Method Article

نقص الأكسجين المسبق للخلية السلف المستمدة من نخاع كمصدر لتوليد خلايا شوان الناضجة

DOI:

10.3791/55794

⸱

June 14th, 2017

 ,  ,  ,  , 
1School of Biomedical Sciences, The University of Hong Kong, 2Department of Orthopaedics and Traumatology, The University of Hong Kong

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خلايا انسجة النخاع (مسس) مع وجود إمكانات عصبية داخل نخاع العظم. بروتوكول لدينا يثري هذه المجموعة من الخلايا عن طريق مسبق نقص الأكسجين، وبعد ذلك يوجه لهم لتصبح خلايا شوان ناضجة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصف هذه المخطوطة وسيلة لإثراء الأسلاف العصبية من الخلايا اللحمية نخاعي (مسك) السكان وبعد ذلك لتوجيهها إلى مصير شوان الخلية ناضجة. لقد أخضعنا مسس الفئران والانسان لظروف نقص الأكسجين العابرة (1٪ من الأكسجين لمدة 16 ساعة)، يليه التوسع كالعصب العصبية على الطبقة المنخفضة المرفق مع عامل نمو البشرة (إغف) / عامل نمو الخلايا الليفية الأساسية (بفغف). تم تربيط الأعصاب على البلاستيك زراعة الأنسجة بولي-D- يسين / لامينين المغلفة والمثقفة في كوكتيل غليوجين يحتوي على β- هيريغولين، بفغف، وعامل النمو المشتقة من الصفيحات (بدغف) لتوليد شوان خلايا تشبه الخلايا (سكلس). تم توجيه سكلس إلى مصير الالتزام عبر كوكولتشر لمدة 2 أسابيع مع العصبية الجذر الظهرية المنقى (درغ) الخلايا العصبية الحصول عليها من E14-15 الحوامل سبراغ داولي الفئران. الخلايا الناضجة شوان تثبت استمرار في التعبير S100β / p75 ويمكن أن تشكل قطاعات المايلين. الخلايا التي تم إنشاؤها بهذه الطريقة لها إمكانات أببلتيونس في زرع الخلايا الذاتية بعد إصابة الحبل الشوكي، وكذلك في النمذجة المرض.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

زرع الأسلاف العصبية ومشتقاتها يدل على الوعد كاستراتيجية علاج التالية إصابة العصب الصدمة 1 ، 2 والتنكس العصبي 3 ، 4 . قبل التطبيق السريري، فمن الضروري ضمان: ط) وسيلة للوصول والتوسع على مصدر ذاتي من الخلايا الجذعية / السلف و 2) وسيلة لتوجيهها إلى ذات الصلة، وأنواع الخلايا الناضجة 3 . اهتمامنا في العلاج بالخلايا لإصابة الحبل الشوكي أدى بنا إلى السعي قوية، مصدر خلية ذاتي من الأسلاف العصبية من أنسجة الكبار.

وهناك مجموعة فرعية....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات وفقا صارم مع دليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية والتي وافقت عليها لجنة استخدام الحيوانات الحية للتعليم والبحث، لي كا شينغ كلية الطب، وجامعة هونغ كونغ. تم الحصول على عينات من نخاع العظم البشري من العرف الحرقفي للمتبرعين الصحيين بعد الحصول على الموافقة المستنيرة. تمت الموافقة على البروتوكولات من قبل مجلس المراجعة المؤسسية، جامعة هونغ كونغ.

1. إعداد الثقافات مسك الجرذ

  1. حصاد مسس من عظم الفخذ<....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويوضح الشكل 1 لمحة عامة عن المراحل الرئيسية في بروتوكول لدينا. وباختصار، يتم اختيار مسس الفئران والإنسان لاللتزام البلاستيك زراعة الأنسجة. يتم تحديد مسبق موسك الموسعة مع نقص الأكسجين ثم تخضع لظروف تشكيل نيوروسفهير. يتم طلاء الأعصاب والسماح للتفريق في سكلس. سكولتريدس مع الخلايا العصبية درغ المنقى لتوليد خلايا شوان الملتزمة مصير.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فمن الضروري للحفاظ على "الجذعية" من اللجان الدائمة قبل إثراء الأسلاف العصبية عن طريق مسبق الأكسجين الثقافة و نيوروسفهير. من تجربتنا، مسس مولتيبوتنت يمكن تحديدها بشكل موثوق بها من قبل ممدود تشبه الخلايا الليفية مورفولوجيا. في المقابل، مسس التي اعتمدت مورفولوجيا أكثر بالارض، رباعي الأضلاع، مع الألياف الإجهاد الهيكل الخلوي بارزة، لا تعتمد بسهولة مصير الخلايا العصبية ويجب التخلص منها. بشكل عام، ونحن لا تستخدم اللجان الدائمة مع أرقام مرور أكبر من ثمانية. للحفاظ على الجذعية، ف.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى جميع مؤلفي هذه المخطوطة أية إفادات يعلن عنها.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويود المؤلفون أن يعترفوا بالدكتور ناي - سوم وونغ لتوفير جهاز غرفة نقص الأكسجين والسيدة أليس لوي للدعم التقني.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
& ألفا. MEMSigmaaldrichM4526
DMEM / F12Thermofisher العلمي12400-024
المتوسط العصبيالقاعدي Thermofisher العلمي21103-049
FBSBioseraFB-1280/500
B27Thermofisher العلمي17504-001
عامل نمو البشرة (EGF)Thermofisher علميPHG0313
عامل نمو الخلايا الليفية الأساسي (bFGF)   ؛Peprotech100-18B / 100UG
عامل نمو الأعصاب (NGF)   ؛MilliporeNC011
عامل النمو المشتق من الصفائح الدموية- AA (PDGF-AA)Peprotech100-13A
Heregulin beta-3 ، مجال EGF (& beta ؛ -Her)Millipore01-201
UridineSigmaaldrichU3003
5-Fluro-2 '- deoxyuridine (FDU)SigmaaldrichF0503
Poly-D-lysine (PDL)SigmaaldrichP7886-1G
LamininThermofisher Scientific23017015
GlutaMAXThermofisher Scientific35050061
البنسلين / الستربتومايسين (P / S)Thermofisher Scientific15140-122
TrypLE ExpressThermofisher Scientific12604-013
لوحة 10 سم للثقافةالملتصقةTPP93100تستخدم لاختيار الخلايا الجذعية الجذعية عن طريق الالتصاق بزراعة الأنسجة
لوحة 6 آبار للثقافة الملتصقةTPP92006تستخدم لتوسيع الخلايا الجذعية الجذعية بعد المرور
لوحة UltraLow 6 آبار للثقافة غير الملتصقةCorning3471تستخدم لإثراء السلف العصبي
المضاد للإنسان CD90 (Thy-1)BD Biosciences555593
CD73المضاد للإنسانBD Biosciences550256
مكافحة الإنسان / الفئران STRO-1R & D SystemsMAB1038
مكافحة الإنسان NestinR & D SystemsMAB1259
CD45BD Biosciences555480
المضاد للفئران CD90 (Thy-1)BD Biosciences554895
المضاد للفئران CD73BD Biosciences551123
المضاد للفئران BDBiosciencesMAB1259
مكافحة الفئران CD45BD Biosciences554875
مضاد S100 وبيتا ؛داكوZ031101
Anti-p75MilliporeMAB5386
Anti-GFAPSigmaaldrichG3893
المضادة للفئة الثالثة بيتا توبولين (Tuj-1)CovanceMMS-435P
النوى المضادة للإنسانMilliporeMAB1281
غرفة نقص الأكسجةBillups-RothenbergMIC-101
HEPES العازلةSigmaaldrichH4034-100G

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wiliams, R. R., Bunge, M. B. Schwann cell transplantation: a repair strategy for spinal cord injury? Prog Brain Res. 201, 295-312 (2012).
  2. Kanno, H., Pearse, D. D., Ozawa, H., Itoi, E., Bunge, M. B. Schwann cell transplantation....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hypoxic PreconditioningMarrow Stromal CellsNeural ProgenitorsSchwann Cell DifferentiationNeurosphere CultureDorsal Root GangliaCo culture TechniqueGlial Induction MediumS100 Beta ExpressionMyelin Segment Formation

Related Articles