يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

عزل الفئران الدهنية المشتقة من الأنسجة الاوعية الدموية الدقيقة شظايا كما وحدات الأوعية الدموية للهندسة الأنسجة

12.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/55721

⸱

أبريل 30, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Institute for Clinical and Experimental Surgery, Saarland University, 2Division of Plastic Surgery and Hand Surgery, University Hospital Zurich, University of Zurich

في هذه المقالة

ملخص

نقدم بروتوكول لعزل الدهنية شظايا الاوعية الدموية الدقيقة المستمدة من الأنسجة التي تمثل وحدات الأوعية الدموية واعدة. أنها يمكن أن تكون معزولة بسرعة، لا تتطلب في تجهيز المختبر، وبالتالي يمكن استخدامها لprevascularization خطوة واحدة في مختلف مجالات هندسة الأنسجة.

الملخص

شبكة الاوعية الدموية الدقيقة وظيفية ذات أهمية محورية لبقاء والتكامل من بنيات الأنسجة هندسيا. لهذا الغرض، وقد وضعت عدة استراتيجيات عائية وprevascularization. ومع ذلك، وتشمل معظم النهج القائمة على الخلايا في المختبر الخطوات تستغرق وقتا طويلا لتشكيل شبكة الاوعية الدموية الدقيقة. وبالتالي، فهي ليست مناسبة لإجراءات خطوة واحدة أثناء العملية. الدهنية المشتقة من الأنسجة شظايا الاوعية الدموية الدقيقة (إعلان MVF) تمثل وحدات الأوعية الدموية واعدة. أنها يمكن أن تكون معزولة بسهولة من الأنسجة الدهنية ويحمل التشكل microvessel وظيفية. وعلاوة على ذلك، فإنها يحشدوا بسرعة إلى شبكات الاوعية الدموية الدقيقة جديدة بعد زرع في الجسم الحي. وبالإضافة إلى ذلك، وقد ثبت أن إعلان MVF للحث على lymphangiogenesis. وأخيرا، فهي مصدرا غنيا للخلايا الجذعية الوسيطة، والتي قد تزيد من إمكانية المساهمة في الأوعية الدموية العالية. في دراسات سابقة أننا أظهرنا في vascularizati رائععلى قدرة إعلان MVF في هندسة العظام والجلد بدائل. في هذه الدراسة، ونحن التقرير على بروتوكول موحد لعزل الأنزيمية للإعلان MVF من الأنسجة الدهنية في الفئران.

المقدمة

وتركز هندسة الأنسجة في تصنيع الأنسجة والأعضاء البديلة التي تحتفظ، استعادة أو زيادة وظيفة غير صالحة للعمل في نظرائهم الجسم الحي 1 و 2. مصير يبني الأنسجة المهندسة يعتمد بشكل حاسم على الأوعية الدموية كافيا 3. شبكات الاوعية الدموية الدقيقة داخل هذه ثوابت ينبغي تنظيم هرمي مع الشرايين، الشعيرات الدموية، والأوردة للسماح كفاءة الارواء الدم بعد مفاغمة إلى الأوعية الدموية المستلم 4. الجيل من هذه الشبكات هو من بين التحديات الرئيسية في هندسة الأنسجة. لهذا الغرض، تم تقديم مجموعة واسعة من الاستراتيجيات الأوعية الدموية التجريبية على مدى العقدين الماضيين 5، 6.

النهج عائية تحفيز النمو الداخلي من microvessels المتلقي إلى TISS هندسياUES عن طريق الهيكلي أو الفيزيائية تعديل سقالة، مثل إدماج عوامل النمو 7. ومع ذلك، من أجل الأوعية الدموية من بنيات كبيرة ثلاثية الأبعاد والاستراتيجيات التي تعتمد على الأوعية الدموية تقتصر بشكل ملحوظ بنسب نمو بطيئة تطوير microvessels 8.

في المقابل، فإن مفهوم prevascularization يهدف لتوليد شبكات الاوعية الدموية الدقيقة وظيفية في غضون الأنسجة يبني قبل ترسيخها على 9. ينطوي prevascularization التقليدية وثقافة مشتركة من الخلايا المكونة للسفينة، مثل الخلايا البطانية، والخلايا الجدارية أو الخلايا الجذعية 10، ضمن السقالات. بعد تشكيل شبكة الاوعية الدموية الدقيقة، ويمكن بعد ذلك يبني prevascularized يتم زرعها في عيوب الأنسجة. الجدير بالذكر أن هذا النهج prevascularization يصعب تطبيقه في عملية إعداد سريرية، لأنه يقوم على معقدة وتستغرق وقتا طويلا في المختبر </ م> الإجراءات التي تم منعها من قبل العقبات التنظيمية الرئيسية 9. وبناء على ذلك، لا يزال هناك حاجة لتطوير استراتيجيات prevascularization الرواية التي هي أكثر ملاءمة لتطبيق السريرية واسع.

قد تكون هذه الاستراتيجية prevascularization تطبيق شظايا الاوعية الدموية الدقيقة المستمدة من الأنسجة الدهنية (إعلان MVF). إعلان MVF تمثل وحدات الأوعية الدموية القوية التي يمكن حصادها في كميات كبيرة من الأنسجة الدهنية من الفئران 11 و 12 و 13 الفئران. وهي تتألف من تصلب، الشعرية، وشرائح سفينة venular، الذي يحمل التشكل microvessel الفسيولوجية مع التجويف وتحقيق الاستقرار في الخلايا المحيطة بالأوعية 14 و 15. تسمح هذه الميزة الفريدة غرس فوري من السقالات الإعلان MVF المصنف إلى عيوب الأنسجة دون precultivation. هناك، وإعلان MVF يحشدوا بسرعة فيإلى شبكات الاوعية الدموية الدقيقة وظيفية. وعلاوة على ذلك، شبيه MVF تمثل مصدرا غنيا للخلايا الجذعية الوسيطة 16، والتي قد تسهم بالإضافة إلى القدرة على التجدد ضرب بهم. وفقا لذلك، وتستخدم إعلان MVF على نحو متزايد في مختلف مجالات هندسة الأنسجة 14 و 15 و 17 و 18 و 19 و 20 و 21.

وقد أنشئت أصلا عزلة إعلان MVF في الفئران 11 و 12. هنا، نحن تصف البروتوكول الذي يسمح للعزلة موحدة من الفئران إعلان MVF من منصات الدهون بربخي. وهذا قد تقدم مزيدا من الإيضاحات الآليات الجزيئية الكامنة وراء وظيفة إعلان MVF باستخدام نماذج الماوس المعدلة وراثيا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للمعهد الوطني للمبادئ التوجيهية الصحية لاستخدام حيوانات التجارب ويتبع المبادئ التوجيهية المؤسسية (Landesamt FÜR Soziales، Gesundheit اوند Verbraucherschutz، أبت. Lebensmittel- اوند Veterinärwesen، Zentralstelle، ساربروكن، ألمانيا).

1. إعداد الأدوات الجراحية

  1. حافظ على استعداد للمقص تشريح، ملقط جراحي، مقص إعداد صغيرة، ملقط غرامة وطبق بتري معقمة مع 15 مل Dulbecco والمتوسطة النسر المعدلة (DMEM و 10٪ مصل العجل الجنين (FCS)، و 100 U / مل البنسلين، 0.1 ملغ / مل الستربتومايسين ) للحصاد منصات بربخي الدهون.
  2. كشف الأدوات الجراحية إلى حل تعقيم لمدة 5 دقائق. بدلا من ذلك، تعقيم لهم (التعقيم بالبخار، 121 ° C، 20 دقيقة).

2. الحيوانات والتخدير

  1. تختار بعناية سلالة من الفئران كما هو مبين في الدراسة و الموضوع قيد التحقيق.
    ملاحظة: في هذه الدراسة استخدمنا الذكور من النوع البري C57BL / 6 الفئران الجهات المانحة للحصاد بربخي الدهون. من الفائدة، شبيه MVF قد تكون معزولة أيضا من المعدلة وراثيا الخضراء بروتين فلوري (GFP) الحيوانات المانحة -positive (C57BL / 6-TG (CAG-EGFP) 1Osb / J) 22. هذا يحمل ميزة كبيرة أن أجزاء قابلة للكشف بسهولة عن طريق تلطيخ المناعى من GFP بعد زرع في الفئران من النوع البري GFP سلبية 14.
  2. تخدير الحيوانات مع حقن داخل الصفاق من زيلازين (15 ملغ / كلغ) والكيتامين (75 ملغ / كلغ). تأكد من أن الحيوانات هي تخدير عميق عن طريق إجراء قرصة أخمص القدمين مع أي رد. لا يشار العين زيوت التشحيم حيث يتم التضحية الحيوانات المانحة بعد الحصاد الدهون.
    ملاحظة: تأكد من تسكين والعقم الجراحية وبالاتفاق مع المبادئ التوجيهية ذات الصلة للبلد ومؤسسة حيث يتم التخطيط للتجارب.
لو "> 3. حصاد بربخي الدهون وسادات

  1. نقل الحيوانات إلى جدول العملية. وضع الحيوان في موقف ضعيف تحت مجهر تشريحي الجراحية وتأكيد التخدير العميق باستخدام قرصة أخمص قدميه.
  2. لشل حركة الكفوف عن طريق تسجيل لهم ثنى الجراحية وتطهير البطن مع تطهير الحل.
  3. فصل الجلد في منطقة البطن خالية من طبقة العضلات الكامنة مع مقص تشريح.
  4. تنفيذ البطن خط الوسط مع مقص تشريح وأفقيا تتكشف اللوحات من جدار البطن.
  5. تحديد ثنائيا الخصية، البربخ ولوحة بربخي الدهون باستخدام ملقط غرامة (الشكل 1). لا يضر الهياكل المعوية لمنع تلوث برازي من منصات الدهون.
  6. حصاد منصات الدهون بربخي مع مقص إعداد الصغيرة وملقط غرامة تحت مجهر تشريحي. الحفاظ على هامش أمان من عدة مم بين البربخ والدهون لالحد من مخاطر حصاد بربخي عرضي.
    ملاحظة: يمكن أيضا أن يتم تنفيذ هذا الإجراء دون مجهر تشريحي. ولكن هذا قد تزيد من خطر الإصابة العرضية من البربخ وحبل منوي.
  7. نقل منصات بربخي الدهون في طبق بتري تحتوي على 15 مل من DMEM قبل ساخنة-في 37 ° C لنقل إلى المختبر الخلية.
  8. التضحية الحيوانية شق من الشريان الأورطي البطني أو خلع عنق الرحم.

4. عزل إعلان MVF

  1. إعداد ثلاثة أطباق بتري معقمة مع 15 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS)، معقم 14 مل البولي بروبلين أنابيب (PP)، وهي معقمة 50 مل دورق مخروطي، عقيمة 1.5 مل أنابيب مخروطية microcentrifuge لومقص غرامة معقمة.
  2. غسل منصات الدهون ثلاث مرات في أطباق بتري مع 15 مل من برنامج تلفزيوني تحت غطاء تدفق الصفحي.
  3. نقل الدهون في أنبوب 14 مل PP. تحديد حجم الأنسجة الدهنية حصاد (في مل) من خلال ركان أنبوب الحجم. فرم الأنسجة الدهنية ميكانيكيا مع مقص غرامة حتى يتم الحصول على تعليق الأنسجة متجانسة.
  4. نقل الأنسجة المفروم مع مجلدين من كولاجيناز NB4G (0.5 U / مل PBS) في قارورة 50 مل مخروطي من خلال 10 مل قياس ماصة. يصبح الحجم الكلي ثلاث مرات حجم الأنسجة الدهنية قياس في الخطوة 4.3. أداء الهضم الأنسجة في حاضنة لمدة 10 دقيقة مع التحريك القوي عن طريق والنمام الآلي (حجم شريط مغناطيسي: 25 ملم) عند 37 درجة مئوية والظروف الجوية ترطيب مع 5٪ CO 2.
  5. مراقبة جزء صغير (10 ميكرولتر) من الأنسجة هضمها تحت المجهر للحكم على ما إذا كانت عملية الهضم يمكن وقفها. التأكد من أن digestate يحتوي أساسا "الحرة" إعلان MVF بجانب الخلايا واحد، مشيرا إلى النقطة المناسبة لوقف عملية الهضم الأنزيمية (الشكل 2).
    ملاحظة: هذه الخطوة تتطلب خبرة للإجراءات وأمر بالغ الأهمية للجودةمن عزل إعلان MVF. المطول النتائج الهضم الدهون في تعليق وحيد الخلية دون إعلان MVF.
  6. تحييد انزيم مع مجلدين من PBS / 20٪ FCS. يصبح الحجم الكلي ثلاث مرات حجم تعليق الخلية الأوعية الدموية في الخطوة 4.4. نقل تعليق خلية الأوعية الدموية مرة أخرى في أنابيب PP جديدة.
  7. احتضان تعليق لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية لفصل إعلان MVF من تبقى الدهون عن طريق الجاذبية. ثم إزالة بعناية طاف الدهون الرئيسي مع دقة ماصة 1 مل. تكرار هذه الدورة عدة مرات مع دقة ماصة 100 ميكرولتر حتى يظهر تعليق لتكون خالية من الدهون.
  8. وضع مرشح 500 ميكرون على رأس أنبوب الطرد المركزي مخروطي 50 مل. نقل تعليق خلية الأوعية الدموية مع ماصة قياس 10 مل من 14 مل أنابيب PP على الغشاء فلتر لإزالة جلطات الدهون المتبقية. نقل تعليق تصفيتها في أنابيب 14 مل PP جديدة وفقا لعدد من الأفراد إعلان MVF يعزل للتجارب مخطط لها.
    ملاحظة: للفي vitrس فحوصات التركيز على تشكيل شبكة الاوعية الدموية الدقيقة، قد يكون مفيدا لزيادة تنقية تعليق خلية الأوعية الدموية لتحسين جودة التصوير خلال التحليلات المجهرية. لهذا الغرض، وتعليق قد تتم تصفيته بالإضافة إلى ذلك مرة واحدة مع فلتر 20 ميكرون لإزالة الخلايا واحد من إعلان MVF جمعها على التصفية.
  9. الطرد المركزي تعليق خلية الأوعية الدموية (600 x ج، 5 دقائق، درجة حرارة الغرفة) للحصول على بيليه تحتوي على إعلان MVF.
  10. بعد الطرد المركزي، وإزالة طاف حتى 1 تبقى مل. إعادة تعليق بيليه مع إعلان MVF في هذا 1 مل ونقل تعليق في أنبوب microcentrifuge مخروطي 1.5 مل.
  11. الطرد المركزي تعليق إعلان MVF في أنبوب microcentrifuge (600 x ج، 5 دقائق) للحصول على بيليه.
  12. إزالة طاف لإعادة تعليق بيليه في الحجم النهائي المطلوب من PBS / 20٪ FCS.
    ملاحظة: عدد الإعلانية MVF في عزلة يمكن تقييمها من قبل العد المجهري. لهذا الغرض، 1/10 من النهائي خلية vesseغير المخفف ل تعليق 01:10 في برنامج تلفزيوني ويتم نقل 100 ميكرولتر من هذا التخفيف في بئر من لوحة 96-جيدا. ثم يتم حساب عدد كامل من إعلان MVF اظهار التشكل مثل السفن واستقراء لعزل كله. تركيز إعلان MVF وتنقية المطلوبة يمكن تكييفها بشكل فردي إلى منها في المختبر أو في تطبيق الجسم الحي للإعلان MVF. هذا ويمكن أن تشمل التضمين من إعلان MVF في المواد الهلامية الكولاجين للتحليل في المختبر لتشكيل شبكة الاوعية الدموية الدقيقة أو البذر من إعلان MVF على السقالات في الجسم الحي زرع في عيوب الأنسجة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

في هذه الدراسة أجرينا ستة إجراءات العزل إعلان MVF مع الأنسجة الدهنية من 7- لمن العمر 12 شهرا من الذكور من النوع البري C57BL / 6 الفئران (يعني وزن الجسم: 35 ± 1 غرام). يوضح الشكل (1) حصاد الفئران منصات بربخي الدهون مع الميكانيكية والأنزيمية العزلة إعلان MVF اللاحقة. كان الوقت اللازم لحصاد الدهون 30 دقيقة ولعزل إعلان MVF كان 120 دقيقة. في المجموع، واستغرق إجراء 150 دقيقة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه الدراسة نقدم بروتوكول راسخة لعزل إعلان MVF. الحصول على إعلان MVF من الأنسجة الدهنية في الفئران هو إجراء بسيط مع عدد قليل من الخطوات الحاسمة. الفئران المعرض تحت الجلد المختلفة، ورواسب الدهون داخل البطن. كما هو موضح سابقا بالنسبة للفئران، ومصدر الدهون الأنسب لعزل إعلان MVF هي منصات بربخي الدهون بسبب حجمها، بنية متجانسة والحد الأدنى من التلوث مع الأوعية الدموية أكبر 11 و 12. في المقابل، رواسب الدهون تحت الجلد في الفئرا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

ونحن ممتنون للمساعدة التقنية الممتازة جانين بيكر، كارولين بيكلمان وروث نيكيلس. وقد تم تمويل هذه الدراسة من خلال منحة من جمعية الألمانية للبحوث (DFG - مؤسسة الأبحاث الألمانية) - LA 2682 / 7-1.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1.5 مل أنبوب الطرد المركزي الصغير المخروطيVWR ، Kelsterbach ، ألمانيا700-5239
100 - & micro ؛ ماصة L دقيقةEppendorf ، هامبورغ ، ألمانيا4920000059
ماصة قياس 10 ملCostar ، Corning Inc. ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية4488
أنابيب PP سعة 14 ملGreiner bio-one ، Frickenhausen ، ألمانيا187261
ماصة دقيقة 1 ملEppendorf ، هامبورغ ، ألمانيا4920000083
500 - & micro ؛ مرشح m (pluriStrainer 500 & micro; م)HISS ، فرايبورغ ، ألمانيا43-50500-03
أنبوب طرد مركزي مخروطي 50 ملGreiner bio-one ، فريكنهاوزن ، ألمانيا227261
قارورة Erlenmeyer 50 ملVWR ، Kelsterbach ، ألمانيا214-0211
لوحة Greiner bio-one ذات 96 بئر، Frickenhausen ، ألمانيا65518
محلول انفصال الخلايا (Accutase)eBioscience ، سان دييغو ، كاليفورنيا الولايات المتحدة الأمريكية00-4555-56
C57BL / 6 فئرانتشارلز ريفر ، كولونيا ، ألمانيا027
C57BL / 6-Tg (CAG-EGFP) 1Osb / J الفئرانمختبر جاكسون ، بار هاربور ، الولايات المتحدة الأمريكية003291
CD117-FITCBD Biosciences ، هايدلبرغ ، ألمانيا553373
CD31-PEBD Biosciences ، هايدلبرغ ، ألمانيا553354
كولاجيناز NB4G Serva Electrophoresis GmbH ، هايدلبرغ ، ألمانيا17465.02تم اختبار الكثير من قبل الشركة المصنعة للنشاط الأنزيمي
مقص التشريحBraun Aesculap AG & amp CoKG ، Melsungen ، ألمانياBC 601
صبغة ربط الحمض النووي (Bisbenzimide H33342)Sigma-Aldrich ، Taufkirchen ، ألمانياB2261
النسر المعدل من Dulbecco (DMEM)   ؛PAN Biotech ، Rickenbach ، ألمانياP04-03600
مصل ربلة الساق الجنينية (FCS)Biochrom GmbH ، برلين ، ألمانياS0615
ملقط ناعمS & T AG ، Neuhausen ، سويسراFRS-15 RM-8
مقص دقيقالعالم للدقة ، ساراسوتا ، فلوريدا ، الولايات المتحدةالأمريكية 503261
بديل الجلد الجلدي (Integra)Integra Life Sciences ، Sain Priest ، فرنسا62021
Ketamine   ؛Serumwerk Bernburg AG ، بيرنبورغ ، ألمانيا7005294
M-IgG2akAL488   eBioscience, سان دييغو, كاليفورنيا الولايات المتحدة الأمريكية53-4724-80
Octeniderm (محلول مطهر)Schü lke & ماير ، نوردرستيدت ، ألمانيا118211
البنسلين / الستربتومايسينBiochrom ، برلين ، ألمانياA2213
طبق بتريGreiner bio-one ، فريكنهاوزن ، ألمانيا664160
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) مجموعةلونزا ، بازل ، سويسرا17-516F
pluriStrainer 20-& micro ؛ م (20 وميكرو؛ مرشح م)تشخيص HISS ، فرايبورغ ، ألمانيا43-50020-03
Rat-IgG2akFITCBD Biosciences ، هايدلبرغ ، ألمانيا553988
Rat-IgG2akPEBD Biosciences ، هايدلبرغ ، ألمانيا553930
مقص تحضيرصغير S & T AG ، نيوهاوزن ، سويسراSDC-15 R-8S
ملقط جراحيبراون Aesculap AG & CoKG, Melsungen, ألمانياBD510R
شريط (Heftpflaster Seide) 1.25 سمFink & Walter GmbH, Mechweiler, Germany1671801
Xylazine Bayer Vital GmbH ، ليفركوزن ، ألمانيا1320422
α-SMA-AL488eBioscience ، سان دييغو ، كاليفورنيا الولايات المتحدة الأمريكية53-9760-82الملصقات داخل الخلايا بالإضافة إلى ذلك Cytofix / Cytoperm (BD Biosciences ، هايدلبرغ ، ألمانيا ؛ # 554722)
تشخيص وسط تتطلب

المراجع

  1. Langer, R., Vacanti, J. P. Tissue engineering. Science. 260 (5110), 920-926 (1993).
  2. Khademhosseini, A., Langer, R. A decade of progress in tissue engineering. Nat Protoc. 11 (10), 1775-1781 (2016).
  3. Novosel, E. C., Kleinhans, C., Kluger, P. J. Vascularization is the key challenge in tissue engineering. Adv Drug Deliv Rev. 63 (4-5), 300-311 (2011).
  4. Rouwkema, J., Khademhosseini, A. Vascularization and Angiogenesis in Tissue Engineering: Beyond Creating Static Networks. Trends Biotechnol. 34 (9), 733-745 (2016).
  5. Laschke, M. W., Menger, M. D. Vascularization in tissue engineering: angiogenesis versus inosculation. Eur Surg Res. 48 (2), 85-92 (2012).
  6. Sarker, M., Chen, X. B., Schreyer, D. J. Experimental approaches to vascularisation within tissue engineering constructs. J Biomater Sci Polym Ed. 26 (12), 683-734 (2015).
  7. Frueh, F. S., Menger, M. D., Lindenblatt, N., Giovanoli, P., Laschke, M. W. Current and emerging vascularization strategies in skin tissue engineering. Crit Rev Biotechnol. 20, 1-13 (2016).
  8. Utzinger, U., Baggett, B., Weiss, J. A., Hoying, J. B., Edgar, L. T. Large-scale time series microscopy of neovessel growth during angiogenesis. Angiogenesis. 18 (3), 219-232 (2015).
  9. Laschke, M. W., Menger, M. D. Prevascularization in tissue engineering: Current concepts and future directions. Biotechnol Adv. 34 (2), 112-121 (2016).
  10. Baiguera, S., Ribatti, D. Endothelialization approaches for viable engineered tissues. Angiogenesis. 16 (1), 1-14 (2013).
  11. Wagner, R. C., Kreiner, P., Barrnett, R. J., Bitensky, M. W. Biochemical characterization and cytochemical localization of a catecholamine-sensitive adenylate cyclase in isolated capillary endothelium. Proc Natl Acad Sci U S A. 69 (11), 3175-3179 (1972).
  12. Wagner, R. C., Matthews, M. A. The isolation and culture of capillary endothelium from epididymal fat. Microvasc Res. 10 (3), 286-297 (1975).
  13. Laschke, M. W., Menger, M. D. Adipose tissue-derived microvascular fragments: natural vascularization units for regenerative medicine. Trends Biotechnol. 33 (8), 442-448 (2015).
  14. Laschke, M. W., et al. Vascularisation of porous scaffolds is improved by incorporation of adipose tissue-derived microvascular fragments. Eur Cell Mater. 24, 266-277 (2012).
  15. Frueh, F. S., et al. Adipose tissue-derived microvascular fragments improve vascularization, lymphangiogenesis and integration of dermal skin substitutes. J Invest Dermatol. 137 (1), 217-227 (2017).
  16. McDaniel, J. S., Pilia, M., Ward, C. L., Pollot, B. E., Rathbone, C. R. Characterization and multilineage potential of cells derived from isolated microvascular fragments. J Surg Res. 192 (1), 214-222 (2014).
  17. Nakano, M., et al. Effect of autotransplantation of microvessel fragments on experimental random-pattern flaps in the rat. Eur Surg Res. 30 (3), 149-160 (1998).
  18. Nakano, M., et al. Successful autotransplantation of microvessel fragments into the rat heart. Eur Surg Res. 31 (3), 240-248 (1999).
  19. Shepherd, B. R., Hoying, J. B., Williams, S. K. Microvascular transplantation after acute myocardial infarction. Tissue Eng. 13 (12), 2871-2879 (2007).
  20. Pilia, M., et al. Transplantation and perfusion of microvascular fragments in a rodent model of volumetric muscle loss injury. Eur Cell Mater. 28, 11-23 (2014).
  21. Laschke, M. W., et al. Adipose tissue-derived microvascular fragments from aged donors exhibit an impaired vascularisation capacity. Eur Cell Mater. 28, 287-298 (2015).
  22. Okabe, M., Ikawa, M., Kominami, K., Nakanishi, T., Nishimune, Y. 'Green mice' as a source of ubiquitous green cells. FEBS Lett. 407 (3), 313-319 (1997).
  23. Honek, J., et al. Modulation of age-related insulin sensitivity by VEGF-dependent vascular plasticity in adipose tissues. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (41), 14906-14911 (2014).
  24. Cho, C. H., et al. Angiogenic role of LYVE-1-positive macrophages in adipose tissue. Circ Res. 100 (4), e47-e57 (2007).
  25. Han, S., Sun, H. M., Hwang, K. C., Kim, S. W. Adipose-Derived Stromal Vascular Fraction Cells: Update on Clinical Utility and Efficacy. Crit Rev Eukaryot Gene Expr. 25 (2), 145-152 (2015).
  26. Chen, Y. J., et al. Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues. J Vis Exp. (109), e53886(2016).
  27. Guillaume-Jugnot, P., et al. Autologous adipose-derived stromal vascular fraction in patients with systemic sclerosis: 12-month follow-up. Rheumatology (Oxford). 55 (2), 301-306 (2016).
  28. Tissiani, L. A., Alonso, N. A Prospective and Controlled Clinical Trial on Stromal Vascular Fraction Enriched Fat Grafts in Secondary Breast Reconstruction. Stem Cells Int. , 2636454(2016).
  29. Calcagni, M., et al. The novel treatment of SVF-enriched fat grafting for painful end-neuromas of superficial radial nerve. Microsurgery. , (2016).
  30. Hoying, J. B., Boswell, C. A., Williams, S. K. Angiogenic potential of microvessel fragments established in three-dimensional collagen gels. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32 (7), 409-419 (1996).
  31. Kirkpatrick, N. D., Andreou, S., Hoying, J. B., Utzinger, U. Live imaging of collagen remodeling during angiogenesis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 292 (6), H3198-H3206 (2007).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

عزل الأنسجة الدهنيةالعزل الإنزيميقياس التدفق الخلويالخلايا الموجبة لـ CD31الخلايا الجذعية الميزنكيميةالأنسجة الدهنية الفأريةالهضم بالكولاجيناز
عزل الفئران الدهنية المشتقة من الأنسجة الاوعية الدموية الدقيقة شظايا كما وحدات الأوعية الدموية للهندسة الأنسجة
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.