إزالة مرة واحدة من الجسم، والأنسجة العصبية تتأثر كثيرا الظروف البيئية، مما يؤدي إلى تدهور في نهاية المطاف من الأنسجة بعد 6-8 ساعة. باستخدام طريقة حضانة فريدة من نوعها، التي تراقب عن كثب وتنظم البيئة خارج الخلية من الأنسجة، وقابلية الأنسجة يمكن تمديدها بشكل ملحوظ ل> 24 ساعة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الحضانة لفترات طويلة الحادة العصبية الأنسجة للالكهربية والكالسيوم التصوير
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الحادة الاستعدادات الأنسجة العصبية، وشرائح المخ وwholemount في شبكية العين، وعادة ما يمكن أن تستمر إلا لل6-8 ساعة بعد تشريح. وهذا يحد من الوقت التجريبية، ويزيد من عدد الحيوانات التي تستخدم في الدراسة. هذا القيد على وجه التحديد الآثار بروتوكولات مثل التصوير الكالسيوم التي تتطلب فترات طويلة قبل الحضانة مع الأصباغ التطبيقية حمام. ويرتبط 4 ساعات بعد تشريح بإحكام مع انخفاض في صحة الأنسجة - نمو البكتيريا الأسي خلال 3. توضح هذه الدراسة وسيلة للحد من انتشار البكتيريا في الأعمال التحضيرية الحادة للحفاظ على الأنسجة العصبية قابلة للحياة لفترات طويلة من الزمن (> 24 ساعة) دون الحاجة للمضادات الحيوية، والإجراءات العقيمة، أو وسائل الإعلام زراعة الأنسجة التي تحتوي على عوامل النمو. عن طريق دورة السائل خارج الخلية من خلال الأشعة فوق البنفسجية والحفاظ على الأنسجة في غرفة مخصصة عقد في 15-16 درجة مئوية، تظهر الأنسجة لا فرق في الخصائص الكهربية، أو الاشتراكية الكالسيومgnaling من خلال الأصباغ الكالسيوم داخل الخلايا في> 24 ساعة postdissection. وهذه الطرق تمتد ليس فقط وقت تجريبي لتلك التي تستخدم الأنسجة العصبية الحادة، ولكن سوف يقلل من عدد الحيوانات اللازمة لاستكمال أهداف تجريبية، وسوف تحدد معيار الذهب للحضانة الأنسجة العصبية الحادة.
المقدمة
الكهربية والتصوير وظيفي (الكالسيوم، والجهد الأصباغ الحساسة) وهما من التقنيات التجريبية الأكثر شيوعا في علم الأعصاب. الدماغ الاستعدادات شريحة وwholemount في شبكية العين، والتي سيتم مناقشتها هنا، وتوفير وسيلة لدراسة الخصائص الكهربية واتصال متشابك دون تلوث من التخدير أو مرخيات العضلات. شرائح الدماغ وشبكية العين wholemount حفاظ على السلامة الهيكلية، على عكس الثقافات أو الخليط خلية، والسماح للدراسة دوائر محددة وشبكات الدماغ 1. تسجيلات من الأنسجة المعزولة لها يتم استبعاد من المزايا أكثر في الجسم الحي التسجيلات الحركات المرتبطة ضربات القلب والتنفس. وعلاوة على ذلك، والتصور المباشر يسمح فئات معينة من الخلايا لتكون مستهدفة، والتطبيق المحلي للأدوات الدوائية 2 و 3.
تسجيلات التصحيح المشبك وأحسبالبوتاسيوم صبغ التحميل في wholemount الشبكية معقدة بسبب وجود الداخلية الحد من غشاء (ILM)، الذي يغطي طبقة الشبكية العقدة الخليوي (RGC) ويمنع الوصول المباشر إلى الخلايا. عادة، يتم كشط هذا الغشاء بعيدا مع ماصة الزجاج للسماح التطبيق المباشر للماصة التصحيح وتشكيل ختم gigaohm على خلية واحدة. وبالإضافة إلى ذلك، والأصباغ الكالسيوم تطبيقها حمام لا تعبر ILM وإما أن يتم حقنه تحت هذا الغشاء 4، نقل retrogradely حقن التالية في العصب البصري 5 أو electroporated من خلال الأنسجة 6. وعلاوة على ذلك، عندما تستخدم نموذجا القوارض من التهاب الشبكية الصباغي، الماوس الثالثة / الثالثة، وILM هو أكثر سمكا وأكثر من ذلك لا يمكن اختراقها. هنا، ونحن نستخدم تقنية لإزالة ILM مع الهضم الأنزيمي 7، للسماح كلا في كل مكان الكالسيوم صبغ التحميل، والوصول المباشر إلى خلايا الشبكية العقدة لrecordi التصحيح، المشبكخ ع 8.
تعتمد التسجيلات ناجحة سواء من شرائح الدماغ أو wholemount في شبكية العين على تشريح وحضانة الأنسجة العصبية قابلة للحياة. عادة، يتم استخراج الأنسجة صباح يوم التجربة والمحتضنة في الاصطناعي السائل النخاعي (ACSF) حتى يتم استخدامها للتسجيلات. عادة، لا تزال الأنسجة قابلة للحياة 6-8 ساعة، مع تدهور كبير بعد هذه النافذة الوقت. ومع ذلك، كل شرائح الدماغ والاستعدادات الشبكية wholemount عادة ما تنتج المزيد من الأنسجة مما يمكن تسجيله من ضمن هذه الفترة الزمنية القصيرة. ونتيجة لذلك، غالبا ما يتم تجاهل الأنسجة في نهاية اليوم واكتمال تشريح مرة أخرى في الأيام اللاحقة. وهذا يعني يستخدم حيوان آخر و~ 2 ساعة من الإعداد وتشريح / تلطيخ المتكررة. يصف بروتوكول التالية وسيلة لإطالة حياة بعض الأنسجة العصبية لأكثر من 24 ساعة، وهذا يعني عددا أقل من الحيوانات تستخدم، والمزيد من الوقت التجريبي هو متاح. الأنسجة الحيوية ثكما تقييمها من خلال تسجيل الخصائص الكهربية وديناميات الكالسيوم، وكانت هذه الخصائص لا يمكن تمييزه بين <4 ساعات و> 24 ساعة postdissection.
وتشير هذه النتائج التي هي خصائص خلية واحدة سليمة وظيفية بعد حضانة طويلة فحسب، بل نشاط الشبكة، وفقا لتقييم الكالسيوم التصوير والتسجيلات الكهربية، هو دون تغيير> 24 ساعة postdissection. وعلاوة على ذلك، وتبين لنا أن الأصباغ الكالسيوم يمكن أن يبقى في الخلايا لفترات طويلة دون أن تسبب أي آثار ضارة. تطبيق هذا البروتوكول يوضح أن النشاط الوظيفي للخلايا العصبية في الأنسجة العصبية الحادة يمكن أن يستمر لفترات طويلة، وبمجرد درجة عالية من التنظيم والبيئة الخارجية. وعلاوة على ذلك، كما الجدوى الأنسجة تختلف اختلافا كبيرا بين المختبرات بسبب البروتوكولات حضانة مختلفة، يحدد هذا الأسلوب معيار الذهب للمعلمات المثالية التي يجب تطبيقها للحد من التباين في صحة نوي الحادالأنسجة رونالد.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يصف بروتوكول أدناه إعداد C57BL / 6 و C3H / و(تتدهور retinally) الأنسجة العصبية الماوس، ولكن تقنيات مشابهة يمكن تطبيقها على الأنواع الأخرى. وكانت جميع الحيوانات السليمة والتعامل مع الظروف القياسية لدرجة الحرارة، والرطوبة، 12 ساعة ضوء / دورة الظلام، وحرية الحصول على الغذاء والماء، ودون أي محفزات الإجهاد المقصود. تمت الموافقة على جميع التجارب وتنفيذها وفقا للجنة جامعة ويسترن سيدني رعاية الحيوان والأخلاق وفقا للاستخدام الحيواني والمبادئ التوجيهية الرعاية (الحيوان البحوث السلطة # A9452، # A10396 و# A8967).
1. إعداد شريحة الدماغ
- تخدير الحيوانات عن طريق الاستنشاق من الأيزوفلورين (5٪)، وقطع رأس باستخدام المقصلة القوارض. إزالة الدماغ بسرعة، كما هو موضح سابقا 9 ووضعه في حل المثلج الفسيولوجية (ACSF) التي تحتوي على (مم): 125 كلوريد الصوديوم، 2.5 بوكل، 1 MgCl 2، 1.25 ناه 2 ص 4، 2 CaCl 2، 25NaHCO 3 و 25 وسكر العنب، ومشبعة كربوجين (95٪ O 2/5٪ CO 2 الخليط، 310 ملي أوزمول، ودرجة الحموضة 7.4).
- قطع شرائح الدماغ، في المنطقة من الفائدة، 300 ميكرون سميكة مع مشراح تهتز.
- نقل شرائح إلى المخصصة بنيت نظام الحضانة التي تراقب عن كثب، وتسيطر على مستويات الحموضة (الرقم الهيدروجيني 7،2-7،4)، وتدفق كربوجين، ودرجة الحرارة كما هو موضح سابقا 10 و 11.
- ضبط درجة الحرارة غرفة الأولية إلى 35 درجة مئوية لمدة 15-30 دقيقة، ثم خفض ببطء إلى 15-16 درجة مئوية كما هو مبين في الشكل 1C. ثم احتضان شرائح في نظام الحضانة لحين الحاجة إليها، إما لالكهربية أو التصوير.
ملاحظة: إذا كانت لاستخدامها شرائح للكالسيوم التصوير، اتبع الخطوات التالية قبل تبريد الأنسجة تحت RT.
إعداد 2. الشبكية Wholemount والداخلية الحد من إزالة غشاء
- إعداد wholemounts الشبكية تحت إما وضعها الطبيعيظروف الإضاءة المختبر أو خافت أحمر / الأشعة تحت الحمراء ضوء.
- الموت ببطء الحيوانية خلع عنق الرحم وعيون استأصل على الفور. جعل قطع صغيرة على طول مشرشر أورا، ومكان سواء في أميس وسائل الإعلام، أو ACSF تحتوي على (مم): 125 كلوريد الصوديوم، و 25 NaHCO 3، 3 بوكل، 2 CaCl 2، 1 MgCl 2 و 10 الجلوكوز، 0.5 L-الجلوتامين، و تشبع مع كربوجين (95٪ O 2/5٪ CO 2 الخليط؛ ~ 300 ملي أوزمول، ودرجة الحموضة 7.4)، في RT.
- على الفور إزالة القرنية، العدسة والجسم الزجاجي عن طريق قطع على طول مشرشر أورا مع مقص صغير وإزالة العدسة والجسم الزجاجي مع ملقط. وضع الأنسجة في نظام الحضانة في RT.
ملاحظة: يمكن الحفاظ على الأنسجة الشبكية في العين الكأس، بعد انخفاض درجة الحرارة بشكل بطيء إلى 15-16 درجة مئوية، ل> 24 ساعة في نظام الحضانة لحين الحاجة إليها. - لإزالة ILM، ونقل العين كوب يحتوي على شبكية العين في جرة زجاجية صغيرة تحتوي على 30 وحدة / مل غراء، 1 مم L-سيستين، 0.5 ملي EDTA و 0.005٪ الدناز في Earl's-محلول ملحي متوازن (BSS) عند 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. تطبيق 95٪ O 2/5٪ CO 2 إلى الحل من خلال الغطاء ولكن لا فقاعة. في حالة استخدام الأنسجة من الحيوانات الصغيرة (<6 أسابيع)، وتمييع الحل لنصف القوة.
- وقف الهضم الأنزيمي، عن طريق وضع النسيج في محلول مخاطاني البيض (10 ملغ / مل)، وديوان الرقابة المالية (10 ملغ / مل) لمدة 10 دقيقة في BSS إيرل. غسل الأنسجة تماما مع ACSF قبل نقلها إلى نظام الحضانة وتقلل درجة الحرارة إلى 15-16 درجة مئوية.
- الحفاظ على الأنسجة الشبكية في العين كوب لحين الحاجة إليها. لنقلها إلى المجهر، عزل شبكية العين من العين كوب ومقطعة إلى 4 قطع مع razorblade. إذا كنت بحاجة شبكية العين بأكملها، وجعل أربعة الجروح الصغيرة في المحيط الخارجي للشبكية العين للسماح له أن يكذب شقة.
ملاحظة: للحصول على تجارب التصوير، والحمل مع الكالسيوم الأصباغ قبل نقلها إلى نظام الحضانة، انظر أدناه.
3. الحفاظ على الأنسجة في حاضنة
- مكان الأنسجة في الغرفة الرئيسية التي تحتوي على مجسات لقياس الرقم الهيدروجيني ودرجة الحرارة (الشكل 1A، B).
- تعميم ACSF من خلال الغرفة الثانية (UVC غرفة، الذي بني كما هو موضح سابقا 12) معزولة عن الغرفة الرئيسية ويتعرض إلى 1.1 W UVC الضوء (254 نانومتر، 5W / 2P معقم مصباح الأشعة فوق البنفسجية) وذلك لأشع البكتيريا العائمة في الحل (الشكل 1A). ضوء توقيت السيطرة UVC عبر الموقت للبرمجة باستخدام ميزة العشوائية التي تدور حول في أوقات متفاوتة ما بين 15 و 26 دقيقة كل 15-30 دقيقة لتجنب الإفراط في التدفئة من ACSF.
- تعيين معدل التدفق في غرفة UVC إلى 12 مل / دقيقة كما سبق وذكرت 12. تغطية غرفة UVC مع رقائق الألومنيوم لمنع UVC الإضاءة خارج الغرفة، التي يمكن أن تتلف الأنسجة العصبية.
ملاحظة: للحصول على أنسجة الشبكية الظلام تكييفها، وتطبيق غطاء مصنوعة خصيصا لالقاعة الرئيسية لمنع الضوء. - استخدام مضخة تحوي على circulaالشركة المصرية للاتصالات الحل (ACSF) من خلال المجلسين وبلتيير لوحة الباردة الحرارية برودة إما باردة أو حرارة الغرفة الرئيسية لدرجات الحرارة المطلوبة في حدود 0-50 درجة مئوية. لحضانة الأنسجة المثلى، استخدم 15-16 درجة مئوية لمدة البقاء على المدى الطويل.
4. الكالسيوم صبغ تحميل
- اختيار الأصباغ الكالسيوم على أساس تفضيل الباحث الفردية. هنا نستخدم FURA-02:00، فلوو-08:00 أو فلوو-04:00. ومع ذلك، يمكن تطبيق هذا الأسلوب لالأصباغ الأخرى أيضا: حل الأصباغ الكالسيوم في DMSO إلى بوليمرات 1 حل ملم و 1٪ كتلة (على سبيل المثال، حمض 127 pluronic) إلى الحجم النهائي من 50 ميكرولتر ويصوتن لمدة 10 دقيقة.
- إضافة إلى حل ACSF إلى تركيز النهائي من 10 ميكرومتر، 0.01٪ كتلة بوليمرات لشرائح الدماغ، و 20 ميكرومتر (شبكية العين)، 0.02٪ كتلة بوليمرات لشبكية العين. في الشبكية (غراء معاملة) وشرائح الدماغ من الحيوانات الصغيرة، تحميل إلى الحمام لمدة 45 دقيقة عند 37 درجة مئوية (FURA-02:00) أو في RT (فلوو-04:00، Fلوه-08:00).
- للحيوانات الكبار، (> 12 أسبوعا) ماصة الأصباغ (50 ميكرولتر) مباشرة على شرائح الدماغ، والحفاظ على ل75 دقيقة للسماح للتغلغل أفضل من الصبغة في الطبقات العميقة.
- لضمان الأوكسجين الكافي للشريحة المغمورة أثناء الحضانة صبغ، وإعداد غرفة زجاجية تحميل مع غطاء مغلق (جرة دائرية قطرها 2.5 سم، 3.5 سم الارتفاع) مع الأصباغ الكالسيوم المخفف في 2.5 مل من ACSF. الأوكسجين بشكل مستمر مع 95٪ O 2/5٪ CO 2. لا فقاعة.
- بعد صبغ تحميل، وغسل الأنسجة مع ACSF ونقل إلى نظام الحضانة، والحد ببطء درجة الحرارة إلى 15-16 درجة مئوية حتى الاستخدام التجريبي.
5. تسجيلات الكهربية والتصوير
- وضع الأنسجة في غرفة تسجيل المغمورة تحت المجهر، ويروي مع الاوكسيجين ACSF بمعدل تدفق 4-5 مل / دقيقة إما في RT (~ 22 درجة مئوية) أو درجة حرارة الفسيولوجية (~ 35 درجة مئوية). الحولد الأنسجة في المكان باستخدام العرف '' القيثارة ''، مصنوعة من النايلون أو الذهب المواضيع امتدت ولصقها في جميع أنحاء قطعة على شكل حرف U من الذهب أو البلاتين الأسلاك.
- لالكهربية:
- إعداد الماصات تسجيل من 1.5 مم (1.19 ملم ID) زجاج البورسليكات باستخدام مجتذب micropipette لتحقيق المقاومة النهائية 5-6 MΩ.
- ملء ماصة مع 3-4 ميكرولتر من حل داخلي كما هو موضح سابقا 13 وتصور الخلايا تحت الأشعة تحت الحمراء التفاضلية التدخل التباين (IR-DIC) باستخدام كاميرا CCD. يجب أن تكون مصممة على حل الخلايا بعناية إلى كل تجربة لتحقيق النتائج التجريبية.
- موقف ماصة، مع الحفاظ على ضغط إيجابي تطبيقها من خلال منفذ الشفط على حامل ماصة، على غشاء الخلية باستخدام micromanipulator. منذ أن تم نقل ILM من شبكية العين، لا يلزم كشط غشاء مسبق. مرة واحدة ماصة هي على الخلية، وتطبيق سلبية لطيفالضغط على ماصة لتحقيق ختم gigaohm. ثم تمزق غشاء الخلية مع كمية وجيزة من الضغط السلبي.
- جعل خلية كاملة التسجيلات current- أو الجهد المشبك باستخدام التقنيات القياسية حسب الاقتضاء.
- الكالسيوم التصوير:
- للتصوير ratiometric من FURA-2، استخدام فائقة الطول الموجي الجلاد سرعة لتوفير موجات الإثارة من 340 نانومتر و 380 نانومتر. يمر الضوء المنبعث من الخلايا الفردية من خلال تصفية الانبعاثات من 510 ± 20 نانومتر، والتقاط مع حساسية عالية وسرعة عالية في الكاميرا الرقمية.
- لطول موجة الإثارة واحد من فلوو-4، وعلى ضوء فلتر الإثارة من خلال 460-490 نانوميتر تمرير تصفية والضوء المنبعث من خلال 515-550 نانومتر الفرقة تمرير مرشح. لأسرع والأكثر حساسية تسجيل استخدام الكاميرا الرقمية بسرعة عالية مثل. الحصول على صور كما هو مطلوب.
- قياس التغيرات في مضان بوصفها وظيفة من الزمن سواء في الطول الموجي واحد (فلوو-4) أو باستخدام نسبة الطول الموجيطريقة (FURA-2)، كما هو موضح سابقا 8، 14.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تنظيم محكم من الحمولة الجرثومية ودرجة حرارة ACSF خلال حضانة ضروري للمحافظة على سلامة الأنسجة العصبية. يمكن أن يكون الأمثل ذلك من خلال التعرض للأشعة UVC والحفاظ على درجة حرارة ACSF في 15-16 درجة مئوية (الشكل 1). وعلاوة على ذلك، فإن ACSF المعلمات ختم (وكالة الأنباء الجزائرية، الشكل 1C) توفر مجرب مع سجل من الظروف البيئية (الرقم الهيدروجيني ودرجة الحرارة)، مما يتيح معيار الذهب للمعاملات عندما تفرخ الأنسجة العصبية، والت...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
توضح هذه المقالة طريقة حضانة لتمديد بقاء الأنسجة العصبية الحادة للتصوير والكهربية التجارب، مما يؤدي إلى خفض أعداد الحيوانات اللازمة لاستكمال أهداف التجريبية. عمليتان رئيسيتان تحكم تدهور الأنسجة العصبية على مر الزمن: أ) زيادة مستويات البكتيريا، والزيادة المصاحبة في الذيفان الداخلي الجرثومي المفرج عنهم، والثاني) التحفيز الزائدة التي تتبع إجراء تشريح الصدمة 10. كما الأنسجة العصبية الحادة هي العزل للبيئة، تنظيم محكم للبيئة الأنسجة من خلال الرصد الدقيق لمستويات ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن يوسي بوسكيلا وبول برين أنهما شريكان في ملكية PAYO Scientific Pty Ltd ، وهي شركة متخصصة في بناء أنظمة حضانة للأنسجة العصبية الحادة. أبلغ جميع المؤلفين الآخرين عن عدم وجود مصالح مالية أو تضارب محتمل في المصالح فيما يتعلق بالدراسة الحالية.
شكر وتقدير
نشكر كولين سيمونز وجيمس رايت على المساعدة الفنية. تم دعم هذا العمل من خلال منحة التمويل الأولي (WSU) إلى YB ومكتب الابتكار في جامعة ويسترن سيدني. ماجستير مدعوم من قبل زمالة ARC (DECRA).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| كلوريد الصوديوم | سيجما ألدريتش فيتيك | V800372 | |
| كلوريد البوتاسيوم | سيجما ألدريتش | P9333 | |
| N-Methyl-D-glucamine | Sigma Aldrich | M2004 | |
| D-الجلوكوز | Sigma Aldrich | G5767 | |
| بيكربونات الصوديوم | Sigma Aldrich | S6014 | |
| فوسفات الصوديوم أحادي القاعدة | Sigma Aldrich | S2554 | |
| كلوريد المغنيسيوم | Sigma Aldrich | M9272 | |
| كلوريد الكالسيوم | سيجما ألدريتش | 223506 | |
| نظام تفكك غراء | ورثينجتون | LK003150 | |
| ثنائي ميثيل سلفوكسيد اللامائي | سيجما ألدريتش | 276855 | |
| بلورونيك F-127 امتصاص منخفض للأشعة فوق البنفسجية * | تقنيات الحياة | P-6867 | محلول 20٪ في DMSO & nbsp ؛ |
| فورا-2 صباحا | Anaspec | 84017 | |
| Fluo-4 AM | Life Technologies | F23917 | |
| Fluo-8 AM | Abcam | Ab142773 | |
| شفرة تهتز microtome | Leica Biosystem | VT1200 S | مجهزة ب Leica ' s Vibrocheck™ جهاز القياس |
| الجدول المضاد للاهتزاز | أنظمة الاهتزاز | الطائرة الاهتزازية 9100/9200 | |
| مجهر مستقيم للمرحلة الثابتة | أوليمبوس | BX51WI | |
| هدف المجهر | أوليمبوس | XLUMPlanFLN 20x/1.00w | 20X |
| مجهر الموضوع | أوليمبوس | LUMPlanFLN 60x / 1.00w | 60X |
| CCD كاميرا | Andor | Ixon + | |
| محول الطول الموجي عالي السرعة | أداة | Sutter Lambda DG-4 & nbsp ؛ | |
| مكبر للصوت المشبك التصحيح | الأجهزة الجزيئية | MultiClamp 700B | |
| نظام الحصول على البيانات | الأجهزة الجزيئية | Digidata 1440A | Axon Digidata & reg ؛ نظام |
| الشعيرات الدموية الزجاجية البورسليكات | Sutter Instrument Co | BF150-86-10 | |
| مجتذب القطب الكهربائي | الدقيق Sutter Instrument Co | P-97 | مجتذب الماصات الدقيقة من النوع المشتعل / البني |
| غرفة التسجيل / التروية | Warner Instruments | RC-40LP | الحمام المفتوحة |
| منخفضة المستوى برامج | الأجهزة الجزيئية | pClamp 10.2 | |
| Andor iQ برنامج تصوير الخلايا الحية | Andor | Andor iQ3 | |
| Braincubator | Payo Scientific | BR26021976 | www.braincubator.com.au |
| Peltier-Thermoelectric Cold | Technology | CP-121 | |
| وحدة التحكم في درجة الحرارة | TE Technology | TC-36-25 RS232 |
المراجع
- Colbert, C. M. Preparation of cortical brain slices for electrophysiological recording. Meth mol biol. 337, Clifton, N.J. 117-125 (2006).
- Gibb, A., Edwards, F. Patch clamp recording from cells in sliced tissues. Microelect Techniq. , 255-274 (1994).
- Kantevari, S., Buskila, Y., Ellis-Davies, G. C. R. Synthesis and characterization of cell-permeant 6-nitrodibenzofuranyl-caged IP3. Photochem photobiol sci. 11 (3), 508-513 (2012).
- Blankenship, A. G., et al. Synaptic and Extrasynaptic Factors Governing Glutamatergic Retinal Waves. Neuron. 62 (2), 230-241 (2009).
- Sargoy, A., Barnes, S., Brecha, N. C., Perez De Sevilla Muller, L. Immunohistochemical and Calcium Imaging Methods in Wholemount Rat Retina. J Vis Exp. (92), e51396(2014).
- Kulkarni, M., et al. Imaging Ca2+ dynamics in cone photoreceptor axon terminals of the mouse retina. J Vis Exp. (99), e52588(2015).
- Velte, T. J., Masland, R. H. Action potentials in the dendrites of retinal ganglion cells. J neurophysiol. 81 (3), 1412-1417 (1999).
- Cameron, M., et al. Calcium imaging of AM dyes following prolonged incubation in acute neuronal tissue. PLoS ONE. 11 (5), (2016).
- Buskila, Y., Morley, J. W., Tapson, J., van Schaik, A. The adaptation of spike backpropagation delays in cortical neurons. Front Cell Neurosci. 7, (2013).
- Breen, P. P., Buskila, Y. Braincubator: An incubation system to extend brain slice lifespan for use in neurophysiology. Eng Med Biol Soc. , 4864-4867 (2014).
- Buskila, Y., Breen, P., Wright, J. Device for storing a tissue sample. WIPO Patent. , WO2015021513A1 (2015).
- Buskila, Y., et al. Extending the viability of acute brain slices. Sci Rep. 4, 4-10 (2014).
- Buskila, Y., Farkash, S., Hershfinkel, M., Amitai, Y. Rapid and reactive nitric oxide production by astrocytes in mouse neocortical slices. Glia. 52 (3), 169-176 (2005).
- Barreto-Chang, O. L., Dolmetsch, R. E. Calcium imaging of cortical neurons using Fura-2 AM. J Vis Exp. (23), e3-e5 (2009).
- Buskila, Y., et al. Enhanced Astrocytic Nitric Oxide Production and Neuronal Modifications in the Neocortex of a NOS2 Mutant Mouse. PLoS ONE. 2 (9), 9(2007).
- Russell, W. M. S., Burch, R. L. The Principles of Humane Experimental Technique. , Methuen. London, UK. (1959).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
