مقالة منهجية

إعداد وتوصيف رواية هدل-محاكاة الجسيمات النانوية لتغليف عامل النمو العصبي

7.9K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/55584

⸱

مايو 22, 2017

 , 
1Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of North Texas Health Science Center

في هذه المقالة

ملخص

تم استخدام التجانس بسيطة لإعداد رواية، عالية الكثافة، البروتينات الدهنية تحاكي الجسيمات النانوية لتغليف عامل نمو الأعصاب. يتم وصف التحديات، والبروتوكولات التفصيلية لإعداد جسيمات متناهية الصغر، توصيف في المختبر ، والدراسات في الجسم الحي في هذه المقالة.

الملخص

والهدف من هذه المادة هو تقديم أساليب إعداد وتوصيف لعامل نمو الأعصاب (نغف)، تحميل، عالية الكثافة، البروتين الدهني (هدل) - محاكاة الجسيمات النانوية (نبس). إن هدل هي نپس الذاتية وقد تم استكشافها كمركبات لتسليم العوامل العلاجية. وقد تم تطوير أساليب مختلفة لإعداد هدل-محاكيات نيبس. ومع ذلك، فهي معقدة عموما، وتستغرق وقتا طويلا، وصعبة على نطاق صناعي المتابعة. في هذه الدراسة، تم استخدام التجانس من خطوة واحدة لخلط سواغ وتشكيل نبس النموذج. نغف هو بروتين قابل للذوبان في الماء من 26 كيلو دالتون. لتسهيل تغليف نغف في البيئة الدهنية من هدل-محاكي نبس، تم استخدام بروتامين أوسب لتشكيل مجمع الأيونات الزوج مع نغف لتحييد الرسوم على سطح نغف. ثم تم إدخال مجمع نغف / بروتامين في النماذج الأولية. أبوليبوبروتين أي المغلفة أخيرا على سطح نبس. أظهرت نغف هدل-ميمكينغ نبيس خصائص مفضلة في المدىs من حجم الجسيمات، توزيع الحجم، كفاءة التخميد، في المختبر الافراج، النشاط الحيوي، و بيوديستريبوتيون. مع تصميم دقيق واستكشاف التجانس في هدل-محاكاة نيب، تم تبسيط الإجراء إلى حد كبير، وجعلت نبس قابلة للتطوير. وعلاوة على ذلك، تم التغلب على التحديات المختلفة، مثل فصل نغف تفريغها من نبس، وإجراء دراسات موثوقة في المختبر الإفراج، وقياس النشاط الحيوي لل نبس.

المقدمة

جزيئات كبيرة، مثل البروتينات، والببتيدات، والأحماض النووية، وقد ظهرت كدواء واعدة واكتسبت اهتماما كبيرا في العقود الماضية 1 ، 2 . نظرا لفعاليتها عالية وطرق عمل محددة، فإنها تظهر إمكانات علاجية كبيرة لعلاج السرطان، والأمراض المناعية، وفيروس نقص المناعة البشرية، والظروف ذات الصلة 3 ، 4 . ومع ذلك، فإن الخصائص الفيزيوكيميائية، مثل حجمها الجزيئي الكبير، هيكل ثلاثي الأبعاد، ورسوم السطح، وطبيعة ماء، وجعل في تسليم الجسم الحي من هذه الجزيئات صعبة للغاية. هذا يعوق بشكل كبير استخدامها السريري 4 . التطورات الأخيرة في أنظمة تسليم المخدرات، مثل الجسيمات الدقيقة، الجسيمات النانوية البوليمر (نبس)، الجسيمات الشحمية، و نبس الدهون، تغلبت هذه التحديات وتحسين كبير في تسليم الجسم الحي من الجزيئات. هووقد تم الكشف عن بعض العيوب فيما يتعلق بشحنات التسليم هذه، بما في ذلك انخفاض قدرة تحميل الدواء، وانخفاض كفاءة الانحباس، ونصف العمر القصير، وفقدان النشاط الحيوي، والآثار الجانبية غير المرغوبة 5 و 6 و 7 و 8 . ولا تزال نظم الموجات الحاملة الفعالة مجالا للاهتمام البحثي. وعلاوة على ذلك، فإن تطوير أساليب تحليلية لتوصيف نبس محملة المخدرات هو أكثر تحديا للجزيئات الصغيرة من الجزيئات الصغيرة.

البروتين الدهني عالي الكثافة (هدل) هو نب الطبيعية تتكون من جوهر الدهون التي هي المغلفة من أبوليبوبروتينز وأحادي الطبقة الفوسفاتية. يلعب هدل الذاتية دورا حاسما في نقل الدهون والبروتينات والأحماض النووية من خلال تفاعلها مع المستقبلات المستهدفة مثل سر-بي و أبكاي و ABCG1. وقد تم استكشافه كوسيلة لتسليم مختلف العوامل العلاجية 9، 10 ، 11 ، 12 . وقد تم تطوير أساليب مختلفة لإعداد هدل-محاكيات نيبس. غسيل الكلى هو نهج شعبية. في هذه الطريقة، يتم تشكيل نبس عن طريق ترطيب فيلم الدهون باستخدام حل الصوديوم الصوديوم. ثم يتم إزالة الملح من خلال غسيل الكلى لمدة يومين مع ثلاثة مخازن 13 . طرق سونيكاتيون تلفيق نبس عن طريق سونيكاتينغ خليط الدهون لمدة 60 دقيقة تحت حالة التدفئة. يتم تنقية نبس أكثر من خلال اللوني هلام 14 . ميكروفليديكش يولد نبس عن طريق جهاز ميكروفلويديك، الذي يمزج الفوسفورية و أبوليبوبروتين أي (أبو أي) الحلول من خلال خلق ميكروفورتيسز في نمط التركيز 15 . ومن الواضح أن هذه الأساليب يمكن أن تكون مضيعة للوقت وقاسية وصعبة على النطاق الصناعي.

في هذه المقالة، ونحن نقدم إعداد وتوصيف رواية هدل-محاكاة نيب للأعصابعامل النمو (نغف). نغف هو مثبط ثنائي ببتيد هوموديمر تحتوي على اثنين من 13.6 كيلو دالتون ببتيد أحادية. وقد تم تطوير إجراء جديد لإعداد نبس عن طريق التجانس، تليها تغليف نغف في نبس. وقد تميزت نغف هدل-محاكاة نيبس لحجم الجسيمات، وتوزيع الحجم، وإمكانات زيتا، والإفراج في المختبر . تم تقييم نشاطها الحيوي لانتشار نيوريت في خلايا PC12. تمت مقارنة بيوديستريبوتيون من نغف هدل-محاكاة نيبس مع أن من نغف مجانا بعد الحقن في الوريد في الفئران.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: وقد تمت الموافقة على الدراسات الحيوانية المدرجة في جميع الإجراءات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسية في جامعة شمال تكساس مركز العلوم الصحية.

1. إعداد نغف هدل-محاكاة الجسيمات النانوية

  1. حل سواغ، فوسفهاتيديلكولين (بيسي)، سفينغومييلين (سم)، فسفاتيديل (بس)، أوليي الكوليستريل (كو)، و D- α- توكوفيريل البولي إثيلين غليكول سكسينات (تبغس)، في الإيثانول لإعداد حلول الأسهم في 1 ملغ / مل.
    ملاحظة: أليكوتد حلول الأسهم وتخزينها في -20 درجة مئوية. تم تخزين أوليات الكوليستريل في زجاجات داكنة. وكانت الحلول بيسي، سم، بس، وكو الأسهم مستقرة لمدة تصل إلى 6، 3، 12، و 12 شهرا، على التوالي، في -20 درجة مئوية. كان الحل تبغس مستقرة لمدة لا تقل عن 12 شهرا عند -20 درجة مئوية.
  2. مزيج 10 ميكرولتر من نغف (1 ملغ / مل في الماء) مع 10 ميكرولتر من بروتامين أوسب (1 ملغ / مل في الماء) في أنبوب ميكروسنتريفوج 1.5 مل والسماح لها الوقوف لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة إلىتشكل المجمع.
    ملاحظة: أليكوتد و نغف وحلول الأسهم بروتامين وتخزينها في -20 درجة مئوية. لا يوصى بالتجميد المتكرر والذوبان في مخزون نغف.
  3. إضافة 59 ميكرولتر من جهاز الكمبيوتر، 11 ميكرولتر من سم، 4 ميكرولتر من بس، 15 ميكرولتر من كو، و 45 ميكرولتر من تبغس إلى قارورة زجاجية. مزيج وتتبخر الإيثانول تحت تيار النيتروجين لطيف لمدة 5 دقائق. يجب أن تشكل جميع سواغ الزيتية، رقيقة في الجزء السفلي من قارورة زجاجية.
  4. إضافة 1 مل من الماء عالى النقاء (نوع 1) المياه إلى قارورة والتجانس في 9،500 دورة في الدقيقة (8،600 x ج) لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة لتشكيل نبس النموذج.
  5. إضافة مجمع أعدت في الخطوة 1.2 إلى نبس النموذج واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة مع التحريك باستخدام شريط التحريك صغير في قارورة زجاجية.
    1. تبريد نبس أسفل عن طريق التحريك في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة أخرى. بعد هذا يبرد، إضافة 106 ميكرولتر من منظمة العفو الدولية أبو (1.49 ملغ / مل) ويقلب في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها لتشكيل المباراة النهائيةنغف هدل-ميمبيكينغ نبس.

2. توصيف نغف هدل-محاكاة الجسيمات النانوية

  1. قياس حجم الجسيمات وإمكانية زيتا باستخدام محلل الجسيمات (انظر جدول المواد) وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
  2. استخدام عبر ربط الاغاروز الترشيح هلام العمود الكروماتوغرافي لفصل نغف تفريغها من نغف هدل-محاكي نبس وتحديد كفاءة حبس من نغف.
    1. لإعداد العمود، ونقل 15 مل من سيفاروس 4B-كل تعليق لدورق 50 مل. تحريك تعليق حبة باستخدام قضيب زجاجي وتصب بعض في عمود (30 سم طول × 1 سم القطر، مع فريت الزجاج في الجزء السفلي). اضغط برفق على العمود للتخلص من الفقاعات. السماح للمذيب لاستنزاف وحبات لتسوية لبضع دقائق.
    2. تابع إضافة التعليق المتبقي. شطف الجدار الداخلي من العمود لتنظيف الخرز. استنزاف المذيب حتى مستوى المذيبات قليلابوف الجزء العلوي من المرحلة الثابتة. غسل وحالة العمود مع 20 مل من 1X الفوسفات مخزنة المالحة (بس، تحتوي على 137 ملي كلوريد الصوديوم، 2.7 ملي بوكل، 8 ملي نا 2 هبو 4 ، و 2 ملي خ 2 بو 4 ).
    3. لتحديد الكسور التي تحتوي على نغف تفريغها، تحميل 200 ميكرولتر من حل نغف (10 ميكروغرام / مل) على عمود الترشيح هلام (25 سم طول × 1 سم القطر) وأزله مع برنامج تلفزيوني 1X.
    4. جمع ما مجموعه 12 كسور (1 مل لكل جزء) وقياس تركيز نغف في كل جزء باستخدام مجموعة ساندويتش إليسا ل نغف.
    5. كشف نغف من الكسور 6-10 باستخدام مجموعة ساندويتش إليسا. الحصول على كروماتوغرام من نغف تفريغها على العمود. غسل العمود مع 20 مل من برنامج تلفزيوني.
    6. لتحديد الكسور التي تحتوي على نغف هدل-محاكاة نيبس، تحميل 200 ميكرولتر من نبس على العمود ونزل مع برنامج تلفزيوني 1X. جمع ما مجموعه 12 كسور (1 مل لكل جزء) وقياس شدة الجسيمات في كل جزء شالغناء محلل حجم الجسيمات. كشف نبس نغف من الكسور 2 إلى 4.
      ملاحظة: شدة هي معلمة يقاسها محلل الجسيمات، الذي يقول كم عدد الجسيمات النانوية قد تكون موجودة في حل الاختبار. أكثر نبس موجودة في الحل، وارتفاع كثافة هو. من خلال هذا النهج، يمكننا أن نؤكد أن العمود يمكن فصل نغس نب من تفريغ نغف.
    7. لقياس كفاءة انحباس من نغف، تحميل 200 ميكرولتر من نغف هدل-محاكاة نيب على العمود ونزل مع برنامج تلفزيوني 1X. جمع ما مجموعه 12 كسور (1 مل لكل جزء).
    8. قياس تركيز نغف تفريغها من الكسور 6-10 باستخدام طقم ساندويتش إليسا.
    9. إضافة كميات نغف المقاسة من الكسور 6 إلى 10 معا باعتبارها نغف تفريغ وحساب كفاءة انغراب من نغف باستخدام المعادلة التالية.
      ٪ إي = (1 - تفريغ نغف / مجموع نغف تضاف إلى نب) × 100٪ المعادلة (1)

3. في المختبر الافراج عن نغف هدل- محاكاة الجزيئات النانوية

  1. دراسة نغف مجانا (10 ميكروغرام / مل في الماء؛ ن = 4) و نغف هدل-محاكاة نيب (10 ميكروغرام / مل = ن = 4) بالتوازي.
  2. قبل علاج 8 أنابيب غسيل الكلى (الوزن الجزيئي قطع: 300 كيلو دالتون) باتباع تعليمات الشركة الصانعة.
  3. إعداد 5٪ ألبومين المصل البقري (بسا) في برنامج تلفزيوني كوسيلة إطلاق. إضافة 30 مل من وسط التحرير إلى أنبوب الطرد المركزي 50 مل ودفئه حتى 37 درجة مئوية في شاكر مع 135 دورة في الدقيقة تهز السرعة. وضع 50 مل أخرى من وسط التحرير في شاكر لاستبدال.
  4. إضافة 400 ميكرولتر من وسط إطلاق في أنبوب غسيل الكلى وبسرعة إضافة 200 ميكرولتر من عينة اختبار لجعل حجم ما يكفي لغسيل الكلى.
  5. إغلاق أنبوب ووضع بسرعة أنبوب غسيل الكلى في وسط الافراج (أنبوب الطرد المركزي). سحب بسرعة 100 ميكرولتر من وسط الافراج عن أنبوب غسيل الكلى الخارجي كعينة للوقت 0. وضع على الفور العينة إلى -20 درجة مئوية لتحليل لاحق. إضافة 100 ميكرولتر من إعادة جديدةتأجير المتوسطة في أنبوب الطرد المركزي ليحل محل العينة المسحوبة. بدء الموقت.
  6. في 1 و 2 و 4 و 6 و 8 و 24 و 48 و 72 ساعة، اسحب 100 ميكرولتر من وسط التحرير واستبدلها ب 100 ميكرولتر من الوسط الطازج. وضعت على الفور العينات المسحوبة إلى -20 درجة مئوية لتحليلها لاحقا.
  7. بعد 72 ساعة، وأخرج جميع العينات من -20 درجة مئوية ويذوبان لهم في درجة حرارة الغرفة. قياس تركيزات نغف من عينات الافراج باستخدام مجموعة ساندويتش إليسا.

4. النشاط الحيوي من نغف هدل-محاكاة الجسيمات النانوية (نيوريت دراسة النمو)

  1. الثقافة خلايا PC12 في وسط رمي-1640 تستكمل مع 10٪ المصل الحصان المعطل الحرارة، 5٪ مصل بقري الجنين، 100 ميكروغرام / مل الستربتومايسين، و 100 وحدة / مل البنسلين. الحفاظ على الخلايا في حاضنة ترطيب عند 37 درجة مئوية ومع 5٪ كو 2 .
  2. عندما تصل الخلايا ~ التقاء 70-80٪، وإزالة وسط الثقافة وغسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني 1X (حوالي 2 مل لكل 10 سم <سوب> 2 مساحة سطح الثقافة). قم بإزالة محلول الغسيل. تريبسينيز الخلايا عن طريق إضافة 0.25٪ تريبسين-إدتا الحل (0.25٪ التربسين و 1 ملي إدتا؛ 0.5 مل لكل 10 سم 2 مساحة سطح الثقافة) إلى قارورة واحتضان عند 37 درجة مئوية حتى يتم فصل معظم الخلايا.
  3. إضافة مجلدين من الوسط الثقافي وتدور باستمرار في 180 x ج لمدة 5 دقائق. إزالة طاف و ريسوسبيند بيليه الخلية في 5 مل من وسط الثقافة. تصفية الخلايا من خلال 22 G، ½ بوصة إبرة لكسر مجموعات الخلايا.
  4. تقسيم الخلايا بنسبة 1: 3 في قارورة ثقافة الخلية الجديدة. بعد احتضان بين عشية وضحاها، وإزالة خلايا PC12 غير مرتبط. السماح للخلايا المرفقة أن تبقى لمزيد من النمو.
  5. كرر هذا الإجراء لمدة 3 مقاطع لتحديد ثقافة فرعية من PC12 التي لديها خاصية التصاق قوية. قبل معطف لوحة 6 جيدا مع 800 ميكرولتر / بئر من نوع الفئران ذيل الكولاجين I (100 ميكروغرام / مل).
  6. تريبسينيز خلايا PC12 المحددة كما هو موضح في الخطوة 4.2 وتصفية لهم من خلال22 G، ½ بوصة إبرة لكسر مجموعات الخلايا. عد الخلايا مع عدادة الكريات. البذور الخلايا بين عشية وضحاها بكثافة 10،000 الخلايا / جيدا في لوحة المغلفة مسبقا 6-جيدا في الخطوة 4.5 للسماح للخلايا أن نعلق على لوحة.
  7. تمييع نغف مجانا (10 ميكروغرام / مل) و نغف هدل-محاكي نبس (10 ميكروغرام / مل) مع الوسط الثقافي (الموصوفة في الخطوة 4.1) لإعداد 0.5، 1، 5، 10، 50، و 100 نغ / مل تركيزات. إزالة 2 مل من المتوسطة من كل بئر واستبدالها مع 2 مل من نغف المخفف مجانا أو نغف هدل-محاكي نبس. الثقافة لمدة 4 أيام.
  8. في يوم 4، تغيير المتوسطة إلى الطازجة المتوسطة (وصفها في الخطوة 4.1) التي تحتوي على العلاج المقابلة ومواصلة العلاج لمدة 3 أيام أخرى.
  9. في يوم 7، تصور الخلايا مع مجهر الضوء مقلوب وصورة كل جيدا في بقع عشوائية تحت التكبير 10X.

5. بيوديستريبوتيون من نغف هدل-محاكاة الجسيمات النانوية

  1. استخدام الكبار بالب / ج الفئران (ذكور، 25-30 ز) إلى رإست توزيع الأنسجة من نغس نبس. تقسيم عشوائي الفئران إلى ثلاث مجموعات من 3 الفئران لكل مجموعة. استخدام ضبط على شكل مخروط البلاستيك (على سبيل المثال، ديكابيكون) لكبح الفأر ومسح الذيل مع الايثانول لتعزيز توسع الأوعية ووضوح الوريد.
  2. حقن 100 ميكرولتر من أي محلول ملحي، نغف مجانا، أو نغف هدل-محاكي نبس لكل مجموعة من الفئران (3 مجموعات) من خلال الأوردة الذيل بجرعة 40 ميكروغرام / كغ من نغف. استخدام إبرة 30½ G تعلق على حقنة 1 مل.
  3. في 30 دقيقة بعد الحقن، تخدير الفئران باستخدام 3٪ إيسوفلوران استنشاق (في الأكسجين بمعدل تدفق 2 لتر / دقيقة). أداء ذيل وأخمص القدمين قرصة لتحديد عمق التخدير. جمع الدم عن طريق ثقب القلب.
    1. سحب حوالي 1 مل من الدم من القلب. الموت ببطء كل ​​الماوس عن طريق خلع عنق الرحم.
  4. وضع الذبيحة الماوس في الاستلقاء الظهري. فتح البطن باستخدام مقص جراحي ونقل الدهون والأمعاء جانباباستخدام مسحة القطن لفضح الكبد والطحال والكلى. حصاد هذه الأنسجة وشطف لهم في برنامج تلفزيوني 1X لتنظيف الدم.
  5. على الفور الطرد المركزي عينات الدم في 3،400 x ج و 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق للحصول على البلازما. تخزين البلازما والأنسجة في -80 درجة مئوية حتى التحليلات.
  6. لتحليل عينات الأنسجة، ونقل العينات من -80 درجة مئوية إلى 4 درجات مئوية وتعليق 100 ملغ من عينة الأنسجة في حجم 10X من استخراج العازلة (0.05 M خلات الصوديوم، 1.0 M كلوريد الصوديوم، 1٪ تريتون X-100، 1٪ بسا، 0.2 ملي فينيل ميثان سلفونيل فلوريد، و 0.2 ملي كلوريد البنزيثونيوم). التجانس في 10،000 دورة في الدقيقة و 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق.
  7. التضحية اثنين من الفئران غير المعالجة لجمع البلازما والأنسجة فارغة، كما هو موضح في الخطوات 5.3 و 5.4. إعداد الحلول القياسية نغف باستخدام البلازما فارغة أو تجانس الأنسجة الفارغة.
  8. تحديد تركيزات نغف في مجانس البلازما والأنسجة باستخدام عدة ساندويتش إليسا، كما هو موضح أعلاه.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

ويرد مخطط الهندسة من هدل محاكاة، α توكوفيرول المغلفة نغس نبس أعدتها استراتيجية أيون زوج في الشكل 1 . لتحييد رسوم سطح نغف، تم استخدام بروتامين أوسب كعامل أيون زوج لتشكيل مجمع مع نغف. ولحماية النشاط الحيوي، تم تصميم النموذج الأولي لمحاكاة الخلايا النانوية (هدل)، وذلك باستخدام التجانس أولا؛ ثم، مغلف مجمع نغف / بروتامين في نبس النموذج. وقدم التجانس طاقة كافية ونجح في تعزيز خلط السواغات. بعد التجانس 3 دقائق، وأحجام الجسيمات متسقة (حوالي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه الدراسة، ونحن نبرهن على طريقة بسيطة لإعداد هدل-محاكاة نيبس للتغليف نغف. وقد تم دراسة مختلف أنظمة التسليم نب لتقديم البروتينات. حاليا، العديد من الاستعدادات نب تشمل غسيل الكلى، وهطول المذيبات، وترطيب الفيلم. وهذه العمليات معقدة عموما وتحديا عند توسيع نطاقها. خلال هذا التطور نب، تم تحديد أن الدهون لديها التصاق قوي للجدار الزجاجي للحاوية، مما أدى إلى صعوبات في ترطيب رقيقة و خلط سواغ كفاءة. وبالنظر إلى مكونات متعددة في نبس الطبيعية هدل، أصبح خلط صعبة للغاية وحاسمة لإعداد هدل-مح...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة R03 NS087322-01 إلى دونغ، X.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
المؤتلف البشري بيتا NGFالإبداعي BiomartNGF-05H
L- & alpha - فوسفاتيديل كولين (PC) أفانتي131601P95٪ ، بيض ، دجاج
سفينغوميلين (SM) أفانتي860062Pالدماغ ، لحم الخنزير
فوسفاتيديل سيرين (PS) أفانتي840032Pالدماغ ، لحم الخنزير
كوليستيريل أوليات (CO)سيجماC9253
D- & alpha - توكوفيريل بولي إيثيلين جلايكول سكسينات (TPGS) BASF9002-96-4فيتامين E بولي إيثيلين جلايكول سكسينات
كبريتات البروتامينSigmaP3369يلبي مواصفات اختبار USP
Apolipoprotein A1 ، أبحاث أثينا البلازما البشرية& التكنولوجيا16-16-1201011 ملغ في 671 & ميكرو; L 10 ملي مولار NH4< / sub>HCO3< / sub> ، الرقم الهيدروجيني 7.4
Sepharose 4B-CLSigmaCL4B200agarose متشابك ، & nbsp ؛ مواد تعبئة عمود الترشيح اللوني للترشيح الهلام
Sandwich ELISA Kit ل NGFR& نظام DDY008
مصل الأبقار الألبومينSigmaA2153
RPMI-1640 متوسطGE Healthcare LifeScience SH30096.02
مصل الحصانGE Healthcare LifeScience SH30074.03
مصل الأبقار الجنينيGibco10082147
خلايا PC12ATCCCRL-1721
ذيل الفئران الكولاجين من النوع الأولسيجماC3867
أسيتات الصوديومسيجماS2889
كلوريد الصوديومسيجما31414
تريتون X-100سيجماT8787
فينيل ميثان سولفونيل فلوريد (PMSF)سيجماP7626
كلوريد البنزيثونيومسيجماB8879
<قوي> الاسم< / strong> الشركة< / strong> رقم الكتالوج< / strong>تعليقات< / strong>
Equipment< / strong>
HomogenizerTekmarT 25-S1
Delsa Nano HC محلل الجسيماتBeckman-CoulterDelsa Nano HC
Float-A-Lyzer G2 مختبرات طيفالكلى G235036قطع الجزيء 300 كيلو دالتون
جهاز طرد مركزيEppendoff5424R
خيال بوليترونKinematicaPT 1200C
DecapiCone  شركة برينتري العلميةDC-M200
جهاز غسيل

المراجع

  1. Bruno, B. J., Miller, G. D., Lim, C. S. Basics and recent advances in peptide and protein drug delivery. Ther Deliv. 4 (11), 1443-1467 (2013).
  2. Mo, Z. C., Ren, K., Liu, X., Tang, Z. L., Yi, G. H. A high-density lipoprotein-mediated drug delivery system. Adv Drug Deliv Rev. 106 (Pt A), 132-147 (2016).
  3. Lacko, A. G., Sabnis, N. A., Nagarajan, B., McConathy, W. J. HDL as a drug and nucleic acid delivery vehicle. Front Pharmacol. 6, 247-252 (2015).
  4. Vaishya, R., Khurana, V., Patel, S., Mitra, A. K. Long-term delivery of protein therapeutics. Expert Opin Drug Deliv. 12 (3), 415-440 (2015).
  5. Lasic, D. D., Papahadjopoulos, D. Medical application of liposomes. , Elsevier. (1998).
  6. Samad, A., Sultana, Y., Aqil, M. Liposomal drug delivery systems: an update review. Curr Drug Deliv. 4 (4), 297-305 (2007).
  7. Bezemer, J. M., Radersma, R., Grijpma, D. W., Dijkstra, P. J., van Blitterswijk, C. A., Feijen, J. Microspheres for protein delivery prepared from amphiphilic multiblock copolymers: 2. Modulation of release rate. J Control Release. 67 (2-3), 249-260 (2000).
  8. Patel, A., Patel, M., Yang, X., Mitra, A. K. Recent advances in protein and peptide drug delivery: a special emphasis on polymeric nanoparticles. Protein Pept lett. 21 (11), 1102-1120 (2014).
  9. Kuai, R., Li, D., Chen, Y. E., Moon, J. J., Schwendeman, A. High-density lipoproteins: nature's multifunctional nanoparticles. ACS Nano. 10 (3), 3015-3041 (2016).
  10. Gursky, O. Structural stability and functional remodeling of high-density lipoproteins. FEBS Lett. 589 (19 Pt A), 2627-2639 (2015).
  11. McMahon, K. M., Thaxton, C. S. High-density lipoproteins for the systemic delivery of short interfering RNA. Expert Opin Drug Deliv. 11 (2), 231-247 (2014).
  12. McMahon, K. M., Foit, L., Angeloni, N. L., Giles, F. J., Gordon, L. I., Thaxton, C. S. Synthetic high-density lipoprotein-like nanoparticles as cancer therapy. Cancer Treat Res. 166, 129-150 (2015).
  13. Lerch, P. G., Förtsch, V., Hodler, G., Bolli, R. Production and characterization of a reconstituted high density lipoprotein for therapeutic applications. Vox Sang. 71 (3), 155-164 (1996).
  14. Zhang, Z., Chen, J., Ding, L., Jin, H., Lovell, J. F., Corbin, I. R., Cao, W., Lo, P. C., Yang, M., Tsao, M. S., Luo, Q., Zheng, G. HDL-mimicking peptide-lipid nanoparticles with improved tumor targeting. Small. 6 (3), 430-437 (2010).
  15. Kim, Y., Fay, F., Cormode, D. P., Sanchez-Gaytan, B. L., Tang, J., Hennessy, E. J., Ma, M., Moore, K., Farokhzad, O. C., Fisher, E. A., Mulder, W. J., Langer, R., Fayad, Z. A. Single step reconstitution of multifunctional high-density lipoprotein-derived nanomaterials using microfluidics. ACS Nano. 7 (11), 9975-9983 (2013).
  16. Prathipati, P., Zhu, J., Dong, X. D. Development of novel HDL-mimicking α-tocopherol-coated nanoparticles to encapsulate nerve growth factor and evaluation of biodistribution. Eur J Pharm and Biopharm. 108, 126-135 (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

A I

مقالات ذات صلة