يظهر هذا البروتوكول كيفية استئصال باستمرار عيون مستورقة (أكواب البصرية) من دون إزعاج الأنسجة المحيطة بها. باستخدام إبرة الأنسولين والمحاقن، إما احدة أو كلتا العينين يمكن أن يكون ذاب لتسهيل التحقيقات في آليات تنظيم التجديد العين، وتطور تجديد البصري، والأساس العصبي للسلوك الناجم عن الضوء.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الجراحية تذرية الفحص لدراسة التجديد العين في مستورقات
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في دراسة الخلايا الجذعية للبالغين وآليات التجدد، الديدان المفلطحة مستورقة هي من دعائم النظام في نموذج الجسم الحي. ومن المقرر في جزء كبير منه إلى وفرة المحفزة السكان الخلايا الجذعية وقدرتها على تجديد جميع أنواع الخلايا والأنسجة بعد الإصابات التي سيكون كارثيا بالنسبة لمعظم الحيوانات هذا. في الآونة الأخيرة، اكتسبت شعبية مستورقات كنموذج للتجديد العين. قدرتها على التجدد العين بأكملها (تتألف من أنواع الأنسجة هما: الخلايا الصبغية ومبصرات) تسمح للتشريح الآليات التي تنظم تجديد النظام البصري. العين الاجتثاث لديها العديد من المزايا أكثر من غيرها من التقنيات (مثل قطع الرأس أو ثقب) لدراسة سبل وآليات العين محددة، وأهمها هو أن يقتصر التجديد إلى حد كبير إلى أنسجة العين وحدها. والغرض من هذه المقالة الفيديو هو إظهار كيفية إزالة موثوق الكأس البصرية مستورقة دون إزعاج الدماغ أو الأنسجة المحيطة بها.يوصف أيضا التعامل مع الديدان وصيانة مستعمرة أنشئت. ويستخدم هذا الأسلوب 31 G، 5/16 بوصة الانسولين إبرة لحلج القطن جراحيا من الكأس البصري من مستورقات يجمد على طبق من ذهب الباردة. ويشمل هذا الأسلوب على حد سواء مفردة ومزدوجة الاجتثاث العين، مع عيون تجديد في غضون 1-2 أسابيع، والسماح لمجموعة واسعة من التطبيقات. على وجه الخصوص، هذه التقنية الاجتثاث يمكن الجمع بسهولة مع (التدخل RNA) شاشات الدوائية والجينية لفهم أفضل للآليات التجدد وتطورها، والخلايا الجذعية العين وصيانتها، والاستجابات السلوكية phototaxic وأساسها العصبية.
المقدمة
مستورقات هي قوية نموذج حي لدراسة الجذعية البالغة تجديد بوساطة الخلايا. هذه الديدان المفلطحة المياه العذبة غير الطفيلية تمتلك القدرة على التجدد أي وجميع الأنسجة المفقودة، بما في ذلك نظامهم العصبي المركزي والدماغ 1. درس بقدر ما يعود إلى 1700s في 2، والتقدم التكنولوجي في مجال مستورقة خلال 10-15 سنة الماضية (مثل تسلسل الجينوم، في الموقع التهجين، المناعية، والتدخل RNA (رني)، وtranscriptomics) قمنا بتحديث هذا نموذج حي تاريخي . على وجه التحديد، اكتسبت مستورقات شعبية في الآونة الأخيرة لتكون نموذجا الناشئة للبحوث العين 3.
مستورقات لها عيون prototypic مع أنواع الأنسجة اثنين فقط، والخلايا العصبية مستقبلة للضوء والخلايا الصبغية. وقد مكن هذا التوصيف من سكان العين الخلايا الجذعية، وأظهرت أن العديد من نفس الجينات التي تنظم الفقاريات العين دييتم حفظها velopment في مستورقات 4 و 5. تقع الكؤوس البصرية ظهريا وتتكون من البيض، التشعبات unpigmented من الخلايا العصبية مستقبلة للضوء وشبه القمر الخلايا الصبغية الأسود، وعيون عصب الدماغ عن طريق chiasm البصرية. بالإضافة إلى كونه نموذجا لتوضيح عمليات التجدد 6، والعين مستورقة هي مناسبة تماما لدراسة تطور آليات البصرية 7، والاستجابات السلوكية للضوء (مستورقات عرض انجذاب ضوئي سلبي) 8، والأساس العصبي للسلوك 9.
تجديد العين في مستورقات وقد درست إلى حد كبير في سياقين رئيسيين: كجزء من تجديد رئيس يلي قطع الرأس 4، 10، وفيما يلي استئصال فقط أنسجة العين 11 و 12 . وقد استخدمت معظم الدراسات مستورقة على تجديد العين طريقة قطع الرأس، كما هو بسيط ومباشر. وكان مستورقة طريقة الختان العين الأكثر شيوعا حتى الآن عبر ثقب مع كوب غرامة الشعرية أنبوب 13 و 14، على الرغم من أن بعض الدراسات قد أجريت أيضا عمليات البتر خلف العينين (قطع الرأس الجزئي) 15. ومع ذلك، كل من هذه الأساليب تنطوي على فقدان العديد من الأنسجة الأخرى من مجرد العين (مثل الدماغ والأمعاء وnephridia)، ويحتمل أن تعقيد تفسير النتائج. بروتوكول الاجتثاث العين المعروضة هنا يقيد الختان إلى أنسجة العين (باستثناء المخ على وجه التحديد)، مما أدى إلى البيانات التي هي أكثر تحديدا للعين. بالإضافة إلى ذلك، على عكس الديدان مقطوعة الرأس التي تأخذ 7-14 أيام للبدء في التغذية، والعين ذاب الديدان تتغذى خلال 24 ساعة من الاجتثاث 12، مما يسمح للتجارب رني (حيث يتم تسليم رني عبر الطعام) ليتم performeد متزامن.
وعلى الرغم من الاجتثاث العين هو أصعب من الناحية الفنية لأداء بنجاح من قطع الرأس، لم شملت الدراسات الحالية التي تنطوي على استئصال العين تعليمات مفصلة حول إجراءاتها. والهدف من هذه المقالة الفيديو هو لتمكين الباحثين من إزالة باستمرار الكأس البصرية مستورقة دون إزعاج أنسجة المخ الأساسية وإزالة بعض الأنسجة الأخرى كما ممكن. وهذه الطريقة يمكن أن تستخدم في كل من مفردة ومزدوجة الاجتثاث العين وينطبق على مجموعة واسعة من التحقيقات. مثل معظم فحوصات تجديد، والاجتثاث العين مناسبة تماما للمزيج مع كل من (رني) شاشات الدوائية والوراثية، وكذلك الدراسات السلوكية. نحن هنا وصف الطرق لمعالجة الديدان، والحفاظ على مستعمرة مستورقة، وتقنية الاجتثاث العين نفسها.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. الحيوان الثقافة والمناولة
ملاحظة: يستخدم هذا البروتوكول ميدتيرانيا Schmidtea، وهي من الأنواع مستورقة مضاعفا مع تسلسل الجينوم 16 و 17 التي يشيع استخدامها للبحث تجديد. ومع ذلك، فإن الاختبار هو ناجح على قدم المساواة مع الأنواع الأخرى، مثل Girardia tigrina وGirardia dorotocephala (والتي هي متوفرة تجاريا).
- الحفاظ على الديدان في "المياه دودة" مصنوعة من 0.5 غرام أملاح / L البحر في عالى النقاء (أو منزوع الأيونات تصفيتها) المياه. استخدام معقم البولي بروبلين أو العبوات الزجاجية لعقد المياه دودة. رؤية الملف التكميلي 1 للاطلاع على تفاصيل إعداد ماء دافيء.
ملاحظة: لا تستخدم الصابون لتنظيف حاويات (أو غيرها من اللوازم)، والصابون سامة لالديدان. بدلا من ذلك مسح مع الايثانول 70٪ والسماح للهواء الجاف. <رأ> - ارتداء القفازات أثناء العمل مع المستورقات لحمايتها من التلوث.
ملاحظة: الديدان هي حساسة جدا للسموم والمواد الكيميائية البيئية، بما في ذلك الصابون ومواد التبييض، والشامبو، وهواء، وغسول اليد.
ملاحظة: يجب أن يكون المستعمرات لا يزيد عن 500-1،000 الديدان لكل لتر من الماء دودة. للتجارب، وترك أغطية تماما في المكان، منذ تم تصميم تدفق الهواء إلى هذه الأطباق.
ملاحظة: الكبد يجب أن لا تحتوي على الهرمونات أو المضادات الحيوية ويفضل أن لا يتم تجميد سابقا. الطرد المركزي هريس قبل التجميد (أو قبل التغذية) لإزالة الهواء ومنع الطعام من العائمة. يجب أن تغرق الغذاء إلى أسفل الحاوية. 1 مل من معجون يكفي ل500-1،000 الديدان.
- الماصات Backload مع كمية صغيرة من الماء دودة قبل مص لهم.
- حاول نقل المياه في جميع أنحاء دودة، بدلا من الدودة نفسها، للمساعدة في منع تمزق الديدان رخوة عن طريق لمس منهم مع ماصة.
- حافظ على أطباق التجريبية غطت ما لم نقل الديدان أو استبدال المياه.
2. إعداد
- التوقف عن تغذية الديدان أسبوع واحد على الأقل قبل التجارب.
- اختر الديدان التي تم لم يتم تغذيتها لمدة أسبوع ≥1 وهي على الأقل 5-7 ملم في الطول. نقل الديدان على طبق بيتري 2/3 كامل من الماء دودة، وتأكيد طول الدودة عن طريق تحريك مسطرة تحت الطبق. قياس ثorms تمديد حين بالكامل وتتحرك.
ملاحظة: في حين أن أصغر (5-7 ملم) الديدان تعمل على نحو أفضل عند تنفيذ المناعي لاحق ويحلل الموقع التهجين، والديدان الكبيرة (8-10 ملم) هي أسهل للعمل مع - وخاصة عندما تعلم اجتثاث. - تأكد من أن الديدان هي كلها، لم يلحق بها أذى، وليس تجديد مؤخرا.
ملاحظة: مجدد الديدان يكون أخف وزنا بكثير (أو لا) الصباغ في الرأس و / أو منطقة الذيل بالمقارنة مع الديدان العادية. - إذا كان أداء رني أو العلاجات الدوائية على الديدان، والقيام بذلك في هذه المرحلة. إذا كانت تتغذى الديدان كجزء من العلاج (كما لرني)، وانتظر بعد 7 أيام على الأقل التغذية مشاركة قبل المتابعة إلى الخطوة 2.2.
- اختر الديدان التي تم لم يتم تغذيتها لمدة أسبوع ≥1 وهي على الأقل 5-7 ملم في الطول. نقل الديدان على طبق بيتري 2/3 كامل من الماء دودة، وتأكيد طول الدودة عن طريق تحريك مسطرة تحت الطبق. قياس ثorms تمديد حين بالكامل وتتحرك.
- تنظيف قاعدة المجهر مساحة العمل وتشريح مع الايثانول 70٪ واتركه حتى يجف تماما. وضع طبق من الديدان المحدد إلى الجهة اليسرى من النطاق. إلى اليمين من نطاق، ووضع زوج من رقم 5 ملقط، و31 G 5/16 بوصة الانسولين إبرة مع 1مل حقنة، وماصة نقل نظيفة.
- ضمان أن يتم الاحتفاظ الصكوك من لمس مقاعد البدلاء (والذي يمكن أن يعرض الملوثات). استخدام عنصر جامدة (مثل بقية عود) للحفاظ على ملقط، إبرة، وماصة نظيفة. بدلا من ذلك، أدوات مكان على رأس البني (غير مقصور) منشفة ورقية جديدة.
ملاحظة: تتم كتابة هذه واللاحقة تعليمات من حيث صلتها الأفراد يمنى. يجب أعسر الأفراد عكس اليمين / اليسار الاتجاهات.
- ضمان أن يتم الاحتفاظ الصكوك من لمس مقاعد البدلاء (والذي يمكن أن يعرض الملوثات). استخدام عنصر جامدة (مثل بقية عود) للحفاظ على ملقط، إبرة، وماصة نظيفة. بدلا من ذلك، أدوات مكان على رأس البني (غير مقصور) منشفة ورقية جديدة.
- بجانب مساحة العمل، ووضع علبة من مناديل الأنسجة خالية من الوبر، مصدر للمياه العذبة دودة، وبعض ماصات نقل إضافية (محمية من أعلى مقاعد البدلاء). ماء دافيء مكان في زجاجة غسل البلاستيك لسهولة صرفها. أيضا وضع المسمى لوحة 12-جيدا (أو 100 ملم طبق بيتري) إلى يمين نطاق لجمع الحيوانات ذاب.
- في حالة استخدام لوحة بلتيير حسب الطلب لشل حركة الديدان، ووضع لوحة بلتيير إلى الاكتئاب في تيانه قاعدة المجهر تشريح وضبط الإخراج على مصدر الطاقة DC حتى سطح العمل من لوحة بلتيير باردا بما فيه الكفاية (عادة ~ 5 V) .Alternatively، وجعل لوحة الباردة عن طريق ملء طبق بيتري ملم 100 ½ بالكامل بالماء وتجميد لمدة 24 ساعة على الأقل. تجاهل الغطاء ووضع الجزء السفلي من طبق 100 ملم على قاعدة نطاق تشريح، ثم وضع غطاء طبق بيتري 60 ملم رأسا على عقب مباشرة على سطح الجليد (الشكل 1A).
- بعد الماء جمدت في صحن 100 ملم، يمكن أن تظهر في "بركان" من الجليد في وسط اللوحة. إذا حدث هذا، استخدام شفرة حلاقة لكشط شقة الجليد، لإزالة أي مخالفات من على سطح الأرض.
ملاحظة: أثناء العمليات الجراحية الجليد سوف تذوب، مما يجعل ablations أكثر صعوبة بكثير. إعداد عدة أطباق الجليد مقدما، وتحل محل المجمدة لذوبان منها خلال فحص في أقرب وقت غطاء صحن 60 ملم يبدأ العائمة.
- بعد الماء جمدت في صحن 100 ملم، يمكن أن تظهر في "بركان" من الجليد في وسط اللوحة. إذا حدث هذا، استخدام شفرة حلاقة لكشط شقة الجليد، لإزالة أي مخالفات من على سطح الأرض.
- حضرسطح الجراحة. قطع قطعة 5 سم × 10 سم من البلاستيك فيلم البارافين (4 سم 2 في حالة استخدام طبق بتري لوحة الباردة) ووضعه في وسط الجهاز الشلل. أضعاف الأنسجة خالية من الوبر مسح في مربع تقريبا 2 سم 2 ووضعه على رأس الفيلم. قطع قطعة من مرشح ورقة بيضاء 1.5-2 سم 2 ووضعه على رأس القضاء. انظر الشكل 1B-1E.
- عقد مطوية مسح في مكان مع إصبع القفاز، واستخدام ماء دافيء لتخفيف بخفة مسح للتأكد من أنها لا تزال مطوية. استخدام الجانب من ماصة نقل للفة مسح المسطح.
ملاحظة: درجات الحرارة الباردة يساعد على إبقاء الديدان من التحرك. العمل "جافة" يساعد أيضا في تجميد. الأنسجة مسح الأفعال الفتيل المياه من خلال ورقة الترشيح، والحفاظ على دودة رطبة أثناء الجراحة دون السماح الديدان لتجف تماما (وهو قاتلة).
- عقد مطوية مسح في مكان مع إصبع القفاز، واستخدام ماء دافيء لتخفيف بخفة مسح للتأكد من أنها لا تزال مطوية. استخدام الجانب من ماصة نقل للفة مسح المسطح.
3. تذرية الجراحي
- استخدام ماصة نقل وضعها علىالجانب ه دودة ظهري حتى على ورقة الترشيح. تحويل مصدر الضوء على وتوجيه goosenecks قابل بحيث يتركز الضوء على دودة. ضبط تشريح التركيز نطاق والتكبير بحيث عيون هي واضحة للعيان (دودة كاملة لا تحتاج إلى أن تكون في رأي)؛ 5X التكبير هو نقطة انطلاق جيدة. توجيه الدودة عن طريق تناوب الفيلم البارافين بحيث يتم أشار يتجه نحو الباحث (نحو الجزء الأمامي من المجهر)، الزاوية 30-40 درجة إلى اليمين.
- تجنب استخدام الضوء الساطع لمنع حركة الدودة الزائدة. مستورقات عرض انجذاب ضوئي سلبية، وسوف تسعى للتهرب من الضوء الساطع.
- إذا تم وضع دودة الجانب البطني مواجهة (مع البلعوم فتح مرئية)، استخدم الجانب مملة من ملقط لإعادة بلطف الجانب الظهري دودة (بعيون مرئية). تجنب الاقتراب من الحيوانات مع طرف حاد من ملقط لتقليل فرصة على اختراق الأنسجة الرخوة عند اعادة تموضع الحيوان.
- ضبط التركيز المجهر بحيث العينين بشكل واضح في التركيز. أيضا التأكد من أن كل من العينين والأنسجة المحيطة بها الرأس هي في الرأي.
- عقد إبرة جديدة / حقنة في اليد اليمنى كما لو كانت من ركلة جزاء (بين الإبهام والسبابة). يستعدوا الإبهام الأيسر ضد لوحة بلتيير (أو طبق بتري لوحة الباردة)، واستخدام الإبهام الأيسر كنقطة ارتكاز على أي الجزء السفلي من الحقنة ستقع (الشكل 2A). تبدو من خلال المجهر، وتأكد من أن شطبة من الإبرة مرئيا.
ملاحظة: إبر حادة جدا. كن حذرا عند التعامل معها. ويمكن ارتداء اللاتكس أو قفازات النتريل تقدم بعض الحماية.- استخدام الإبهام الأيسر للمساعدة في اجراء إبرة / المحاقن ثابتة في جميع أنحاء الداخلي وتجنب المصافحة.
- جعل زاوية من حوالي 40 درجة مع الإبهام الأيسر والأيسر السبابة (مع السبابة على سطح الجراحة) للمساعدة في اجراء مستقر سطح الجراحة.
- معشطبة من الإبرة التي تواجه أعلى (مثل ملعقة)، موقف الإبرة بزاوية قائمة على العين (الشكل 2B). استخدام رأس الإبرة لاختراق بلطف طبقة رقيقة من الأنسجة التي تغمر كوب البصري (أبيض والمنطقة unpigmented) من العين، يغرف من اليمين إلى اليسار. جدا إزالة بلطف أي نوع من الأنسجة الصباغية التي تقع داخل الكأس البصرية، مع الحرص على عدم ثقب أسفل أو تدمير حدود الكأس البصرية.
- إذا كانت دودة على ورقة الترشيح لل> 1-2 دقيقة في أي وقت أثناء العملية، إضافة قطرة واحدة من الماء لترطيب دودة دودة.
ملاحظة: سوف الجفاف زيادة قابلية الدودة إلى وقوع إصابات التمزيق.
- إذا كانت دودة على ورقة الترشيح لل> 1-2 دقيقة في أي وقت أثناء العملية، إضافة قطرة واحدة من الماء لترطيب دودة دودة.
- كرر الخطوة 3.3 حتى كل من الأنسجة مصطبغة السوداء (الخلايا الصبغية)، وكذلك كل من الأنسجة البيضاء للكوب الضوئية (التشعبات للخلايا مستقبلة للضوء)، تتم إزالتها. إزالة الأنسجة رفعه تمسك نهاية إبرة عن طريق المسح بعناية بمنديل يمسح. إذا مزدوج عبلة العينهو المطلوب نشوئها، اجتثاث العين الثانية في هذه المرحلة.
ملاحظة: لتجنب الإصابة، والإبر يمكن تنظيفها عن طريق الامساك الإبرة بمنديل نظيف يمسح عقد مع الإبهام والسبابة، ثم باستخدام اليد الأخرى لسحب الإبرة من خلال مسح بعيدا عن الإبهام والسبابة. بدلا من ذلك، إبرة يمكن أن تمحى على سطح النسيج الرطب مسح وفحص للنظافة. - عند الانتهاء، استخدم ماصة نقل لنقل دودة إلى طبق المسمى تحتوي على المياه العذبة دودة. إذا تحليل البيانات المجموعة، وضع ما يصل إلى 20 ديدان في واحد 100 مم طبق بيتري. إذا تتبع تجديد في نفس الأفراد مع مرور الوقت، ضع 1 دودة في كل بئر من لوحة ال 12 أيضا. مرة واحدة يتم نقل جميع الديدان، وشطف الديدان عن طريق إزالة جميع المياه دودة من أطباق / الآبار واستبدال مع المزيد من المياه العذبة دودة.
- لإزالة الديدان من مرشح، backload ماصة مع كمية صغيرة من الماء دودة والافراج عن الماء على دودة. وهذا ينبغي رفع رانه دودة من ورقة الترشيح، إلى أن امتص على الفور في ماصة للنقل.
- احتضان التجارب في ~ 20 درجة مئوية (درجة حرارة الغرفة) محمية من الضوء ومتابعة عملية التجدد.
ملاحظة: الديدان يمكن تخزينها في حاضنة التحكم في درجة حرارته للحفاظ على درجة حرارة ثابتة، ولكن هذا ليس ضروريا تماما. معظم درجة حرارة الغرفة تختلف فقط من قبل +5 ° C، والتي لن تؤثر على قدرة الدودة على التجدد. - إذا رغبت في ذلك، وتحديد الديدان لالمناعية (أنظر الشكلين 3-4) و / أو في الموقع التهجين تحليل التعبير الجيني. توجد طرق تثبيت مختلفة لالمناعية مستورقة 18 و 19 و 20 و الموقع التهجين 21، 22، 23 البروتوكولات في.
- عندما تبرم التجارب، sacrifiم تعيش الديدان عن طريق إزالة ماء دافيء من طبق واستبدالها مع 70٪ من الإيثانول. احتضان الديدان لمدة 3-5 دقيقة، والتحقق من الديدان إلى ليز وتحويل رمادي.
- وضع الديدان غير المعالجة في مجرى النفايات العادية مرة واحدة التضحية. تجنب إدخال الديدان الحية في البيئة، وخاصة الأنواع غير المحلية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
لأول 1-2 ساعة بعد الجراحة، قد يحمل الحيوانات انخفضت حركة بالمقارنة مع الديدان سليمة (ومع ذلك فإنها لا تزال تتحرك). إذا رغبت في ذلك، والديدان تأكل خلال 24 ساعة من الجراحة (على سبيل المثال، لتغذية رني). عند اتباع تجديد العين في نفس الأفراد مع مرور الوقت، تأكد من التقاط صورة لكل دودة على حد سواء قبل الجراحة (سليمة) وفي 1 ساعة بعد الاجتثاث (HPA). قبل 4 أيام آخر الاجتثاث (د ب أ) ينبغي أن يكون تجديد الخلايا الصبغية مرئية، وبنسبة 14 د ب أ العين بالكامل سو...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تحسن هذه التقنية الاجتثاث العين على الطرق الحالية (مثل ثقب) باستبعاد أنسجة المخ وتقييد الختان أساسا إلى أنسجة العين. مع الممارسة، وهذه التقنية يمكن أن يقوم بها معظم الأفراد، من الفنيين ذوي الخبرة في microsurgeries للطلاب الجامعيين عديم الخبرة ولكن الضميري. فمن المستحسن أن هذه التقنية أن تمارس عدة مرات قبل استخدام ablations في التجارب، بما في ذلك (عند الإمكان) تأكيد الإزالة الكاملة للجميع أنسجة العين عن طريق المناعية أو التهجين الموضعي للعلامة العين (ق) <...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
فإن الكتاب أود أن أشكر ميشيل ديوتشاند لاتقان هذه التقنية الاجتثاث العين، تايلور بيركولز للمساعدة في فحص وظيفي، مايكل ليفين عن الأجسام المضادة لمكافحة arrestin، وجونجي Morokuma للحصول على معلومات على لوحات بلتيير. وأيد هذا العمل من منحة SFSA من جامعة ميشيغان الغربية إلى WSB.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أملاح البحر الفورية | للمحيط Spectrum Brands | SS15-10 | "10 جالون" مربع ؛ (الوزن الصافي 3 أرطال) |
| مناديل مناديل Kimwipes EX-L الخالية من النسالة | Kimberly-Clark | 34155 | 4.5 × 8.5 بوصة |
| Whatman # 2 ورقة الترشيح | Sigma | WHA1002125 | دوائر ، قطر 125 مم ، حقنة |
| أنسولين بيضاء سهلة اللمس (مع إبرة) سوق | صحة الأليفة | 17175-04 | ؛ U-100 1 سم مكعب حقنة ، 31 جم 5/16 في إبرة |
| 100 مم طبق بتري | VWR | 25384-342 | 100 مم × 15 مم |
| 60 مم طبق بتري | VWR | 25384-092 | 60 مم × 15 مم |
| Dumont # 5 ملقط ؛ | أدوات العلوم الدقيقة | 11254-20 | اينوكس، طرف مستقيم، |
| ماصات نقل 11 سم | سامكو العلمية | 225 | مبتذلة كبيرة متخرجة 7.5 مل غير معقمة |
| فيلم بارافيلم M Brand | ؛ | 701606 | 4 في × 125 قدم لفة |
| 12 بئر لوحة زراعة الأنسجة غير المعالجة | VWR | 15705-059 | غير معالجة ، قاع مسطح ، معقم ، حاويات طعام بلاستيكية من ماركة فالكون |
| (للمستعمرة) ؛ | Ziploc | مستطيل كبير | 2.25 كوارت (2.12 لتر) ، 10 بوصة × 6 -3/4 بوصة × 3 -3/16 بوصة ؛ |
| Planaria (Girardia tigrina< / em>) Carolina | Biological | 132954 | تباع باسم Planaria "البني" ؛ غالبا ما تكون G. tigrina< / em> (المعروفة أيضا باسم Dugesia tigrina< / em>) ، ولكن في بعض الأحيان تكون G. dorotocephala< / em> (المعروف أيضا باسم Dugesia dorotocephala< / em>) ؛ كلاهما سيعمل. |
| Planaria (Schmidtea mediterranea) | n / a | n/a< | em>S. mediterranea ليست متوفرة تجاريا. في هذا الوقت لا يمكن الحصول على إلا من المختبرات التي تستخدمها ولديها إضافية. |
| مناشف ورقية بنية | Grainger | 2U229 | 9-3 / 16 × 9-3 / 8 "منشفة ورقية متعددة الطيات 1-Ply ، زجاجة غسيل غير مبيضة |
| (للمياه الدودية) ، زجاجات | اختيارية VWR | 16650-275 | ، بولي إيثيلين منخفض الكثافة ، فم واسع ، 500 مل |
| جسم مضاد مضاد للسينابسين ، اختياري | دراسات تنموية Hybridoma Bank | 3C11 | |
| جسم مضاد مضاد مضاد للاعتقال الطافي ، | اختياري غير متوفر | غير متوفر تجاريا. هدية لطيفة من مايكل ليفين ، جامعة تافتس | |
| Nalgene Lowboy carboy مع حنفية (لتخزين مياه الدودة) ، اختياري | Nalge Nunc International Corporation | 2324-0015 | 15 L، البولي بروبيلين ، المظهر الجانبي المنخفض يجعل من السهل ملء حاويات المستعمرة البلاستيكية ؛ |
| لوحة بلتيير مخصصة ، آلة | ويليامز اختيارية ، فوكسبورو ، ماساتشوستس & nbsp ؛ | تفاصيل | التصميم غير مجاملة من Junji Morokuma ، جامعة تافتس: تم تصنيع لوحة Peltier من مضخة حرارية كهروحرارية قياسية (على سبيل المثال ، كتالوج All Electronics Corp # PJT-1 ، 30 مم 2< / sup>). المضخة الحرارية المربعة مغطاة بسطح رفيع معكوس ، ثم توضع داخل ثقب مربع 30 مم < > 2 < / sup> في شكل زجاج شبكي دائري (~ 50 مم في القطر). هذا النموذج ذو سمك مماثل للمضخة الحرارية ، ويتناسب مع التدفق في أداة جيدة في وسط بالوعة حرارية مستديرة (~ 115 مم في القطر). النموذج / المضخة الحرارية هي ؛ "مثبتة" في الحوض بمركب المشتت الحراري ذو القاعدة السيليكونية. يتم ربط الخيوط من خلال ثقوب محفورة من خلال كل من النموذج والمشتت الحراري. يتم تجهيز النصف السفلي من المشتت الحراري في "قدم" تتناسب مع فتحة لوحة قاعدة المجهر. |
| مصدر طاقة التيار المستمر (للوحة بلتيير) ، اختياري | B & مصدر | 1665 | ، 1-18 فولت (تيار مستمر) ، 1-10 أمبير. |
| الإمدادات | |||
| قفازات | |||
| شفرة الحلاقة | |||
| مقص | |||
| نطاق تشريح مع إضاءة | |||
| مساند عود تناول الطعام ، اختياري |
المراجع
- Gentile, L., Cebria, F., Bartscherer, K. The planarian flatworm: an in vivo model for stem cell biology and nervous system regeneration. Dis Model Mech. 4 (1), 12-19 (2011).
- Elliott, S. A., Sanchez Alvarado, A. The history and enduring contributions of planarians to the study of animal regeneration. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2 (3), 301-326 (2013).
- Emili Saló, R. B. Chapter 3. Animal Models in Eye Research. Tsonis, P. A. , Academic Press. 15-26 (2008).
- Lapan, S. W., Reddien, P. W. dlx and sp6-9 Control optic cup regeneration in a prototypic eye. PLoS Genet. 7 (8), e1002226(2011).
- Lapan, S. W., Reddien, P. W. Transcriptome analysis of the planarian eye identifies ovo as a specific regulator of eye regeneration. Cell Rep. 2 (2), 294-307 (2012).
- Inoue, T., et al. Morphological and functional recovery of the planarian photosensing system during head regeneration. Zoolog Sci. 21 (3), 275-283 (2004).
- Pineda, D., et al. The genetic network of prototypic planarian eye regeneration is Pax6 independent. Development. 129 (6), 1423-1434 (2002).
- Paskin, T. R., Jellies, J., Bacher, J., Beane, W. S. Planarian Phototactic Assay Reveals Differential Behavioral Responses Based on Wavelength. PLoS One. 9 (12), e114708(2014).
- Raffa, R. B., Martley, A. F. Amphetamine-induced increase in planarian locomotor activity and block by UV light. Brain Res. 1031 (1), 138-140 (2005).
- Sandmann, T., Vogg, M. C., Owlarn, S., Boutros, M., Bartscherer, K. The head-regeneration transcriptome of the planarian Schmidtea mediterranea. Genome Biol. 12 (8), R76(2011).
- Vasquez-Doorman, C., Petersen, C. P. The NuRD complex component p66 suppresses photoreceptor neuron regeneration in planarians. Regeneration (Oxf). 3 (3), 168-178 (2016).
- Deochand, M. E., Birkholz, T. R., Beane, W. S. Temporal regulation of planarian eye regeneration. Regeneration. 3 (4), 209-221 (2016).
- Sakai, F., Agata, K., Orii, H., Watanabe, K. Organization and regeneration ability of spontaneous supernumerary eyes in planarians -eye regeneration field and pathway selection by optic nerves. Zoolog Sci. 17 (3), 375-381 (2000).
- Asano, Y., Nakamura, S., Ishida, S., Azuma, K., Shinozawa, T. Rhodopsin-like proteins in planarian eye and auricle: detection and functional analysis. J Exp Biol. 201 (Pt 9), 1263-1271 (1998).
- Cross, S. D., et al. Control of Maintenance and Regeneration of Planarian Eyes by ovo. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (12), 7604-7610 (2015).
- Robb, S. M., Gotting, K., Ross, E., Sanchez Alvarado, A. SmedGD 2.0: The Schmidtea mediterranea genome database. Genesis. 53 (8), 535-546 (2015).
- Robb, S. M., Ross, E., Sanchez Alvarado,, A, SmedGD: the Schmidtea mediterranea genome database. Nucleic Acids Res. 36, D599-D606 (2008).
- Beane, W. S., Tseng, A. S., Morokuma, J., Lemire, J. M., Levin, M. Inhibition of planar cell polarity extends neural growth during regeneration, homeostasis, and development. Stem Cells Dev. 21 (12), 2085-2094 (2012).
- Forsthoefel, D. J., Waters, F. A., Newmark, P. A. Generation of cell type-specific monoclonal antibodies for the planarian and optimization of sample processing for immunolabeling. BMC Dev Biol. 14, 45(2014).
- Ross, K. G., et al. Novel monoclonal antibodies to study tissue regeneration in planarians. BMC Dev Biol. 15, 2(2015).
- Cardona, A., Fernandez, J., Solana, J., Romero, R. An in situ hybridization protocol for planarian embryos: monitoring myosin heavy chain gene expression. Dev Genes Evol. 215 (9), 482-488 (2005).
- King, R. S., Newmark, P. A. In situ hybridization protocol for enhanced detection of gene expression in the planarian Schmidtea mediterranea. BMC Dev Biol. 13, 8(2013).
- Pearson, B. J., et al. Formaldehyde-based whole-mount in situ hybridization method for planarians. Dev Dyn. 238 (2), 443-450 (2009).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
