تقييم عمل المضادات الحيوية مع تطوير العقاقير الجديدة الموجهة نحو البكتيريا اللاهوائية أمر صعب ومطالب من الناحية الفنية. للحصول على نظرة ثاقبة وزارة الزراعة ممكن، والتغيرات المورفولوجية المرتبطة التعرض للمضادات الحيوية يمكن تصور باستخدام المجهر الإلكتروني المسح (سيم). دمج التصوير سيم مع منحنيات قتل التقليدية قد تحسن رؤيتنا في العمل المخدرات والمضي قدما في عملية تطوير المخدرات. لاختبار هذه الفرضية، وقتل منحنيات ودراسات سيم أجريت باستخدام المخدرات مع وزارة الزراعة المعروفة ولكن مختلفة (فانكومايسين وميترونيدازول). خلايا C. صعب (R20291) نمت مع أو بدون وجود المضادات الحيوية لمدة تصل إلى 48 ساعة. على مدى فترة 48 ساعة، تم جمع الخلايا في نقاط زمنية متعددة لتحديد فعالية المضادات الحيوية والتصوير على سيم. وتمشيا مع التقارير السابقة، كان فانكومايسين وميترونيدازول نشاطا كبيرا للجراثيم بعد 24 ساعة من العلاج على النحو الذي تقاسه وحدة تشكيل مستعمرة (كفو) كونتينغ. باستخدام التصوير سيم، وجدنا أن ميترونيدازول له آثار كبيرة على طول الخلية (> 50٪ تخفيض في طول الخلية لكل المضادات الحيوية؛ P <0.05) مقارنة مع الضوابط والفانكومايسين. في حين لم يتم توثيق الاستجابة المظهري للعلاج من تعاطي المخدرات سابقا بهذه الطريقة، فإنها تتفق مع وزارة الزراعة المخدرات التي تبين تنوع وموثوقية التصوير والقياسات وتطبيق هذه التقنية للمركبات التجريبية الأخرى.
كلوستريديوم ديفيسيل عبارة عن جرثومية إيجابية تشكل البكتريا التي تسبب الجراثيم، مما تسبب في حوالي 500،000 إصابة سنويا في الولايات المتحدة، ويعتبر هذا المرض ممرضا عاجلا على مستوى التهديد من قبل مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها، وهو أعلى مستوى من المخاطر. 1 شهد العقد الماضي تطورا كبيرا في العقاقير المضادة للميكروبات مع النشاط ضد C. صعب . 2 ، 3 في المختبر الدراسات هي عنصر ضروري من عملية تطوير المخدرات. 4 تقليديا، في المختبر وقابلية الوقت وقتل الدراسات تستخدم للتحقق من صحة الح....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
1. عزل C. صعب من مختلف المصادر البيئية أو السريرية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
كلوستريديوم ديفيسيل هو بكتيريا تشكيل بوغ وبالتالي فمن الضروري تحديد الاختلافات التشكل بين الخضري وخلايا بوغ قبل أي تحليل وظيفي. الشكل 1 يوضح الصور التمثيلية للخلايا الخضرية التي تم التقاطها خلال المرحلة الأسية من منحنى النمو وخلايا بوغ. كما هو مبين، والخلايا الخضرية طويلة، على نحو سلس، والهياكل على شكل قضيب في حين أن الجراثيم صغيرة، والهياكل البيضاوية التي لديها الخارجي الخام. وظيفيا، والخلايا الخضرية تنمو وتقسيم .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وكان الهدف من الدراسة الحالية لخلق طريقة عالية الإنتاجية لعزل C. صعب واختبار الحساسية للمضادات الحيوية باستخدام المجهر الإلكتروني المسح (سيم) كوسيلة لتوصيف أكثر دقة من العمل الدوائي للمضادات الحيوية. باستخدام البروتوكولات المبينة هنا، أثبتنا أن التصوير استجابة الظواهر الخلية للعلاج بالمضادات الحيوية يمكن أن تكشف عن نظرة ثاقبة في العمل الدوائي للدواء. في المجموع، الجزء التصوير من هذا البروتوكول يستغرق ما يقرب من 2 ساعة في مدة بعد جمع الخلايا، ولكن يمكن أن يكون أكثر تمييزية.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تلقت KWG دعما بحثيا سابقا وحاليا من Merck & Co. و Summit ، PLC.
تم دعم هذه التجارب من خلال منح بحثية من Merck and Co. and Summit ، PLC.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| شاش قطني | العناية | PRM21408C | |
| كلوريد الصوديوم | ماكرون | 7532 | |
| 50 مل أنابيب | فالكون | 352098 | |
| ضخ القلب في الدماغ (BHI) ؛ | المعيار | C5141 | |
| L-cysteine | Alfa Aesar | A10389 | |
| مستخلص الخميرة | المعيار | C741 | |
| الصوديوم taurocholate | Alfa Aesar | A18346 | |
| الغرفة اللاهوائية | Coy | الفينيل الغرفة اللاهوائية | |
| Cycloserinecefoxitin الفركتوز أجار (CCFA) | أنظمة Anaerobe | AS-213 | |
| لوحات أجار الدم التشخيص | هاردي | A-10 | |
| كاشف تراص اللاتكس | أوكسويد | DR1107A | C. مجموعة اختبار ديفان |
| الطرد المركزي | الدقيقة Eppendorf | 222363204 | |
| PBS | Gibco | 10010-031 | |
| 4٪ بارافورمالدهايد | فيشر Scientific | 50-259-98 | |
| شرائح مجهر | J. ملفين العلامة التجارية المحررة | 7525M | 75 × 25mm |
| تدفق هود | Labconco | الفئة الثانية من النوع A2 & nbsp ؛ | خزانة السلامة الحيوية |
| آلة الاخرق المكتبية | Denton Vacuum | Desk II | |
| الشريط | البلاستيكي الأساسي | 05072-AB | SPI شريط كربوني لاصق |
| مزدوج الوجهين | Denton Vacuum | TAR001-0158 | 2.375 " القطر × .002 بوصة مجهر إلكتروني ماسح رقائق الذهب السميكة |
| FEI | XL-30 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن