يصف هذا العمل بروتوكول يستخدم نهج حل المكون لدراسة الحساسية لمسببات الحساسية لقاح العشب في مجموعة من المرضى من جنوب الصين مع حساسية الأنف و / أو الربو.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
يصف هذا العمل بروتوكول يستخدم نهج حل المكون لدراسة الحساسية لمسببات الحساسية لقاح العشب في مجموعة من المرضى من جنوب الصين مع حساسية الأنف و / أو الربو.
يؤدي التحسس إلى حبوب اللقاح الحشائش إلى مخاطر عالمية لأمراض مجرى الهواء التحسسي. على الرغم من أن الوقاية تعتمد على التحقيق المحلي من المواد المسببة للحساسية حبوب اللقاح، والبيانات حول هذا الموضوع محدودة في جنوب الصين. تم الحصول على أي بيانات متوفرة عن طريق الاستبيانات تقرير الذاتي، واختبارات الجلد وخز، واختبارات إيج الكلي أو محددة باستخدام مقتطفات الخام. ولأسباب كثيرة، لا يمكن الاعتماد على هذه الأساليب. تم فحص تفاعل المصل إلى عشب برمودا، وعشب تيموثي، ومسببات الحساسية من هومولوس في مجموعة من المرضى من قوانغتشو الكبرى (أكبر مدينة في جنوب الصين وضواحيها) مع التهاب الأنف التحسسي و / أو الربو باستخدام محلل المناعية المؤتمتة بالكامل كعنصر (كرد).
وللمرة الأولى، ظهر انتشار كبير إلى حد كبير لإيجابية البرمودا العشب سيج في الجنوبيين الصينيين مع التهاب الأنف التحسسي و / أو الربو. في هؤلاء المرضى، انتشار خفية من التوعيةإلى العشب تيموثي و همولوس سكاندنز لوحظ أيضا، والتي قد تنشأ من التفاعل عبر، كما أن الأخيرين ليست مشتركة في المنطقة. وقد تم دعم ذلك أيضا من خلال الكشف عن مكونات الحساسية.
وقد يوفر محللو المقايسة المناعية التلقائية بالكامل اتساقا مرضيا بين المناطق والمختبرات والمؤسسات ومع مرور الوقت. وقد تتيح آلية الصك كشفا موحدا لم يكن من الممكن كشفه بسهولة قبل ظهور كرد.
هذه هي الدراسة التي تستخدم نهج كرد للتحقيق في التوعية للحساسية حبوب اللقاح العشب في جنوب الصين. ويضيف إلى الأدلة الحالية في الأدب. هناك حاجة إلى دراسات مستقبلية للتحقق من صحة هذه النتائج. ومع ذلك، على الرغم من كرد هو أداة مفيدة، والنتائج التي تم التوصل إليها مع محلل المناعي الآلي بالكامل لا ينبغي أن تحل محل غيرها من التحقيقات المخبرية، والتقييمات السريرية، والخبرة الطبيب.
تمثل حبوب اللقاح العشب ما يقرب من 50٪ من الحساسية المرتبطة بالغلوبيولين المناعي (إيغ)، وبسبب طبيعتها المحمولة جوا، تفرض مخاطر عالمية لأمراض مجرى الهواء التحسسي، وخاصة الربو والتهاب الأنف التحسسي 1 ، 2 ، 3 ، 4 . الوقاية من الحساسية العشب حبوب اللقاح في منطقة تعتمد على معلومات حول التوزيع المحلي للحساسية حبوب اللقاح. لسوء الحظ، الطيف من حساسية المواد المسببة للحساسية يختلف من مكان إلى آخر، وهي الملاحظة المعروفة عموما باسم خصوصية إقليمية.
وفي الصين، وهي منطقة شاسعة من شرق آسيا، تتزايد خصوصية المناطق الإقليمية لتوعية حبوب اللقاح في الأعشاب بسبب محدودية البيانات المتاحة حاليا من الجزء الجنوبي من هذا البلد خلال العقود الماضية 5 . وقد أدى هذا الندرة في البيانات إلى صعوبة في إظهار الحسي حبوب اللقاح العامفي هذا البلد الكبير 6 . بالإضافة إلى ذلك، تم الحصول على بيانات محدودة جدا عن الجنوبيين الصينيين إلى حد كبير من الاستبيانات تقرير الذاتي، واختبارات الجلد وخز (بدلا من اختبارات المصل المختبر)، والقياسات الإجمالية إيغ (بدلا من حساسية إيغ (سيج))، وكشف سيج لمسببات الحساسية ( بدلا من الجزيئات المكونة للحساسية).
الإبلاغ الذاتي من أعراض الحساسية يمكن أن تكون غير موثوق بها عندما تكون مهتمة المواد المسببة للحساسية محددة. اختبارات الوخز الجلد، على الرغم من أن الوصول إليها على نطاق واسع، تنطوي على استخدام غير القياسية، مستخلصات الحساسية الخام، التي قد تحتوي على نفسها مكونات توعية أخرى التي تربك تفسير النتيجة. تعتمد موثوقية اختبار وخز الجلد أيضا بشكل حاد على التلاعب بمهارة من قبل أخصائيي الحساسية أو الممرضات المتخصصين، واستخدام الهستامين مؤخرا، والامتثال المريض (في بعض الأحيان من الصعب جدا للأطفال الصغار). إجمالي المفتش العام مفيد لفحص الحساسية ولكن لا تحديد معقول ثه المساس بالمواد المسببة للحساسية لدى المريض. وعلاوة على ذلك، تحتوي جميع المواد المسببة للحساسية تقريبا على عدد من الجزيئات المكونة للحساسية. قد يشير الحساسية إلى المكونات الرئيسية ( أي دير p 1 و دير p 2 من عث الغبار المنزلي) إلى حساسية "حقيقية" (الحساسية لمسبب حساسية معين، بدلا من إيجابية كاذبة بسبب التفاعلات المتبادلة مع المواد المسببة للحساسية الأخرى)، ولكن التحسس (على سبيل المثال، التفاعل التفاعلي دير p 10، تروبوميوسين) قد لا 7 .
وقبل إدخال التشخيصات التي تم حلها عن طريق المكونات، أعاقت هذه النكسات المخيبة للآمال دراسات الحساسية في الصين. كرد على وجه التحديد بالكشف عن مكونات مسببات الحساسية باستخدام المؤتلف أو تنقيته جزيئات الحساسية، مما يجعل القياس بسهولة قابلة للقياس وقابل للتخصيص 8 . في العقود الماضية، ودراسات الحساسية في كثير من الأحيان استخدام مستخلصات الخام من المواد المسببة للحساسية التي تحتوي حتما على عدد من المكونات غير ذات الصلة. العديد من هذه كووالمكونات هي خاملة، ولكن في بعض الأحيان، يمكن أن يؤدي بعضها إلى ارتباك ردود فعل إيجابية. استخدام جزيئات مسببة للحساسية المؤتلف أو المنقى في كرد يمكن الالتفاف على هذا وبالتالي توفير أفضل دقة الاختبار. عند معالجتها في ميكروأرس، نهج كرد بسرعة شاشات أو يحدد التوعية لمئات من جزيئات الحساسية في المواضيع الفردية. ولا توجد حاليا دراسة جيدة تصميما على كرد على التوعية بالحبوب اللقاحية في جنوب الصين. ومن الناحية المثالية، ينبغي أن تشمل هذه الدراسة سكانا محليين يتمتعون بتغطية جغرافية كبيرة، وأنهم يمثلون حبوب اللقاح التي يتم الإبلاغ عنها عادة في الصين، وأن يعالجوا الجوانب التقنية المذكورة أعلاه. للوصول إلى المستوى العملي من الأهمية السريرية وتسهيل تجنيد عينات المصل، والتحقيق المبكر على التوعية إلى حبوب اللقاح العشب كما المواد المسببة للحساسية استنشاق قد تركز أيضا على المرضى الذين يعانون من اضطرابات الجهاز التنفسي التحسسي، وليس على عامة السكان.
يصف هذا العمل طريقةتستخدم لاختبار تفاعل المصل سيج إلى عشب برمودا، تيموثي العشب، و سكانولس همولوس في المرضى من قوانغتشو الكبرى (أكبر مدينة في جنوب الصين وضواحيها) مع التهاب الأنف التحسسي و / أو الربو باستخدام نهج كرد 5 . هذه النتائج على توعية هذه الحشائش شبه الاستوائية والمعتدلة في جنوب الصين إضافة أدلة هامة إلى أن حاليا في الأدب.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم اعتماد بروتوكول الدراسة، بما في ذلك استخدام عينة المصل البشري، من قبل لجنة الأخلاقيات، مستشفى تابع الأولى من جامعة قوانغتشو الطبية. وقدم جميع المشاركين موافقة خطية مستنيرة، إما بشكل مستقل أو عن طريق والديهم (في حالة الأطفال). وقد تم تسجيل البروتوكول على الانترنت (الصينية السريرية سجل المحاكمة، رقم التسجيل: تشيكر-دسك-13004003، الرجوع إلى http://www.chictr.org/cn/).
1. تحديد مجتمع الدراسة
ملاحظة: مستودع معلومات الحساسية من مختبر مفتاح الدولة لأمراض الجهاز التنفسي (إير-سكلرد) هو المصدر الرئيسي لتجنيد المرضى، لأن إير هو قاعدة بيانات كبيرة الأكثر توثيقا جيدا من المرضى لاختبار مسببات الحساسية في جنوب الصين 9 ، 10 . وقد قامت إير بتخزين عينات من المصل للمرضى منذ ما يقرب من عقد من الزمان. باختصار، تم إعداد هذه العينات المخزنة مسبقا بواسطة الطرد المركزي 5 مل سو فليبوتوميزد الدم الوريدي لمدة 10 دقيقة في 3000 x ج والتعافي من طاف. وضعت عينات المصل في ثلاجات -80 درجة مئوية للتخزين على المدى الطويل. العينات التي استوفت معايير إدراج المريض كانت جاهزة للاستخدام لجميع الاختبارات في هذه الدراسة.
2. تدفق الدراسة وقياسات الفائدة
3. إجراء الاختبار الآلي بالكامل باستخدام نظام تحليل المقايسة المناعية
ملاحظة: الإجراء برمته من اختبار سيج حساسية، وهو مؤتمتة بالكامل ووصف في مكان آخر 7 ، 8 ، 9 ، 10 ، يتبع بروتوكول الشركة المصنعة.
4. تعريف سيج رياكتيفيتي
ملاحظة: لعينة مصل غير مخفف، ومجموعة من قياس إيغ محددة هي 0.35-100 كو / L.
5 - التحليل الإحصائي
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
محلل المناعية الآلي بالكامل المستخدمة في هذه الدراسة لديها بنية المرحلة الصلبة مغطاة المكونات التساهمية مسببات الحساسية أو مكونات الحساسية التي تتفاعل مع جزيئات الفائدة (سيج) في عينات المصل من المريض. مع برنامج تلقائي، محلل يغسل كل غير محددة إيغس مع 150 ميكرولتر من الحل شطف ويكرر هذا 5 مرات. ثم يضيف أنزيم المسمى المضادة للأجسام المضادة إيغ (50 ميكرولتر) لتوليد معقدة. إن الأجسام المضادة لمكافحة إيغ المسمى (المتقارن) إنزيم المسمى هو الأجسام المضادة ا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وقد يوفر محللو المقايسة المناعية التلقائية بالكامل اتساقا مرضيا بين المناطق والمختبرات والمؤسسات ومع مرور الوقت. وقد وجد هذا الإجراء التلقائي لدعم كبير البحوث والبحوث السريرية مقعد، وتمكين الكشف الموحد للكثير من المواد المسببة للحساسية و / أو مكونات الحساسية، وتحديد احتمال حساسية عبر التفاعلات التي لم يكن من السهل الكشف عنها قبل ظهور كردز. وعلاوة على ذلك، يمكن أن تكتمل إجراءات الاختبار كله مع رقابة صارمة على الجودة، مما يسمح للطرق الإنتاجية العالية، على النحو المطلوب في مسح لمنطقة...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
نشكر يويمينغ سو على مساعدته في إعداد هذا الرقم. وقد تم تمويل هذه الدراسة من قبل مؤسسة قوانغدونغ للعلوم والتكنولوجيا (مشروع رقم: 2014A020212352)، ومكتب التعليم قوانغتشو (1201630044؛ 1201630393) والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (نسفك 81572063؛ نسفك 81601394).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| ImmunoCAP 1000 Instrument | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 12-3800-01 | |
| Phadia Information Data Manager حزمة | البرامج Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 12-3801-11 | |
| حزمة البرامج ، ImmunoCAP 1000 | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 12-3801-12 | |
| g2 ( عشب برمودا) | شركة ثيرمو فيشر العلمية (فاديا AB ، أوبسالا السويد) | 14-4131-01 | |
| g6 (عشب تيموثي) شركة | ثيرمو فيشر العلمية (فاديا AB ، أوبسالا السويد) | 14-4100-01 | |
| w22 (قفزة يابانية) شركة | ثيرمو فيشر العلمية (فاديا AB ، أوبسالا السويد) | 14-4452-01 | |
| g216 (nCyn d 1) شركة | ثيرمو فيشر العلمية (فاديا AB ، أوبسالا السويد) | 14-4972-01 | |
| g205 (rPhl p 1) شركة | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 14-5234-01 | |
| g208 (nPhl p 4) شركة | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 14-5288-01 | |
| g215 (rPhl p 5b) شركة | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 14-5338-01 | |
| g209 (rPhl p 6) | شركة Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 14-5289-01 | |
| g210 (rPhl p 7) شركة | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 14-5290-01 | |
| g211 (rPhl p 11) | شركة Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 14-5291-01 | |
| g212 (rPhl p 12) شركة | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 14-5292-01 | |
| o214 محددات الكربوهيدرات المتقاطعة (CCDs) شركة | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 14-5339-01 | |
| IgE Conjugate 400 | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 10-9310-08 | |
| معاير | IgE محدد Thermo Fisher Scientific Inc. (فاديا AB ، أوبسالا السويد) | 10-9459-08 | |
| شريط التحكم في منحنى IgE | محدد Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 10-9312-08 | |
| IgE Specific Anti-IgE ImmunoCAP | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 14-4417-01 | |
| ImmunoCAP IgE Negative Control | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 10-9445-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control L | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 10-9528-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control M | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 10-9529-01 | |
| ImmunoCAP IgE Control H | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 10-9530-01 | |
| حل | التطويرشركة Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 10-9439-08 | |
| Stop Solution | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 34-2271-58 | |
| محلول الغسيل | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 10-9202-08 | |
| FluoroC | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 10-9264-01 | |
| طقم حلول الصيانة | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB ، أوبسالا السويد) | 10-9476-01 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.