Method Article

العزلة في وقت واحد من كارديوميوسيتس عالية الجودة، الخلايا البطانية، والألياف الليفية من القلب الجرذ الكبار

DOI:

10.3791/55601

⸱

May 19th, 2017

 ,  , 
1Internal Medicine, Cardiology and Angiology, University Hospital Giessen

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد وضعت العديد من البروتوكولات ووصف لعزل أنواع مختلفة من خلايا القلب من القلب الفئران. هنا، يوصف بروتوكول الأمثل الذي يسمح لعزل عالية الجودة أنواع الخلايا القلب الرئيسية (الخلايا العضلية، الخلايا البطانية، والألياف الليفية) من إعداد واحد، والحد من التكاليف التجريبية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الفئران هو نموذج حيواني مهم المستخدمة في البحوث القلب والأوعية الدموية، وتستخدم خلايا القلب الفئران بشكل روتيني لتحليل المختبر من الآليات الجزيئية للتقدم أمراض القلب والأوعية الدموية مثل تضخم القلب والتليف وتصلب الشرايين. على الرغم من أن العديد من المحاولات مع نجاح متغير قد أحرزت لتطوير خطوط الخلايا خلد من نظام القلب والأوعية الدموية لفهم هذه الآليات الخلوية، والخلايا الأولية توفر أكثر طبيعية وقريبة من البيئة في الجسم الحي لمثل هذه الدراسات. لذلك، مختبرات مختلفة تعمل على نوع خلية معينة وضعت بروتوكولات لعزل أنواع فردية من خلايا القلب الفئران من الفائدة. ومع ذلك، هناك بروتوكول يسمح لعزل أكثر من نوع خلية واحدة، غير موجود. هنا يوصف بروتوكول الأمثل الذي يسمح لعزل عالية الجودة أنواع خلايا القلب الرئيسية (الخلايا العضلية، الخلايا البطانية، والألياف الليفية) من إعداد واحد وتمكن ثيr للاستخدام في التحليلات الخلوية. ويسمح ذلك بأكفأ استخدام للموارد المتاحة، مما قد يوفر الوقت ويقلل من تكاليف البحث.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد استخدمت منذ فترة طويلة نماذج القوارض كأدوات لتوسيع فهمنا لعلم وظائف الأعضاء القلب والأوعية الدموية في الصحة والمرض. 1 على الرغم من أن هذه النماذج الحيوانية تسمح لنا لفهم الفيزيولوجيا المرضية للمرض على مستوى الجهاز وتحليل الدوائية والديناميكا الدوائية من مختلف العوامل الدوائية المستخدمة لعلاج أمراض القلب والأوعية الدموية، وفهم الآليات الجزيئية للتطور أمراض القلب والأوعية الدموية ومساهمة معين نوع الخلية يتطلب استخدام في المختبر نماذج زراعة الخلايا. لهذا الغرض تم تطوير خطوط خلوية مختلفة من نظام القلب والأوعية الدموية؛ 2 ، 3 ومع ذلك، الخ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويتفق التحقيق مع دليل رعاية الحيوانات المختبرية واستخدامها الذي نشرته المعاهد الوطنية للصحة في الولايات المتحدة (منشور المعهد الوطني للصحة رقم 85-23 1985) وتمت الموافقة عليه من قبل لجنة الأخلاقيات المحلية في جامعة جيسن. تم استخدام الذكور البالغين من الفئران ويستار وزنها 200 - 250 غرام في هذه الدراسة.

1. الأوتوكلاف

  1. قبل يوم واحد على الأقل من الإجراء هو أن يتم تنفيذها، الأوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية، نصائح ماصة، وماصات باستور لاستخدامها في إجراء العزلة في 121 درجة مئوية ل....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يؤدي إجراء العزلة إلى العائد من 70 - 80٪ قابلة للحياة، على شكل قضيب، كارديوميوسيتس المخططة ( أرقام 2A و 2 C ) التي يمكن استخدامها للتجارب المخطط لها. في كارديوميوسيتس مختبرنا تستخدم بشكل روتيني لتحليل كا 2 + الإشارات. الشكل 5A يظهر الكالسيوم داخل الخلايا [كا 2 + ] ط التذبذبات ردا على نقص التروية / ضخه في خلايا عضلية محملة فورا-آم (5 ميكرومتر). ويبين.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه المقالة، يتم وصف بروتوكول استنساخ لعزل وثقافة ميوسيتس القلب، الخلايا البطانية، والألياف الليفية. يصف هذا البروتوكول العزلة في وقت واحد وعالية الجودة من أنواع الخلايا الرئيسية من الأنسجة القلبية، أي خلايا عضلية، الخلايا البطانية، والخلايا الليفية في مقابل نوع خلية واحدة فقط. وهناك خطوة حاسمة في إجراء العزل هو الهضم السليم للنسيج القلب. إذا كان الهضم غير مكتمل، قد لا يزال الحصول على عدد كبير من ميوسيتس ولكن نوعية جودتها سيئة جدا، وهي في الغالب هيبيركونتراكتيد وجولة (.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفين ليس لديهم ما يعلن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الدعم الفني من L. رينالدي، S. شافير، D. ريتز، H. توماس و A. ويبر هو مع الامتنان بشكر. ويود المؤلفون أيضا أن يشكروا الدكتور إ. مارتينسون على قراءته المكثفة للطباعة والتحرير اللغوي للمخطوطة. وأيد الدراسة من قبل جامعة جيسن أنسكوبسفينانزيرونغ منحة ل M. أسلم و D. غوندوز.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
مكافحة vWFسانتا كروز للتكنولوجيا الحيوية.SC-14014
كلوريد الكالسيومميرك102378
كارنيتينسيجما ألدريتشC0283
كولاجيناز من النوع الثانيورثينجتونLS004176
الكرياتينسيجما ألدريتشC0780
D-GlucoseMerck108342
Dil-Ac-LDLThermo ScientificL3484
محلول EDTA (0.2 م)Biochrome AGL2113
التضمينCitiflourAF1-25
الخلية البطانية المتوسطة MV2PromoCellC-22022
مصل ربلة الساق الجنينية (FCS)Biochrome AGS0615
GentamicinServa Chemicals47991
HEPESSigma-AldrichH0887
IsofluraneAbbottTU 061219
Laminin روش / سيجما11243217001
M199 متوسطالحرارة العلمي 11150059
M199 متوسط (مسحوق)Biochrome AGT061
كبريتات المغنيسيومSigma-Aldrich63138
الفأر المضاد للفئران CD31 (TLD-3A12) محلولكلوريد الصوديومالعلمي MA1-81051
(0.9٪) معقمب. براون30820080
حبات IgG ماوس (Dynabeads)Thermo Scientific11041
Paraformaldehyde (PFA) 4٪ SolutionSanta Cruz Biotech.sc-281692
البنسلين الستربتومايسينالحراري العلمي15070-063
محلول ملحي عازل للفوسفات (PBS) 1x & nbsp ؛PAN-BiotechP04-36500
المواد الاستهلاكية البلاستيكيةGreiner Bio-One
كلوريد البوتاسيومMerck4933
فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيومMerck7873
كلوريد الصوديومMerck6404
محلول هيدروكسيد الصوديوم (2 N)Merck109136
معقم نظام الترشيحThermo Scientific5660020
TaurineSigma-AldrichT8691
TO-PROThermo ScientificT3605
Trypsin-EDTA Solution (10x)Sigma-AldrichT4174
Water ، معقمB. Braun
محلول الحراري

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zaragoza, C., et al. Animal models of cardiovascular diseases. J Biomed Biotechnol. 2011, 497841(2011).
  2. Claycomb, W. C., et al. HL-1 cells: a cardiac muscle cell line that contracts and retains phenotypic characteristic....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cardiomyocyte IsolationEndothelial Cell IsolationFibroblast IsolationRat Heart PerfusionCollagenase DigestionTissue ChoppingCell FiltrationMagnetic Bead SeparationCalcium Solution TreatmentCCT Medium Culture

Related Articles