إعادة استيعاب حامض الصفراء تعتمد على الأمعاء وتثبيط تغذية مرتدة التوليفي الكبدية الصفراوية حمض مهم للتوازن المنهجي والصحة. في هذه الدراسة، يصف لنا نموذج ماوس لاستئصال لفائفي لتقييم سوء الامتصاص الناجم عن إيليكتومي الصفراء، أوفيراككوموليشن، وسمية في الأمعاء الماوس.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
أوفيراككوموليشن الناجمة عن إيليكتومي الصفراوية في الأمعاء الماوس
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
استئصال الأمعاء هو نهج علاجي مشترك للأمراض التي تصيب الإنسان مثل السمنة ومرض التهاب الأمعاء وداء كرون وسرطان القولون الذي غالباً ما ينتج عن الآثار الضارة مثل متلازمة الأمعاء القصيرة شديدة بما في ذلك الإسهال حامض الصفراء، الجفاف واضطرابات المنحل بالكهرباء، وسوء امتصاص المغذيات. هنا نقدم نموذجا بتر لفائفي مورين، يسمى إيليكتومي، لتقييم الاتصالات الأنسجة والحفاظ على التوازن المنهجي. بعد بتر لفائفي، تعميم الدم بشكل دائم تخلو من عامل النمو تنتجها الخلايا الليفية هرمون الغدد الصماء خاصة الدقاق 15 (FGF15)، التي تصدر عن تثبيط الصماء تخليق حامض الصفراء في الكبد. في تركيبة مع زيادة الإنتاج وإعادة استيعاب الملغاة من الأحماض الصفراوية بعد إزالة الدقاق، تعاني الفئران التي خضعت لعملية جراحية أوفيراككومولاتيون الملح الصفراوية في الأمعاء والإسهال المرتبطة بها، والاعتلال، والوفيات. رواية استخدام نموذج عملية جراحية في هذه الدراسة قد ثاقبة الميكانيكية والفنية التحكم لفائفي التنظيم الأيضي المنهجية في علم وظائف الأعضاء والأمراض.
المقدمة
في البحوث الطبية الحيوية الحديثة، ونماذج حيوانية محوره وراثيا تستخدم على نطاق واسع استخلاص رؤى في الأمراض التي تصيب الإنسان. على وجه الخصوص، قد استخدمت الأنسجة أو وظائف الربح والخسارة الخاصة بالخلية الجينات لدراسة التنظيم الجزيئي، فضلا عن الآثار البيولوجية المستحث. وعلى الرغم من التقدم في معالجة الهدف الجينات في فيفو، هناك قيود الذي طال أمده. الحذف الخاصة الأولى، العديد من الخلايا أو الأنسجة سوف تؤثر على أجهزة متعددة. على سبيل المثال، حذف الجينات الظهارية سيقضي على التعبير ابيثيليا من الأنسجة المتعددة. علاوة على ذلك، حتى لو حذف مقصور على نسيج معين، نادراً ما أمكن السيطرة المكانية. على سبيل المثال، تنفيذ جزأين متمايزين في أنسجة مثل الأمعاء، مهام محددة للغاية التي لا يمكن معالجته مع الدقة في فيفو. وفي هذه الحالات، يعتبر استئصال الأنسجة المحتوية على الجينات نهج دراسة أكثر كفاءة لتحديد أهمية الاتصال الأنسجة الميكانيكية والفنية.
إيليكتومي الغالب تستخدم في مرضى كرون والتهابات الأمراض التي تنطوي على الدقاق القاصي 1،2،3. الدقاق تنتج عادة عدة هرمونات تخزين الطاقة مثل عامل النمو تنتجها الخلايا الليفية 15/19 (FGF15/19) والببتيد YY (بيي) مثل الجلوكاجون الببتيد 1/2 (GLP1/2)؛ هذه الهرمونات تلعب أدواراً هامة في المحلية والغدد الصماء في الكثير من الوظائف البيولوجية4،،من56. من بين هذه الهرمونات، تم التعرف على FGF15 كمثبط الغدد الصماء قوية تخليق حامض الصفراء في الكبد. بمجرد إعادة استيعاب في انتيروسيتيس لفائفي، الأحماض الصفراوية تنشيط مستقبلات فارنيسويد X مستقبلات النووية (FXR) لتحفيز التعبير Fgf15 ، الأمر الذي يؤدي بعد ذلك إلى تثبيط التغذية المرتدة من حامض الصفراء الكبدية توليف 7. في دراسة أجريت مؤخرا، قدمنا نموذج إيليكتومي الماوس من أجل دراسة العوامل مثل كروبيل لفائفي 15 (KLF15)--Fgf15 يشير إلى المحور الذي ينظم إنتاج حامض الصفراء الإيقاعية في الكبد 8. الأهم من ذلك، أدرجنا عائلة رواية، عوامل مثل كروبيل، لا سيما KLF15، في البيولوجيا حامض الصفراء. استناداً إلى الدراسات الفنية بما في ذلك الجراحة إيليكتومي، عقدنا العزم أن توليف حمض الصفراء أوبريجولاتيس KLF15 عبر إليه غير الكبد غير مباشرة. وأخيراً، اعتبرت KLF15 لفائفي أيضا الجهة السلبية الذاتية أول من Fgf15.
أجزاء الأمعاء تنازلي من الأقرب إلى المناطق البعيدة المسؤولة عن امتصاص المواد الغذائية المختلفة. الدقاق هو الجزء الرئيسية المسؤولة عن حامض الصفراء، وفيتامين ب12 (VB12) الاستيعاب 9. دراسة سابقة استخدمت نموذج ماوس لاستئصال القناة الهضمية الدانية لدراسة متلازمة الأمعاء القصيرة؛ واقترحت مختلف أطوال بتر والوجبات الغذائية وأنواع خياطة الاحتفاظ معدل أمثل جراحة بعد بقاء 10. وعلاوة على ذلك، يشير استعراض عهدا إلى أن بتر لفائفي عادة ينتج عن المرض أكثر شدة من ريسيكتيونس الجزء (غي) الجهاز الهضمي الأخرى نظراً لانخفاض قدرة التكيف المسالك المتبقية 11. هذا الموضوع اكتسب مكثفة مصالح جماعات البحوث الأساسية والسريرية، بينما فهم الانتعاش والنهج العلاجية الفعالة التي لا تزال محدودة.
ينتج الإسهال حامض الصفراء من اختلالات في التوازن حامض الصفراء في 12،تداول enterohepatic13. يمكن أن يكون نتيجة لاستئصال لفائفي، أمراض الجهاز الهضمي، أو نتيجة لسوء امتصاص الأحماض الصفراوية مجهول السبب. أكثر من 80 في المائة مرضى وجدت أن يقدم مع الإسهال بعد أن خضع لاستئصال لفائفي 14. وقد إيليكتومي يمكن أن تكون نموذجا جراحة مهمة لتحقيق الإسهال حامض الصفراء. في هذه الدراسة، وتقديم سلسلة من ريسيكشنز لفائفي تقييم تدرج لنقص FGF15، فضلا عن سوء الامتصاص المعوي الصفراوية الملح، أوفيراككوموليشن، والأضرار السامة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
البروتوكول الحيوان واستعرضت ووافقت عليه لجنة الاستخدام في "حالة الاحتياطي الغربية كلية الطب بجامعة" ورعاية الحيوان المؤسسية وأجرى وفقا لدليل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية (الطبعة الثامنة، 2011). وقد euthanized الفئران بأساليب متوافقة مع المبادئ التوجيهية للرابطة الطبية البيطرية الأميركية (وبرايتون) "القتل الرحيم للحيوانات" (طبعة عام 2013). واستخدمت C57BL/6J، ذكور، 8-16 أسبوع القديمة الفئران في هذا البروتوكول. تم إيواء الفئران في بيئة دورة الضوء الظلام/12 ح.
1-"إعداد المنطوق" قبل
- نقل الفئران إلى قفص نظيف 24 ساعة قبل الإجراء. تتيح حرية الوصول إلى المياه للحيوانات. استبدال الأغذية تشو مع الأغذية لينة هلام (مكملات غذائية) ح 4-6 قبل الجراحة للحد من محتويات الأمعاء الدقيقة للجراحة-
- تعقيم جميع الأدوات الجراحية وإعداد المواد الجراحية المعقمة التي تستخدم مرة واحدة. تنظيف منطقة الجراحة ومخروط الآنف مخدر مع الإيثانول 70%-
- إعداد مجهر تشريح والمبخر isoflurane مخدر والصكوك والتحكم في درجة الحرارة حيوانية جراحية طاولة صغيرة للحفاظ على درجة حرارة الجسم. تنظيم الصكوك وخياطة الجروح، والمحاقن في موقع للوصول الحر أثناء الجراحة.
- إعداد مصدر ضوء لتوفير ما يكفي من الضوء لمنطقة الجراحية.
- تعد عقيمة المالحة 0.9 في المائة في 5 مل حقنه لتنظيف الأمعاء والبطن.
2. إيليكتومي وملامسة
- أنيسثيتيزي الفئران مع إيسوفلوراني (2-3 ٪) في غرفة حضانة حيوانات صغيرة. تحديد أنيسثيتيزيشن الكافية باستخدام تقنية قرصه إصبع القدم بينما الحيوان على إيسوفلوراني- إزالة شعر البطن بتطبيق المنتج إزالة الشعر
- ويمسح الشعر باستخدام الأسفنج الجراحية بعيداً مع المحافظة على التخدير. ضع الماوس على التحكم في درجة حرارة حيوان جراحية طاولة صغيرة ( الشكل 1 أ) للحفاظ على درجة حرارة الجسم في 37 درجة مئوية. المحافظة على التخدير مع إيسوفلوراني (1-2 ٪) من خلال فاسيماسك. علاج العيون الماوس مع مرهم العين.
- تنظيف الجلد باستخدام الكحول بوفيدون و 70 في المائة، وتغطي منطقة العمليات الجراحية للبطن مع شاش معقم الجراحية ( الشكل 1 ب)-
- جعل شق البطن خط الوسط باستخدام مشرط جراحة بعد التخدير في الواقع. استخدم قضيب القطن ذات الرؤوس لحماية الأمعاء وسحب الماوس البطن العضلات مع الكامشات تماما فتح وفضح تجويف البطن ( الشكل 1 ج)-
- موقع الأعور. بدءاً من الأعور، الانتقال بعناية الدقاق متصلة وجزء من الصائم خارج تجويف البطن ( الشكل 1 د)-
ملاحظة: الأعور يمكن بسهولة تحديد نظراً لكبر حجمها حتى بعد الصيام. - اضطر الفرع العلوي للشريان المساريقي العلوي مع 7-0 خياطة حرير أوككلودي الدم إمداد الجزء لفائفي أن اقتطعت. يتغير لون لفائفي من الوردي إلى الأرجواني الداكن بعد عملية ربط. ( الشكل 1 ﻫ-F).
- تبعاً للغرض من هذه التجربة، باستخدام مقص، المكوس وإزالة 50% أو 90% من الدقاق.
ملاحظة: لإجراء عملية جراحية الشام، لا تقوم بتنفيذ عملية ربط الشريان المساريقي العلوي ولا تقم بإزالة الدقاق-
مسح - التجويف كلا طرفي لفائفي مع المالحة 0.9%.
ملاحظة: كما الدقاق سليمة الباقية يزال يتلقى إمدادات دم عادي من الشريان المساريقي العلوي، كمية صغيرة من الدم سيتم مسح أثناء العملية. وهذا يشير أيضا إلى أن إمدادات الدم إلى نهايات لفائفي العادي ويضمن لا الاسكيمية أثناء إجراء مفاغره ( الشكل 1 ز)- - موقع ميسينتيريس على جانب طرفي لفائفي. محاذاة ميسينتيريس وخياطة نهايات لفائفي معا باستخدام 8-0 خياطة ( الشكل 1 ز-ح)-
- خياطة أناستوموسيد إلى جانب contralateral الدقاق للحفاظ الدقاق بطريقة طبيعية ( الشكل 1 أنا)-
- خياطة الطرفين العلوي والسفلي بين خيوط الأصلي اثنين لدقة التسجيل الاثنين لفائفي ينتهي معا ( الشكل 1 ي)-
- يؤكد أنه لا يوجد أي تسرب من موقع ملامسة بعد الانتهاء من الإجراء سوتورينج ثلاث خطوات ( الشكل 1 ز--أنا). العودة الأعور والأمعاء الدقيقة في تجويف البطن إلى الموقع الأصلي التشريحية. تغسل منطقة الجراحة مع الحارة المالحة 0.9% باستخدام إبرة حادة. ( الشكل 1 ك)-
- إغلاق شق طبقة العضلات البطن مع خياطة 6-0. محاذاة إلى شق البطن من الجلد باستخدام الملقط وخياطة الجلد البطن لتسهيل التئام الأمثل ( الشكل 1 لتر)-
3. الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية
الفئران- نقل بعد الجراحة إلى وحدة العناية المركزة للانتعاش. منزل لهم في قفص الفراش الورق على لوح تدفئة درجة الحرارة التي تسيطر على مواصلة الانتعاش ما بعد الجراحة بين عشية وضحاها. توريد الفئران مع الأغذية الناعمة بالإضافة إلى المياه والأغذية العادية-
- تول البوبرينورفين (0.05-0.1 مغ/كغ) بالحقن تحت الجلد كل ح 8-12 للتسكين.
ملاحظة: Euthanize الفئران CO 2 في حالة شدة المرضى. - في نقطة النهاية، التضحية بالفئران باستخدام عينات isoflurane والحصاد أوفيردوسيد حسب الحاجة (القسم 4)-
4. تقييم الصفراء الناجمة عن إيليكتومي "أوفيراككوموليشن"
- تزن وتشريح الفئران بعد بتر 0% (الشام) أو 50% أو 90% من الدقاق يوم واحد. إزالة الجهاز الهضمي
- وتزن عليه. حساب وزن غي بنسبة وزن الجسم لتقييم شدة سوء امتصاص الملح الصفراوية وأوفيراككوموليشن- تحويل مساحات غي إلى أنابيب مخروطية الشكل 15 مل
- وقطع منها إلى مقاطع قصيرة باستخدام مقص. بعد القطع، نقل أجهزة الطرد المركزي في 3,000 س ز للحد الأدنى 10 المادة طافية (غي السوائل التي تحتوي على أملاح الصفراء) في أنبوب نظيف.
- قياس إجمالي حجم ووزن السائل غي وحساب وزن السوائل لغي المسالك نسبة الوزن مواصلة تقييم overaccumulation الصفراء في الجهاز الهضمي.
- تحديد المبلغ الإجمالي الصفراوية في المادة طافية بمقايسة حمض الصفراء كما هو موضح في مرجع 8.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وترد الإجراءات المتعلقة إيليكتومي في الشكل 1. وتشمل الخطوة الأولى إعداد الماوس جلد البطن وإجراء شق البطن، واستخدام الكامشات لفضح تماما الأمعاء (الشكل 1أ-ج). بعد ذلك، كان يقع الأعور الماوس (الشكل 1د)؛ ونظرا لأن حجمه والشكل جعله معلما يسهل التعرف عليها. الأعور، الدقاق، وجزء من صائم القاصي تم كشفها وإزالتها من تجويف البطن (الشكل 1د<...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
بغية تنفيذ إيليكتومي نجاح، يجب أن متصلة الشريان المساريقي العلوي مقدما لمنع إمدادات الدم إلى الجزء ريسيكتينج. سيتم تشغيل الجزء لفائفي الدماغية أرجواني داكن بعد عملية ربط. ثم يجب أن تكون تماما مستأصل الجزء لفائفي. ويجب ضمان إمدادات دم طبيعي لنهايات المحتفظ بها. وهذا ضروري لتجنب إزالة النزيف وغير لائق، التي يمكن بسهولة سبب فشل العمليات الجراحية سبب نخر الدماغية بعد خياطة. أثناء ملامسة، من المهم أن تنضم إلى نهايات لفائفي معا في موقفهم التشريحية الطبيعية. ويعتبر مساريق التاريخية الأكثر موثوقية لخياطة الأولية لتجنب احتمال وقو...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
هذا البحث معتمد من قبل "مؤسسة بيترسون توم" والمعاهد الوطنية للصحة منح R01-HL119780 (جاين، عضو الكنيست).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| تشريح المجهر | أوليمبوس | SZ61 | للجراحة |
| جهاز التحكم في درجة حرارة | Physitemp Instruments، Inc. | TCAT-2LV | للتحكم في درجة حرارة الجسم |
| مبخر مخدر الأيزوفلوران | VetEquip | 911104 | للتخدير |
| ملقط | تشريح ; أدوات العلوم الجميلة ، وشركة | 11274-20 | للجراحة |
| مقص | أدوات العلوم الجميلة ، وشركة | 14084-08 | للجراحة |
| حامل إبرة | شركة روبوز للأدوات الجراحية | RS-7882 | للجراحة |
| إبرة السكاكين الصغيرة | فيشر Scientific | 10318-14 | للجراحة |
| 6-0 خياطة أحادية الشعيرات | Ethicon | 1698G | لإغلاق جلد البطن |
| خياطة حريرية 7-0 خياطة حريرية | Ethicon | 766G | للربط |
| 8-0 خياطة أحادية الشعيرات | Ethicon | 1714G | للإسفنج الجراحي مفاغرة |
| Dynarex Corp. | 3333 | للجراحة | |
| أدوات تطبيق صغيرة ذات رؤوس قطنية | فيشر ساينتفيك | 23-400-118 | للجراحة |
| Isoflurane | Piramal Healthcare Limited | 66794-013-25 | للتخدير |
| بوبرينورفين هيدروكلوريد | ريكيت بينكيزر للمستحضرات الصيدلانية | 12496-0757-1 | للمسكن |
| 0.9٪ حقن كلوريد الصوديوم | B. Braun Medical Inc. | 0264-7800-10 | للغسيل / الحقن |
| محلول تحضير اليود بوفيدون | Dynarex Corp. | 1413 | لتحضير الجلد |
| مرهم Puralube البيطري | Dechra المنتجات البيطرية | 17033-211-38 | لحماية العين |
| غسول مزيل الشعر | Church & amp شركة دوايت | لتحضير الجلد | |
| وحدة العناية المركزة | ThermoCare | FW-1 | للتعافي بعد الجراحة |
| DietGel | Recovery ClearH2O | 72-06-5022 | للتعافي بعد الجراحة مجموعة |
| الأنسجة الدهنية والليفية Aurum Total RNA والأنسجة الدهنية والليفية | Bio-Rad | 7326830 | لعزل الحمض النووي الريبي |
| iScript supermix ل RT-qPCR | Bio-Rad | 1708841 | ل مقايسة النسخ العكسي |
| TaqMan مزيج رئيسي سريع متقدم | للأنظمة الحيوية التطبيقية / تقنيات | الحياة 4444965 | لتحليل QPCR |
| مجموعة فحص حمض الصفراء الكلي | Genzyme Diagnostic | DZ042A-K01 | لمقايسة حمض الصفراء |
| C57BL / 6J & nbsp ؛ | جاكسون |
المراجع
- McLeod, R. S. Surgery for inflammatory bowel diseases. Dig Dis. 21, 168-179 (2003).
- Hancock, L., Windsor, A. C., Mortensen, N. J. Inflammatory bowel disease: the view of the surgeon. Colorectal Dis. 8, 10-14 (2006).
- Polle, S. W., Bemelman, W. A. Surgery insight: minimally invasive surgery for IBD. Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol. 4, 324-335 (2007).
- Fon Tacer, K., et al. Research resource: Comprehensive expression atlas of the fibroblast growth factor system in adult mouse. Mol Endocrinol. 24, 2050-2064 (2010).
- Pournaras, D. J., et al. The role of bile after Roux-en-Y gastric bypass in promoting weight loss and improving glycaemic control. Endocrinology. 153, 3613-3619 (2012).
- Spreckley, E., Murphy, K. G. The L-Cell in Nutritional Sensing and the Regulation of Appetite. Front Nutr. 2, 23(2015).
- Inagaki, T., et al. Fibroblast growth factor 15 functions as an enterohepatic signal to regulate bile acid homeostasis. Cell Metab. 2, 217-225 (2005).
- Han, S., et al. Circadian control of bile acid synthesis by a KLF15-Fgf15 axis. Nat Commun. 6, 7231(2015).
- Christl, S. U., Scheppach, W. Metabolic consequences of total colectomy. Scand J Gastroenterol Suppl. 222, 20-24 (1997).
- Helmrath, M. A., VanderKolk, W. E., Can, G., Erwin, C. R., Warner, B. W. Intestinal adaptation following massive small bowel resection in the mouse. J Am Coll Surg. 183, 441-449 (1996).
- Tappenden, K. A. Pathophysiology of short bowel syndrome: considerations of resected and residual anatomy. J Parenter Enteral Nutr. 38, 14-22 (2014).
- Camilleri, M. Bile Acid diarrhea: prevalence, pathogenesis, and therapy. Gut Liver. 9, 332-339 (2015).
- Camilleri, M. Advances in understanding of bile acid diarrhea. Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 8, 49-61 (2014).
- Mottacki, N., Simren, M., Bajor, A. Review article: bile acid diarrhoea - pathogenesis, diagnosis and management. Aliment Pharmacol Ther. 43, 884-898 (2016).
- Rao, A., et al. The organic solute transporter alpha-beta, Ostalpha-Ostbeta, is essential for intestinal bile acid transport and homeostasis. Proc Natl Acad Sci. 105, 3891-3896 (2008).
- Hofmann, A. F., Poley, J. R. Cholestyramine treatment of diarrhea associated with ileal resection. N Engl J Med. 281, 397-402 (1969).
- Kir, S., et al. FGF19 as a postprandial, insulin-independent activator of hepatic protein and glycogen synthesis. Science. 331, 1621-1624 (2011).
- Kuipers, F., Bloks, V. W., Groen, A. K. Beyond intestinal soap--bile acids in metabolic control. Nat Rev Endocrinol. 10, 488-498 (2014).
- Buchman, A. L., Scolapio, J., Fryer, J. AGA technical review on short bowel syndrome and intestinal transplantation. Gastroenterology. 124, 1111-1134 (2003).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
