Method Article

في طرق المختبر لمقارنة الهدف وتجليد وCDC التعريفي بين الأجسام المضادة العلاجية: تطبيقات في تحليل Biosimilarity

DOI:

10.3791/55542

⸱

May 4th, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Unit for Development and Research in Bioprocesses Unit (UDIBI), National School of Biological Sciences, National Polytechnic Institute (IPN), University of Mexico (UNAM), 2School of Chemistry, National Autonomous University of Mexico (UNAM), 3Graduate Program in Chemical Sciences, National Autonomous University of Mexico (UNAM), 4Unit for Development Research and Medical Innovation in Biotechnology (UDIMEB), National School of Biological Sciences, National Polytechnic Institute (IPN), 5Department of Immunology, National Scool of Biological Sciences, National Polytechnic Institute (IPN), 6Department of Pharmacology and Unit of Translational Biomedicine (CMN 20 de noviembre), School of Medicine, National Autonomous University of Mexico (UNAM)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول المقارنة في المختبر من اثنين من الخصائص الوظيفية الرئيسية لريتوكسيماب: الهدف ملزمة والسمية الخلوية (CDC) الحث تعتمد تكمل. وقد استخدمت أساليب مقارنة جنبا إلى جنب بين ريتوكسيماب مرجعية وبدائل حيوية ريتوكسيماب. هذه المقايسات يمكن استخدامها خلال تطوير بدائل حيوية أو لمراقبة الجودة في إنتاجها.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الاجسام المضادة العلاجية (MABS) هي ذات الصلة لعلاج الأمراض المختلفة، بما في ذلك السرطان. تطوير MABS بدائل حيوية من قبل شركات الأدوية هي فرصة السوق، ولكنها أيضا استراتيجية لزيادة إمكانية الوصول المخدرات والحد من التكاليف المرتبطة العلاج. البروتوكولات بالتفصيل هنا تصف تقييم هدف ملزم وCDC تحريض من قبل ريتوكسيماب في الخلايا داودي. تتطلب هذه الوظائف منطقتين هيكلية مختلفة من الأجسام المضادة وهي ذات الصلة الاثر السريري الناجم عن ريتوكسيماب. البروتوكولات تسمح للمقارنة جنبا إلى جنب من ريتوكسيماب مرجعية وبدائل حيوية ريتوكسيماب تسويقها. وأظهرت المنتجات تقييم الاختلافات في كل من هدف ملزم وCDC تحريض، مما يوحي بأن هناك اختلافات الفيزيائية الأساسية وتسليط الضوء على الحاجة إلى تحليل أثر هذه الاختلافات في إعداد سريرية. الأساليب ذكرت هنا تمثل بسيطة وغير مكلفة في المختبر </ em> نماذج لتقييم نشاط البدائل الحيوية ريتوكسيماب. وبالتالي، فإنها يمكن أن تكون مفيدة خلال تطوير بدائل حيوية، فضلا عن مراقبة الجودة في إنتاج بدائل حيوية. وعلاوة على ذلك، وأساليب عرض يمكن استقراء لMABS العلاجية الأخرى.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأجسام المضادة العلاجية هي الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المؤتلف (مابس) وضعت لعلاج أمراض مختلفة، بما في ذلك السرطان، المناعة الذاتية والأمراض المزمنة، واضطرابات عصبية، وغيرها 1 . حاليا، وافقت ادارة الاغذية والعقاقير الموافقة على أكثر من 40 مابس العلاجية، وأكثر من المتوقع أن تصل إلى السوق في السنوات التالية.

ريتوكسيماب هو عالية تقارب خيالية أحادي النسيلة IgG1 الأجسام المضادة المعتمدة لعلاج CD20 + B خلية سرطان الغدد الليمفاوية غير هودجكين (نهل)، CD20 + نهل الجريبي، سرطان الدم الليمفاوي المزمن، والتهاب المفاصل الروما....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تقييم الهدف ربط بواسطة التدفق الخلوي

  1. إعداد المواد البيولوجية والكواشف
    1. جعل 500 مل من وسط ثقافة رمي تستكمل مع 10٪ مصل الدم البقري الجنين المعطل (H-إفبس).
    2. ثقافة داودي بوركيت خلايا الغدد الليمفاوية (داودي) وخلايا دودي غفب + باستخدام رمي و 75 سم 2 قوارير الثقافة. الحفاظ على الثقافات في 37 درجة مئوية في 5٪ كو 2 جو مرطب حتى تصل إلى 6 - 9 × 10 5 خ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باستخدام البروتوكولات المذكورة أعلاه، تستهدف ملزمة وتمت مقارنة تحريض CDC ريتوكسيماب إشارة بالتوازي مع تلك ريتوكسيماب بدائل حيوية تنتج ومتاحة تجاريا في آسيا.

في الخلايا داودي، سواء MABS ملزمة CD20 بطريقة تعتمد على التركيز (1D الشكل). عرض الانحدار غير الخطية من البيانات ملزمة لص 2 من 0،978 و0.848 لتكون مرجعا وريتوكسيماب بد.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إن انتهاء صلاحية براءة اختراع ماب العلاجي هو تشجيع تطوير بيوسيميالز. وبالتالي، هناك حاجة إلى أساليب بسيطة يمكن أن تحدد الاختلافات في الأنشطة ذات الصلة سريريا من هذه المنتجات. تم استخدام CD20 + الخلايا المستزرعة لتقييم اثنين من الخصائص الوظيفية الرئيسية لل ريتوكسيماب: الهدف ملزمة و سدك الحث. النشاط السابق يتطلب الاعتراف CD20 من قبل منطقة فاب من ماب، في حين أن هذا الأخير يعتمد أساسا على التفاعل من منطقة فك مع تكملها 9 . لذلك، هذه المقايسات توفر وسي.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

N. ساليناس، ياسمين، E. غونزاليس غونزاليس، وSM بيريز تابيا هم موظفون من UDIBI، الذي يؤدي الدراسات biosimilarity لعدة شركات الأدوية.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم الاعترافات.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
RPMI-1640 متوسطATCC30-2001قم بتعديل المزرعة اعتمادا على خط الخلية
محلول Trypan BlueSigmaT81540.4٪ ، سائل ، مفلتر معقم ، مناسب لزراعة الخلايا
سرطان الغدد الليمفاوية داودي بوركيتATCCCCL-213يمكنك تعديل خط الخلية اعتمادا على الجسم المضاد محل الاهتمام
مصل الأبقار الجنيني (FBS)جيبكو16000-044يمكنك تعديل مصدر المصل اعتمادا على متطلبات خط الخلية
Normal Human Serum ComplementQuidelA113لذلك فهو مناسب للاستخدام في تجارب التوافق الحيوي بما في ذلك تطوير الأدوية واختبار المواد الحيوية والتطبيقات الأخرى
7AA-DBDPharmigen559925يمكنك استخدام مجموعة واسعة من خيارات الألوان ، المتوافقة مع معظم تكوينات الأدوات لتحليل الجدوى.
PECy5 Mouse Anti-Human IgGBDPharmigen551497قم بتغيير الفلوروكروم اعتمادا على الفلتر والليزر لمقياس التدفق
بك التحكم في النمط المتنظير البشريIgG ThermoFisher Scientific07-7102التغيير اعتمادا على mAb
BDCytofixBDPharmigen554655التدفق الخلوي التثبيت المؤقت (1-4٪ فورمالديهايد أو بارافورمالدهايد)
PBS درجة الحموضة 7.4 10x (عازلة الفوسفات محلول ملحي)GIBCO70011-044Phosphatebuffer بدون Ca2 + < / sup> / Mg 2 + < / sup> [137 ملي كلوريد الصوديوم ، 2.7 ملي كلوريد كلوريد ، 8 ملي مولار Na 2< / sub>HPO4< / sub> ، 1.46 ملي مولار KH2< / sub>PO4< / sub>] وخالي من السموم الداخلية.
ألواح زراعة الخلايا 96 بئر ، V-bottomCorning29442-068أنابيب اختبار القاع المستديرة 12 × 75 مم أو 96 بئر V- أو U- أسفل لوحات microtiter
MabThera (Rituximab)روشو [مدش] ؛المنتج المرجعي
ريتوكسيمابهندي و [مدش] ؛منتج البدائل الحيوية
أنابيب الطرد المركزي المخروطية 15 أو 50 ملCorning430290 أو 430052& [مدش] ؛
نصائح الماصةEppendorf&[مدش] ؛تكوينات وحدة تخزين متعددة ضرورية
PipettesEppendorf& [مدش] ؛الماصات ذات الحجم القابل للتعديل ضرورية
جهاز طرد مركزي 5430 / 5430R موديلEppendorf& [مدش] ؛جهاز طرد مركزي مبرد متغير السرعة (4 إلى 25 درجة ؛ ج) بسرعات تتراوح من 10 إلى 30،130 مرة ؛ ز
مقياس التدفق الخلويBD Dickinson& [مدش] ؛BD FACSAria III أو مقياس التدفق الخلوي الآخر
أوليمبوس المجهر البصري والضوئيأوليمبوسو [مدش] ؛لتحديد وتقييم نمو الخلايا
حاضنةسانيوو [مدش] ؛حاضنة لدرجة الحرارة والتحكم في ثاني أكسيد الكربون2< / فرعي> لخلايا المزرعة
خزانة السلامة البيولوجيةCHC BIOLUS&[مدش] ؛خزانة السلامة البيولوجية التي تستخدم لحماية الباحث والمنتج والبيئة.
خلايا الخلوي الخاص

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Schimizzi, G. F. Biosimilars from a practicing rheumatologist perspective: An overview. Autoimmun Rev. 15 (9), 911-916 (2016).
  2. Cuello, H. A., et al. Comparability of Antibody-Mediated Cell Killing Activity Between a P....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Therapeutic AntibodiesTarget BindingCDC InductionBiosimilarity AnalysisRituximab BiosimilarDaudi CellsIn Vitro MethodsFunctional ComparisonAntibody EvaluationQuality Control

Related Articles