يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التصوير تلألؤ بيولوجي من Neuroinflammation في الفئران المعدلة وراثيا بعد الطرفية تلقيح ألفا Synuclein الألياف

8.3K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/55503

⸱

أبريل 13, 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1German Center for Neurodegenerative Diseases (DZNE), 2Centre for Prions and Protein Folding Diseases & Department of Biochemistry, University of Alberta

في هذه المقالة

ملخص

حقن الطرفية من الألياف، synuclein ألفا في الصفاق أو اللسان من تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران، التي تعبر عن الإنسان ألفا synuclein مع الطفرة A53T العائلية واليراع وسيفيراز، يمكن أن تحفز الأعصاب، بما في ذلك neuroinflammation في الجهاز العصبي المركزي الخاصة بهم.

الملخص

لدراسة سلوك مثل بريون من تتجمع ألفا synuclein، هناك حاجة إلى نماذج الماوس التي تسمح انتقال سريع وبسيط من prionoids ألفا synuclein، والتي تتسبب في أمراض الأعصاب في الجهاز العصبي المركزي (CNS). نحن هنا وصف تلك intraglossal أو الحقن داخل الصفاق من الألياف، synuclein ألفا إلى bigenic تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران التي بإفراط البشري ألفا synuclein مع الطفرة A53T من المروج بروتين بريون ويراعة luciferase من المروج لييفي الدبقية البروتين الحمضية (GFAP)، ويكفي للحث على المرض neuropathologic. بالمقارنة مع تيراغرام متماثل (M83 + / +) الفئران التي تتطور لديهم أعراض عصبية شديدة بدءا من سن 8 أشهر، متخالف تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الحيوانات تبقى خالية من المرض من تلقاء أنفسهم حتى التوصل إلى سن 22 شهرا. ومن المثير للاهتمام، حقن الألياف-synuclein ألفا عبر intraperitoneآل الطريق التي يسببها مرض عصبي مع الشلل في أربعة من خمسة تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران مع فترة حضانة متوسط 229 ± 17 يوما. أظهرت الحيوانات المريضة ودائع شديدة من فسفرته ألفا synuclein في أدمغتهم والنخاع الشوكي. كانت تراكمات ألفا synuclein sarkosyl-غير قابلة للذوبان وcolocalized مع اليوبيكويتين وP62، وكان يرافقه استجابة التهابية مما أدى إلى دباق نجمي الخلايا وكثرة الدبيقيات. والمثير للدهشة، كان التلقيح من الألياف، synuclein ألفا في اللسان أقل فعالية في التسبب في مرض واحد فقط من خمسة الحيوانات المحقونة تظهر ألفا synuclein علم الأمراض بعد 285 يوما. وتشير النتائج التي توصلنا إليها أن التلقيح عبر الطريق intraglossal وأكثر من ذلك عبر الطريق داخل الصفاق هو مناسبة للحث على مرض عصبي مع بصمات ذات الصلة synucleinopathies في تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران. وهذا يوفر نموذجا جديدا لدراسة مثل بريون المرضية لحثد كتبها prionoids ألفا synuclein بمزيد من التفصيل.

المقدمة

وهناك أدلة متزايدة على أن ألفا synuclein له خصائص مشابهة لتلك التي بروتين بريون، لا سيما في قدرتها على البذور الذاتي ونشر misfolding بين الخلايا وعلى طول الممرات العصبية. ويشار إلى هذه الخاصية ألفا synuclein أيضا باسم "بريون مثل 'أو' prionoid"، وبدعم من الملاحظات في تجارب زراعة الأعضاء، والتي توحي على الانتقال من تتجمع ألفا synuclein من الخلايا العصبية المريضة لزرع حديثا الخلايا العصبية السليمة 1، 2 و 3 و 4. أيضا الحقن المباشر للتتجمع ألفا synuclein في الدماغ أو المحيط، مثل العضلات hindlimb أو جدار الأمعاء، والنتائج في انتشار أمراض ألفا synuclein إلى أجزاء البعيدة للCNS 5، 6، 7، <سوب الطبقة = "XREF"> 8 و 9 و 10. قمنا بتحليل انتقال prionoids ألفا synuclein عبر طرق الطرفية في مزيد من التفاصيل وتناول مسألة ما إذا كانت تتجمع ألفا synuclein قد neuroinvade الجهاز العصبي المركزي بعد intraglossal احد أو الحقن داخل الصفاق، وهي الميزة التي سبق قد تعرض لالبريونات ولكن ليس لألفا تتجمع synuclein. بعد حقن البريونات في اللسان، ويتحقق neuroinvasion من الجهاز العصبي المركزي عن طريق نشر على طول العصب تحت اللسان لسان الذي يؤدي إلى نواة العصب تحت اللسان، والذي يقع في جذع الدماغ (11). كنموذج الماوس اخترنا تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران التي بإفراط متحولة A53T من البشر ألفا synuclein من المروج بريون، ويراعة luciferase تحت سيطرة أحد المروجين GFAP لمراقبة تفعيل نجمي الخلايا التي تلألؤ بيولوجي، كما هو موضح سابقا في دماغبريون-إصابة الفئران 12. في أيدينا bigenic تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران لم تتطور المرض حتى 23 شهرا من العمر كما لم تظهر من قبل الآخرين (13). حقنة واحدة من الألياف، synuclein ألفا الإنسان عبر intraglossal أو داخل الصفاق الطريق التي يسببها المرض العصبي يعانون من أمراض في العقول والنخاع الشوكي من تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران دعم الفرضية القائلة بأن prionoids ألفا synuclein مشاركة الخصائص المهمة مع البريونات 14.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات بما في ذلك الحيوانات مع موافقة لجنة حماية الحيوان وكالة شمال الراين وستفاليا الدولة للبيئة (LANUV). تم إيواء الحيوانات ويعتني به وفقا لظروف قياسية مع ضوء 12 ساعة / دورة الظلام، وحرية الوصول إلى الغذاء والماء.

1. الحيوان نموذج

  1. تزاوج الأقارب فرداني الزيجوت تيراغرام (GFAP -luc +/-) الفئران مع فرداني الزيجوت الفئران تيراغرام (M83 +/-) لتوليد فرداني الزيجوت bigenic تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران 15 و 16.
  2. الوراثي ذرية مع الوقت الحقيقي PCR لوجود ترميز التحوير البشري ألفا synuclein ومع معيار PCR ليراعة luciferase 12 و 17.
  3. تطعيم الحيوانات في سن ستة إلى ثمانية أسابيع.

2. إعداد اللقاح

  1. إعداد موnomeric المؤتلف الإنسان ألفا synuclein مع الطفرة A53T في المخزن مخزنة تريس المالحة (TBS) التي تحتوي على 150 ملي كلوريد الصوديوم في 20 ملي تريس، حمض الهيدروكلوريك (الرقم الهيدروجيني 7.2) كما وصفت سابقا 14.
  2. إعداد ييفي ألفا synuclein عن التطعيمات التي كتبها تهييج 3 ميكروغرام / ميكرولتر من أحادى المؤتلف الإنسان ألفا synuclein في شاكر المداري في 800 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية لمدة 5 أيام.
  3. تمييع المجالس ليفية في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) للوصول إلى تركيز النهائي من 1 ميكروغرام / ميكرولتر لداخل الصفاق أو 2 ميكروغرام / ميكرولتر عن التطعيمات intraglossal.
  4. تفتيت الألياف، synuclein ألفا مع sonicator قضيب لمدة 1 دقيقة (40 نبضات من مدة 0.5 الصورة مع وقفة ثانية واحدة بين كل نبضة واتساع المقرر أن 50٪) على الجليد. لتجنب التلوث عبر البذر. استخدام تحقيقات صوتنة نظيفة للتحضير اللقاح مختلفة.

3. Intraglossal الحقن

  1. تخدير الحيوانات مع intrapeحقن ritoneal من 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 10 ملغم / كغم من زيلازين. قرصة إصبع الحيوان وتؤكد أنه لا سحب hindlimb لضمان التخدير المناسب. استخدام البيطري مرهم على عيون الحيوان لمنع جفاف بينما تحت التخدير.
  2. إصلاح الحيوانات مخدر بعناية مع شريط لاصق على لوحة التدفئة في موقف الظهرية راقد مع رؤوسهم التوجه نحو محقق.
  3. ملء 27 G حقنة تحت الجلد القابل للتصرف مع 5 ميكرولتر من الألياف، synuclein ألفا sonicated أو برنامج تلفزيوني.
  4. استخدام واحد ملقط الإبهام حادة الانف مع نصائح مسننة لعقد فم الحيوان المفتوحة، وزوج الثانية أصغر من الملقط لسحب بعناية اللسان لجعل الجانب السفلي من اللسان يمكن الوصول إليها عن طريق الحقن.
  5. حقن إبرة الحقنة في الجانب السفلي الأيمن أو الأيسر من اللسان على مقربة من العصب تحت اللسان. ببطء حقن اللقاح بعد 5 ثوان. ببطء سحب الإبرة بعد 5 ثوان للتأكد من أن اللقاحوقد اخترق الأنسجة ولا تضيع في حين التراجع الإبرة.
  6. الافراج عن الحيوان من تثبيتات وترك الأمر على لوحة التدفئة تحت مراقبة مستمرة حتى الشفاء التام.

4. داخل الصفاق حقن

  1. لحقن داخل الصفاق، خدر الحيوانات قريبا في غرفة التخدير عن طريق الاستنشاق مع isoflurane / الأكسجين باستخدام معدل تدفق 2 لتر / دقيقة والمرذاذ المقرر أن 2٪. قرصة إصبع الحيوان وتؤكد أنه لا سحب hindlimb لضمان التخدير المناسب.
  2. ملء 27 G حقنة تحت الجلد القابل للتصرف مع 50 ميكرولتر من الألياف، synuclein ألفا sonicated أو برنامج تلفزيوني.
  3. حقن مباشرة في الصفاق من الماوس وتجنب اختراق الأمعاء الدقيقة أو الأعور الواقعة خلف جدار البطن من خلال عقد هذا الحيوان في موقف الظهرية مع رئيس تواجه بعيدا عن المحقق ونزولا عند حوالي 45 درجة. مراقبة الحيوانات إلا بعد أن تعافىمن التخدير.

5. ضوء بارد التصوير

  1. صورة تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران كل 2-4 أسابيع باستخدام نظام التصوير تلألؤ بيولوجي.
  2. قبل التصوير تخدير الفئران في غرفة الأيزوفلورين / الأكسجين بمعدل تدفق 2 لتر / دقيقة والمرذاذ المقرر أن 2٪ بقليل. قرصة إصبع الحيوان وتؤكد أنه لا سحب hindlimb لضمان التخدير المناسب.
  3. حلاقة ويزيل الشعر رؤساء الفئران مع كريم مزيل الشعر. لون آذان باللون الأسود مع علامة غير مزعجة لمنع تلألؤ بيولوجي غير محددة.
  4. تمييع-D وسيفيرين ملح البوتاسيوم، وركيزة من وسيفيراز، في برنامج تلفزيوني إلى 30 ملغ / مل محلول المخزون. تخزين هذه في 1 مل aliquots في -20 ° C. حماية المنحل D-وسيفيرين من التعرض للضوء.
  5. وزن الحيوانات قبل الحقن. حساب حجم الدقيق D-وسيفيرين للحقن 150 ملغم / كغم من وزن الجسم. البريتونى حقن D-luciferin والعودة الحيوان إلى غرفة التخدير.
  6. بدء برامج التصوير. بعد أن وصل نظام التصوير في درجة الحرارة التشغيلية تهيئة النظام عن طريق النقر على زر "تهيئة" في لوحة التحكم.
  7. حدد أزرار "الفلورسنت" و "الصورة". ضبط الوقت التعرض ل60 ثانية، وbinning إلى "متوسط"، وF / إيقاف ل"1"، وكسب EM إلى 'إيقاف'.
  8. تأكد من أن يتم تعيين مرشح الإثارة على "حظر" وتصفية الانبعاثات إلى 'فتح'، وتعيين ارتفاع الموضوع إلى 1.50 سم.
  9. عشرة دقيقة بعد حقن مع D-وسيفيرين، وضع الحيوانات على لوحة التدفئة في غرفة التصوير والتأكد من أن يخرس بهم توضع بشكل صحيح في منفذ التخدير. إغلاق تدفق الأيزوفلورين / الأكسجين من الغرفة استنشاق وفتح تدفق للغرفة التصوير مع معدل التدفق من 0.25 لتر / دقيقة والتبخر من 2٪. إغلاق باب العلاقات العامة غرفة التصويرoperly.
  10. انقر على زر "اكتساب" لقياس تلألؤ بيولوجي، والتي تأخذ 60 ثانية. وقف تدفق الأيزوفلورين ومراقبة الحيوانات إلا بعد أن تعافى تماما بعد إعادتها إلى أقفاصها.
  11. استخدام برامج التصوير لقياس تلألؤ بيولوجي. ضمن "أداة لوحة 'اختر' أدوات العائد على الاستثمار". تحت عنوان "النوع" ضمن "أدوات العائد على الاستثمار 'اختر' قياس العائد على الاستثمار".
  12. ضمن 'أدوات العائد على الاستثمار "، انقر على أداة" الدائرة "وحدد عدد رويس رسم من القائمة المنسدلة - مثالي" 3 "لمدة ثلاثة الفئران.
  13. في الصورة انقر بزر الماوس الأيمن فوق كل ROI وتحت عنوان "خصائص" ضبط العرض والارتفاع إلى 1.25 سم. وضع كل ROI على منطقة الدماغ التي كميا.
  14. في الجانب الأيسر العلوي من الصورة، وضع لوحة وحدات إلى 'الاشعاع (الفوتونات).
  15. ضمن "أداة لوحة"، حدد "صورة ضبط" وضبط الحد الأدنى والحدالحد الأقصى من 'مقياس اللون، على سبيل المثال، من 0.20e6 إلى 1.00e6.
  16. تحت عنوان "ملف" حفظ البيانات مع 'حفظ'.

6. تحليل البيوكيميائية

  1. عزل العقول والنخاع الشوكي وفقا لبروتوكولات إنشاء 18 و 19.
  2. التجانس الدماغ كله وعينات النخاع الشوكي كلها بشكل منفصل في برنامج تلفزيوني في وجود الأنزيم البروتيني والفوسفاتيز مثبطات (مخفف ل1x أخرى في PBS) في اثنين من 30 ثانية دورات مع 6000 دورة في الدقيقة في الخالط الأنسجة. تأكد من أن الدماغ وعينات النخاع الشوكي والمتجانس إلى تركيز النهائي من 20٪ (وزن / المجلد).
  3. يصوتن العينات مرتين مع إبقائها على الجليد مع نبض المستمر من 10 ثانية والسعة المحددة إلى 50٪.
  4. ضبط الخليط إلى 10٪ في برنامج تلفزيوني و 750 ملي مول كلوريد الصوديوم عن طريق تمييع لهم 1: 1 مع 1.5 M كلوريد الصوديوم في برنامج تلفزيوني.
  5. للفصل بين الحطام الخلوي، الطرد المركزي الخليط في 1000 x ج لمدة 5 دقائق في4 ° C. الحفاظ على supernatants للخطوات القادمة والتخلص من الكريات.
  6. قياس تركيز البروتين في الخليط باستخدام فحص الحمض bicinchoninic (BCA) وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. احتضان 1.0 ملغ من البروتين الكلي من الخليط الدماغ أو 0.8 ملغ من الخليط في النخاع الشوكي في N-laurylsarcosyl بتركيز نهائي 10٪ (وزن / المجلد) لمدة 15 دقيقة على الجليد.
  7. تراكب الخليط على وسادة 3 مل السكروز 10٪ (وزن / المجلد) في الماء المقطر، ونابذة لهم في 465000 x ج لمدة 1 ساعة عند 4 درجات مئوية.
  8. إعادة تعليق الكريات في العازلة التي تحتوي على 4٪ دوديسيل كبريتات الصوديوم (SDS)، 2٪ β-المركابتويثانول، 192 ملي الجلايسين، 25 ملي تريس، و 5٪ (وزن / المجلد) السكروز.
  9. تغلي العينات عند 100 درجة مئوية لمدة 5 دقائق وتحميلها على المواد الهلامية بولي أكريلاميد SDS-لالكهربائي في نظام المخزن حمض morpholineethanesulfonic (MES).
  10. نقل البروتينات فصلها لdifluoride البولي فينيل (PVDF) الأغشية في وزارة شؤون المرأةidry نظام النشاف.
  11. احتضان الأغشية في 0.4٪ (المجلد / المجلد) حل الفورمالين في برنامج تلفزيوني لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة على الدوار مع 35 دورة في الدقيقة لعبور الارتباط البروتينات مع الغشاء.
  12. منع الأغشية العازلة في TBS تحتوي على 0.05٪ (المجلد / المجلد) توين 20 و 5٪ (وزن / المجلد) الحليب لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  13. احتضان البقع مع الأجسام المضادة الأولية في عرقلة العازلة بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
  14. غسل الأغشية ثلاث مرات في المخزن TBS واحتضان لهم مع الأجسام المضادة الثانوية peroxidase- أو fluorophore مترافق في TBS لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  15. تصور الأجسام المضادة الثانوية ملزمة التوهج أو مضان وفقا لبروتوكولات إنشاء 20.

تحليل 7. المناعي

  1. يذوى أدمغة تشريح والنخاع الشوكي في محطة معالجة الأنسجة وتضمينها في البارافين باستخدام محطة البارافين.
  2. قطع تيس جزءا لا يتجزأ من البارافينيقاضي مع مبضع للفحص المجهري في 8 ميكرون أقسام الاكليلية سميكة وجبل المقاطع على الشرائح الزجاجية.
  3. Deparaffinize المقاطع الأنسجة التي يحتضنها منهم في اثنين من حمامات زايلول منفصلة لمدة 5 إلى 10 دقائق وترطيب لهم من خلال سلسلة من الحمامات الايثانول متدرج (100٪، 90٪، 70٪، 50٪)، وأخيرا مع H 2 O.
  4. احتضان المقاطع في 0.01 M عازلة سيترات (الرقم الهيدروجيني 6.0) لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة، وبالإضافة إلى ذلك سلقها لمدة 10 دقيقة في فرن الميكروويف.
  5. دع أقسام يبرد إلى درجة حرارة الغرفة واحتضان لهم 3٪ محلول بيروكسيد الهيدروجين لمدة 30 دقيقة لمنع بيروكسيديزات الذاتية.
  6. منع المقاطع الأنسجة التي الحضانة مع 20٪ (المجلد / المجلد) العادي مصل الماعز، 1٪ (المجلد / المجلد) زلال المصل البقري (BSA)، و 0.5٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  7. احتضان المقاطع مع الأجسام المضادة الأولية مخففة في 1٪ (المجلد / المجلد) العادي مصل الماعز، 1٪ (المجلد / المجلد) BSA، و 0.25٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
    8. <لى> غسل أقسام مرتين مع 0.25٪ (المجلد / المجلد) تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني ومرة ​​واحدة مع برنامج تلفزيوني.
  8. وصمة عار على المقاطع مع الأجسام المضادة الثانوية fluorophore مترافق المقابلة ودابي صبغ النووي مخففة في 1٪ (المجلد / المجلد) العادي مصل الماعز، 1٪ (المجلد / المجلد) BSA، وبرنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  9. بعد غسل مرتين مع 0.25٪ (المجلد / المجلد) تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني ومرة ​​واحدة مع PBS، ساترة الشرائح مع وسائل الاعلام تضمين ووضع تصور لتلطيخ مع متحد البؤر مجهر المسح بالليزر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

حقن الطرفية من prionoids ألفا synuclein عبر اللسان أو الغشاء البريتوني الناجم عن أمراض الأعصاب في الجهاز العصبي المركزي من bigenic تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران (الجدول 1) والشكل (1). بعد الحقن داخل الصفاق واحد مع الألياف-synuclein ألفا، أربعة من خمسة الفئران المتقدمة مرض عصبي مع فترة حضانة متوسط ​​229 ± 17 يوما. والمثير للدهشة، وضعت واحدة فقط من خمس الفئران مرض CNS بعد ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

حقن الطرفية من الألياف، synuclein ألفا في الصفاق من تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) يمثل الفئران طريقة سطحي للحث على مرض عصبي يرافقه neuroinflammation لتلخيص الخصائص المهمة للsynucleinopathies. وبالمثل، يمثل حقن اللسان طريقا آخر للneuroinvasion التي كتبها prionoids ألفا synuclein في الفئران المعدلة وراثيا ولكن أقل كفاءة. لقد اخترنا لإنهاء تجاربنا في 420 يوما بعد الحقن، ونحن لا يمكن استبعاد احتمال أن أكثر أو كل من الفئران ليفية حقن قد وضعت المرض في ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

الكتاب أشكر أولغا شارما، تيريزا هوندت، وموظفي الفحص المجهري والحيوان مرافق DZNE حصول على الدعم الفني.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الجسم المضاد للأكتينMerck MilliporeMAB1501
المضاد لألفا سينوكلين ، الجسم المضاد فوسفو S129 [pSyn # 64]واكو015-25191
المضاد لألفا سينوكلين ، الجسم المضاد فوسفو S129 [EP1536Y]Abcamab51253
الجسم المضاد المضاد ل GFAPDakoZ0334 01
الجسم المضاد ل IBA-1واكو019-19741
الجسم المضاد المضاد للسيكويستوسوم -1 (p62)Proteintech18420-1-AP
الأجسام المضادة المضادة لليوبيكويتين [Ubi-1]ميرك ميليبورMAB1510
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)Invitrogen14190169
الكيتامين   ؛نسبة فارم100 مجم / كجم
نسبة الزيلازينفارم10 مجم / كجم
27 جرام حقنةVWR613-4900
Isoflurane   ؛Piramal HealthcarePZN  4831850
كريم مزيل الشعرVeet
Secureline lab marker Neolab25040
D-luciferin ملح البوتاسيومAcrisLK1000030 مجم / مل محلول مخزون
ThermomixerEppendorf5776671
Sonopuls Mini20 SonicatorBandelin3648
IVIS نظام التصوير Lumina IIPerkinElmer
Living Image 3.0 SoftwarePerkinElmer
Tg (M83 +/- < / sup>) الفئران أو B6 ؛ C3-Tg (Prnp-SNCA * A53T) 83Vle / J الفئرانمختبر جاكسون004479
ملقط نمط قياسيأدوات العلوم الدقيقة11000-16
ملقط نمط ضيقأدوات العلوم الدقيقة11002-12
N-laurylasarcosylSigmaL5125-100G
Optima Max-XP أجهزة الطرد المركزي الفائقة بيكمان كولترTLA-110 الدوار  
أنابيب البولي كربونات السميكةBeckman Coulter362305
NuPAG Novex 4-12٪ Bis-Tris Midi ProteinGels Thermo Fisher ScientificWG1401BOX
HRP الأجسام المضادة المترافقةCaymanCay10004301-1
IR Dye 680 الجسم المضاد المترافق   ؛LI-COR Biosciences926-68070
SuperSignal West Dura Extended Duration SubstrateThermo Fisher Scientific34075
Stella 3200 نظام التصويربالأشعة تحت الحمراء Raytest
Odyssey  LI-COR Biosciences
Tween 20 MP BiomedicalsTWEEN201
Triton X-100SigmaSA / T8787
Immobilon-FL PVDF غشاءMerck MilliporeIPFL00010
XylolSigma Roth
بيروكسيد الهيدروجينSigmaSA / 00216763 / 000500حل العمل 3٪
ألبومين مصل البقر (BSA)   ؛ثيرمو فيشر ScientificA3294-100G
مصل الماعزThermo Fisher ScientificPCN5000
4،6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)Thermo Fisher ScientificD1306تخفيف العمل 1: 50،000
Fluoromount media OmnilabSA / F4680 / 000025
LSM700 مجهر المسح الضوئي بالليزر متحد البؤركارل زايس
HALT البروتياز ومثبطات الفوسفاتيزThermo Fisher Scientific   ؛10516495
Precellys 24-Dual homogenizer   ;Peqlab91-PCS24D
Alexa Fluor 488 الجسم المضاد المترافقThermo Fisher ScientificA31619
Alexa Fluor 594 الجسم المضاد المترافقThermo Fisher ScientificA11005
Pierce & nbsp ؛ BCA  البروتين  فحص  كيتثيرمو فيشر العلمي10741395
ميكروتوم RM2255Leica
LSM700 مجهر المسح الضوئي بالليزر متحد البؤركارل زايس

المراجع

  1. Aguzzi, A. Cell biology: Beyond the prion principle. Nature. 459 (7249), 924-925 (2009).
  2. Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T. B. Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease. Nat Med. Olanow, C. W. 14 (5), 504-506 (2008).
  3. Li, J. Y., et al. Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation. Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).
  4. Hansen, C., et al. alpha-Synuclein propagates from mouse brain to grafted dopaminergic neurons and seeds aggregation in cultured human cells. J Clin Invest. 121 (2), 715-725 (2011).
  5. Masuda-Suzukake, M., et al. Prion-like spreading of pathological alpha-synuclein in brain. Brain. 136 (4), 1128-1138 (2013).
  6. Holmqvist, S., et al. Direct evidence of Parkinson pathology spread from the gastrointestinal tract to the brain in rats. Acta Neuropathol. 128 (6), 805-820 (2014).
  7. Luk, K. C., et al. Pathological alpha-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice. Science. 338 (6109), 949-953 (2012).
  8. Sacino, A. N., et al. Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 1, 38(2013).
  9. Sacino, A. N., et al. Intramuscular injection of alpha-synuclein induces CNS alpha-synuclein pathology and a rapid-onset motor phenotype in transgenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), 10732-10737 (2014).
  10. Mougenot, A. L., et al. Prion-like acceleration of a synucleinopathy in a transgenic mouse model. Neurobiol Aging. 33 (9), 2225-2228 (2012).
  11. Bartz, J. C., Kincaid, A. E., Bessen, R. A. Rapid prion neuroinvasion following tongue infection. J Virol. 77 (1), 583-591 (2003).
  12. Tamgüney, G., et al. Measuring prions by bioluminescence imaging. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (35), 15002-15006 (2009).
  13. Watts, J. C., et al. Transmission of multiple system atrophy prions to transgenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (48), 19555-19560 (2013).
  14. Breid, S., et al. Neuroinvasion of alpha-Synuclein Prionoids after Intraperitoneal and Intraglossal Inoculation. J Virol. 90 (20), 9182-9193 (2016).
  15. Giasson, B. I., et al. Neuronal alpha-synucleinopathy with severe movement disorder in mice expressing A53T human alpha-synuclein. Neuron. 34 (4), 521-533 (2002).
  16. Zhu, L., et al. Non-invasive imaging of GFAP expression after neuronal damage in mice. Neurosci Lett. 367 (2), 210-212 (2004).
  17. Bernis, M. E., et al. Prion-like propagation of human brain-derived alpha-synuclein in transgenic mice expressing human wild-type alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 3 (1), 75(2015).
  18. Gunther, R., et al. Clinical testing and spinal cord removal in a mouse model for amyotrophic lateral sclerosis (ALS). J Vis Exp. (61), (2012).
  19. Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. Protocol for the MPTP mouse model of Parkinson's disease. Nat Protoc. 2 (1), 141-151 (2007).
  20. Mathews, S. T., Plaisance, E. P., Kim, T. Imaging systems for westerns: chemiluminescence vs. infrared detection. Methods Mol Biol. 536, 499-513 (2009).
  21. Kim, C., et al. Exposure to bacterial endotoxin generates a distinct strain of alpha-synuclein fibril. Sci Rep. 6, 30891(2016).
  22. Keller, A. F., Gravel, M., Kriz, J. Live imaging of amyotrophic lateral sclerosis pathogenesis: disease onset is characterized by marked induction of GFAP in Schwann cells. Glia. 57 (10), 1130-1142 (2009).
  23. Stöhr, J., et al. Distinct synthetic Abeta prion strains producing different amyloid deposits in bigenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. , (2014).
  24. Luk, K. C., et al. Intracerebral inoculation of pathological alpha-synuclein initiates a rapidly progressive neurodegenerative alpha-synucleinopathy in mice. J Exp Med. 209 (5), 975-986 (2012).
  25. Recasens, A., et al. Lewy body extracts from Parkinson disease brains trigger alpha-synuclein pathology and neurodegeneration in mice and monkeys. Ann Neurol. 75 (3), 351-362 (2014).
  26. Sacino, A. N., et al. Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 1 (1), 38(2013).
  27. Peelaerts, W., et al. alpha-Synuclein strains cause distinct synucleinopathies after local and systemic administration. Nature. 522 (7556), 340-344 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

GFAP
التصوير تلألؤ بيولوجي من Neuroinflammation في الفئران المعدلة وراثيا بعد الطرفية تلقيح ألفا Synuclein الألياف
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.