Method Article

في طرق المختبر لمقارنة الهدف وتجليد وCDC التعريفي بين الأجسام المضادة العلاجية: تطبيقات في تحليل Biosimilarity

DOI:

10.3791/55542

⸱

May 4th, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Unit for Development and Research in Bioprocesses Unit (UDIBI), National School of Biological Sciences, National Polytechnic Institute (IPN), University of Mexico (UNAM), 2School of Chemistry, National Autonomous University of Mexico (UNAM), 3Graduate Program in Chemical Sciences, National Autonomous University of Mexico (UNAM), 4Unit for Development Research and Medical Innovation in Biotechnology (UDIMEB), National School of Biological Sciences, National Polytechnic Institute (IPN), 5Department of Immunology, National Scool of Biological Sciences, National Polytechnic Institute (IPN), 6Department of Pharmacology and Unit of Translational Biomedicine (CMN 20 de noviembre), School of Medicine, National Autonomous University of Mexico (UNAM)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول المقارنة في المختبر من اثنين من الخصائص الوظيفية الرئيسية لريتوكسيماب: الهدف ملزمة والسمية الخلوية (CDC) الحث تعتمد تكمل. وقد استخدمت أساليب مقارنة جنبا إلى جنب بين ريتوكسيماب مرجعية وبدائل حيوية ريتوكسيماب. هذه المقايسات يمكن استخدامها خلال تطوير بدائل حيوية أو لمراقبة الجودة في إنتاجها.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الاجسام المضادة العلاجية (MABS) هي ذات الصلة لعلاج الأمراض المختلفة، بما في ذلك السرطان. تطوير MABS بدائل حيوية من قبل شركات الأدوية هي فرصة السوق، ولكنها أيضا استراتيجية لزيادة إمكانية الوصول المخدرات والحد من التكاليف المرتبطة العلاج. البروتوكولات بالتفصيل هنا تصف تقييم هدف ملزم وCDC تحريض من قبل ريتوكسيماب في الخلايا داودي. تتطلب هذه الوظائف منطقتين هيكلية مختلفة من الأجسام المضادة وهي ذات الصلة الاثر السريري الناجم عن ريتوكسيماب. البروتوكولات تسمح للمقارنة جنبا إلى جنب من ريتوكسيماب مرجعية وبدائل حيوية ريتوكسيماب تسويقها. وأظهرت المنتجات تقييم الاختلافات في كل من هدف ملزم وCDC تحريض، مما يوحي بأن هناك اختلافات الفيزيائية الأساسية وتسليط الضوء على الحاجة إلى تحليل أثر هذه الاختلافات في إعداد سريرية. الأساليب ذكرت هنا تمثل بسيطة وغير مكلفة في المختبر </ em> نماذج لتقييم نشاط البدائل الحيوية ريتوكسيماب. وبالتالي، فإنها يمكن أن تكون مفيدة خلال تطوير بدائل حيوية، فضلا عن مراقبة الجودة في إنتاج بدائل حيوية. وعلاوة على ذلك، وأساليب عرض يمكن استقراء لMABS العلاجية الأخرى.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأجسام المضادة العلاجية هي الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المؤتلف (مابس) وضعت لعلاج أمراض مختلفة، بما في ذلك السرطان، المناعة الذاتية والأمراض المزمنة، واضطرابات عصبية، وغيرها 1 . حاليا، وافقت ادارة الاغذية والعقاقير الموافقة على أكثر من 40 مابس العلاجية، وأكثر من المتوقع أن تصل إلى السوق في السنوات التالية.

ريتوكسيماب هو عالية تقارب خيالية أحادي النسيلة IgG1 الأجسام المضادة المعتمدة لعلاج CD20 + B خلية سرطان الغدد الليمفاوية غير هودجكين (نهل)، CD20 + نهل الجريبي، سرطان الدم الليمفاوي المزمن، والتهاب المفاصل الروماتويدي 2 ، 3 . الاعتراف CD20، أوفيركسرسد في الخلايا ب، من قبل ريتوكسيماب يدفع موت الخلايا المبرمج. تكملة التنشيط؛ والخلايا التي تعتمد على الأجسام المضادة السمية الخلوية (أدسك) 3 . براءات الاختراع من هذا الدواء انتهت في أوروبا والولايات المتحدة في 2013 و 2016على التوالي. وهكذا، شركات الأدوية في جميع أنحاء العالم على تطوير البدائل الحيوية ريتوكسيماب. كما هو الحال في أي عقار آخر للاستهلاك البشري، البدائل الحيوية تتطلب موافقة من الهيئات التنظيمية. وتشير المبادئ التوجيهية الدولية التي لMABS، يجب أن يظهر biosimilarity بمقارنة خصائص الفيزيائية، الدوائية، فعالية، وسلامة المنتجات الجديدة والمرجعية 4.

وفقا لذلك، يجب على المنهجيات المستخدمة في مثل هذه المقارنات تقييم الخصائص الهيكلية والوظيفية للMABS، وخاصة تلك التي لها صلة السريرية. تحقيقا لهذه الغاية، فحوصات في المختبر تظهر العديد من المزايا في التجارب المجراة (إعادة النظر في تشابمان وآخرون.) 5: أ) في الدراسات المختبرية هي أكثر حساسية للاختلافات بين المنتج بدائل حيوية والإشارة المقترحة؛ ب) الدراسات المجراة يجب أن يؤديها في الأنواع ذات الصلة، والتي لكثير من MABS لالرئيسيات غير البشرية. والثالث) منذ آلية العمل، وعلم السموم قبل السريرية، والآثار السريرية من الناتج إشارة معروفة، الدراسات المجراة مع البدائل الحيوية قد لا توفر معلومات إضافية مفيدة. وفقا لذلك، توجيه الاتحاد الأوروبي لالبدائل الحيوية يسمح المرشحين لدخول التجارب السريرية على أساس قوي في بيانات المختبر وحده 6.

هنا، نقدم اثنين من فحوصات سريعة واقتصادية وبسيطة أن تقييم النشاط البيولوجي للريتوكسيماب باستخدام CD20 + الخلايا المستزرعة. يمكن تضمين هذه المقايسات كجزء من ممارسة المقارنة للمرشحين بدائل حيوية ريتوكسيماب.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تقييم الهدف ربط بواسطة التدفق الخلوي

  1. إعداد المواد البيولوجية والكواشف
    1. جعل 500 مل من وسط ثقافة رمي تستكمل مع 10٪ مصل الدم البقري الجنين المعطل (H-إفبس).
    2. ثقافة داودي بوركيت خلايا الغدد الليمفاوية (داودي) وخلايا دودي غفب + باستخدام رمي و 75 سم 2 قوارير الثقافة. الحفاظ على الثقافات في 37 درجة مئوية في 5٪ كو 2 جو مرطب حتى تصل إلى 6 - 9 × 10 5 خلايا / مل.
    3. جعل 50 مل من تلطيخ العازلة عن طريق تمييع 1/100 H- إيفس في برنامج تلفزيوني. هذا العازلة مستقرة في 2-8 درجة مئوية لمدة شهر واحد على الأقل.
    4. إعداد حلول الاختبار للمرجعية و مبس مشابهة. جعل عشرة 1: 2 التخفيفات المسلسل (500 ميكرولتر لكل منهما) في العازلة تلطيخ، بدءا من 5 ميكروغرام / مل.
    5. استخدام العازلة تلطيخ لتخفيف إيغ الإنسان (السيطرة إيزوتيب) إلى 5 ميكروغرام / مل و بي-Cy5 الماوس إيغ لمكافحة الإنسان (الأجسام المضادة الثانوية) إلى يخدعوحدانية التركيز المقترح من قبل المصنع.
    6. إعداد بارافورمالدهيد 4٪ في برنامج تلفزيوني (عازلة التثبيت).
  2. هدف ملزم
    1. جمع داودي وتعليق خلية داودي GFP + من قوارير ثقافة 75 سم 2 ونقلها إلى أنبوب الطرد المركزي 15 مل. أجهزة الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 5 دقائق.
    2. غسل الخلايا بإضافة 5 مل من برنامج تلفزيوني والطرد المركزي تعليق خلية في 400 x ج لمدة 5 دقائق.
    3. Resuspend الخلايا في برنامج تلفزيوني وإجراء تعداد خلايا وتحليل الجدوى مع الأزرق التريبان. استخدام الثقافات مع مستويات بقاء الخلية ≥ 95٪ للتحليل.
    4. تمييع تعليق خلية إلى 4 × 10 6 خلية / مل مع العازلة تلطيخ الباردة.
    5. في أنابيب microcentrifuge 1.5 مل، إضافة 50 ميكرولتر من تعليق خلية إلى 100 ميكرولتر من تركيزات مختلفة من اختبار الإشارة أو MABS بدائل حيوية. تشمل مكررات لكل حالة تجريبية.
    6. إعداد أنابيب إضافية ل(IGG1 الإنسان بدلا من ريتوكسيماب) والسيطرة السلبية (الأجسام المضادة الثانوية دون الأجسام المضادة الأولية).
    7. احتضان في 4 درجات مئوية لمدة 20 - 30 دقيقة.
    8. غسل الخلايا عن طريق إضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني والطرد المركزي تعليق الخلية في 400 x ج لمدة 5 دقائق في 10 درجة مئوية. تجاهل طاف.
    9. تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من الأجسام المضادة الثانوية واحتضان لمدة 20 - 30 دقيقة في 4 درجات مئوية، محمية من الضوء.
    10. غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني وتعليقها في 200 ميكرولتر من العازلة التثبيت.
    11. تحليل الخلايا على مقياس التدفق الخلوي.
      ملاحظة: تظل إشارة مستقرة لعدة أيام إذا تم تخزين العينات في 4 درجات مئوية ومحمية من الضوء.
  3. الحصول على البيانات
    1. فتح اثنين من النقاط المؤامرة على ورقة عمل من برنامج تشغيل التدفق الخلوي. تعيين فسك-A مقابل فسك-H في الأولى و فسك-A مقابل سا-A في الثانية. افتح مخطط بياني لقناة بي-Cy5.
    2. في FSC-A مقابل FSC-H مؤامرة، وجعل باب (R1) اختيار الأحداث القميص (الشكل 1A).
    3. تعيين السكان R1 في FSC-A مقابل SSA-A دوت مؤامرة ثم جعل بوابة جديدة (R2) تحديد الخلايا المستهدفة (الشكل 1B). تعيين السكان R2 في الرسم البياني PE-Cy5 كثافة لعرض توزيع تردد من الخلايا.
    4. ضبط حد أدنى كثافة مضان (FI) للقناة PE-Cy5 باستخدام السيطرة السلبية ونمط إسوي (الشكل 1C).
    5. الحصول على 10000 الأحداث داخل R2 من العينة مع تركيز أعلى من الناتج إشارة. وينبغي أن يكون FI من هذه العينة أعلى من المتوقع (الشكل 1C).
    6. الحصول على بقية العينات.
    7. لكل عينة، احصل على كثافة مضان متوسط ​​(MFI) في قناة PE-Cy5.
    8. للعينات مع الإشارة أو بدائل حيوية ماب، حساب الفرق بين عينة مؤسسات التمويل الأصغر وذلك من isotype السيطرة (ΔMFI).

2. تقييم CDC

  1. إعداد المواد البيولوجية والكواشف
    1. إعداد الخلايا خلية ثقافة متوسطة والثقافة داودي وداودي GFP + كما هو موضح أعلاه (الخطوات 1.1.1 - 1.1.2).
      ملاحظة: بالإضافة إلى ذلك، فحص CDC يتطلب RPMI المصل خالية.
    2. تمييع العادي تكملة المصل البشري (NHSC) 1: 2 مع خالية من المصل RPMI. إعداد 2.5 مل.
    3. إعداد 1 مل من الحرارة المعطل (30 دقيقة / 56 ° C) NHSC المخفف 1: 2 مع RPMI.
    4. إعداد مجموعة من الاختبارات حلول للمرجعية وMABS بدائل حيوية في RPMI المصل خالية. إجراء عشر التخفيفات (200 ميكرولتر لكل منهما) 1-،025 ميكروغرام / مل.
  2. CDC فحص
    1. جمع الخلايا داودي وداودي GFP + من الثقافات وتحديد بقاء الخلية (انظر الخطوات 1.2.1 - 1.2.3).
    2. إعداد تعليق الخلية مع 4 × 10 5 خلية / مل في RPMI المصل خالية.
    3. إضافة50 ميكرولتر من تعليق خلية إلى 50 ميكرولتر من كل مرجع أو بيوسيميلار تركيز تركيز ماب في 96-جيدا مخروطي (V) -الفلتر الصغير. تضمين النسخ المتماثلة لكل حالة تجريبية.
    4. إعداد آبار إضافية للسيطرة السلبية ( أي بدون ماب)، والسيطرة على الموت القاعدية ( أي الحرارة معطل نهسك في وجود ماب)، وتلطيخ السيطرة الإيجابية ( أي الخلايا المعرضة ل 50 ميكرولتر من إتوه 70٪).
    5. احتضان الخلايا لمدة 20 - 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في 5٪ كو 2 جو مرطب.
    6. إضافة 50 ميكرولتر من نسك (المخفف 1: 2) إلى كل بئر واحتضان الخلايا أوبوسونيزد لمدة 2.5 ساعة عند 37 درجة مئوية في جو 2٪ ترطيب كو 2 ٪. استخدام الحرارة المعطلة نهسك في الآبار القاعدية لمراقبة الموت.
    7. أجهزة الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 5 دقائق في 10 درجة مئوية. تجاهل طاف.
    8. غسل الخلايا عن طريق إضافة 150 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني والطرد المركزي تعليق الخلية لمدة 5 دقائق في 400 x ج و 10 درجة مئوية. ديscard طاف.
    9. وصمة عار على عينات مع 7-aminoactinomycin (7-AAD)، كما هو موضح سابقا 7 و 8.
    10. تحليل الخلايا على عداد الكريات تدفق في نفس اليوم.
  3. الحصول على البيانات
    1. فتح اثنين الدوت المؤامرات على ورقة عمل لقياس التدفق الخلوي برنامج التشغيل. وضع هذه المؤامرات كما في الخطوات 1.3.1 - 1.3.3 (الشكل 2A-B). إنشاء مؤامرة الثالثة التي هي مؤامرة نقطة لGFP مقابل 7-AAD على السكان R2.
    2. تعريف حدود FI كافية باستخدام خلايا داودي، داودي GFP + الخلايا، ومراقبة إيجابية الموت (الشكل 2C).
    3. لكل عينة، وقياس النسبة المئوية للخلايا 7-AAD + الهدف. الحصول على ما لا يقل عن 5000 من الأحداث R2.
    4. حساب سمية الخلايا المحددة الناجمة عن ماب-بطرح نسبة 7-AAD + في السيطرة الموت القاعدية من نسبة جدت في عينات مع تختلفوتركيزات إنت من مابس ( الشكل 2D ).

3. تحليل بيوسيماليتي

  1. أدخل قيم التركيز والاستجابة في برنامج رسوم بيانية.
  2. توليد الرسوم البيانية وحساب الانحدارات غير الخطية مع الاعتبارات التالية: 1) استخدام سجل التحول من تركيز ماب كما "X". 2) استخدام النموذج الرياضي المنحدر المتغير (Y = الحد الأدنى من الاستجابة + (الاستجابة القصوى - الحد الأدنى من الاستجابة) / 1 + 10 ^ ((لوجيك 50 -X) * منحدر هيل))؛ و 3) تقييد القيم السفلية إلى الصفر، حيث تم طرح الاستجابة القاعدية.
    ملاحظة: ومن المتوقع المنحنيات مع شكل سيني متناظرة.
  3. قارن كل من غير الخطية يناسب مع تناسب عالمي باستخدام اختبار F (العديد من برامج الرسوم البيانية وتشمل هذه الميزة).
    ملاحظة: هذه الاختبارات تنص على فرضية نول أن الاستجابة القصوى، لوجيك 50 ، ومنحدر هيل هي نفسها لمجموعتي البيانات، والذي يطابقمسألة بيولوجية يعتزم معالجتها.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باستخدام البروتوكولات المذكورة أعلاه، تستهدف ملزمة وتمت مقارنة تحريض CDC ريتوكسيماب إشارة بالتوازي مع تلك ريتوكسيماب بدائل حيوية تنتج ومتاحة تجاريا في آسيا.

في الخلايا داودي، سواء MABS ملزمة CD20 بطريقة تعتمد على التركيز (1D الشكل). عرض الانحدار غير الخطية من البيانات ملزمة لص 2 من 0،978 و0.848 لتكون مرجعا وريتوكسيماب بد...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إن انتهاء صلاحية براءة اختراع ماب العلاجي هو تشجيع تطوير بيوسيميالز. وبالتالي، هناك حاجة إلى أساليب بسيطة يمكن أن تحدد الاختلافات في الأنشطة ذات الصلة سريريا من هذه المنتجات. تم استخدام CD20 + الخلايا المستزرعة لتقييم اثنين من الخصائص الوظيفية الرئيسية لل ريتوكسيماب: الهدف ملزمة و سدك الحث. النشاط السابق يتطلب الاعتراف CD20 من قبل منطقة فاب من ماب، في حين أن هذا الأخير يعتمد أساسا على التفاعل من منطقة فك مع تكملها 9 . لذلك، هذه المقايسات توفر وسي...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

N. ساليناس، ياسمين، E. غونزاليس غونزاليس، وSM بيريز تابيا هم موظفون من UDIBI، الذي يؤدي الدراسات biosimilarity لعدة شركات الأدوية.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم الاعترافات.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
RPMI-1640 متوسطATCC30-2001قم بتعديل المزرعة اعتمادا على خط الخلية
محلول Trypan BlueSigmaT81540.4٪ ، سائل ، مفلتر معقم ، مناسب لزراعة الخلايا
سرطان الغدد الليمفاوية داودي بوركيتATCCCCL-213يمكنك تعديل خط الخلية اعتمادا على الجسم المضاد محل الاهتمام
مصل الأبقار الجنيني (FBS)جيبكو16000-044يمكنك تعديل مصدر المصل اعتمادا على متطلبات خط الخلية
Normal Human Serum ComplementQuidelA113لذلك فهو مناسب للاستخدام في تجارب التوافق الحيوي بما في ذلك تطوير الأدوية واختبار المواد الحيوية والتطبيقات الأخرى
7AA-DBDPharmigen559925يمكنك استخدام مجموعة واسعة من خيارات الألوان ، المتوافقة مع معظم تكوينات الأدوات لتحليل الجدوى.
PECy5 Mouse Anti-Human IgGBDPharmigen551497قم بتغيير الفلوروكروم اعتمادا على الفلتر والليزر لمقياس التدفق
بك التحكم في النمط المتنظير البشريIgG ThermoFisher Scientific07-7102التغيير اعتمادا على mAb
BDCytofixBDPharmigen554655التدفق الخلوي التثبيت المؤقت (1-4٪ فورمالديهايد أو بارافورمالدهايد)
PBS درجة الحموضة 7.4 10x (عازلة الفوسفات محلول ملحي)GIBCO70011-044Phosphatebuffer بدون Ca2 + < / sup> / Mg 2 + < / sup> [137 ملي كلوريد الصوديوم ، 2.7 ملي كلوريد كلوريد ، 8 ملي مولار Na 2< / sub>HPO4< / sub> ، 1.46 ملي مولار KH2< / sub>PO4< / sub>] وخالي من السموم الداخلية.
ألواح زراعة الخلايا 96 بئر ، V-bottomCorning29442-068أنابيب اختبار القاع المستديرة 12 × 75 مم أو 96 بئر V- أو U- أسفل لوحات microtiter
MabThera (Rituximab)روشو [مدش] ؛المنتج المرجعي
ريتوكسيمابهندي و [مدش] ؛منتج البدائل الحيوية
أنابيب الطرد المركزي المخروطية 15 أو 50 ملCorning430290 أو 430052& [مدش] ؛
نصائح الماصةEppendorf&[مدش] ؛تكوينات وحدة تخزين متعددة ضرورية
PipettesEppendorf& [مدش] ؛الماصات ذات الحجم القابل للتعديل ضرورية
جهاز طرد مركزي 5430 / 5430R موديلEppendorf& [مدش] ؛جهاز طرد مركزي مبرد متغير السرعة (4 إلى 25 درجة ؛ ج) بسرعات تتراوح من 10 إلى 30،130 مرة ؛ ز
مقياس التدفق الخلويBD Dickinson& [مدش] ؛BD FACSAria III أو مقياس التدفق الخلوي الآخر
أوليمبوس المجهر البصري والضوئيأوليمبوسو [مدش] ؛لتحديد وتقييم نمو الخلايا
حاضنةسانيوو [مدش] ؛حاضنة لدرجة الحرارة والتحكم في ثاني أكسيد الكربون2< / فرعي> لخلايا المزرعة
خزانة السلامة البيولوجيةCHC BIOLUS&[مدش] ؛خزانة السلامة البيولوجية التي تستخدم لحماية الباحث والمنتج والبيئة.
خلايا الخلوي الخاص

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Schimizzi, G. F. Biosimilars from a practicing rheumatologist perspective: An overview. Autoimmun Rev. 15 (9), 911-916 (2016).
  2. Cuello, H. A., et al. Comparability of Antibody-Mediated Cell Killing Activity Between a Proposed Biosimilar RTXM83 and the Originator Rituximab. Bio Drugs. 30 (3), 225-231 (2016).
  3. Iwamoto, N., et al. Validated LC/MS Bioanalysis of Rituximab CDR Peptides Using Nano-surface and Molecular-Orientation Limited (nSMOL) Proteolysis. Biol Pharm Bull. 39 (7), 1187-1194 (2016).
  4. World Health Organization. Guidelines on evaluation of monoclonal antibodies as similar biotherapeutic products (SBPs). , Available from: http://www.who.int/biologicals/expert_committee/mAb_SBP_GL-ECBS_review_adoption-2016.10.26-11.7post_ECBS-Clean_Version.pdf (2016).
  5. Chapman, K., et al. Waiving in vivo studies for monoclonal antibody biosimilar development: National and global challenges. MAbs. 8 (3), 427-435 (2016).
  6. EMA, EMEA/CHMP/BMWP/42832/2005 Rev1. Guideline on similar biological medicinal products containing biotechnology-derived proteins as active substance: non-clinical and clinical issues. , Available from: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2015/01/WC500180219.pdf (2014).
  7. Zembruski, N. C., et al. 7-Aminoactinomycin D for apoptosis staining in flow cytometry. Anal Biochem. 429 (1), 79-81 (2012).
  8. Salinas-Jazmin, N., Hisaki-Itaya, E., Velasco-Velazquez, M. A. A flow cytometry-based assay for the evaluation of antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) in cancer cells. Methods Mol Biol. 1165, 241-252 (2014).
  9. Teeling, J. L., et al. The Biological Activity of Human CD20 Monoclonal Antibodies Is Linked to Unique Epitopes on CD20. J Immunol. 177 (1), 362-371 (2006).
  10. Miranda-Hernandez, M. P., et al. Assessment of physicochemical properties of rituximab related to its immunomodulatory activity. J Immunol Res. 2015, 910763(2015).
  11. Visser, J., et al. Physicochemical and functional comparability between the proposed biosimilar rituximab GP2013 and originator rituximab. BioDrugs. 27 (5), 495-507 (2013).
  12. Ylera, F., et al. Off-rate screening for selection of high-affinity anti-drug antibodies. Anal Biochem. 441 (2), 208-213 (2013).
  13. Broyer, L., Goetsch, L., Broussas, M. Evaluation of complement-dependent cytotoxicity using ATP measurement and C1q/C4b binding. Methods Mol Biol. 988, 319-329 (2013).
  14. Herbst, R., et al. B-cell depletion in vitro and in vivo with an afucosylated anti-CD19 antibody. J Pharm Exp Ther. 335 (1), 213-222 (2010).
  15. Lazar, G. A., et al. Engineered antibody Fc variants with enhanced effector function. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (11), 4005-4010 (2006).
  16. Winiarska, M., et al. Statins impair antitumor effects of rituximab by inducing conformational changes of CD20. PLoS medicine. 5 (3), e64(2008).
  17. Zhou, X., Hu, W., Qin, X. The role of complement in the mechanism of action of rituximab for B-cell lymphoma: implications for therapy. Oncologist. 13 (9), 954-966 (2008).
  18. Hayashi, K., et al. Gemcitabine enhances rituximab-mediated complement-dependent cytotoxicity to B cell lymphoma by CD20 upregulation. Cancer Sci. 107 (5), 682-689 (2016).
  19. Mossner, E., et al. Increasing the efficacy of CD20 antibody therapy through the engineering of a new type II anti-CD20 antibody with enhanced direct and immune effector cell-mediated B-cell cytotoxicity. Blood. 115 (22), 4393-4402 (2010).
  20. Lapalombella, R., et al. A novel Raji-Burkitt's lymphoma model for preclinical and mechanistic evaluation of CD52-targeted immunotherapeutic agents. Clin Cancer Res. 14 (2), 569-578 (2008).
  21. Mitoma, H., et al. Mechanisms for cytotoxic effects of anti-tumor necrosis factor agents on transmembrane tumor necrosis factor alpha-expressing cells: comparison among infliximab, etanercept, and adalimumab. Arthritis Rheum. 58 (5), 1248-1257 (2008).
  22. Kaymakcalan, Z., et al. Comparisons of affinities, avidities, and complement activation of adalimumab, infliximab, and etanercept in binding to soluble and membrane tumor necrosis factor. Clin Immunol. 131 (2), 308-316 (2009).
  23. Zent, C. S., et al. Direct and complement dependent cytotoxicity in CLL cells from patients with high-risk early-intermediate stage chronic lymphocytic leukemia (CLL) treated with alemtuzumab and rituximab. Leuk Res. 32 (12), 1849-1856 (2008).
  24. Goswami, M. T., et al. Regulation of complement-dependent cytotoxicity by TGF-beta-induced epithelial-mesenchymal transition. Oncogene. 35 (15), 1888-1898 (2016).
  25. Wang, A., et al. Induction of anti-EGFR immune response with mimotopes identified from a phage display peptide library by panitumumab. Oncotarget. , (2016).
  26. Ueda, N., et al. The cytotoxic effects of certolizumab pegol and golimumab mediated by transmembrane tumor necrosis factor alpha. Inflamm Bowel Dis. 19 (6), 1224-1231 (2013).
  27. Nesbitt, A., et al. Mechanism of action of certolizumab pegol (CDP870): in vitro comparison with other anti-tumor necrosis factor alpha agents. Inflamm Bowel Dis. 13 (11), 1323-1332 (2007).
  28. Teeling, J. L., et al. Characterization of new human CD20 monoclonal antibodies with potent cytolytic activity against non-Hodgkin lymphomas. Blood. 104 (6), 1793-1800 (2004).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Therapeutic AntibodiesTarget BindingCDC InductionBiosimilarity AnalysisRituximab BiosimilarDaudi CellsIn Vitro MethodsFunctional ComparisonAntibody EvaluationQuality Control

Related Articles