لتكييف أبتمر إلى جهاز استشعار الفلورسنت، ويرد على fluorophore إلى محطة 5 'من حبلا، وهو ما يتم تهجين مع حبلا التبريد (QS) عبر 13 قواعد تكميلية (الشكل 1). والموسومة QS مع جزيء فاكهه تقضي الظلام في 'محطة 3. في غياب ش ج 3+، أجهزة الاستشعار (ش ج استشعار)، تتكون من نسبة 1: الخلد 2 ش ج-أبتمر وQS على التوالي، وسيكون الحد الأدنى من الانبعاثات مضان ر المناسبس نقل الطاقة من fluorophore إلى فاكهه تقضي. وإضافة مائي ش ج 3+ تحل محل QS من ش ج-أبتمر، مما أدى إلى زيادة في الانبعاثات مضان.

figure-introduction-1
الشكل 1. استشعار (ش ج استشعار) التي تتكون من أبتمر 44 قاعدة طويلة (ش ج-أبتمر) الموسومة مع فلوريسئين (أ fluorophore) و13 قاعدة تبريد طويل حبلا (QS) الموسومة مع dabcyl (فاكهه تقضي الظلام) . في غياب unchelated ش ج 3+، مضان من أجهزة الاستشعار هو الحد الأدنى. مع اضافة كلمة المدير العام 3+، تهجير QS يحدث ولوحظ حدوث زيادة في الانبعاثات مضان. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

هناك في الوقت الحاضر، احد يشيع استخدامها أسلوب قائم على التحليل الطيفي للكشف عنجي مائي ش ج 3+. يستخدم هذا الاختبار البرتقال زايلينول جزيء، والتي تخضع لعملية التحول في أقصى الطول الموجي امتصاص 433-573 نانومتر على عملية إزالة معدن ثقيل إلى أيون 10. نسبة هذين الامتصاصية ماكسيما يمكن أن تستخدم لقياس كمية من unchelated ش ج 3+. أجهزة الاستشعار أبتمر هو بديل (قد تكون أيضا مكملة) لفحص زايلينول البرتقال، وطرق لهما ظروف التفاعل المختلفة (مثل درجة الحموضة وتكوين المحاليل المستخدمة)، الإختياريات الهدف، ويتراوح خطية من تقدير، وطرائق الكشف 9.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: يتم استخدام الجزيئي المياه البيولوجيا الصف في كافة الاستعدادات العازلة والحل. جميع أنابيب القابل للتصرف (microcentrifuge لوPCR) ونصائح الماصة هي DNase- وريبونوكلياز خالية. يرجى الاطلاع على ورقة بيانات سلامة المواد (MSDS) لجميع المواد الكيميائية قبل استخدامها. ينصح بشدة استخدام معدات الوقاية الشخصية المناسبة (PPE).

1. إعداد الحلول المالية أبتمر

  1. شراء 2 خيوط polydeoxynucleotide تجاريا. طلب كل من خيوط بالتطهير عبر الأداء العالي اللوني السائل (HPLC).
    حبلا 1 (ش ج-أبتمر):
    5 '- / 56-FAM / AGGCTCTCGGGACGACCAGTTGGTCCCGCTTTATGTGTCCCGAG-3 "
    حبلا 2 (QS):
    5'-GTCCCGAGAGCCT / 3Dab / -3 "
  2. حل كل حبلا في الماء لجعل 100 ميكرومتر الحلول الأسهم الفردية للش ج-أبتمر وQS.
  3. تخزين هذه الحلول في -20 درجة مئوية. الحلول هي مستقرة حتى الآن، لمدة 3 سنوات.
  4. لتقليل فريزدورات ذوبان الجليد الإلكترونية، تخزين الحلول الأسهم في 10 مكل.

2. إعداد 2X ش ج استشعار الحل

  1. إعداد المخزن المؤقت فحص (20 ملي HEPES، 2 مم MgCl 2، 150 مم كلوريد الصوديوم، 5 مم بوكل). ضبط درجة الحموضة إلى ~ 7.4 مع هيدروكسيد الصوديوم وحمض الهيدروكلوريك، وتصفية من خلال معقمة يمكن التخلص منها زجاجة أعلى مرشحات مع 0.2 ميكرومتر غشاء PES. تخزين في زجاجات معقمة. إذا تمت تصفيتها وتخزينها بشكل صحيح (في درجة حرارة الغرفة)، المخزن المؤقت مستقرة حتى الآن، لمدة 2 سنة.
  2. تمييع 1 ميكرولتر من محلول المخزون ش ج-أبتمر (من الخطوة 1.2) و 2 ميكرولتر من محلول المخزون QS (من الخطوة 1.2) في 497 ميكرولتر من العازلة الفحص. تخلط جيدا باستخدام الدوامة. تركيزاتها في 2X حل ش ج استشعار هي 200 نانومتر و 400 نانومتر، على التوالي.
    ملاحظة: حجم 2X حل ش ج استشعار أعد في هذه الخطوة هو 500 ميكرولتر، وهو ما يكفي لاختبار 6-7 تركيزات مختلفة من ش ج 3+ لمنحنى المعايرة والحلول عامل تباين(الخطوة 3). وسيكون لكل عينة تعطي الآبار مكررة في 384 لوحة جيدا.
    1. ضبط حجم 2X حل ش ج استشعار وفقا لعدد من الحلول ش ج 3+ التي تحتاج إلى فحصها.
  3. نقل 2X حل ش ج استشعار في 9 أنابيب PCR، مع 50 ميكرولتر إلى كل أنبوب. وضع الأنابيب في cycler الحرارية.
  4. ضبط البرنامج في cycler الحرارية لتسخين الحل في أنابيب إلى 95 درجة مئوية، وعقد لمدة 5 دقائق، ثم تبرد ببطء الحلول إلى 25 درجة مئوية خلال ~ 15 دقيقة (بمعدل ~ ،05-،1 ° C / ق). دورة التدفئة والتبريد هي ضمان التهجين الأمثل بين ش ج-أبتمر وQS. نتائج التهجين جزئية في تبريد غير مكتمل ومضان الخلفية أعلى من أجهزة الاستشعار. إذا كان cycler الحرارية غير متوفر، تنفيذ هذه العملية باستخدام حمام الماء الساخن بدلا من ذلك.
  5. مرة واحدة يتم تبريده الى 25 درجة مئوية، واستخدامها على الفور الحل، أو الاحتفاظ في cycler الحرارية (تصل إلى حوالي 2 ساعة) حتى يكون على استعداد لمستعمل. عند استخدام حمام ماء للتدفئة، وترك الأنابيب في الحمام كما الماء يبرد ببطء إلى درجة حرارة الغرفة.

3. بناء منحنى الإسفار المعايرة والكشف عن وجود Unchelated ش ج 3+ في حل من وكيل التباين كلمة المدير العام

  1. حل GdCl 3 الصلبة في المخزن المؤقت فحص (المخزن نفسه كما في الخطوة 2.1).
  2. من خلال التخفيف المتسلسل، وإعداد 100 ميكرولتر كل من 6 حلول ش ج 3+ مختلفة في أنابيب microcentrifuge في ضعف تركيز المطلوب النهائية لمنحنى المعايرة (2X الحلول).
    1. على سبيل المثال، لإنشاء معايرة ل0 (العازلة فقط مع عدم وجود GdCl 3)، 50، 100، 200، 400، و 800 نيوتن متر من ش ج 3+، وإعداد الحلول التي تحتوي على 0، 100، 200، 400، 800، و 1،600 نيوتن متر من أيون. تأكد من تضمين دائما "فارغة" مع 0 نانومتر ش ج 3+ كما سيطرة سلبية.
  3. حل كيل النقيض أن يكون الاختبارإد في المنطقة العازلة الفحص. إعداد 2 أو 3 تركيزات مختلفة من الحلول عامل تباين عبر التخفيف المتسلسل.
    ملاحظة: اختبار 3 تركيزات مختلفة من الحل وكيل النقيض من المستحسن. هذا هو التأكد من أن هذه التركيزات ضمن نطاق خطي. إذا كانت العينات المختبرة لا تعرض وجود علاقة خطية، والحد من تركيز وكيل النقيض المستخدمة.
  4. خذ أنابيب PCR يحتوي الحل 2X ش ج استشعار من الخطوة 2.5 من cycler الحرارية.
  5. إضافة 50 ميكرولتر من كل كلمة المدير العام 3+ حل من الخطوة 3.2 إلى 6 من 9 أنابيب PCR يحتوي الحل 2X ش ج استشعار. مزيج من قبل pipetting صعودا وهبوطا. يحتوي كل أنبوب PCR الآن التركيز المطلوب من ش ج 3+ لفحصها، و 100 نيوتن متر ش ج-أبتمر، و 200 نانومتر QS.
  6. للأنابيب PCR المتبقية التي تحتوي على 2X حل كلمة المدير العام أجهزة الاستشعار، وإضافة 50 ميكرولتر من الحلول وكيل النقيض من الخطوة 3.3. مزيج جيد من قبل pipetting صعودا وهبوطا عدة مرات.
  7. احتضان الصورةolutions في أنابيب PCR لحوالي 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. قد يكون من اليسار إلى الوقوف لمدة تصل إلى 30 دقيقة.
  8. نقل 45 ميكرولتر من كل أنبوب في لوحة 384 جيدا. وسيكون لكل أنبوب PCR تعطي الآبار مكررة.
  9. تسجيل مضان من كل بئر على طبق من ذهب للقارئ. وfluorophore (فام) المستخدمة في تصميم ش ج-أجهزة الاستشعار لديها الإثارة وانبعاث قصوى تبلغ 495 و 520 نانومتر على التوالي، كما هو موضح على الموقع الإلكتروني للمورد. اختيار المناسبة الإثارة وانبعاث موجات أو مرشحات اعتمادا على ما إذا كان قارئ اللوحة هو monochromator- أو القائم على التصفية.
  10. رسم بياني من مضان في وحدات مضان التعسفية (AFU) ضد تركيز ش ج 3+.
  11. رسم بياني مع تغير مضان أضعاف ضد تركيز ش ج 3+. حساب التغير مضان أضعاف بقسمة AFU كل تركيز من قبل AFU من الحل "فارغ" (مع 0 نانومتر ش ج 3+). فإن التغيير مضان أضعاف تسمح للنormalization من النتائج، ينبغي عرض AFU بعض دورية (أيام مختلفة، وما إلى ذلك) الاختلافات.
  12. مقارنة الانبعاثات مضان من محلول يحتوي على عامل تباين و"فارغة"، وهو محلول يحتوي على 0 نانومتر GdCl 3 (العازلة فقط).
    ملاحظة: مضان أعلى من الحل GBCA يعني وجود unchelated ش ج 3+، والتي قد تتطلب المزيد من تنقية وكيل التباين. ويمكن تقدير كمية unchelated ش ج 3+ الحاضر باستخدام منحنى المعايرة التي شيدت في خطوة 3.10 أو 3.11.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويرد التغيير مضان نموذجي من الحل ش ج استشعار بحضور unchelated ش ج 3+ في الشكل 2. قد يكون رسم انبعاث كما تغير مضان أضعاف (الشكل 2A) أو مضان الخام القراءة (الشكل 2B) في وحدات التعسفي (AFU). كلا المؤامرات تسفر عن منحنيات المعايرة متشابهة جدا مع مجموعة خطية لتركيزات ش ج 3+ أقل من 1 ميكرومتر وتشبع إشارة في> 3 ميكرومتر. الحد من الكشف ~ 100 نيوتن متر مع نسبة 3 الإشارة إلى الضوضاء....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باستخدام كلمة المدير العام استشعار القائم على أبتمر، وزيادة في الانبعاثات مضان أن يتناسب مع تركيز unchelated ش ج 3+ لوحظ. لتقليل كمية العينة المستخدمة، يمكن تشغيل الفحص في صفيحة 384 بشكل جيد مع حجم العينة ما مجموعه 45 ميكرولتر لكل بئر. في هذا التصميم، واختيار فلوريسئين (فام) وdabcyl (DAB) ويستند في المقام الأول على تكلفة الكواشف. لتعديل الطول الموجي الانبعاثات، الاقتران مختلفة من fluorophore وفاكهه تقضي يمكن استخدامها 11.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يسعدنا أن نعرب عن امتناننا للدكتور ميلان إن ستويانوفيتش من جامعة كولومبيا ، نيويورك ، نيويورك للمدخلات العلمية القيمة. يتم دعم هذا العمل بتمويل من جامعة ولاية كاليفورنيا إيست باي (CSUEB) ومنحة دعم أعضاء هيئة التدريس CSUEB - الباحث الفردي. تم دعم OE و TC و A.L. من قبل زمالة مركز CSUEB لأبحاث الطلاب (CSR).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

يمكن استخدام مياه المسببة للتآكل يمكن الطرد المركزي الدقيقة مناسبة

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
تسلسل المدخلات Gd-aptamerIDTDNAوتعديل الفلوروفور في شكل الترتيبA فلوروفور بطول موجة انبعاث مختلف. يمكن أيضا طلب أبتامر من شركة أخرى.
تبريد حبلاIDTDNAتسلسل الإدخال وتعديل التبريد في شكل الترتيبيمكن استخدام مروي مختلف لنقل الطاقة الأمثل من الفلوروفور. يمكن أيضا طلب أبتامر من شركة أخرى.
من الدرجة في البيولوجيا الجزيئيةلا توجد شركة مصنعة محددة ، سواء معالجتها DEPC أو غير DEPC تعمل بشكل جيد بشكل جيد
كلوريد الجادولينيوم (III) اللامائيStrem936416HEPES السامة
فيشر ScientificBP310-500
كلوريد المغنيسيوم اللامائيMP Biomedicals0520984480 - 100 جم
كلوريد الصوديومAcros Organics327300025
كلوريد البوتاسيومفيشر ScientificP333-500
هيدروكسيد الصوديوم ، الكرياتفيشر ScientificBP359
حمض الهيدروكلوريكفيشر ScientificSA49سامة ومسببة للتآكل
384 بئر شفة منخفضة من البوليسترين الأسود المسطح القاع ألواح NBSلوحات Corning3575التي هي مناسبة للتألق القراءة مطلوبة.
Nalgene Rapid-Flow معقم الزجاجة العلوية القابل للتصرفThermo Scientific5680020سطح الزجاجة مزود بغشاء PES 0.2 ميكرون
زجاجات معقمة يمكن التخلص منها 250 مل430281استخدام زجاجة أكبر أو أصغر
1.5 مل أنابيبلا توجد شركة تصنيع محددة ، طالما أنها خالية من الحمض النووي والحمض النووي الريبي أنابيب
0.2 مل PCRلا توجد شركة مصنعة محددة ، طالما أنها خالية من الحمض النووي والحمض النووي الريبي
Micropipetsلا توجد شركة تصنيع محددة
أطراف Pipet (غير مرشح) بأحجاملا توجد شركة تصنيع محددة ، طالما أنها خالية من DNAse و RNAse
< قوية > المعدات < / قوية >
قارئ الألواحBiotek Synergy H1ستعمل قارئات اللوحات من الشركات المصنعة الأخرى بشكل جيد

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Shen, C., New, E. J. Promising strategies for Gd-based responsive magnetic resonance imaging contrast agents. Curr. Opin. Chem. Biol. 17 (2), 158-166 (2013).
  2. Cheong, B. Y. C., Muthupillai, R. Nephrogenic systemic fibrosis: a concise review for cardiologists. Tex. Heart Inst. J. 37 (5), 508-515 (2010).
  3. Hao, D., Ai, T., Goerner, F., Hu, X., Runge, V. M., Tweedle, M. MRI contrast agents: basic chemistry and safety. J Magn. Reson. Imaging. 36 (5), 1060-1071 (2012).
  4. Telgmann, L., Sperling, M., Karst, U. Determination of gadolinium-based MRI contrast agents in biological and environmental samples: a review. Anal. Chim. Acta. 764, 1-16 (2013).
  5. Frenzel, T., Lengsfeld, P., Schirmer, H., Hütter, J., Weinmann, H. -J. Stability of gadolinium-based magnetic resonance imaging contrast agents in human serum at 37 degrees C. Invest. Radiol. 43 (12), 817-828 (2008).
  6. Loreti, V., Bettmer, J. Determination of the MRI contrast agent Gd-DTPA by SEC-ICP-MS. Anal. Bioanal. Chem. 379 (7), 1050-1054 (2004).
  7. Telgmann, L., et al. Speciation and isotope dilution analysis of gadolinium-based contrast agents in wastewater. Environ. Sci. Technol. 46 (21), 11929-11936 (2012).
  8. Cleveland, D., et al. Chromatographic methods for the quantification of free and chelated gadolinium species in MRI contrast agent formulations. Anal. Bioanal. Chem. 398 (7), 2987-2995 (2010).
  9. Edogun, O., Nguyen, N. H., Halim, M. Fluorescent single-stranded DNA-based assay for detecting unchelated gadolinium(III) ions in aqueous solution. Anal. Bioanal. Chem. 408 (15), 4121-4131 (2016).
  10. Barge, A., Cravotto, G., Gianolio, E., Fedeli, F. How to determine free Gd and free ligand in solution of Gd chelates. A technical note. Contrast Med. Mol. Imaging. 1 (5), 184-188 (2006).
  11. Johansson, M. K. Choosing reporter-quencher pairs for efficient quenching through formation of intramolecular dimers. Methods Mol. Biol. 335, 17-29 (2006).
  12. Sherry, A. D., Caravan, P., Lenkinski, R. E. A primer on gadolinium chemistry. J. Magn. Reson. Imaging. 30 (6), 1240-1248 (2009).
  13. Shakhverdov, T. A. A cross-relaxation mechanism of fluorescence quenching in complexes of lanthanide ions with organic ligands. Opt. Spectrosc. 95 (4), 571-580 (2003).
  14. Brittain, H. G. Submicrogram determination of lanthanides through quenching of calcein blue fluorescence. Anal. Chem. 59 (8), 1122-1125 (1987).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Gd3 384

مقالات ذات صلة