توفر هذه المقالة طريقة مفصلة لإجراء فحص الكيميائي العدلة السريع عن طريق دمج العزلة على رقاقة العدلات من الدم الكامل واختبار الكيميائي على رقاقة ميكروفلويديك واحدة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
توفر هذه المقالة طريقة مفصلة لإجراء فحص الكيميائي العدلة السريع عن طريق دمج العزلة على رقاقة العدلات من الدم الكامل واختبار الكيميائي على رقاقة ميكروفلويديك واحدة.
العدلات الهجرة و الكيميائي حاسمة لجهاز المناعة في الجسم. وتستخدم الأجهزة ميكروفلويديك على نحو متزايد للتحقيق الهجرة العدلات والكيماوية نظرا لمزاياها في التصور في الوقت الحقيقي، ومراقبة دقيقة لتوليد تركيز تركيز الكيميائية، وانخفاض كاشف واستهلاك العينة. في الآونة الأخيرة، وقد بذلت جهود متزايدة من قبل الباحثين ميكروفلويديك نحو تطوير متكاملة وسهلة التشغيل نظم تحليل الكيميائي ميكروفلويديك، مباشرة من الدم كله. في هذا الاتجاه، وقد تم تطوير أول طريقة على كل رقاقة لدمج تنقية سلبية المغناطيسي من العدلات والمقايسة الكيميائي من عينات حجم الدم الصغيرة. هذه الطريقة الجديدة تسمح السريعة عينة إلى نتيجة اختبار العدلات الكيميائي في 25 دقيقة. في هذه الورقة، ونحن نقدم مفصلة البناء والتشغيل وتحليل البيانات طريقة لهذا الفحص الكيميائي الكل على رقاقة مع مناقشة حول استراتيجيات استكشاف الأخطاء وإصلاحها، ييميوالتوجهات والاتجاهات المستقبلية. تظهر النتائج التمثيلية للاختبار الكيميائي العدلات اختبار كاشف كيميائي محدد، N -Formyl-ميت-ليو-ف (فملب)، والبلغم من مرض الانسداد الرئوي المزمن (كوبد)، وذلك باستخدام هذه الطريقة كل على رقاقة. هذا الأسلوب ينطبق على العديد من التحقيقات المتعلقة بالهجرة الخلية والتطبيقات السريرية.
الكيميائي، وهي عملية موجهة للهجرة الخلية للذوبان التدرج الكيميائي التدرج، وتشارك بشكل حاسم في العديد من العمليات البيولوجية بما في ذلك الاستجابة المناعية 1 ، 2 ، 3 ، تطوير الأنسجة 4 والسرطان الانبثاث 5 . العدلات هي مجموعة فرعية من خلايا الدم البيضاء الأكثر وفرة وتلعب أدوارا حاسمة في تمكين وظائف الدفاع المضيف الفطرية الجسم، وكذلك في الوساطة الاستجابات المناعية التكيفية 6 ، 7 . وقد تم تجهيز العدلات بآلات كيميائية عالية التنظيم تسمح ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وتمت الموافقة على جميع بروتوكولات جمع العينات البشرية من قبل مجلس أخلاقيات البحوث المشتركة بين أعضاء هيئة التدريس في جامعة مانيتوبا، وينيبيغ.
1. ميكروفلويديك جهاز تلفيق ( الشكل 1A )
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يتم اختيار العدلات سلبا من قطرة من الدم كله مباشرة في الجهاز ميكروفلويديك. تم التحقق من نقاء العدلات معزولة من قبل على رقاقة جيمزا تلطيخ وأظهرت النتائج نموذجية على شكل حلقة ونوى الفص على شكل العدلات ( الشكل 2A ) 25 . وهذا يدل على فعالية العزلة على رقاقة العدلة في نقاء عالية من حجم صغير من الدم الكامل. وعلاوة على ذلك، يمكن للهيكل لرسو السفن محاذاة بشكل فعال الخلايا بجانب قناة التدرج قبل تطبيق الت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
في هذه الورقة، تم وصف بروتوكول مفصل لعزل مباشرة العدلات من الدم الكامل تليها اختبار الكيميائي، وكلها على رقاقة ميكروفلويديك واحدة. هذا الأسلوب يوفر ميزات مفيدة في عملية سهلة، واختيار السلبية من العدلات عالية النقاء، سريع عينة إلى نتيجة اختبار الكيميائي، الكواشف المخفضة واستهلاك العينة، وتحليل البيانات الهجرة الهجرة دقيقة. كما تقدير تقريبي، على الأقل 25٪ من العدلات من مدخلات عينة الدم كاملة دخلت بشكل فعال في هيكل لرسو السفن في الجهاز، وجدنا النقاء العدلات عالية من قبل على رقاقة جيم.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
لا يوجد تضارب في المصالح للكشف.
ويدعم هذا العمل جزئيا من المنح المقدمة من مجلس العلوم الطبيعية والهندسة البحوث في كندا (نزيرك) والمعاهد الكندية للبحوث الصحية (سيهر). نشكر المعهد السريري للبحوث التطبيقية والتعليم في مستشفى فيكتوريا العام في وينيبيغ ومستشفى سيفين أوكس العام في وينيبيغ لإدارة العينات السريرية من البشر. نشكر الدكتور هاجيت بيريتز-سوروكا لمناقشة مفيدة حول استراتيجيات عملية الفحص. نشكر البروفيسور كارولين رن والدكتور شياو مينغ (كودي) تشن من جامعة واترلو لدعمهم السخي في عملية التصوير.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي>تصنيع الجهاز< / قوي> | |||
| محاذاة القناع | ABM | N / A | |
| Spinner | Solitec | 5000 | |
| Hotplate | VWR | 11301-022 | |
| منظف البلازما | هاريك البلازما | PDC-001 | |
| مجفف الفراغ | فيشر ساينتفيك | 08-594-15A | |
| مقياس رقمي | Ohaus | CS200 | |
| SU-8 2000 أرق | Microchem | SU-8 2000 | |
| SU-8 2025 مقاوم للضوء | Microchem | SU-8 2025 | |
| SU-8 مطور | Microchem | SU-8 مطور | |
| Si رقاقة | Silicon، Inc | LG2065 | |
| كحول الأيزوبروبيل | فيشر Scientific | A416-4 | |
| (tridecafluoro-1،1،2،2-tetrahydrooctyl) trichlorosilane | Gelest | 78560-45-9 | |
| Polydimethylsiloxane (PDMS) | Ellsworth المواد اللاصقة | 2065622 | |
| طبق بتري | فيشر FB0875714 | ||
| الشرائح الزجاجية | العلمية فيشر Scientific | 12-544-4 | |
| وسادة القطع | N / A | N / A | الطلب |
| اللكمات | N / A | N / A | حسب الطلب |
| < قوي > الاسم < / قوي > | < قوي > المصدر < / strong > | رقم الكتالوج < / strong > | التعليقات < strong > |
| على الرقاقة عزل الخلايا ومقايسة الانجذاب الكيميائي < / strong> | |||
| RPMI 1640 | فيشر SH3025502 | ||
| DPBS | Fisher Scientific | SH3002802 | |
| ألبومين مصل البقر (BSA) | سيجما ألدريتش | SH3057402 | |
| فيبرونيكتين | VWR | CACB356008 | |
| fMLP | سيجما ألدريتش | F3506-10MG | |
| الأقراص المغناطيسية | أدوات النيلي | 44202-1 | قطر 5 مم ، 1 مم سميكة |
| FITC-Dextran: | سيجما-ألدريتش | FD10S | |
| Rhodamine | Sigma-Aldrich | R4127-5G | |
| محلول وصمة عار Giemsa | Rowley Biochemical Inc. | G-472-1-8OZ | |
| EasySep Direct Human Neutrophil Isolation Kit | STEMCELL Technologies Inc | 19666 | |
| Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | D0632 | |
| Nikon Ti-U مجهر | نيكون | Ti-U | |
| الغرفة البيئية. | InVivo Scientific | N / A | |
| CCD | نيكون | DS-Fi1 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.