يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تلألؤ بيولوجي والقريبة من تحت الحمراء التصوير من التهاب العصب البصري والمخ التهاب في نموذج EAE من مرض التصلب العصبي المتعدد في الفئران

9K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/55321

⸱

مارس 1, 2017

 , 
1Institute of Clinical Pharmacology, University Hospital Frankfurt

في هذه المقالة

ملخص

وتبين لنا تقنية لفي الجسم الحي تلألؤ بيولوجي الحية والأشعة تحت الحمراء القريبة التصوير من التهاب العصب البصري والتهاب الدماغ في النموذج التجريبي التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي (بنت) لمرض التصلب المتعدد في الفئران SJL / J.

الملخص

التجريبية التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي (بنت) في SJL / J الفئران هو نموذج للتحويل بين التصلب المتعدد الانتكاس (RRMS). عشرات EAE السريرية واصفا العجز وظيفة الحركة هي قراءات الأساسية للالتهاب بوساطة في مأمن من الحبل الشوكي. ومع ذلك، عشرات ووزن الجسم لا تسمح لإجراء تقييم في الجسم الحي من التهاب الدماغ والتهاب العصب البصري. وهذا الأخير هو مظهر باكر ومتكررة في حوالي 2/3 من مرضى التصلب المتعدد. هنا، وتبين لنا طرق تلألؤ بيولوجي والتصوير الحي القريب من الأشعة تحت الحمراء لتقييم EAE أثار التهاب العصب البصري، التهاب الدماغ، وحاجز الدم في الدماغ (BBB) اضطراب في الفئران الحية باستخدام المجراة نظام التصوير. والركيزة إضاءة الحيوية تفعيلها من خلال oxidases أظهر في المقام الأول التهاب العصب البصري. كانت إشارة محددة وسمحت التصور من آثار الدواء والمرض مرة الدورات، التي توازي عشرات من السريرية. النانوية الفلورسنت مضاد للفيروسات التي بقيت داخل vasculaturاستخدمت البريد لفترات طويلة من الوقت لتقييم سلامة BBB. بالقرب من الأشعة تحت الحمراء وكشف التصوير تسرب BBB في ذروة المرض. كانت إشارة أقوى حول العينين. تم استخدام الركيزة القريب من الأشعة تحت الحمراء للمصفوفة metalloproteinases لتقييم التهاب أثار EAE. تدخلت لصناعة السيارات في مضان مع إشارة، تتطلب unmixing الطيفي للالكمي. وعموما، كان التصوير تلألؤ بيولوجي طريقة موثوق بها لتقييم التهاب العصب البصري والدواء الآثار المرتبطة EAE وكان متفوقة على التقنيات القريب من الأشعة تحت الحمراء من حيث خصوصية إشارة، متانة، وسهولة القياس الكمي، والتكلفة.

المقدمة

يحدث التصلب المتعدد بسبب الهجوم المناعي الذاتي وتدمير غمد المايلين في الدماغ والحبل الشوكي < فئة الدعم = 'xref'>1. مع معدل الإصابة الإجمالي بحوالي 3.6 حالة لكل 100,000 شخص سنويا لدى النساء وحوالي 2.0 عند الرجال ، يعد مرض التصلب العصبي المتعدد ثاني أكثر الأسباب شيوعا للإعاقة العصبية لدى الشباب ، بعد الإصابات الرضحية< فئة الدعم = 'xref'>2,< sup class = 'xref'>3. تساهم العوامل الوراثية والبيئية في علم أمراض المرض < فئة الدعم = 'xref'>4 ولكنها لا تزال غير مفهومة تماما. تدخل الخلايا الليمفاوية التائية ذاتية التفاعل إلى الجهاز العصبي المركزي وتؤدي إلى سلسلة التهابية تسبب تسللات بؤرية في المادة البيضاء للدماغ والحبل الشوكي والعصب البصري. في معظم الحالات ، تكون هذه الاختراقات قابلة للعكس في البداية ، ولكن الثبات يزداد مع عدد الانتكاسات. تم تطوير عدد من نماذج القوارض لدراسة أمراض المرض. تعد EAE الانتكاسية في الفئران SJL / J و EAE التقدمية الأولية في الفئران C57BL6 هي النماذج الأكثر شيوعا.

درجات EAE السريرية ، التي تصف مدى عجز الوظيفة الحركية ، ووزن الجسم هي المعايير الذهبية لتقييم شدة EAE. تتفق هذه العلامات السريرية مع مدى تسلل الخلايا المناعية وتدمير المايلين في النخاع الشوكي وتتنبأ بشكل معتدل بفعالية العلاج الدوائي في البشر< فئة الدعم = 'xref'>5. ومع ذلك ، فإن هذه العلامات تعكس بشكل أساسي تدمير المسالك الليفية البطنية في النخاع الشوكي. في الوقت الحاضر ، لا توجد طريقة سهلة وغير جراحية وموثوقة وقابلة للتكرار لتقييم تسلل الدماغ في الجسم الحي والتهاب العصب البصري في الفئران الحية.

يتفق التصوير في الجسم الحي مع مبادئ "R" الثلاثة لراسل وبورش (1959) ، والتي تدعي وضع R، وتعليم R، وتحسين Rللتجارب على < فئة sup = 'xref'>6 ، لأن التصوير يزيد من قراءات واحد في عدة نقاط زمنية ويسمح بتقليل الأرقام الإجمالية. في الوقت الحاضر ، يتم تقييم حالة الالتهاب أو المايلين بشكل أساسي خارج الجسم الحي عن طريق الكيمياء المناعية ، أو تحليل FACS ، أو طرق بيولوجية جزيئية مختلفة< فئة sup = 'xref'>7 ، وكلها تتطلب الفئران القتل الرحيم في نقاط زمنية محددة.

< p class = "jove_content">تم تطوير عدد من مجسات نظام التصوير في الجسم الحي لتقييم الالتهاب في الجلد والمفاصل والأوعية الدموية. تعتمد التقنيات على تنشيط ركائز الفلورسنت المضيئة بيولوجيا أو الأشعة تحت الحمراء القريبة من الأشعة تحت الحمراء بواسطة بيروكسيداز الأنسجة ، بما في ذلك المايلوبيروكسيداز (MPO) ، والبروتينات المعدنية المصفوفة (MMPs) < فئة الدعم = 'xref'>8 ، والقسط < فئة الكأس = 'xref'>9 أو cyclooxygenase < sup class = 'xref'>2. تم التحقق من صحة هذه المجسات بشكل أساسي في نماذج التهاب المفاصل أو تصلب الشرايين< فئة الدعم = 'xref'>9,10. كما تم استخدام مسبار حساس للقسطرة للتصوير المقطعي الجزيئي الفلوري ل EAE11. تساهم MMPs ، وخاصة MMP2 و MMP9 ، في اضطراب BBB بوساطة البروتياز في EAE ويتم تنظيمها في مواقع تسلل الخلايا المناعية < فئة sup = 'xref'>12 ، مما يشير إلى أن هذه المجسات قد تكون مفيدة لتصوير EAE. وينطبق الشيء نفسه على المجسات القائمة على البيروكسيديز أو الكاثيبسين. من الناحية الفنية ، يعد تصوير الالتهاب في الدماغ أو النخاع الشوكي أكثر صعوبة لأن الجمجمة أو العمود الفقري يمتصان إشارات الإضاءة الحيوية والأشعة تحت الحمراء القريبة.

بالإضافة إلى مؤشرات الالتهاب ، تم وصف المواد الكيميائية الفلورية ، والتي ترتبط على وجه التحديد بالمايلين وقد تسمح بتحديد كمية النخاع < فئة sup = 'xref'>13. تم العثور على مسبار الفلورسنت القريب من الأشعة تحت الحمراء ، 3،3'-ثنائي إيثيل ثياتريكربوسيانين يوديد (DBT) ، يرتبط على وجه التحديد بالألياف النخاعية وتم التحقق من صحته كأداة كمية في نماذج الفئران لعيوب تكوين النخاع الأولية وفي إزالة الميالين < فئة الكوب = 'xref'>14. في EAE ، زادت إشارة DBT إلى حد ما ، مما يعكس التهاب ألياف المايلين < فئة sup = 'xref'>5.

السمة المميزة الإضافية ل EAE و MS هي انهيار BBB ، مما يؤدي إلى زيادة نفاذية الأوعية الدموية وتسرب خلايا الدم والسائل خارج الخلية والجزيئات الكبيرة في حمة الجهاز العصبي المركزي. يمكن أن يؤدي ذلك إلى الوذمة والالتهاب وتلف الخلايا قليلة التغصن ، وفي النهاية إزالة الميالين< فئة الدعم = 'xref'>15,16. ومن ثم ، فإن تصور تسرب BBB باستخدام مجسات الفلورسنت ، مثل ألبومين مصل الأبقار المسمى بالفلوروكروم < فئة sup = 'xref'>5 ، والتي تنتشر عادة ببطء شديد من الدم إلى الأنسجة ، قد يكون مفيدا لتقييم EAE.

في الدراسة الحالية ، قمنا بتقييم فائدة المجسات المختلفة في EAE وأظهرنا الإجراء الخاص بتقنية الإضاءة الحيوية الأكثر موثوقية وقوة. بالإضافة إلى ذلك ، نناقش إيجابيات وسلبيات مجسات الأشعة تحت الحمراء القريبة لنشاط MMP وسلامة BBB.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. EAE التعريفي في SJL / J الفئران

  1. الفئران
    1. استخدام منذ 11 أسابيع الإناث SJL / J الفئران والسماح لهم روض إلى غرفة التجريبية لمدة 7 أيام. استخدام ن = 10 الفئران في المجموعة.
    2. لتقييم تأثيرات الدواء وإدارة المخدرات وهمي لمجموعة المراقبة بشكل مستمر عن طريق مياه الشرب أو عن طريق الغذاء الكريات تبدأ بعد 3 أو 5 أيام التحصين (ن = 10 لكل مجموعة). في ذروة المرض، إدارة الدواء أو وهمي مع الحليب أو 3٪ رقائق الذرة ينقع بالماء السكر.
  2. مادة التحصين
    1. استخدام عدة تحريض EAE تتكون من المستضد (الببتيد من البروتين شحم بروتيني، PLP139-151، 1 ملغ / مل مستحلب) في مستحلب مع مساعد الكامل فرويند (CFA، قتلت الحرارة المتفطرة السلية H37 رع) و 2 قارورة (5 ميكروغرام لكل منهما) من السم السعال الديكي مجفف بالتجميد (PTX).
    2. حل PTX (2 ميكروغرام / مل) في 1X الفوسفات مخزنة المالحة (PBS، أي </ م> إضافة 1.5 مل من برنامج تلفزيوني على كل أنبوب PTX، وتخلط جيدا، وإزالة بنفس طرف الماصة، وإضافة إلى 1 مل من برنامج تلفزيوني في أنبوب 50 مل)؛ اخلط جيدا.
  3. تحصين
    1. حقن حزب العمال التقدمي / CFA تحت الجلد في 2 أجزاء، كل 100 ميليلتر، سواء على قاعدة الذيل. لا حقن في الجزء الخلفي من الرقبة، لأن أي ردود فعل المناعة في الجلد في الجزء الأعلى من الظهر أو العنق ويشوش على تصوير الرأس والحبل الشوكي.
    2. ضخ 100 ميكرولتر من PTX البريتونى (الملكية الفكرية)، مرتين في الماوس، أول 1-2 ساعة بعد التطعيم، والثانية في 24 ساعة.
    3. للالسيطرة على الفئران، وضخ CFA من دون حزب العمال التقدمي (2 أجزاء من 100 ميكرولتر)، بالإضافة إلى PTX دون حزب العمال التقدمي.
  4. التعامل مع الماوس بعد التطعيم
    1. وزن الفئران كل يوم حتى آخر ليوم 7، ثم وزن لهم يوميا.
      ملاحظة: الفئران تفقد حوالي 1 - 2 غرام من وزن الجسم خلال EAE. يمثل انخفاضا بداية EAE.
    2. تقييم الأعراض السريرية يوميا من يوم 7 الاتفاقجي لأنظمة القياسي بتسجيله (أي نقاط 0: لا تغييرات واضحة في الوظائف الحركية، يسجل 0.5: شلل البعيدة من الذيل، درجة 1: شلل ذيل الكامل، يسجل 1.5: شلل جزئي خفيف في إحدى أو كلتا رجليه الخلفيتين، يسجل 2: شلل شديد في رجليه الخلفيتين، يسجل 2.5: الشلل التام من الساق الخلفية واحد؛ النتيجة 3: الشلل التام من ساقيه الخلفيتين، يسجل 3.5: الشلل التام من رجليه الخلفيتين وشلل جزئي من الساق الأمامية واحد الموت ببطء الفئران مع عشرات من 3.5 أو أعلى ل > 12 ساعة.
  5. EAE الدورة ووقت التصوير
    1. إجراء التصوير الأولى في بداية المرض، عندما تصل الفئران العشرات> 1، والتي سوف تحدث في جميع أنحاء يوم 10-12 بعد التحصين.
    2. إجراء التصوير الثاني في الذروة، والتي سوف يتم التوصل إلى 1 أو 2 بعد أيام من ظهور الاعراض عليهم الأولية وتستمر لمدة 1-3 أيام.
      ملاحظة: بعد ذلك، سوف الفئران يتعافى تماما في غضون 7 إلى 10 أيام. التصوير خلال فترات قد لا تزال تظهر تسرب الأوعية الدموية،لكن مؤشرات الالتهاب يجب أن تكون سلبية.

2. إضاءة الحيوية والتصوير القريبة من الأشعة تحت الحمراء من التهاب العصب البصري والمخ التهاب

  1. إعداد نظام التصوير
    1. أداء في مجال التصوير المجراة مع أي المعدات التي تسمح لتحليل تلألؤ بيولوجي وإشارات الأشعة تحت الحمراء القريبة.
    2. حافظ على الفئران تحت 2-2،5٪ الأيزوفلورين التخدير خلال جميع الإجراءات التصوير.
    3. موقف واحد أو اثنين من الفئران بجانب بعضها البعض في الجهاز باستخدام إمدادات الغاز المتوسطة. وضع العمود الفقري العلوي في المركز.
    4. استخدام اثنين من الفئران في وقت واحد، واحد في كل مجموعة، لتقييم تأثيرات الدواء للمقارنة بين الأزواج. وهذا أمر مهم للتصوير إضاءة الحيوية.
    5. حماية الموقع من التحصين مع قطعة قماش سوداء وأخذ صورة فوتوغرافية وخط الأساس لتقييم المواقع الصحيحة من الماوس / الفئران. استخدام التركيز B بمسافة 6.5 سم إلى الكاميرا لجميع الصور.
  2. الحقن والتصوير من التحقيق التهاب إضاءة الحيوية
    1. استخدام في الجسم الحي إعدادات نظام التصوير: برنامج التحصين الموسع-BLI، إم تصفية مفتوحة، مثال مرشح كتلة، fstop 1، binning 8، والتركيز B = 6.5 سم، والتعرض الإعلان 120 ق. التقاط صورة أساسية.
    2. ضخ 100 الملكية الفكرية ميكرولتر من كاشف chemiluminescent جاهزة للاستعمال (40 ملغ / مل). تخلط جيدا قبل ملء المحقن.
    3. التقاط الصور تلألؤ بيولوجي 5 و 10 و 15 دقيقة بعد الحقن. على مدار الساعة من ذروة إضاءة الحيوية التي تختلف بين الحيوانات.
      ملاحظة: سوف ذروة تحدث 5-10 دقائق بعد الحقن. انخفاض في 15 دقيقة إلى أن ليس هناك حاجة لمزيد من الصور. استخدام الماوس أزواج من مجموعات المراقبة والعلاج للقضاء على التحيز طفيفة نظرا لمختلف الدورات الوقت.
    4. شغل في وصف ذات الصلة إلى التجربة. لاحظ مربع الحوار المنبثقة تلقائيا؛ ويشمل المعلومات، مثل سلالة الماوس، الجنس، وأشر الوقت، والوقت من حقن التحقيق، مجموعة، الخ. حفظ كافة الملفات في سمجلد ني. سيكون لديهم علامات الساعة وجميع الأوصاف.
  3. الحقن والتصوير النانوية الفلورسنت الأشعة تحت الحمراء القريبة لسلامة BBB
    1. استخدام الأشعة تحت الحمراء القريبة التصوير epifluorescence في التركيز ب (المسافة: 6.5 سم). ماكسيما الإثارة / الانبعاثات من الجسيمات النانوية الفلورسنت مضاد للفيروسات و675/690 نانومتر. التقاط صورتين في أطوال موجية مختلفة، في Ex640 / Em700 وEx675 / Em720. استخدام ليالي 2 التعرض binning 8، وfstop 2. أخذ صورة خط الأساس.
    2. ضخ 70 ميكرولتر من النانوية الأشعة تحت الحمراء الفلورسنت مضاد للفيروسات الرابع عن طريق الوريد الذيل وتخيل الفئران 3 ساعات و 24 ساعة بعد الحقن باستخدام الإعدادات أعلاه. مزيج البئر حل قبل ملء المحقن.
    3. ضخ 0.9٪ كلوريد الصوديوم في السيطرة على الفئران، والتي سوف تكون هناك حاجة لتقييم خصوصية الإشارة.
  4. الحقن والتصوير لجنة التحقيق الفلورسنت القريب من الأشعة تحت الحمراء للنشاط MMP
    1. يحلق أو يزيل الشعر من الرأس وشمنطقة العمود الفقري pper بحذر يوم واحد قبل التقاط الصورة الأساس. يجب عدم جرح الجلد.
    2. استخدام الأشعة تحت الحمراء القريبة التصوير epifluorescence في التركيز ب (المسافة: 6.5 سم). ماكسيما الإثارة / انبعاث التحقيق activatable المشاركة المتناقصة و680/700 نانومتر. التقاط صورتين في أطوال موجية مختلفة، في Ex640 / Em700 وEx675 / Em720. استخدام ليالي 1 التعرض binning 8، وfstop 2. أخذ صورة خط الأساس.
    3. إضافة 200 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني 1X إلى أنبوب 1.5 مل من محلول جاهزة للاستخدام (20 نانومول / 1.5 مل في برنامج تلفزيوني 1X) بحيث تكون كافية لمدة 10 الفئران. تخلط جيدا قبل ملء المحقن.
      ملاحظة: حجم المقدمة لا تأخذ في الاعتبار أن يتم فقدان بعض وحدات التخزين خلال ملء حقنة وحقن.
    4. ضخ 150 ميكرولتر من د التحقيق عن طريق الوريد الذيل 24 ساعة قبل التصوير. حقن برنامج تلفزيوني فقط في الحيوانات السيطرة لتقييم خصوصية الإشارة.
    5. في 24 ساعة بعد الحقن، والتقاط صور برنامج التحصين الموسع-FL على الأقل اثنين من الأطوال الموجية، Ex640 / Em700 والمحررين 675 / EM720، مع إعدادات موضح أعلاه (1-ق التعرض، والتركيز B، binning 8، وfstop 2).
      ملاحظة: استخدام اثنين من موجات يسمح للunmixing الأطياف بطرح إشارة غير محددة.

3. تحليل صورة

  1. تحليل تلألؤ بيولوجي (BLI)
    1. انقر نقرا مزدوجا فوق البرنامج لفتحه.
    2. في شريط القوائم العلوي، انقر على أيقونة ملف المتصفح، انتقل إلى الدليل من مجلد من هذه التجربة، وتحديده. هذا سيفتح جميع الملفات في المجلد في جدول.
    3. تكوين الأعمدة التي تبين أوصاف ذات الصلة إلى التجربة.
    4. لمراقبة الجودة، انقر نقرا مزدوجا فوق ملف على فأرة الحاسوب عدم الرد من دون أعراض EAE و / أو الماوس السذاجة تحقق خصوصية إشارات EAE.
      ملاحظة: يجب أن يكون هناك أي إشارة في الفئران ساذجة والحد الأدنى من إشارة في الفئران غير مستجيب.
      1. التحقق من الصورة الأساسية قبل حقن للمحترفينيكون لكل فأر كما مزيد من السيطرة على خصوصية إشارة. ينبغي أن يكون سلبيا.
    5. لتحديد صورة، انقر نقرا مزدوجا فوق الملف الأول من أول ماوس EAE وتحقق من شدة إضاءة الحيوية (طرفية شريط المدى) والتعريب. تحقق من كل الصور واحدة تلو الأخرى. إغلاق الملف مع أقل كثافة لكل الماوس (أي، والحفاظ على 2 من 3 صور لكل الماوس).
    6. صورة تعديل والتصدير
      1. انقر نقرا مزدوجا فوق الملف الأول إلى أن يكون كميا. مراقبة نافذة البوب ​​الجديد يصل. تحت عنوان "خيارات" (القائمة العلوية)، وتخصيص تسميات لعرضه في كل صورة.
      2. في لوحة أداة الصحيح، انتقل إلى "تعديل الصور". افتراضيا، يتم تعيين كثافة الحد الأدنى والحد الأقصى ل"السيارات" وعرضها في pseudocolor قوس قزح. حدد "يدوي" إلى تغيير الإعدادات إذا لزم الأمر.
        ملاحظة: على سبيل المثال، قد يكون كل صور المصدرة الحانات طرفية متطابقة (الدنيا متطابقة وماكسيما) لتكون قابلة للمقارنة بسهولة.تعديل الحدود الدنيا والحدود القصوى ليس له أي تأثير على النتائج الكمية.
      3. انقر على تصدير صورة، حدد بابوا نيو غينيا، الدليل، واسم الصورة
    7. الكمي من المناطق ذات الاهتمام (ROI)
      1. انتقل إلى أداة "العائد على الاستثمار" في لوحة الأدوات. حدد طريقة العائد على الاستثمار (دائرة، مستطيل، والسيارات، أو خالية من ناحية) وعدد رويس. مراقبة نافذة العائد على الاستثمار يطفو على السطح في نافذة الصورة.
      2. باستخدام الماوس، وضبط حجم وموضع. استخدام عتبات العائد على الاستثمار متطابقة لجميع الصور إذا تم استخدام أداة لصناعة السيارات في العائد على الاستثمار. استخدام المناطق متطابقة لجميع الصور إذا تم تعريف أحجام العائد على الاستثمار والمواقف يدويا (على سبيل المثال، رويس التعميم).
      3. انقر على "قياس RO.I. مراقبة نافذة البوب الجديد يصل. تخصيص الأعمدة (على سبيل المثال، اسم الملف، عدد الحيوانات، مجموعة، التجربة، منطقة، العدد الكلى، متوسط التهم، تهمة SD، دقيقة والحد الأقصى تحصي، منطقة، وقت نقطة، والوقت من حقن التحقيق، وما إلى ذلك). احفظ الإعدادات المخصصة. عندما إعادةعدي، حدد كافة (السيطرة + A)، ونسخ ولصق الجدول في جدول بيانات.
      4. تصدير الصورة كما بابوا نيو غينيا مع رويس في المكان. حفظ وإغلاق ملف الصورة.
    8. كرر الإجراء (الخطوات 3.1.6 - 3.1.7) لجميع ملفات الصور التي تحتاج إلى أن يكون كميا. نسخ كافة التحديد الكمي العائد على الاستثمار في جدول البيانات.
      ملاحظة: وهنا النتائج يمكن فرزها من قبل مجموعة، نقطة زمنية، وغيرها، وتحليلها إحصائيا. استخدام العد الكلي للإشارات تلألؤ بيولوجي في رويس التحليلات الإحصائية.
  2. (الجرد) تحليل الأشعة تحت الحمراء القريب من الجسيمات النانوية الفلورسنت
    1. باستخدام عناصر التحكم في البرنامج، وضبط عتبة الصورة.
      ملاحظة: هذا ليس له أي تأثير على النتيجة الكمية.
    2. بصريا مقارنة الصور التي تم التقاطها في السابق / إم 675/720 والمحررين / إم 640/700 لتقييم خصوصية الإشارة.
    3. استخدام الصور التي تم التقاطها في السابق / إم 675/720 للتحليل الكمي (الإثارة القصوى: 680 نانومتر). تحديد رويس، والتي يمكن أن تستخدم أداة لصناعة السيارات في العائد على الاستثمار. ضبط عتبة لصناعة السيارات في العائد على الاستثمار واستخدامه لجميع الصور. قياس كفاءة مشع الإجمالية في رويس (راجع الخطوة 3.1).
  3. (الجرد) تحليل الأشعة تحت الحمراء القريب من التحقيق الحساسة البروتيني
    1. باستخدام ضوابط البرنامج، وضبط عتبة الصورة.
      ملاحظة: هذا ليس له أي تأثير على النتيجة الكمية. أداء unmixing الطيفي لصناعة السيارات في مضان. ويتم تنفيذ الأداة unmixing في صورة حية. يستخدم-unmixing السيارات في السابق / إم 640/700 كما محدد، و675/720 كصورة السيارات الفلورسنت.
    2. حدد الصورة غير مخلوطة وتحديد رويس، كما هو موضح أعلاه. استخدام كفاءة مشع الإجمالية في رويس لالتحليلات الكمية والإحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

دورة الوقت من ضوء بارد من التهاب العصب البصري

كانت إشارة تلألؤ بيولوجي لجنة التحقيق التهاب الأقوى حول العينين ويحدث بشكل حصري في الفئران EAE مع التهاب العصب البصري. حدثت إشارة في أي من الفئران غير EAE-ولا الفئران لا حقن مع لجنة التحقيق التهاب. اختفت إشارة عندما تعافى الفئران. وبالتالي، فإن الإشارة محددة لالتهاب العصب البصري، ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ويظهر شريط الفيديو الحالي تقنيات تلألؤ بيولوجي ومضان الأشعة تحت الحمراء القريبة في التصوير المجراة من EAE في الفئران SJL / J. وتبين لنا أن تلألؤ بيولوجي التصوير باستخدام مسبار الحساسة للالتهاب يظهر أساسا التهاب العصب البصري، ويوافق على القياس الكمي مع التقييم السريري للEAE شدة وآثار الدواء. ومع ذلك، فإن طريقة التصوير تلألؤ بيولوجي غير قادرة على الكشف عن التهاب النخاع الشوكي القطني، وهو الموقع الرئيسي للEAE مظهر 17، على الأرجح لأنه يمتص في ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

وأيد هذا البحث من قبل جمعية الألمانية للبحوث (CRC1039 A3) وبرنامج تمويل البحوث "Landesoffensive زور ENTWICKLUNG wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz" (LOEWE) في ولاية هيسن، مركز بحوث الطب بالحركة والصيدلة TMP وعدا كورون سهم Fresenius مؤسسة (EKFS)، مجموعة بحوث التدريب بالحركة البحوث الاكتشافات - فارما (رحلة).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
AngioSpark-680Perkin Elmer، Inc. ، Waltham ، الولايات المتحدة الأمريكيةNEV10149مسبار التصوير ، الجسيمات النانوية pegylated ، مفيد لتصوير سلامة الحاجز الدموي الدماغي
MMP-sense 680Perkin Elmer، Inc. ، Waltham ، الولايات المتحدة الأمريكيةNEV10126مسبار التصوير ، قابل للتنشيط بواسطة البروتينات المعدنية المصفوفة ، مفيد لتصوير الالتهاب
XenoLight RediJect Inflammation ProbePerkin Elmer، Inc. ، Waltham ، الولايات المتحدة الأمريكية760535مسبار التصوير ، قابل للتنشيط بواسطة الأوكسيديز ، مفيد لتصوير الالتهاب
PLP139-151 / مستحلب CFA   ؛Hooke Labs ، سانت لورانس ، MAEK-0123EAE مجموعة الحث
السعالتوكسين هوك لابز ، سانت لورانس ، MAEK-0123مجموعة الحث EAE
IVIS Lumina SpectrumPerkin Elmer، Inc. ، والثام ، الولايات المتحدة الأمريكيةالتلألؤ البيولوجي والتصوير بالأشعة تحت الحمراء
LivingImage 4.5 software Perkin Elmer، Inc. ، Waltham ، الولايات المتحدة الأمريكيةCLS136334برنامج تحليل IVIS
IsofluraneAbbott Labs ، إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكية26675-46-7التخدير
الديكي نظام

المراجع

  1. Compston, A., Coles, A. Multiple sclerosis. Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).
  2. Dunn, J. Impact of mobility impairment on the burden of caregiving in individuals with multiple sclerosis. Expert Rev Pharmacoecon Outcomes Res. 10 (4), 433-440 (2010).
  3. Dutta, R., Trapp, B. D. Mechanisms of neuronal dysfunction and degeneration in multiple sclerosis. Prog Neurobiol. 93 (1), 1-12 (2011).
  4. Sawcer, S., et al. Genetic risk and a primary role for cell-mediated immune mechanisms in multiple sclerosis. Nature. 476 (7359), 214-219 (2011).
  5. Schmitz, K., et al. R-flurbiprofen attenuates experimental autoimmune encephalomyelitis in mice. EMBO Mol Med. 6 (11), 1398-1422 (2014).
  6. Balls, M. The origins and early days of the Three Rs concept. Altern Lab Anim. 37 (3), 255-265 (2009).
  7. Barthelmes, J., et al. Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues. J Vis Exp. (111), (2016).
  8. Leahy, A. A., et al. Analysis of the trajectory of osteoarthritis development in a mouse model by serial near-infrared fluorescence imaging of matrix metalloproteinase activities. Arthritis Rheumatol. 67 (2), 442-453 (2015).
  9. Scales, H. E., et al. Assessment of murine collagen-induced arthritis by longitudinal non-invasive duplexed molecular optical imaging. Rheumatology (Oxford). 55 (3), 564-572 (2016).
  10. Nahrendorf, M., et al. Dual channel optical tomographic imaging of leukocyte recruitment and protease activity in the healing myocardial infarct. Circ Res. 100 (8), 1218-1225 (2007).
  11. Eaton, V. L., et al. Optical tomographic imaging of near infrared imaging agents quantifies disease severity and immunomodulation of experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo. J Neuroinflammation. 10, (2013).
  12. Kandagaddala, L. D., Kang, M. J., Chung, B. C., Patterson, T. A., Kwon, O. S. Expression and activation of matrix metalloproteinase-9 and NADPH oxidase in tissues and plasma of experimental autoimmune encephalomyelitis in mice. Exp Toxicol Pathol. 64 (1-2), 109-114 (2012).
  13. Wang, C., et al. In situ fluorescence imaging of myelination. J Histochem Cytochem. 58 (7), 611-621 (2010).
  14. Wang, C., et al. Longitudinal near-infrared imaging of myelination. J Neurosci. 31 (7), 2382-2390 (2011).
  15. Engelhardt, B. Molecular mechanisms involved in T cell migration across the blood-brain barrier. J Neural Transm. 113 (4), 477-485 (2006).
  16. Badawi, A. H., et al. Suppression of EAE and prevention of blood-brain barrier breakdown after vaccination with novel bifunctional peptide inhibitor. Neuropharmacology. 62 (4), 1874-1881 (2012).
  17. Simmons, S. B., Pierson, E. R., Lee, S. Y., Goverman, J. M. Modeling the heterogeneity of multiple sclerosis in animals. Trends in immunology. 34 (8), 410-422 (2013).
  18. Lin, T. H., et al. Diffusion fMRI detects white-matter dysfunction in mice with acute optic neuritis. Neurobiol Dis. 67, 1-8 (2014).
  19. Knier, B., et al. Neutralizing IL-17 protects the optic nerve from autoimmune pathology and prevents retinal nerve fiber layer atrophy during experimental autoimmune encephalomyelitis. J Autoimmun. 56, 34-44 (2015).
  20. Schellenberg, A. E., Buist, R., Yong, V. W., Del Bigio, M. R., Peeling, J. Magnetic resonance imaging of blood-spinal cord barrier disruption in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis. Magn Reson Med. 58 (2), 298-305 (2007).
  21. Mori, Y., et al. Early pathological alterations of lower lumbar cords detected by ultrahigh-field MRI in a mouse multiple sclerosis model. Int Immunol. 26 (2), 93-101 (2014).
  22. Bittner, S., et al. Endothelial TWIK-related potassium channel-1 (TREK1) regulates immune-cell trafficking into the CNS. Nat Med. 19 (9), 1161-1165 (2013).
  23. Theien, B. E., et al. Differential effects of treatment with a small-molecule VLA-4 antagonist before and after onset of relapsing EAE. Blood. 102 (13), 4464-4471 (2003).
  24. Hawkins, B. T., Davis, T. P. The blood-brain barrier/neurovascular unit in health and disease. Pharmacol Rev. 57 (2), 173-185 (2005).
  25. Coisne, C., Mao, W., Engelhardt, B. Cutting edge: Natalizumab blocks adhesion but not initial contact of human T cells to the blood-brain barrier in vivo in an animal model of multiple sclerosis. J Immunol. 182 (10), 5909-5913 (2009).
  26. Andresen, V., et al. High-resolution intravital microscopy. PLoS One. 7 (12), e50915(2012).
  27. Bukilica, M., et al. Stress-induced suppression of experimental allergic encephalomyelitis in the rat. Int J Neurosci. 59 (1-3), 167-175 (1991).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تلألؤ بيولوجي والقريبة من تحت الحمراء التصوير من التهاب العصب البصري والمخ التهاب في نموذج EAE من مرض التصلب العصبي المتعدد في الفئران
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.