يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

بيوسنسينغ موتور الخلايا العصبية الغشاء المحتملة في الأجنة الزرد الحية

6.5K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/55297

⸱

يونيو 26, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Biotechnology and Translational Medicine, Università degli Studi di Milano, 2Department of Neuroscience; Department of Cell Biology, Howard Hughes Medical Institute, Yale University School of Medicine, 3Program in Cellular Neuroscience, Neurodegeneration and Repair, Yale University School of Medicine, 4Department of BioSciences, Università degli Studi di Milano

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

تسمح البروتوكولات الموضحة >jove_content<هنا بدراسة الخصائص الكهربائية للخلايا القابلة للإثارة في أكثر الظروف الفسيولوجية غير الغازية من خلال استخدام أجنة أسماك الزرد في نظام في الجسم الحي جنبا إلى جنب مع مؤشر الجهد المشفر وراثيا القائم على نقل طاقة الرنين الفلوري (FRET) الذي يتم التعبير عنه بشكل انتقائي في نوع الخلية محل الاهتمام.

الملخص

تم تصميم البروتوكولات الموضحة هنا للسماح للباحثين بدراسة الاتصال الخلوي دون تغيير سلامة البيئة التي توجد فيها الخلايا. على وجه التحديد ، تم تطويرها لتحليل النشاط الكهربائي للخلايا القابلة للإثارة ، مثل الخلايا العصبية الشوكية. في مثل هذا السيناريو ، من الضروري الحفاظ على سلامة الخلية الشوكية ، ولكن من المهم أيضا الحفاظ على التشريح والشكل الفسيولوجي للأنظمة المعنية. في الواقع ، يجب أن يستند فهم الطريقة التي يعمل بها الجهاز العصبي - والأنظمة المعقدة الأخرى - إلى نهج نظامي. لهذا السبب ، تم اختيار جنين الزرد الحي كنظام نموذجي ، وتم تقييم تغيرات جهد غشاء الخلايا العصبية الشوكية دون التدخل في الظروف الفسيولوجية للأجنة.

هنا ، يتم وصف نهج يجمع بين استخدام أجنة الزرد وجهاز استشعار حيوي قائم على FRET. تتميز أجنة أسماك الزرد بجهاز عصبي مبسط للغاية وهي مناسبة بشكل خاص لتطبيقات التصوير بفضل شفافيتها ، مما يسمح بتوظيف مؤشرات الجهد القائمة على التألق في غشاء البلازما أثناء نمو أسماك الزرد. يتيح التآزر بين هذين المكونين تحليل النشاط الكهربائي للخلايا في الكائنات الحية السليمة ، دون الإخلال بالحالة الفسيولوجية. أخيرا ، يمكن أن يتعايش هذا النهج غير الجراحي مع تحليلات أخرى (على سبيل المثال ، تسجيلات الحركة العفوية ، كما هو موضح هنا).

المقدمة

في الجسم الحي التحليل المكوني يسمح العلماء للتحقيق في السلوك الخلوي في الطريقة الأكثر موثوقية. هذا صحيح بشكل خاص عندما يتأثر النشاط تحت التدقيق بشكل كبير من التفاعلات خلية الخلية (على حد سواء الاتصال وغير تعتمد على الاتصال)، كما هو الحال في الجهاز العصبي، حيث التغييرات غشاء الجهد يدفع التواصل بين الخلايا المنكوبة. إن فهم المعلومات المشفرة بواسطة هذه الإشارات الكهربائية هو المفتاح لفهم الطريقة التي يعمل بها الجهاز العصبي في كل من الحالات الفسيولوجية والمرضية.

من أجل دراسة الخواص الكهربائية الخلية في معظم الحالات الفسيولوجية غير الغازية، وقد وضعت مؤخرا عدة مؤشرات الجهد المشفرة وراثيا 1 . على عكس الأجيال السابقة من أجهزة الاستشعار الجهد البصري (أساسا أصباغ حساسة للجهد) 2 ، جيفيس تسمح لفي الجسم الحي تحليلات للنظام العصبي سليمة، ويمكن أن يقتصر التعبير على أنواع محددة من الخلايا أو السكان.

الجنين الزرد هو في الجسم الحي "الركيزة" من خيار للاستفادة من إمكانات كبيرة تعزى إلى جيفيس. في الواقع، وبفضل وضوحها البصري ونظامها العصبي المبسط بعد التطورية، فإن نموذج الزرد يسمح بالتعرف المباشر والتلاعب لكل مكون خلوي في الشبكة. في الواقع، أدى استخدام جريت مرميد القائم على حفرة 3 إلى تحديد التعديلات قبل الأعراض في السلوك العصبي الحركي في العمود الفقري في نموذج الزرد من التصلب الجانبي الضموري (ألس) 4 .

وفيما يلي في بروتوكول الجسم الحي يصف كيفية مراقبة الخصائص الكهربائية من الخلايا العصبية الحركية في العمود الفقري الأجنة الزرد سليمة معربا عن حورية البحر بطريقة محددة الخلايا العصبية. وعلاوة على ذلك، فإنه يوضح كيف تشان الدوائية التي يسببهاجيس في هذه الخصائص الكهربائية يمكن أن تترافق مع التعديلات في وتيرة لفائف عفوية الجنينية، والنشاط النمطي الحركي الذي يميز سلوك حركة الزرد في المراحل المبكرة جدا من التنمية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. pHuC_Mermaid جيل البلازميد

ملاحظة: حورية البحر هو جهاز الاستشعار البيولوجي التي وضعتها الاقتران المجال استشعار الجهد (فسد) من الأمعاء سيونا (الآن سيونا روبوستا ) 5 استشعار الجهد التي تحتوي على الفوسفاتيز (سي-فسب) مع فلوريوفوريس شريك فريت أومي كينوكو الأخضر (موكغ: المانحة) ونسخة أحادية من البرتقال الباعثة للضوء الفلورسنت بروتين كوسابيرا أورانج (مكوك: أسيبتور). لهذا الاستشعار البيولوجي، والتغيرات التوافقية من المجال فسد، التي يسببها الاستقطاب الغشاء، وزيادة القرب من البروتينات المانحة والفلورسنت متقبل، وبالتالي زيادة نقل الطاقة بينهما (زيادة نسبة الحنق) 3 . و فسد يؤكد توطين كفاءة جهاز الاستشعار البيولوجي في غشاء البلازما. ويتحقق التعبير العصبي من جهاز الاستشعار البيولوجي (في الحبل الشوكي، إشارة يمكن الكشف عنها في كل من إنترنيورونس والخلايا العصبية الحركية) عن طريق استنساخ مرميد المرجعإن القراءة الإطار (أورف) تحت الزرد عموم العصبي المروج هوك 6 .

  1. تضخيم عن طريق تفاعل البوليميراز سلسلة (ير) حورية البحر أورف من البلازمايد pcS4 + حورية البحر 3 مع بفو (التدقيق المطبعي) البلمرة الحمض النووي باستخدام التمهيدي العالمي T3 و مرميد سما الأول التمهيدي (5'TATCCCGGGATTCGACGGTTCAGATTTTA) من أجل إدراج سما I موقع تقييد المنبع من حورية البحر أورف.
    1. استخدام خليط ير التالية: 0.5 ميكرولتر من البلمرة دنا بفو، 7.5 ميكرولتر من العازلة 10X محددة، 1 ميكرولتر من 10 دنتبس ملي، 2.5 ميكرولتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (دمسو)، 0.5 ميكرولتر (50 نانوغرام) من إعداد البلازميد، و 1 ميكرولتر من 20 ميكرومتر حلول الأسهم من كل التمهيدي في الحجم الكلي من 50 ميكرولتر.
    2. تسخين خليط ير لمدة 15 ثانية عند 95 درجة مئوية، رئيس الوزراء لمدة 15 ثانية عند 50 درجة مئوية، واستطالة لمدة 4 دقائق في 72 درجة مئوية لمدة ما مجموعه 35 دورة.
  2. هلام تنقية حادة محددةير المنتج باستخدام مجموعة تنقية هلام التجارية، بعد بروتوكول الشركة المصنعة.
  3. استنساخ جزء الحمض النووي في ناقلة بمف-سك حادة بعد بروتوكول الشركة المصنعة.
  4. خطي البلازميد إيجابي حورية البحر (اسمه بمف-SC_Mermaid) مع سما I انزيم تقييد لإدراج التالية من المروج هوك.
    1. إعداد رد فعل تقييد على النحو التالي: 0.5 ميكرولتر (10 U) من سما I انزيم تقييد، 2 ميكرولتر من العازلة 10X كيت، و 5 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميد في حجم إجمالي 20 ميكرولتر. احتضان رد فعل عند 25 درجة مئوية لمدة 1 ساعة.
  5. هلام-تنقية البلازميد هضمها باستخدام عدة تنقية هلام التجارية بعد بروتوكول الشركة المصنعة.
  6. ير-تضخيم المروج هوك (فوك)، مع بفو الحمض النووي البلمرة والحمض النووي الجيني الزرد كقالب، وذلك باستخدام زوج من الاشعال هوك محددة (هوبروم-forw1_SalI: 5'-غتاغغاكتاكتغكاغاغكا و هوكبروm-rev1: 5'-تكاتكتجتاغاكاغاتغ) وتمتد على منطقة 3،150-بب المنبع من أتغ.
    1. إعداد خليط ير باستخدام المخطط التالي: 0.5 ميكرولتر من بفو دنا البلمرة، 7.5 ميكرولتر من العازلة 10X محددة، 1 ميكرولتر من 10 مل دنتبس، 2.5 ميكرولتر من دمسو، 200 نانوغرام من الحمض النووي الجيني، و 1 ميكرولتر من 20 ميكرومتر حلول الأسهم من كل التمهيدي في حجم إجمالي 50 ميكرولتر.
    2. بعد خطوة أولية من 2 دقيقة في 95 درجة مئوية، وتسخين خليط ير لمدة 15 ثانية عند 95 درجة مئوية، رئيس الوزراء لمدة 15 ثانية عند 50 درجة مئوية، واستطالة لمدة 4 دقائق في 72 درجة مئوية لما مجموعه 35 دورات .
  7. هلام تنقية المنتج ير حادة محددة باستخدام مجموعة تنقية هلام التجارية بعد بروتوكول الشركة الصانعة.
  8. ليغات كمية متساوية الملاك من تنقيته بمف-SC_Mermaid (خطوة 1.5) و دنا فوك (الخطوة 1.7) باستخدام 1 ميكرولتر من ليغاز T4 دنا و 1 ميكرولتر من العازلة 10X محددة في حجم إجمالي 10 ميكرولتر. احتضان رد فعل لمدة 16 ساعة في4 درجة مئوية.
  9. تحويل قسامة من الخلايا المختصة مع 5 ميكرولتر من رد فعل ربط (الخطوة 1.8) بعد تعليمات الشركة الصانعة.
  10. حدد استنساخ إيجابية فوك (pHuC_Mermaid) مع المروج إدراجها في التوجه الصحيح من قبل سال I- إكو رف الهضم المزدوج (تم إدراج موقع تقييد I سال المنبع من جزء المروج في الخطوة 1.6، في حين أن موقع إيك رف تقييد يتم وضع المصب للمنطقة بوليادنيلاشيون، بوليا، من البلازميد بمف-سك).
    1. إعداد رد فعل تقييد على النحو التالي: 0.5 ميكرولتر (10 U) من كل من سال I و إكو رف تقييد الإنزيمات، 2 ميكرولتر من العازلة kit10X، و 1 ميكروغرام من الحمض النووي pHuC_Mermaid في حجم إجمالي 20 ميكرولتر. احتضان رد فعل عند 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. تشغيل ردود الفعل على هلام الاغاروز.

2. ميكروينجكتيون الجنين

  1. نقل المخصبة على سبيل المثالغس التي تم الحصول عليها من البرية من نوع (أب سلالة) أو Sod1-G93R الزرد الكبار 4 إلى طبق بتري 10 ملم باستخدام ماصة بلاستيكية.
  2. شطف الأجنة في الماء البارد (4 درجة مئوية)، وعلى الفور ميكروينجيكت لهم في صفار البيض مع 200 بيكوغرام من البلازميد pHuC_Mermaid باستخدام ميكروينجيكتور (لوصف شامل ومفصل لإجراء ميكروينجكتيون، راجع المراجع 7 و 8).
  3. باستخدام ماصة بلاستيكية، ونقل الأجنة إلى طبق بتري واحتضان لهم في مياه السمك في 28 درجة مئوية حتى تصل إلى مرحلة التنموية المطلوب (20-24 ساعة بعد الإخصاب، هف) للتحليلات التالية.

3. عفوية الذيل تحليل اللف

ملاحظة: تقييم سلوك الذيل الذيل عفوية في 20-24 هف الأجنة مع أو بدون ريلوزول المخدرات.

  1. نقل الجنين إلى 90 ملم طبق بتري جولة مليئة مياه السمك التي تحتوي على 0.2٪ دمسو (سيارة ريلوزول) ودكوريونات يدويا باستخدام توملقط الصائغ مع نصائح حادة. احتضان الجنين لمدة 5 دقائق.
  2. كشف اللف الذيل في رت خلال تسجيل الفيديو 1 دقيقة باستخدام كاميرا رقمية شنت على ستيريوميكروسكوب. الحصول على سلسلة زمنية في وقت قرار من 30 لقطة / ثانية.
  3. حساب تردد لفائف الذيل عفوية من خلال حساب عدد من الانحناءات (على حد سواء المقابل والمثل) في وحدة الزمن.
  4. لتقييم تأثير ريلوزول المخدرات، واستخدام بلطف ماصة باستور البلاستيك لنقل الجنين إلى طبق بتري 90 ملم جديدة مليئة الأسماك الأسماك التي تحتوي على 5 ميكرومتر ريلوزول.
    1. احتضان الجنين لمدة 5 دقائق قبل تسجيل الفيديو 1 دقيقة وأداء التحليل السلوكي على النحو الوارد أعلاه.

4. إعداد التصوير لتصوير حورية البحر بيوسنسور في الأجنة الحية: الكشف في وقت واحد من المانحين والمتقبلين إشارات

  1. جبل 20-24 هف الأجنة في 1٪ منخفضة ذوبان نقطة أغاروس في مياه السمك في37 درجة مئوية داخل طبق التصوير القاع الزجاجية 35 مم. توجيه الأجنة على جانبيها. انتظر حتى تصلب الاغاروز في درجة حرارة الغرفة.
  2. نقل طبق التصوير إلى مرحلة متحد البؤر مقلوب شنت على المجهر مقلوب. تحديد الخلايا العصبية الحركية معربا عن جهاز الاستشعار البيولوجي مع هدف 20X (0.7 فتحة العددية، نا) عن طريق إثارة موكغ مع خط ليزر الأرجون 488 نانومتر وتسجيل انبعاثها بين 495 و 525 نانومتر.
  3. لقياس فريت، تثير موكغ، المانحة من الزوج الحنق، مع 488 نانومتر ليزر خط. في وقت واحد كشف، مع الماسح الضوئي الرنانة التي تعمل في 8000 هرتز في وضع ثنائي الاتجاه، مضان المنبعث من المتبرع (بين 495 و 525 نانومتر) والمضان المنبعثة من متقبل موكوك (بين 550 و 650 نانومتر، قناة فريت). إذا كان متوفرا، استخدم الليزر نانومتر 473.
    ملاحظة: سيتم تخفيض كفاءة الإثارة من المتبرع قليلا (85٪ بدلا من 93٪ مع 488 نانومتر)، ولكن عبر الإثارة من متقبل سوف(من 17٪ مع 488 نانومتر إلى 9٪ مع 473 نانومتر ليزر خط).
  4. للحد من فوتوتوكسيسيتي و فلورفور تبييض، تقليل الإضاءة من العينة عن طريق الحد من قوة خط الليزر (على نافذة مسار شعاع من برنامج الاستحواذ).
  5. تحسين الإثارة لمباراة الكسب والإزاحة المعلمات التي تم تعيينها في بداية التجربة والحفاظ على ثابت طوال الدورة. لتعيين الإزاحة، قم بتغيير لون الصورة إلى قيم الشدة (باستخدام جدول نظرة Q)، وأثناء المسح الضوئي باستخدام الليزر، حرك مقبض الإزاحة (الإزاحة الذكية) بحيث تكون بكسل الخلفية ذات كثافة أعلى من الصفر. مع نفس الجدول المتابعة، عن طريق تحويل الليزر على أثناء المسح الضوئي، وتحويل مقبض المكاسب (المكاسب الذكية) لتعظيم نسبة إشارة إلى الضوضاء، والحرص على تجنب بكسل مشبعة.
  6. باستخدام فتحة مفتوحة (2 وحدات متجدد الهواء)، والحصول على صور 16 بت لتوفير مجموعة ديناميكية كافية ل كوانتيتاتيفه. تجنب المتوسط ​​لزيادة سرعة الاقتناء وتقليل فوتوبلاشينغ.
  7. في نافذة اقتناء البرامج، حدد حجم حقل صورة 512 × 64 بكسل (حجم بكسل: 605 نانومتر) من القائمة المنسدلة.
  8. من نافذة وضع الاستحواذ، حدد شيت (الفاصل الزمني على طائرة زي واحد) و مدمج القائمة المنسدلة وتسجيل التغييرات في الجنين العصبوني في العمود الفقري من خلال الحصول على طائرة زي واحدة، ووضع المعلمات اكتساب لتسجيل صورة واحدة كل 30 مللي ثانية لمدة 1 دقيقة.
  9. لتقييم تأثير إدارة ريلوزول على الاستقطاب الغشاء في نفس الخلايا العصبية، والحصول على مجموعة بيانات جديدة 5 دقائق بعد إضافة ماء السمك التي تحتوي على 5 ميكرومتر ريلوزول.
  10. لتحليل فريت، استخدم ماكرو إيماجيج Biosensor_FRET (معربا عن سلسلة أجهزة الاستشعار الحيوية فريت.
  11. تقييم الغشاء القاعدي نسبة الحنق من كل الخلايا العصبية في t 1 كما ((فريت يعني - خلفية الحنق) / (المانحة المانحة - خلفية المانح))، حيث الحنق ودونأو متوسط ​​الكثافة هو متوسط ​​كثافة مضان تحسب في نفس المنطقة من الفائدة (روي) رسمها حول الخلية لكل قناة المكتسبة و فريت والجهات المانحة الخلفية هو متوسط ​​كثافة مضان تحسب في روي من مجال الرؤية دون عينة الفلورسنت.
    ملاحظة: وصف مفصل خطوة بخطوة لاستخدام البرنامج المساعد يمكن العثور عليها في www.med.unc.edu/microscopy/resources/imagej-plugins-and-macros/biosensor-fret الموقع.
  12. استخدام برنامج الرسوم البيانية لمقارنة التردد، السعة، ومدة الاستقطاب بين النماذج التجريبية المختلفة. قارن مجموعتين باستخدام t -test الطالب ونايرد ونعتبر القيم المتوسطة كما إحصائيا مختلفة عندما P <0.05.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم نقل ناقلات التعبير تحمل فريت القائم على حورية البحر تسلسل الاستشعار البيولوجي ترميز تحت سيطرة المروج عموم الخلايا العصبية فوك، الذي يدفع تخليق البروتين حصرا في الجهاز العصبي، إلى بيضة واحدة المخصبة عن طريق حقن ميكروينجكتيون في من أجل الحصول على الأجنة المعدلة وراثيا عابرة ( الشكل 1 ، اللوحة اليسرى). بعد اتقان تقنية حقن ميكروينجكتيون، كانت نسبة الأجنة حورية البحر إيجابية قريبة من 100٪. ومن بين هذه، فقط اعتبرت ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

بروتوكول عرضت هنا يسمح لنا لاستكشاف العلاقة بين الخصائص الكهربائية من الخلايا العصبية الحركية الجنين العمود الفقري الزرد والسلوك الالتفافية عفوية، وأقرب النشاط الحركي النمطية، والذي يظهر حوالي 17 هف من التطور الجنيني ويستمر حتى 24 هف 10 .

يوفر نهجنا الباحثين مع أداة لدراسة النظام العصبي للأجنة سليمة، والحفاظ تماما على تعقيد التفاعلات بين الخلايا في شبكة وظيفية النامية. وقد أجريت في الج...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

يود المؤلفون أن يشكروا Simona Rodighiero على دعمها الذي لا يقدر بثمن في تحليل تصوير FRET.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
نقطة انصهار منخفضة Agarose سيجما ألدريتشA9414
DMSO سيجما ألدريتشW387520
RiluzoleSigma-AldrichR116
Pfu Ultra HQ DNA polymerase  Agilent Technologies - قسم منتجات ستراتاجين600389
T3 Universal primer نظام تنظيف Sigma-Aldrich
Wizard SV Gel و PCRPromegaA9280
Universal SmaI التمهيدي  عن الثدييات Eurofins
StrataClone / pCMV-SC ناقلات حادة  Agilent Technologies - Stratagene Products Division 240228
SmaI نيو إنجلاند بيولابزR0141S
T4 DNA ligasePromegaM1801
SaliNew England BiolabsR0138S
EcoRVNew England BiolabsR0195S
35 مم ، طبق تصوير ذو قاع زجاجي   ؛Ibidi81151
ملقطSigma-AldrichF6521
مجهر مجسمLeica MicrosystemsM10 F
كاميرا رقميةLeica MicrosystemsDFC 310 FX
Leica Application Suite 4.7.1 software Leica Microsystems
QuickTime Player, v10.4مجهر Apple
متحد البؤر (مقلوب)Leica MicrosystemsTCS SP5
Microinjector Eppendorf Femtojet
ImageJ macro Biosensor_FRET 
GraphPad Prism 6.0c GraphPad ، Inc
نظام ناقلات التعبير برنامج

المراجع

  1. Knöpfel, T., Gallero-Salas, Y., Song, C. Genetically encoded voltage indicators for large scale cortical imaging come of age. Curr Opin Chem Biol. 27, 75-83 (2015).
  2. Chemla, S., Chavane, F. Voltage-sensitive dye imaging: Technique review and models. J Physiol Paris. 104 (1-2), 40-50 (2010).
  3. Tsutsui, H., Karasawa, S., Okamura, Y., Miyawaki, A. Improving membrane voltage measurements using FRET with new fluorescent proteins. Nat Methods. 5 (8), 683-685 (2008).
  4. Benedetti, L., et al. INaP selective inhibition reverts precocious inter- and motorneurons hyperexcitability in the Sod1-G93R zebrafish ALS model. Sci Rep. 6, 24515(2016).
  5. Pennati, R., et al. Morphological differences between larvae of the Ciona intestinalis species complex: hints for a valid taxonomic definition of distinct species. PLoS ONE. 10 (5), 0122879(2015).
  6. Park, H. C., et al. Analysis of upstream elements in the HuC promoter leads to the establishment of transgenic zebrafish with fluorescent neurons. Dev Biol. 227 (2), 279-293 (2000).
  7. Yuan, S., Sun, Z. Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos. J Vis Exp. (27), (2009).
  8. Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function. J Vis Exp. (25), (2009).
  9. Drapeau, P., et al. Development of the locomotor network in zebrafish. Prog Neurobiol. 68 (2), 85-111 (2002).
  10. Brustein, E., et al. Steps during the development of the zebrafish locomotor network. J Physiol Paris. 97 (1), 77-86 (2003).
  11. Drapeau, P., Ali, D. W., Buss, R. R., Saint-Amant, L. In vivo recording from identifiable neurons of the locomotor network in the developing zebrafish. J Neurosci Methods. 88, 1-13 (1999).
  12. Kawakami, K. Tol2: a versatile gene transfer vector in vertebrates. Genome Biol. 8, Suppl 1S7 (2007).
  13. Sungmoo, L., et al. Imaging Membrane Potential with Two Types of Genetically Encoded Fluorescent Voltage Sensors. J Vis Exp. (108), e53566(2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

FRET Riluzole
بيوسنسينغ موتور الخلايا العصبية الغشاء المحتملة في الأجنة الزرد الحية
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.