يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

رواية الفحص لالباردة حس الألم في

7.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/55568

⸱

أبريل 3, 2017

 ,  , 
1Department of Genetics, UT MD Anderson Cancer Center, 2Neuroscience Program, Graduate School of Biomedical Sciences at Houston, 3ProDev Engineering, 4Genes and Development Program, Graduate School of Biomedical Sciences at Houston, 5Section of Neurobiology, University of Southern California

في هذه المقالة

ملخص

نحن هنا لشرح فحص رواية لدراسة حس الألم البارد في يرقات ذبابة الفاكهة. هذا الاختبار يستخدم لبلتيير التحقيق مبنية خصيصا قادرة على تطبيق حافز البارد الضارة التنسيق والنتائج القابلة للقياس في السلوكيات الباردة محددة. وهذه التقنية تسمح مزيد من تشريح الخلوية والجزيئية من حس الألم البارد.

الملخص

كيف الكائنات العقل والاستجابة لدرجات الحرارة الضارة لا تزال غير مفهومة. وعلاوة على ذلك، فإن الآليات الكامنة للتوعية الآلية الحسية، كما هو الحال في مرضى الذين يعانون من اعتلال الأعصاب المحيطية أو توعية الإصابة التي يسببها، لا يتميز أيضا. تم استخدام نموذج ذبابة الفاكهة لين العريكة وراثيا لدراسة الخلايا والجينات اللازمة لكشف الحرارة الضارة، التي أسفرت عن الجينات الحفاظ متعددة من الفائدة. لا يعرف إلا القليل عن ذلك الخلايا ومستقبلات مهمة للاستشعار البارد الضارة. وعلى الرغم من ذبابة الفاكهة لا البقاء على قيد الحياة التعرض لفترات طويلة لدرجات الحرارة الباردة (≤10 درجة مئوية)، وسوف تجنب بارد، مفضلا ارتفاع درجات الحرارة في المقايسات تفضيل السلوكية، وكيف تشعر وربما تجنب المحفزات الباردة الضارة في الآونة الأخيرة تم التحقيق فقط.

نحن هنا وصف وتوصيف أول البرد الضارة (≤10 درجة مئوية) الفحص السلوكي فيذبابة الفاكهة. استخدام هذه الأداة وفحص، وتبين لنا محقق كيفية تقييم نوعيا وكميا السلوكيات مسبب للألم الباردة. ويمكن القيام بذلك في ظل ظروف طبيعية ثقافة / صحية، أو يفترض في سياق المرض أو الإصابة أو التوعية. وعلاوة على ذلك، يمكن تطبيق هذا الاختبار على اليرقات التي اختيرت لالمورثات المرغوبة، والتي قد تؤثر thermosensation، والألم، أو التوعية مسبب للألم. وبالنظر إلى أن الألم هو عملية الحفظ جدا، وذلك باستخدام هذا الاختبار إلى مزيد من الدراسة حس الألم الحراري ومن المرجح أن جمع التفاهم مهم من العمليات الألم في الأنواع الأخرى، بما في ذلك الفقاريات.

المقدمة

وقد ثبت ذبابة الفاكهة أن تكون مفيدة للغاية لتحديد الجينات رواية حفظها والدوائر العصبية التي تكمن وراء السلوك المعقد. توفر الذباب مجموعة أدوات الجينية المتطورة والجهاز العصبي مبسطة التي تتيح دقة الجيني والخلايا العصبية التلاعب 1، 2، 3، 4 لتشريح الأسس الخلوية والجزيئية من حس الألم 5 و 6 و 7. اليرقات هي مفيدة بشكل خاص لهذه التحليلات، بالنظر إلى أن فحوصات السلوكية لمسة رقيقة 8 و 9 و 10 و الحرارة الضارة 11 و 12 و 13 و الإحساس الميكانيكية من المحفزات الضارة 4، وقد تم بالفعل إنشاء 11، وإهاب اليرقات شفافة يسمح للتصوير الحية أو ثابت من البشرة والخلايا العصبية الحسية الأساسية. في الآونة الأخيرة، كما تم تطوير مقايسة لالباردة الضارة 7، والذي وصفنا في المزيد من التفاصيل هنا.

باستخدام ما يرام، والمخروطية ذات الرؤوس التحقيق البارد، وتبين لنا أن يرقات ذبابة الفاكهة المعرض مجموعة من السلوكيات رد الفعل الباردة محددة، تختلف عن السلوكيات التي لوحظت خلال الحركة العادية، وبعد لمسة رقيقة، أو بعد القاسية الميكانيكية أو ارتفاع في درجة الحرارة المحفزات 7 و 8 و 11 . وتشمل السلوكيات الباردة محددة انكماش قوي لكامل الجسم (CT)، ورفع 45-90º للقطاعات الخلفي (PR) ورفع في وقت واحد الأمامية والخلفية قطاعات في U-الشكل (US). انتشار هذه السلوكيات يزداد مع انخفاض درجات الحرارة ولكن في كل القمم في الصورةمختلفة طفيفة درجات الحرارة الباردة. الأعمال الأخيرة تشير إلى أن الردود CT وتوسط من قبل مختلف الخلايا العصبية الحسية المحيطية من تلك التي تستجيب للحرارة الضارة أو المنبهات الميكانيكية القاسية 7.

مثل الكثير من nociceptors الفقاريات، ذبابة الفاكهة شجيري متعددة (MD) الخلايا العصبية الحسية المحيطية وجود هياكل شجيري المعقدة التي arborize على البشرة 1. الخلايا العصبية MD موجودة في كل شريحة هيئة اليرقات، وإسقاط محاور لالحبل العصبي البطني 14. يتم فصل الخلايا العصبية الحسية MD إلى أربع فئات مختلفة (I-IV) على أساس التشكل شجيري ووتتراوح الوظائف الحسية 4، 9، 10، 15، 16، 17. في حين أن الخلايا العصبية في الصف الرابع اللازمة لردود لفة الجسم الجانبي اليرقاتلدرجات حرارة عالية أو المنبهات الميكانيكية قاسية 4، والطبقة يطلب III الخلايا العصبية للاستجابة لمسة رقيقة 9 و 10 و لا يتم تفعيلها إلا من خلال الباردة، ولكن أيضا مطلوبة لالاستجابات السلوكية أثار الباردة-7. كل من الدرجة الثالثة والدرجة IV الخلايا العصبية تستخدم منفصلة مستقبلات عابرة المحتملة (TRP) قنوات لتسهيل الاستجابات السلوكية لالضارة 7 و 11 و 18 و المحفزات 9، 10، 17، 19 غير الضارة. وعلاوة على ذلك، وتوعية حس الألم اليرقات إصابة التالية، على الصعيدين الخلوية 20 و السلوكية 12، 21.

مقايسة الموصوفة هنا يسمح للquantificatioن أي من المعتاد، أو يحتمل أن تغير الاستجابات السلوكية لدرجات الحرارة الباردة التي تتراوح بين البرد الضارة (≤ 10 درجة مئوية)، بارد حميدة (11-17 درجة مئوية)، ودرجات الحرارة المحيطة (18-22 درجة مئوية). درجات الحرارة الباردة المستخدمة في هذا الاختبار هي قادرة على تفعيل مباشرة من الطبقة الثالثة الخلايا العصبية الحسية، انتزاع قوية، وزيادة الكالسيوم استنساخه والاستجابات السلوكية أثار الباردة، والتي يمكن أن يكون نوعيا وكميا تحليلها 7. هذا الاختبار يمكن تطبيقها على يرقات أي الوراثي تقريبا فضلا عن اليرقات تتعرض لظروف بيئية مختلفة (التغذية تتغير الإصابة، وكلاء الدوائية) لتحديد العوامل الوراثية والبيئية على حد سواء التي تؤثر على حس الألم البارد، والتوعية مسبب للألم أو ليونة مسبب للألم. وبالنظر إلى أن thermosensation في كل مكان عبر العديد من الأنواع، يوفر هذا الاختبار أداة قيمة لدراسة حس الألم وقد كشف أهداف الجينات رواية أو التفاعلات العصبية التي من شأنها تحسينفهمنا من حس الألم الفقاريات.

التحقيق البارد مبنية خصيصا (انظر التحقيق البارد، جدول المواد) يستخدم في درجة الحرارة حلقة مغلقة تسيطر عليها الجهاز بلتيير، الذي يبرد رمح الألومنيوم ورأس مخروطي الشكل من خلال التوصيل الحراري. تم تضمين الثرمستور داخل غيض الألومنيوم المخروطية تقارير درجة الحرارة في الوقت الحقيقي على وحدة التحكم. وترد بالوعة الحرارة ومروحة وحدة حرارية لتنظيم الحمل تأثير بلتيير في الحرارة (مراقبة الجودة) حتى مدى درجة الحرارة المطلوبة من (22-0 ° C) لا يمكن أن يتحقق (انظر وحدة تحكم الحرارية، جدول المواد). يتم تطبيق التحفيز البارد الضارة من تلميح التحقيق البارد من جهة، إلى خط الوسط ظهري، إلى شريحة (ق) على مسافة واحدة من طرفي الأمامية والخلفية (تقريبا شريحة A4، انظر الشكل 1A) من اليرقة. وردا على المحفزات الباردة، اليرقات تنتج عادة واحد من ثلاثة السلوكيات أثار الباردة ضمن 10 ثانية قطع: كامل الجسمانكماش (CT)، ورفع 45-90º من الأمامية والخلفية قطاعات في U-الشكل (US)، أو رفع للقطاعات الخلفي (PR) (الموصوفة في نتائج). يتم تنفيذ أيا من هذه السلوكيات أثناء الحركة تحوي العادي أو السلوك تستخدم علفا. هذه السلوكيات هي أيضا متميزة من ردود مسة لطيفة واستجابة المتداول مكره لدرجات الحرارة العالية أو المنبهات الميكانيكية الضارة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. إعداد اليرقات

  1. رفع الأسهم أو الصلبان الوراثية في حاضنة 25 درجة مئوية.
    1. إذا زرع الصليب، استخدم 20-25 الإناث البكر و15-20 ذكور في قارورة تحتوي على وسائل الاعلام دقيق الذرة الطيران العادية. السماح الإناث لوضع البيض لحوالي 48 ساعة قبل نقلهم إلى قارورة جديدة من المواد الغذائية.
  2. بعد 4-5 أيام البيض العلمانيين، وجمع 3 طور مرحلي الثالثة اليرقات من النمط الجيني المطلوب من قبل التدفق بلطف مجرى المياه إلى الطعام طري واليرقات، ومن اجل الخروج من المحتويات في، طبق بتري نظيفة متوسطة الحجم (60 ملم × 15 مم).
  3. بعد ذلك، فرز بلطف اليرقات من حيث الحجم باستخدام ملقط أو الفرشاة لمنع أكبر "يتجول الطور 3 الثالثة" أو اليرقات غث صغيرة من التي يجري اختبارها. اليرقات تجاهل تحتوي على أي علامات أو موازنات الوراثية غير مرغوب فيها.
  4. هل لديك زميل أطباق تسمية أعضاء المختبر أو حاويات حيث سيتم وضع اليرقات مرتبة بحيث المجرب يمكن أن يكون "الأعمى" لالسابقينحالة perimental أو التركيب الوراثي لليرقات إن وجدت. المجرب يمكن تطبيق تسميات فك الشفرة إلى البيانات التي تم جمعها بعد التجربة باستخدام مفتاح التي تم إنشاؤها بواسطة أعضاء المختبر.
  5. باستخدام سكوبولا، نقل كمية سنتات الحجم من المواد الغذائية الطازجة إلى (35 ملم × 10 ملم أو 60 ملم × 15 ملم) نظيفة، وصفت طبق بيتري شغل في منتصف الطريق مع الماء درجة حرارة الغرفة.
  6. تحرك بلطف اليرقات مرتبة على الطعام (لمنع المجاعة أو الجفاف إذا كان من المتوقع اختبار ليستغرق أكثر من 20 دقيقة) باستخدام ملقط أو الفرشاة.

2. الباردة مسبار الفحص

  1. تشغيل وحدة التحقيق الباردة والسماح لعدد قليل من دقيقة حتى تبرد إلى درجة الحرارة المطلوبة. إذا الإعداد لدرجات حرارة منخفضة، والتكثيف من المحتمل تشكل جنبا إلى جنب التحقيق.
  2. امسحي أي الرطوبة الزائدة مع مختبر مسح قبل التطبيق لاليرقة. عندما لا تكون قيد الاستعمال المباشر، مكان العزل غطاء على التحقيق لكلا عزل وللحفاظ على طرف نظيفة ومنع الضرر.
  3. وضع منتصف 3 الثالثة طور مرحلي اليرقة على قطعة رقيقة من الفينيل المنقولة الظلام (عادة استخدام قطعة صغيرة من قطع الموثق دفتر) تحت المجهر مشرق الميدان. المساعدات الفينيل السوداء في التصور وعلى النقيض من في تحريك يرقة دون لمسها لمحاذاة بشكل صحيح مع لجنة التحقيق.
  4. ضبط المجهر (انظر جدول المواد) وحدة الضوء (انظر جدول المواد) إلى سطوع المتوسط (50-75٪ كحد أقصى سطوع) لتوفير التباين ومنع اليرقات من الجفاف بسرعة كبيرة جدا.
  5. تجاهل أي اليرقات التي لا تظهر لأول مرة تنقل تحوي العادي لأنها يمكن أن يتغلب على النتائج. يجب أن تكون اليرقة رطبة من طبق بيتري من الماء وإلا فإن يرقة ستلتزم الفينيل تثبيط الحركة العادي. يجب أن المياه لا بركة حول يرقة.
  6. تقدم التحقيق باليد نحو اليرقة في 90º زاوية إلى المحور الأمامي الخلفي الجسم، وذلك باستخدام الفينيل لنقل اليرقة إلى كورموقف مصحح (انظر الشكل 1A).
  7. الشرق غيض من التحقيق لوضع بلطف عبر السطح الظهري من منتصف اليرقة مع لجنة التحقيق في ما يقرب من زاوية 45º إلى مرحلة المجهر.
  8. على تحقيق الاتصال، بدء الموقت المختبر. الضغط النزولي يكفي لالبادئة قليلا سطح بشرة اليرقات في حين لا يزال يسمح للأمام أو للحركة الى الوراء.
  9. عقد لجنة التحقيق في مكان لمدة تصل إلى 10 ثانية أو حتى لوحظ استجابة سلوكية أثار الباردة - أيهما أسبق. ثم إزالة التحقيق.
  10. تسجيل الاستجابة السلوكية لوحظ والكمون استجابة. وتعتبر اليرقات التي لا تستجيب في غضون 10 ثانية "غير المستجيبين". الكمون يمكن أيضا أن تسجل لالمستجيبين وتستخدم لقياس التغيرات في استجابة متانة / السعة.
  11. تجاهل يرقة وإعداد المقبل.
  12. كرر الخطوات من 2،3-2،11 حتى يتم الوصول إلى العدد المطلوب من اختبار اليرقات (ثلاث مجموعات من ن = كانت 20-40 اليرقات شالحوار الاقتصادي الاستراتيجي هنا).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يرقات ذبابة الفاكهة الخطوة مع الحركة تحوي يتضمن توقف في بعض الأحيان، يتحول الرأس، والتغيرات في اتجاه و22. وردا على طلب التنسيق من التحفيز البارد الضارة إلا أن اليرقات المعرض مجموعة من السلوكيات فريدة من نوعها، على عكس لفة جانبية مكره للحرارة الضارة والمحفزات الميكانيكية. هذه السلوكيات هي أيضا مختلفة من الاستجابات لمسة رقيقة 8، 9،

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

مقايسة الموصوفة هنا يمكن استخدامها لنوعيا وكميا تقييم حس الألم أو توعية مسبب للألم في يرقات مختلف الخلفيات الوراثية والتأثيرات البيئية، و / أو الظروف الناجمة عن الضرر. منذ هذا الاختبار يسمح لتطبيق التنسيق من التحفيز الباردة، مع هذه الأداة يمكن للمرء أن تقييم وظيفة من مجموعة فرعية من الخلايا العصبية الحسية المحيطية تحديدا في الاستجابة لدرجات الحرارة الباردة. ومن المثير للاهتمام، ويبدو أن هذه السلوكيات أثار الباردة للاستفادة من فئات مختلفة من الخلايا العصبية الحسية من تلك تفعيلها من...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

تطبيق براءات الاختراع الولايات المتحدة الأمريكية (CL) معلقا على تصميم المسبار البارد. وسيتم توفير معلومات إضافية حول تفاصيل أرقام جزء التحقيق البارد والبناء، فضلا عن الاستشارات إضافية على تصميم أداة بناء على طلبها.

شكر وتقدير

نشكر سارة وو وكميل غراهام لتطوير المراحل المبكرة من فحص البارد التحقيق، ومركز بلومينغتون ذبابة الفاكهة المالية للأسهم ذبابة، وأعضاء المختبر Galko لقراءة نقدية للمخطوطة. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة NRSA (NIH F31NS083306) لHNT، والمعاهد الوطنية للصحة R01NS069828، R21NS087360 وجامعة تكساس MD اندرسون كلارك زمالة في البحوث الأساسية لMJG.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
يمكن توفير Cold ProbePro-Dev Engineeringالمصممة حسب الطلب حسب الطلب، ويمكن توفير أرقام الأجزاء وتفاصيل البناء عند الطلب
وحدة التحكم الحراريTechnologyالضميمة المبنية حسب الطلبتوفير أرقام الأجزاء وتفاصيل البناء عند الطلب
Zeiss Stemi 2000 مجهرZeissNT55-605
Fiber-Lite MI-150 إضاءة عالية الكثافةدولان جينر للصناعات.A20500
Schott Dual Gooseneck 23 بوصة دليل ضوء الألياف البصريةSchott North America، Inc.Schott A08575
ملقطFSTFS-1670يستخدم لفرز اليرقات والتعامل معها. تأكد من تنعيم أطراف الملقط وعدم حدتها قليلا لتقليل خطر ثقب اليرقات أو إصابتها عن طريق الخطأ
فرشاةالرسم ديك بليك مواد الفن06762-1002تستخدم لفرز اليرقات والتعامل معها. من المفيد أن تكون فرشاة الرسم رطبة أثناء الاستخدام.
35 مم × 10 مم طبق بوليسترين بتريفالكون351008
60 مم × 10 مم طبق بوليسترين بتريفالكون351007
قطعة من الفينيل الأسود (2 بوصة × 2 بوصة على الأقل)تستخدم لتوفير التباين وتوجيه اليرقات إلى المسبار البارد
Fisherbrand Scoopulaملعقة فيشر Scientific14-357Qتستخدم لنقل الطعام
Kimtech Science Kimwipesفيشر ساينتفيك06-666Aيستخدم لتجفيف اليرقات والمسبار البارد إذا كانت هناك رطوبة زائدة
TE يمكن

المراجع

  1. Grueber, W. B., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Tiling of the Drosophila epidermis by multidendritic sensory neurons. Development. 129 (12), 2867-2878 (2002).
  2. Gao, F. B., Brenman, J. E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Genes regulating dendritic outgrowth, branching, and routing in Drosophila. Genes Dev. 13 (19), 2549-2561 (1999).
  3. Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects. Neuron. 14 (2), 341-351 (1995).
  4. Hwang, R. Y., et al. Nociceptive neurons protect Drosophila larvae from parasitoid wasps. Curr Biol. 17 (24), 2105-2116 (2007).
  5. Im, S. H., Galko, M. J. Pokes, sunburn, and hot sauce: Drosophila as an emerging model for the biology of nociception. Dev Dyn. 241 (1), 16-26 (2012).
  6. Milinkeviciute, G., Gentile, C., Neely, G. G. Drosophila as a tool for studying the conserved genetics of pain. Clin Genet. 82 (4), 359-366 (2012).
  7. Turner, H. N., et al. The TRP Channels Pkd2, NompC, and Trpm Act in Cold-Sensing Neurons to Mediate Unique Aversive Behaviors to Noxious Cold in Drosophila. Curr Biol. , (2016).
  8. Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12 (6), 1195-1206 (1994).
  9. Tsubouchi, A., Caldwell, J. C., Tracey, W. D. Dendritic filopodia, Ripped Pocket, NOMPC, and NMDARs contribute to the sense of touch in Drosophila larvae. Curr Biol. 22 (22), 2124-2134 (2012).
  10. Yan, Z., et al. Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation. Nature. 493 (7431), 221-225 (2013).
  11. Tracey, W. D. Jr, Wilson, R. I., Laurent, G., Benzer, S. painless, a Drosophila gene essential for nociception. Cell. 113 (2), 261-273 (2003).
  12. Babcock, D. T., Landry, C., Galko, M. J. Cytokine signaling mediates UV-induced nociceptive sensitization in Drosophila larvae. Curr Biol. 19 (10), 799-806 (2009).
  13. Chattopadhyay, A., Gilstrap, A. V., Galko, M. J. Local and global methods of assessing thermal nociception in Drosophila larvae. J Vis Exp. (63), e3837(2012).
  14. Grueber, W. B., et al. Projections of Drosophila multidendritic neurons in the central nervous system: links with peripheral dendrite morphology. Development. 134 (1), 55-64 (2007).
  15. Hughes, C. L., Thomas, J. B. A sensory feedback circuit coordinates muscle activity in Drosophila. Mol Cell Neurosci. 35 (2), 383-396 (2007).
  16. Zhong, L., Hwang, R. Y., Tracey, W. D. Pickpocket is a DEG/ENaC protein required for mechanical nociception in Drosophila larvae. Curr Biol. 20 (5), 429-434 (2010).
  17. Xiang, Y., et al. Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall. Nature. 468 (7326), 921-926 (2010).
  18. Neely, G. G., et al. TrpA1 regulates thermal nociception in Drosophila. PLoS One. 6 (8), e24343(2011).
  19. Zhou, Y., Cameron, S., Chang, W. T., Rao, Y. Control of directional change after mechanical stimulation in Drosophila. Mol Brain. 5, 39(2012).
  20. Im, S. H., et al. Tachykinin acts upstream of autocrine Hedgehog signaling during nociceptive sensitization in Drosophila. Elife. 4, e10735(2015).
  21. Babcock, D. T., et al. Hedgehog signaling regulates nociceptive sensitization. Curr Biol. 21 (18), 1525-1533 (2011).
  22. Berrigan, D., Pepin, D. J. How Maggots Move - Allometry and Kinematics of Crawling in Larval Diptera. J. Insect Physiol. 41 (4), 329-337 (1995).
  23. Galko, M. J., Krasnow, M. A. Cellular and genetic analysis of wound healing in Drosophila larvae. PLoS Biol. 2 (8), E239(2004).
  24. Burra, S., Wang, Y., Brock, A. R., Galko, M. J. Using Drosophila larvae to study epidermal wound closure and inflammation. Methods Mol Biol. 1037, 449-461 (2013).
  25. Dar, A. C., Das, T. K., Shokat, K. M., Cagan, R. L. Chemical genetic discovery of targets and anti-targets for cancer polypharmacology. Nature. 486 (7401), 80-84 (2012).
  26. Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol Rev. 63 (2), 411-436 (2011).
  27. Gill, R. D. Multistate life-tables and regression models. Math Popul Stud. 3 (4), 259-276 (1992).
  28. Mantel, N. Ranking procedures for arbitrarily restricted observation. Biometrics. 23 (1), 65-78 (1967).
  29. Breslow, N. A generalized Kruskal-Wallis test for comparing K samples subject to unequal patterns of censorship. Biometrika. 57 (3), 579-594 (1970).
  30. Gehan, E. A. A generalized wilcoxon test for comparing arbitrarily singly-censored samples. Biometrika. 52, 203-223 (1965).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

اختبار البرودة الضارةالاستجابة السلوكيةمسبار البرودةاستقبال الألم الحراريالتحليل الجينيالاختبارات السلوكيةالتعبير الجينيالتصوير الفلوري
رواية الفحص لالباردة حس الألم في
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.