هنا، نقدم بروتوكول لتسجيل الإيقاعي ثيتا شبكة العصبية وتذبذبات غاما من إعداد الحصين كله معزولة. نحن تصف الخطوات التجريبية من استخراج الحصين إلى تفاصيل الميدان، وحدوية وكل خلية التصحيح المشبك التسجيلات فضلا عن سرعة أوبتوجينيتيك من إيقاع ثيتا.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
هذا البروتوكول يحدد إجراءات لإعداد وتسجيل من الحصين كله معزولة، من وت والفئران المعدلة وراثيا، جنبا إلى جنب مع التحسينات الأخيرة في المنهجيات والتطبيقات لدراسة التذبذبات ثيتا. يتم عرض توصيف بسيط لإعداد الحصين معزولة حيث يتم فحص العلاقة بين مؤشرات التذبذب الحصين ثيتا الداخلية جنبا إلى جنب مع نشاط الخلايا الهرمية، و غابايرجيك إنترنيورونس، من كورنو أمونيس -1 (CA1) والمناطق الفرعية (سوب) المناطق. عموما، وتبين لنا أن الحصين معزولة قادر على توليد التذبذبات ثيتا الجوهرية في المختبر ، وأن الإيقاع ولدت داخل الحصين يمكن التلاعب بها بدقة من قبل التحفيز أوبتوجينيتيك من البارفالبومين إيجابية (بف) إنترنيورونس. في المختبر معزولة إعداد الحصين يوفر فرصة فريدة لاستخدام في وقت واحد والتسجيلات داخل المشبك بين الخلايا من المشاهد بصريا تحديدها نيورونس لفهم أفضل للآليات الكامنة وراء جيل إيقاع ثيتا.
المقدمة
هيبوكامبال ثيتا التذبذبات (4-12 هرتز) هي من بين الأشكال الأكثر سائدة من النشاط الإيقاعي في الدماغ الثدييات ويعتقد أن تلعب أدوارا رئيسية في الوظائف المعرفية مثل معالجة المعلومات المكانية الزمانية وتشكيل ذكريات عرضية 1 ، 2 ، 3 . في حين أن العديد من الدراسات في الجسم الحي التي تسلط الضوء على العلاقة بين خلايا المكان ثيتا التضمين مع الملاحة المكانية والدراسات الآفة، وكذلك الأدلة السريرية، ودعم الرأي القائل بأن التذبذبات الحصين ثيتا تشارك في تشكيل الذاكرة 4 ، 5 ،....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للبروتوكولات والمبادئ التوجيهية التي وافقت عليها لجنة رعاية الحيوان جامعة ماكجيل والمجلس الكندي لرعاية الحيوان.
1. الحصين الحاد في إعداد المختبر
ملاحظة: عزل إعداد الحصين سليمة ينطوي على ثلاث خطوات رئيسية: (1) إعداد الحلول والمعدات، (2) تشريح الحصين و (3) إعداد نظام معدل نضح سريع اللازمة لتوليد التذبذبات ثيتا جوهرية. في هذا البروتوكول، والأداء في الوقت المناسب من الإجراءات - من تشريح لتسجيل - أهمية خاصة لأن الحصين معزولة يشكل مثل كثيفة، ولكن حسا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يوضح هذا القسم أمثلة من النتائج التي يمكن الحصول عليها من خلال دراسة ثيتا التذبذبات في الماوس معزولة إعداد الحصين في المختبر . ويوضح الإجراء تشريح لاستخراج الحصين معزولة في الشكل 1 . باستخدام هذا التحضير، يمكن فحص التذبذبات ثيتا جوهري خلال وضع أقطاب الحقل متعددة، وتسجيل النشاط العام ومدخلات متشابك متزامنة للسكان العصبية في مناطق مختلفة وطبقات الحصين معزولة ( الشكل 2 ). يتم ع.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في حين التسجيلات الكهربية من شرائح الحصين الحاد تشكل معيارا في تقنية المختبر ، والأساليب المعروضة هنا تختلف اختلافا كبيرا عن النهج الكلاسيكي. على عكس الاستعدادات شريحة رقيقة حيث طبقات خلية محددة مرئية على السطح ويمكن فحصها مباشرة، الاستعدادات الحصين سليمة هي أقرب إلى تكوينات الجسم الحي حيث يتم خفض الأقطاب في مناطق الدماغ المستهدفة أثناء عبور من خلال طبقات فردية. يتم الحفاظ على سلامة الحصين جنبا إلى جنب مع الاتصال الوظيفي وخصائص السكان العصبية المحلية. وه.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
لا يعلن المؤلفون أي مصالح تجارية أو مالية متنافسة.
شكر وتقدير
وقد دعم هذا العمل المعاهد الكندية للبحوث الصحية والعلوم الطبيعية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي > كواشف < / قوي > | |||
| كلوريد الصوديوم | سيجما ألدريتش | S9625 | |
| السكروز | سيجما ألدريتش | S9378 | |
| بيكربونات الصوديوم | سيجما ألدريتش | S5761 | |
| NaH 2< / sub>PO4< / sub> - فوسفات الصوديوم أحادي القاعدة | Sigma Aldrich | S8282 | |
| كبريتات المغنيسيوم | سيجما ألدريتش | M7506 | |
| كلوريد البوتاسيوم | سيجما ألدريتش | P3911 | |
| D- (+) - الجلوكوز | سيجما ألدريتش | G7528 | |
| كلوريد الكالسيوم ثنائي هيدرات | سيجما ألدريتش | C5080 | |
| أسكوربات الصوديوم | سيجما ألدريتش | A7631-25G | |
| <قوي>الاسم< قوي> | <قوي>الشركة | رقم الكتالوج | تعليقات |
| Equipment | |||
| قياسي مقص | فيشر Scientific | 08-951-25 | استخراج الدماغ |
| مقبض مشرط # 4 ، 14 سم | WPI | 500237 | استخراج الدماغ |
| ملقط ، فكوك مسطحة ، مستقيم (11 سم) | WPI | 500456 | استخراج الدماغ |
| شفرات مشرط من الفولاذ المقاوم للصدأ # 20 | Ultident | 02-90010-20 | استخراج الدماغ |
| مقص تشريح منحني بنقطة | دقيقة Thermo Fisher Scientific | 711999 | استخراج الدماغ |
| التفلون (PTFE) - ملعقة رقيقة مطلية | VWR | 82027-534 | تحضير |
| الحصينهايمان ستايل ميكروملعقة | فيشر العلمية | 21-401-25A | تحضير الحصين |
| ملعقة مختبر | فيشر العلمية | 14-375-20 | تحضير الحصين |
| زجاج البورسليكات باستور بيبيتس | فيشر العلمي | 13-678-20A | تحضير الحصين |
| قطارة | فيشر إعداد الحصين العلمي | ||
| شفرات الحلاقة ذات حواف واحدة | VWR | 55411-055 | تحضير الحصين |
| ورق عدسة (4 × 6 بوصات) | VWR | 52846-001 | تحضير الحصين |
| أطباق بتري زجاجية (100 × 20 مم) | VWR | 25354-080 | تحضير الحصين |
| صينية بلاستيكية للثلج ؛ مقاس 30 × 20 × 5 سم | تحضير الحصين | ||
| محلول واحد مضمن سخان | وارنر إنسترومنتس | نظام التروية SH-27B | |
| أحجار هواء حوض السمك لنظام التروية الفقاعي | |||
| أنابيب Tygon E-3603 (المعرف 1/16 OD 1/8) | التروية | Fisherbrand | 14-171-129 |
| كهربائية | سوداء & نظام التروية Decker | n.a.perhoe | |
| 95٪ O2< / sub> / 5٪ CO2< / sub> خليط الغاز (الكربوجين) ؛ | نظام التروية | SG466204A | Vitalaire |
| زجاجات زجاجية / قوارير (4 × 1 لتر) | نظام التروية NANA | ||
| مخصص لغرفة التسجيل المغمورة | (FM) | n.a.يمكن | استخدام البديل التجاري |
| الماصات الزجاجية (1.5 / 0.84 OD / ID (مم)) WPI | 1B150F-4 | الفيزيولوجيا الكهربية | |
| Hum Bug 50/60 هرتز مزيل الضوضاء | Quest Scientific | Q-Humbug | الفيزيولوجيا الكهربية |
| Multiclamp 700B مضخم التصحيح المشبك | الأجهزة الجزيئية | الفيزيولوجيا الكهربية | |
| Multiclamp 700B برنامج قائد | الأجهزة الجزيئية | الفيزيولوجيا الكهربية | متعددة المشابك |
| المحول الرقمي / التناظري | الأجهزة الجزيئية | DDI440 | الفيزيولوجيا الكهربية |
| PCLAMP10 | الأجهزة | الجزيئيةPCLAMP10 | الفيزيولوجيا الكهربية |
| جدول عزل الاهتزاز | نيوبورت | n.a.الفيزيولوجيا الكهربية | |
| Micromanipulators (تعمل يدويا) | Siskiyou | MX130 | الفيزيولوجيا الكهربية (LFP) |
| المعالجات الدقيقة (الآلية) | Siskiyou | MC1000e | الفيزيولوجيا الكهربية (رقعة)مراقب |
| الصوت | أنظمة AM | موديل 3300 | الفيزيولوجيا الكهربية |
| مجتذب الماصة الدقيقة / التصحيح مجتذب الماصة | Sutter | P-97 | الفيزيولوجيا الكهربية |
| مجهر مضان مستقيم مصمم خصيصا | Siskiyou | n.a.Imaging | |
| كاميرا فيديو تناظرية | COHU | 4912-2000/0000 | تصوير |
| ملتقط الإطار الرقمي مع برنامج التصوير | EPIX، Inc | PIXCI-SV7 | تصوير |
| أوليمبوس 2.5X الموضوعي | أوليمبوس | MPLFLN | التصوير |
| أوليمبوس 40X الغمر في الماء الهدف | أوليمبوس | UIS2 LUMPLFLN | التصوير |
| المخصص الصمام الثنائي الباعث للضوء (LED) نظام | التحفيز البصري الوراثي المخصص (Amhilon et al. ، 2015) | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animals | |||
| PV::Cre (KI) الفئران | رقم مخزون مختبر جاكسون | 008069 | السماح التعبير الجيني الموجه ب Cre في الخلايا العصبية الداخلية الكهروضوئية |
| الفئران التأسيسية الشرطية Ai9 (R26-lox-stop-lox-tdTomato (KI)) رقم | مختبر جاكسون | 007905 | Express TdTomato بعد إعادة التركيب بوساطة |
| Cre Ai32 الفئران (R26-lox-stop-lox-ChR2 (H134R) -EYFP | مختبر جاكسون | رقم 012569 | عبر عن بروتين اندماج القناة المحسن رودوبسين -2 / EYFP بعد التعرض ل Cre إعادة تركيب |
| الفئران PVChY | في التربية المنزلية | n.a.النسل | الذي تم الحصول عليه من تهجين خط PV-Cre مع الفئران Ai32 (R26-lox-stop-lox-ChR2 (H134R) -EYFP |
المراجع
- Buzsaki, G. Theta rhythm of navigation: link between path integration and landmark navigation, episodic and semantic memory. Hippocampus. 15 (7), 827-840 (2005).
- Sanders, H., Renno-Costa, C., Idiart, M., Lisman, J.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
