Method Article

بروتوكول لتوصيف التغيرات المورفولوجية كلوستريديوم ديفيسيل في الاستجابة للعلاج بالمضادات الحيوية

DOI:

10.3791/55383

⸱

May 25th, 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacy Practice and Translational Research, University of Houston College of Pharmacy, 2Department of Electrical and Computer Engineering, University of Houston

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = 'jove_content'> يتم تحديد فعالية المضادات الحيوية بشكل شائع عن طريق إجراء دراسات حركية للقتل وقياس وحدات تشكيل المستعمرة (CFUs). من خلال دمج المجهر الإلكتروني الماسح (SEM) مع هذه الطرق القياسية ، يمكننا التمييز بين التأثيرات الدوائية للعلاج بين المضادات الحيوية المختلفة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقييم عمل المضادات الحيوية مع تطوير العقاقير الجديدة الموجهة نحو البكتيريا اللاهوائية أمر صعب ومطالب من الناحية الفنية. للحصول على نظرة ثاقبة وزارة الزراعة ممكن، والتغيرات المورفولوجية المرتبطة التعرض للمضادات الحيوية يمكن تصور باستخدام المجهر الإلكتروني المسح (سيم). دمج التصوير سيم مع منحنيات قتل التقليدية قد تحسن رؤيتنا في العمل المخدرات والمضي قدما في عملية تطوير المخدرات. لاختبار هذه الفرضية، وقتل منحنيات ودراسات سيم أجريت باستخدام المخدرات مع وزارة الزراعة المعروفة ولكن مختلفة (فانكومايسين وميترونيدازول). خلايا C. صعب (R20291) نمت مع أو بدون وجود المضادات الحيوية لمدة تصل إلى 48 ساعة. على مدى فترة 48 ساعة، تم جمع الخلايا في نقاط زمنية متعددة لتحديد فعالية المضادات الحيوية والتصوير على سيم. وتمشيا مع التقارير السابقة، كان فانكومايسين وميترونيدازول نشاطا كبيرا للجراثيم بعد 24 ساعة من العلاج على النحو الذي تقاسه وحدة تشكيل مستعمرة (كفو) كونتينغ. باستخدام التصوير سيم، وجدنا أن ميترونيدازول له آثار كبيرة على طول الخلية (> 50٪ تخفيض في طول الخلية لكل المضادات الحيوية؛ P <0.05) مقارنة مع الضوابط والفانكومايسين. في حين لم يتم توثيق الاستجابة المظهري للعلاج من تعاطي المخدرات سابقا بهذه الطريقة، فإنها تتفق مع وزارة الزراعة المخدرات التي تبين تنوع وموثوقية التصوير والقياسات وتطبيق هذه التقنية للمركبات التجريبية الأخرى.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كلوستريديوم ديفيسيل عبارة عن جرثومية إيجابية تشكل البكتريا التي تسبب الجراثيم، مما تسبب في حوالي 500،000 إصابة سنويا في الولايات المتحدة، ويعتبر هذا المرض ممرضا عاجلا على مستوى التهديد من قبل مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها، وهو أعلى مستوى من المخاطر. 1 شهد العقد الماضي تطورا كبيرا في العقاقير المضادة للميكروبات مع النشاط ضد C. صعب . 2 ، 3 في المختبر الدراسات هي عنصر ضروري من عملية تطوير المخدرات. 4 تقليديا، في المختبر وقابلية الوقت وقتل الدراسات تستخدم للتحقق من صحة الح....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. عزل C. صعب من مختلف المصادر البيئية أو السريرية

  1. العزلات البيئية: باستخدام مقياس القطن المعقم مسبقا (مبللة طفيفة مع 0.85٪ كلوريد الصوديوم)، مسحة سطح أي مجال من مجالات الاهتمام (الكلمة، الباب، مقبض، الرف، الخ ). 8 تأكد من ارتداء قفازات معقمة ووضع مسحة في أنبوب معقمة بعد الانتهاء.
  2. العزلات السريرية (البراز): لوحة 10 إلى 100 ملغ من عينات البراز السريري على أجار السيفوكسيتين سيكلوسيرين - الفركتوز (كفا) باستخدام حلقة التلقيح واحتضان تحت ظروف اللاهوائية....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كلوستريديوم ديفيسيل هو بكتيريا تشكيل بوغ وبالتالي فمن الضروري تحديد الاختلافات التشكل بين الخضري وخلايا بوغ قبل أي تحليل وظيفي. الشكل 1 يوضح الصور التمثيلية للخلايا الخضرية التي تم التقاطها خلال المرحلة الأسية من منحنى النمو وخلايا بوغ. كما هو مبين، والخلايا الخضرية طويلة، على نحو سلس، والهياكل على شكل قضيب في حين أن الجراثيم صغيرة، والهياكل البيضاوية التي لديها الخارجي الخام. وظيفيا، والخلايا الخضرية تنمو وتقسيم .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكان الهدف من الدراسة الحالية لخلق طريقة عالية الإنتاجية لعزل C. صعب واختبار الحساسية للمضادات الحيوية باستخدام المجهر الإلكتروني المسح (سيم) كوسيلة لتوصيف أكثر دقة من العمل الدوائي للمضادات الحيوية. باستخدام البروتوكولات المبينة هنا، أثبتنا أن التصوير استجابة الظواهر الخلية للعلاج بالمضادات الحيوية يمكن أن تكشف عن نظرة ثاقبة في العمل الدوائي للدواء. في المجموع، الجزء التصوير من هذا البروتوكول يستغرق ما يقرب من 2 ساعة في مدة بعد جمع الخلايا، ولكن يمكن أن يكون أكثر تمييزية.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تلقت KWG دعما بحثيا سابقا وحاليا من Merck & Co. و Summit ، PLC.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذه التجارب من خلال منح بحثية من Merck and Co. and Summit ، PLC.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
شاش قطني العنايةPRM21408C
كلوريد الصوديومماكرون7532
50 مل أنابيبفالكون352098
ضخ القلب في الدماغ (BHI)   ؛المعيارC5141
L-cysteineAlfa AesarA10389
مستخلص الخميرةالمعيارC741
الصوديوم taurocholateAlfa AesarA18346
الغرفة اللاهوائيةCoyالفينيل الغرفة اللاهوائية
Cycloserinecefoxitin الفركتوز أجار (CCFA)أنظمة AnaerobeAS-213
لوحات أجار الدم التشخيصهارديA-10
كاشف تراص اللاتكسأوكسويدDR1107AC. مجموعة اختبار ديفان
الطرد المركزيالدقيقة Eppendorf222363204
PBSGibco10010-031
4٪ بارافورمالدهايدفيشر Scientific50-259-98
شرائح مجهرJ. ملفين العلامة التجارية المحررة7525M75 × 25mm
تدفق هودLabconcoالفئة الثانية من النوع A2 & nbsp ؛خزانة السلامة الحيوية
آلة الاخرق المكتبيةDenton VacuumDesk II
الشريطالبلاستيكي الأساسي05072-ABSPI شريط كربوني لاصق
مزدوج الوجهينDenton VacuumTAR001-01582.375 " القطر × .002 بوصة مجهر إلكتروني ماسح رقائق الذهب السميكة
FEIXL-30
أنابيب الذهب

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lessa, F. C., et al. Burden of Clostridium difficile infection in the United States. N Engl J Med. 372 (9), 825-834 (2015).
  2. Vickers, R. J., et al. Ridinilazole: a novel therapy for Clostridium difficile infection. Int J Antimicrob Agents.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Clostridium difficileScanning Electron MicroscopyAntibiotic TreatmentMorphological ChangesKill CurvesCell Length AnalysisCFU CountingAnaerobic CultureGold CoatingFiji Software

Related Articles