يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الاستقراء والتشخيص للأورام في

15.3K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/55901

⸱

يوليو 25, 2017

 , 
1Structural Biology Center, National Institute of Genetics and Department of Genetics, School of Life Science, SOKENDAI, 2Graduate School of Media and Governance, Keio University

في هذه المقالة

ملخص

تحليل استنساخ الفسيفساء في ذبابة الفاكهة تخيلي القرص ظهارة هو نظام نموذج قوي لدراسة الآليات الوراثية والخلوية من تكون الأورام. نحن هنا وصف بروتوكول للحث على الأورام في أقراص ذبابة الجناح ذبابة الفاكهة باستخدام نظام GAL4-واس، وإدخال طريقة التشخيص لتصنيف المظاهر الورمية.

الملخص

في المراحل المبكرة من السرطان، والخلايا المتحولة تتحول تظهر تشوهات الخلوية، وتبدأ فرط غير المنضبط، وتعطيل تدريجيا تنظيم الأنسجة. وقد ظهرت ذبابة الفاكهة ميلانوغاستر كنظام نموذج تجريبي شعبية في علم الأحياء السرطان لدراسة الآليات الوراثية والخلوية لتوليد الأورام. على وجه الخصوص، وأدوات وراثية للأقراص تمايل ذبابة الفاكهة (تطوير الظهارة في اليرقات) تمكن من إنشاء خلايا الموالية للورم تتحول داخل الأنسجة الظهارية العادية، وهو وضع مماثل للمراحل الأولية لسرطان الإنسان. وأظهرت دراسة حديثة عن تكوين الأورام في أقراص تخيل الجناح ذبابة الفاكهة ، أن بدء الورم يعتمد على الهندسة المعمارية الخلوية الأنسجة الداخلية والمكروية المحلية، مما يشير إلى أنه من المهم النظر في قابلية المنطقة محددة لمؤثرات الأورام في تقييم المظاهر الورمية في خيال أقراص. لتسهيل التحليل المظهري من التقدم الورمعلى أقراص تخيلي، هنا نحن تصف بروتوكول للتجارب الوراثية باستخدام نظام GAL4-واس للحث على الأورام الورم في أقراص تخيل الجناح. نحن أيضا إدخال طريقة التشخيص لتصنيف المظاهر من الآفات النسلي الناجم عن ظهارة ظهارية، كما لم يتم وصفها طريقة تصنيف واضحة للتمييز في مراحل مختلفة من تطور الورم (مثل تضخم، خلل التنسج، أو الورم) من قبل. قد تكون هذه الأساليب قابلة للتطبيق على نطاق واسع على تحليل نسيلي من المظاهر الورمية في مختلف الأجهزة في ذبابة الفاكهة .

المقدمة

الأنسجة الظهارية هي نظم منظمة للغاية التي لديها القدرة هوموستاتيك ملحوظ للحفاظ على تنظيمها من خلال التنمية ودوران الخلية. هذا النظام الذاتي التنظيم القوي، ومع ذلك، تتعطل تدريجيا خلال تطور الورم. في بداية تطور الورم، والخلايا الطافرة الفردية الناشئة عن تفعيل الجين الورم أو ورم-قمع تعطيل الجينات تظهر داخل طبقة الظهارية. عندما يتحول هذا "الخلية المؤيدة للورم" يتلاشى بيئة قمعية، ويعطل تنظيم الظهارية، ويبدأ انتشار غير المنضبط، يحدث الأورام 1 . خلال العقود القليلة الماضية، أحرز التقدم التكنولوجي المتميز في علم الوراثة والبيولوجيا الجزيئية تقدما ملحوظا في أبحاث السرطان. على وجه الخصوص، والدراسات الحديثة باستخدام أدوات تحليل الفسيفساء وراثيا في ميلانوغاستير ذبابة الفاكهة ، مثل فلب-فرت (فليباس ريكومبيناس / فليباس ريكومبيناس الهدف) ريكومبين الإنقساميةأتيون 2 والوجه خارج GAL4-واس (تسلسل تفعيل المنبع) 3 ، ساهمت إلى حد كبير في فهم أفضل للآليات الوراثية المشاركة في تشكيل ورم خبيث من الأورام 4 و 5 و 6 .

دراسات لمجموعة من الجينات السرطانية، القامع الحفظ ذبابة الفاكهة، اليرقات العملاقة القاتلة (LGL)، وأقراص كبيرة (أجهزة ...)، وخربشات (scrib)، سلط الضوء على العلاقة الحاسمة بين فقدان التنظيم الظهارية والتنمية الورم، حيث أن هذه الجينات تلعب أدوارا رئيسية في تنظيم قطبية الخلايا القاعدية وانتشار الخلايا في الأنسجة الظهارية 7 . في حين أن ذبابة الفاكهة أقراص تخيلي هي عادة ظهارة أحادي الطبقة، والطفرات متماثلة في أي من هذه الجينات الثلاثة تسبب الخلايا لانقاص هيكل وقطعية، تفشل في ديفريفيات، أوفيربروليفيرات، وتشكل في نهاية المطاف الجماهير غير متبلور متعدد الطبقات التي فتيل مع الأنسجة المجاورة 7 . وبالمثل، انقطاع هذه الجينات في الثدييات وتشارك في تطوير الأورام الخبيثة 8 ، 9 . وقد أدت الأنماط الظاهرية للأورام التي عرضتها الأنسجة المتحولة إلى تصنيف هذه الجينات الثلاثة كجينات مضادة للورم الورمية (نتسغس) 7 ، 8 . ومع ذلك، عندما يتم إنشاء خلايا متحولة نتس متماثل متماثل في تطوير البرية نوع أقراص تخيل باستخدام فلب-فرت بوساطة إعادة التركيب الانقسامية، والقضاء على الخلايا الطافرة من الأنسجة من خلال C- جون كيناز محطة N- (جنك) موت الخلايا المبرمج 10 ، 11 ، 12 ، 13 ، 14 ، إكستروسيون 15 ، 16 ، أو غمر و البلعمة من قبل الجيران 17 . في هذه الظهارة الفسيفساء وراثيا، وكشف معظم موت الخلايا المبرمج في الخلايا متحولة نتس تقع على حدود استنساخ، مما يشير إلى أن الخلايا الطبيعية المجاورة تؤدي موت الخلايا المبرمج للخلايا متحولة نتس 10 ، 11 ، 12 ، 18 . وقد أكدت الدراسات الحديثة في خلايا الثدييات أن هذه الخلية تعتمد على المنافسة القضاء على الخلايا المؤيدة للورم هو آلية الحفاظ على الظهارية دفاعيا التطورية ضد السرطان 19 ، 20 ، 21 ، 22 ، 23 .

ومع ذلك، أظهرت دراسة حديثة في أقراص ترويض ذبابة الفاكهة أن فسيفساء نتس-نوكدون استنساخ يدفع الأورام الورم في سبيسيفالمناطق جيم من أقراص تخيل الجناح 16 . تم العثور على تشكيل الورم الأولي دائما في المنطقة "المفصلي" الطرفية ولم يلاحظ قط في المنطقة "الحقيبة" المركزية من ظهارة القرص الجناح، مما يشير إلى أن إمكانات المستضد للخلايا نتس ضربة قاضية يعتمد على البيئة المحلية. تعمل منطقة الحقيبة المركزية على أنها "نقطة باردة للورم" حيث الخلايا المؤيدة للورم لا تظهر فرط التنسج الخاطئ، في حين أن منطقة المفصلي الطرفية تتصرف باعتبارها "نقطة ساخنة للورم" 16 . في مناطق "البرد" الحقيبة، خلايا نتس-ضربة قاضية ديلامينات من الجانب القاعدي وتخضع موت الخلايا المبرمج. على النقيض من ذلك، كما خلايا "المفصلي" المفصلي تمتلك شبكة من الهياكل الهيكلية قوية على الجانبين القاعدية، وخلايا نتس-ضربة قاضية ديلامينات من الجانب القمي من ظهارة والشروع في فرط نمو الأورام 16 . لذلك، تحليل الظواهر الورم في أقراص تخيلي يتطلب كونسي حذرادييراتيون من حساسية المنطقة محددة لمؤثرات الأورام.

هنا، نحن تصف بروتوكول للحث على تشكيل الورم الأورام في الجناح ذبابة الفاكهة أقراص تخيلي باستخدام نظام رني GAL4-UAS- التي يتم إنشاؤها خلايا ضربة قاضية nTSG في العادية القرص الجناح ظهائر. على الرغم من أن هذه النظم التجريبية مفيدة لدراسة المراحل المبكرة من السرطان، لم يتم وصف طريقة تصنيف واضحة لتقييم مراحل تطور الورم في ظهارة القرص ظاهري من قبل. لذلك، فإننا نقترح أيضا طريقة تشخيص لتصنيف الظواهر النسلية المؤيدة للورم التي يسببها ظهارة القرص الجناح إلى ثلاث فئات: تضخم (عدد كبير من الخلايا التي تظهر بشكل طبيعي مع زيادة الانتشار)، خلل التنسج (الأنسجة سابقة التأليف تتألف من ظهور غير طبيعي الخلايا)، والأورام (ورم حميدة أو خبيثة تتألف من خلايا لها مظهر غير طبيعي ونمط انتشار غير طبيعي).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. يطير الصلبان والاستنساخ استنساخ

  1. إزالة جميع الذباب في قارورة 12 ساعة قبل جمع الذباب البكر.
  2. تخدير الذباب في قارورة عن طريق حقن ثاني أكسيد الكربون غاز 2 ومكان الذباب على وسادة الطيران CO 2.
  3. نقل 10-20 أنثى عذراء و 10 ذكور من كو 2 ذبابة في قارورة جديدة واحتضان لمدة 1 يوم عند 25 درجة مئوية.
  4. نقل هذه الذباب في قارورة جديدة واحتضان لمدة 12 ساعة عند 25 درجة مئوية.
    ملاحظة: تجاهل القارورة الأولى كما الإناث البكر لا تضع ما يكفي من البيض في اليوم الأول.
  5. لخطوط محسن GAL4، إزالة الذباب الكبار واحتضان القارورة في 25 درجة مئوية حتى تشريح.
  6. لتحريض استنساخ الفسيفساء عن طريق الوجه خارج GAL4، وإزالة الذباب الكبار واحتضان قارورة لمدة 2-4 أيام عند 25 درجة مئوية. فترة الحضانة قبل صدمة الحرارة تعتمد على الغرض التجريبي. الصدمة الحرارية بعد يومين من ترسب البيض (درهم) يولد استنساخ الفسيفساء في الثانية غير ناضجةإنستار ظهاري تخيل. صدمة حرارية بعد 3 أو 4 أيام إيد يولد استنساخ الفسيفساء في متباينة في وقت مبكر إلى منتصف الثالث إنستار ظهارة تخيل.
    ملاحظة: من المهم أن ندرس تأثير تغيير توقيت صدمة الحرارة على النمط الظاهري للأورام.
  7. لتحريض استنساخ الفسيفساء عن طريق الوجه خارج GAL4، صدمة الحرارة القارورة عن طريق الغمر في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة 10 - 45 دقيقة تليها الحضانة لمدة 2 - 3 أيام عند 25 درجة مئوية.
    ملاحظة: يتم عرض معلومات من الحرارة صدمة الوقت والتوقيت، وحضانة الوقت في كل تجربة في الشكل الأساطير.

2. تشريح اليرقات

  1. جمع يتجول اليرقات الطور الثالث مع عصا خشبية أو ملقط حادة، وراثي لهم من قبل علامات الفلورسنت المناسبة (على سبيل المثال ، إغف) تحت المجهر مضان مجسمة ووضعها في طبق تشريح مع برنامج تلفزيوني (الفوسفات مخزنة المالحة).
  2. غسل اليرقات في برنامج تلفزيوني عن طريق بيبتينغ مع 2 مل ماصات نقل البلاستيك.
  3. قرصة مركز اليرقة مع ملقط واحد والمسيل للدموع الجسم في نصف مع ملقط أخرى.
  4. قرصة هوك الفم من النصف الأمامي مع ملقط واحد ودفع الفم نحو الجسم مع ملقط أخرى لتحويل الجسم من الداخل.
  5. إزالة المواد غير الضرورية مثل الغدد اللعابية أو الأجسام الدهنية مع ملقط.

3. تثبيت وتلطيخ الأجسام المضادة

  1. نقل النصف الأمامي تشريح الجسم اليرقات (بما في ذلك أقراص الجناح تخيل) إلى أنبوب بلاستيكي 1.5 مل وإصلاح في 1 مل من حل فيكس (4٪ الفورمالديهايد في برنامج تلفزيوني) لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام مع دوران لطيف.
    تنبيه: الفورمالديهايد سامة ولها إمكانات مسرطنة. ارتد قفازات واقية وملابس لمنع ملامسة الجلد.
    ملاحظة: في هذا الجزء، جميع الخطوات تجري على نوتاتور في درجة حرارة الغرفة في الظلام ما لم يذكر خلاف ذلك.
  2. إزالة الحل إصلاح وتجاهل. غسل الأنسجة مع 1 مل من بت (0.3٪ الحقدعلى X-100 في برنامج تلفزيوني) ثلاث مرات لمدة 15 دقيقة لكل منهما.
  3. إزالة بت وإضافة 1 مل من بتغ (0.2٪ ألبومين المصل البقري و 5٪ مصل الماعز الطبيعي في بت) ​​لحجب و نوتات 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة أو بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
  4. إزالة بتغ وإضافة حل الأجسام المضادة الأولية المخفف بشكل مناسب مع بتغ (انظر المواد الجدول ) ونوتيت بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
  5. إزالة الحل الأجسام المضادة الأولية وغسل الأنسجة مع 1 مل بت ثلاث مرات لمدة 15 دقيقة لكل منهما.
  6. إزالة بت وإضافة حل الأجسام المضادة الثانوية المخفف بشكل مناسب مع بتغ (1: 400). نوتيت لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة أو بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
  7. إزالة حل الأجسام المضادة الثانوية وغسل الأنسجة مع 1 مل من بت مرتين لمدة 15 دقيقة لكل منهما.
  8. وصمة عار F- أكتين، وإزالة بت وإضافة الحل فالويدين المخفف بشكل مناسب في برنامج تلفزيوني (1:40). ثم نوتات لمدة 20 دقيقة. إزالة الحل فالويدين وغسل الأنسجة مع 1 مل من بت مرتين لمدة 15 دقيقة لكل منهما.
  9. ل كونترستين الحمض النووي النووي، وإزالة بت وإضافة دابي (4 '، 6-دياميدينو-2-فينيليندول) حل (0.5 ميكروغرام / مل من دابي في برنامج تلفزيوني). ثم نوتات 10 دقيقة.
    تنبيه: دابي لديه إمكانات مسرطنة. ارتد قفازات واقية وملابس لمنع ملامسة الجلد.
  10. إزالة حل دابي وغسل الأنسجة مع 1 مل من بت مرتين لمدة 15 دقيقة لكل منهما.
  11. شطف مرة واحدة في 1 مل من برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  12. إزالة بس وإضافة 500 ميكرولتر من الجلسرين بنسبة 100٪ كما المتوسطة قبل تصاعد.

4. تركيب على شرائح المجهر

  1. وضع الأنسجة الملون على شريحة المجهر باستخدام ماصة نقل البلاستيك 2 مل.
  2. نقل الأنسجة إلى قطرات من تصاعد المتوسطة على شريحة المجهر آخر مع ملقط.
  3. عقد باستمرار نهاية الأنسجة تشريح مع ملقط واحد وسحب الدماغ والعين أنتينال أقراص مع ملقط أخرى.
    ملاحظة: الحفاظ على العقول تشريح لوضعها بالقرب من أقراص تخيل الجناح. العقول بمثابة منصة منع ساترة من سحق أقراص تخيل الجناح.
  4. لعزل أقراص تخيل الجناح عقد أسفل نهاية الأنسجة تشريح مع ملقط واحد وخدش بلطف جدار الجسم والمسيل للدموع قبالة الأقراص مع ملقط أخرى.
    ملاحظة: إذا كان من الصعب العثور على أقراص تخيل الجناح، قشر القصبة الهوائية من الخلفي إلى الجانب الأمامي. الجناح تخيل أقراص عصا القصبة الهوائية.
  5. تغطية بلطف أقراص تخيلي مع ساترة وختم مع طلاء الأظافر. مخزن في 4 درجات مئوية.

5. متحد البؤر المجهري

  1. للحصول على الصور متحد البؤر باستخدام متحد البؤر المجهر مجموعة المعلمات الحصول على صورة بما في ذلك مجموعة من الطول الموجي الانبعاثات، كثافة الليزر، وكسب، تعويض، سرعة المسح الضوئي وحجم الصورة 24 .
    ملاحظة: لإجراء مفصل من إعدادات الحصول على الصور، راجع دليل التعليمات التي تقدمها كل مصنع المجهر.
  2. لالتقاط واحد كوأقسام نفوكال من الجناح بأكمله القرص تخيل، واستخدام عدسة الهدف 20X.
  3. الحصول على صور ثلاثية الأبعاد بواسطة المسح كومة Z في خطوة حجم 0.5 - 1.0 ميكرون باستخدام 40X أو 60X العدسات.
    ملاحظة: لتحليل الأنماط الظاهرية الخلوية في دقة عالية، يجب أن يكون حجم الصورة أكبر من 512 × 512 بكسل.

6. تحليل الصورة باستخدام إيماجيج

  1. استخدام فيجي، وهو برنامج مفتوح المصدر إيماجيج تركز على تحليل الصورة البيولوجية (https://fiji.sc/) 25 ، لاكتساب وتحليل متحد البؤر ض الصور كومة.
  2. للحصول على المقاطع الرأسية، افتح صور z-ستاك في إيماجيج وحدد عنصر القائمة "إيماج / ستاكس / ريسليس".
    ملاحظة: إما محور شز أو محور يز يمكن اختيارها في القائمة ريسليس. ويمكن الحصول على القسم الرأسي أيضا في اتجاه تعسفي عن طريق رسم خط مستقيم أو مستطيل على صورة z- المكدس.

7. تشخيص الأنماط الورمية

  1. افتح العموديةأقسام (شز أو محور يز) التي تم الحصول عليها من مجموعة واحدة من الصور Z المكدس وتحليل المظاهر المورفولوجية وتلطيخ الأجسام المضادة.
  2. لتشخيص المظاهر الورمية، تركز أساسا على النقاط الثلاث التالية: (1) إذا كتلة الخلية، بما في ذلك استنساخ ضربة قاضية، ينحرف عن الطبقة الظهارية الرئيسية، (2) إذا تم تغيير توطين تحت الخلية من البروتينات الوصفي في هذه الكتلة الخلية ، و (3) إذا كان قطر هذه الكتلة الخلية أكبر من 4 خلايا.
  3. تصنيف المظاهر الورمية وفقا لمخطط انسيابي وصفها في الشكل 1 .

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

لإثبات تشكيل ورم الورم تجريبيا التي يسببها رني -NTSG ضربة قاضية ضربة قاضية في أقراص ذبابة الجناح ذبابة الفاكهة ، استخدمت ثلاثة برامج تشغيل GAL4 مختلفة للتعبير واس- رناي لجل أو سكريب : (1) سد- GAL4، الذي يدفع التعبير واس قوية في الجناح الحقيبة والتعبير المعتدل في المناطق المفصلي ( الشكل 2 والشكل 3A ). (2) أوبد-GAL4،...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نظام GAL4-واس هي واحدة من الأدوات الوراثية أقوى للتعبير الجيني المستهدفة في ذبابة الفاكهة 26 ويسهل إلى حد كبير تحريض الخلايا السرطانية والتحليل في الجسم الحي 4 . هذا النظام يتيح توليد الحيوانات المستنسخة التي تحمل ضربة قاضية من الجينات الكابتة للورم أو أوفيركسريسيون من الجينات الورمية داخل الأنسجة الظهارية من النوع البري، وهو وضع يشبه إلى حد كبير المراحل الأولية من سرطان الإنسان حيث يتم محو الخلايا المؤيدة للورم الم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

نشكر J. فوغن للقراءة النقدية للمخطوطة. وأيد هذا العمل من المنح من جسبس كاكينهي أرقام المنحة 26891025، 15H01500 ومنحة البحوث مؤسسة تاكيدا العلوم إلى يت

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي > كواشف < / قوي >
ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)واكو162-19321
TritonX-100واكو168-11805
الفورمالديهايدواكو064-00406
ألبومين مصل الأبقارSigmaA7906
مصل الماعز العاديSigmaG6767
تركيب الوسط ،مختبراتH-1000
DAPISigmaD9542
الفأر المضاد ل Dlg 4F3الدراسات التنموية بنك الورم الهجين4F3 المضادة للأقراص الكبيرة ، RRID: AB_528203مخفف في PBTG ، 1:40
فأر مضاد ل MMP1دراسات التنموية بنك الورم الهجين3A6B4 ، RRID: AB_5797803 مختلط 1: 1: 1 ويخفف في PBTG ، 1:40
الفأر المضاد ل MMP1الدراسات التنموية بنك الورم الهجين3B8D12 ، RRID: AB_5797813 مختلطة 1: 1: 1 وتمييع في PBTG ، 1:40
فأر مضاد ل MMP1دراسات تنموية بنك الورم الهجين5H7B11 ، RRID: AB_5797793 مختلط 1: 1: 1 وتمييع في PBTG ، 1:40
فئة الماوس المضادة < span = "font13" >a< / span>tubulin< / span>developmental دراسات بنك الورم الهجينAA4.3 ، RRID: AB_579793مخفف في PBTG ، 1:100
Alexa Fluor 546 Phalloidinالمجسات الجزيئيةA22283مخففة في PBS ، 1:40
جسم مضاد IgG مضاد للفأر ، Alexa Fluor 546مجسات جزيئيةA11030مخففة في PBTG ، 1: 400
Name< / strong>Company< / strong> رقم الكتالوج< / قوي>تعليقات
Fly سلالات
sd-Gal4Bloomington Drosophila Stock Center# 8609أعيد دمجها مع UAS-EGFP
upd-Gal4Bloomington ذبابة الفاكهة Stock Center#26796أعيد دمجها مع UAS-EGFP< / span>< / em>
UAS-lgl-RNAi< / em>مركز ذبابة الفاكهة RNAiفي فيينا # 51247
UAS-scrib-RNAi< / em>مركز ذبابة الفاكهة في فيينا RNAi# 105412
UAS-Ras V12< / sup>< / span>< / em>مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة للمخزون# 64196
< م > UAS-Yki < span class = "font12" >3SA< / sup>< / span>< / em>مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة# 28817
< م > hsFLP < / em >مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة# 6
Act>CD2 >GAL4 (flip-out GAL4) < / em>بلومنجتون ذبابة الفاكهة مركز المخزون# 4780أعيد تجميعه مع UAS-EGFP< / span>< / em>
UAS-EGFP< / em>مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة للمخزون# 5428X chromosome
UAS-EGFP< / em>Bloomington ذبابة الفاكهة الأسهم Center# 6658الكروموسوم الثالث
UAS-Dicer2< / em>بلومنجتون ذبابة الفاكهة الأسهم مركز# 24650الكروموسوم الثاني
< م > UAS-Dicer2 < / em>مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة# 24651الكروموسوم الثالث
< م > vkg-GFP < / em >مورين وآخرون 2001مصيدة بروتين GFP
محلول Vectashield Vector

المراجع

  1. Hanahan, D., Weinberg, R. A. The hallmarks of cancer. Cell. 100 (1), 57-70 (2000).
  2. Xu, T., Rubin, G. M. Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues. Development. 117 (4), 1223-1237 (1993).
  3. Struhl, G., Basler, K. Organizing activity of wingless protein in Drosophila. Cell. 72 (4), 527-540 (1993).
  4. Potter, C. J., Turenchalk, G. S., Xu, T. Drosophila in cancer research. An expanding role. Trends Genet. 16 (1), 33-39 (2000).
  5. Miles, W. O., Dyson, N. J., Walker, J. A. Modeling tumor invasion and metastasis in Drosophila. Dis Model Mech. 4 (6), 753-761 (2011).
  6. Tipping, M., Perrimon, N. Drosophila as a model for context-dependent tumorigenesis. J Cell Physiol. 229 (1), 27-33 (2013).
  7. Bilder, D. Epithelial polarity and proliferation control: links from the Drosophila neoplastic tumor suppressors. Genes Dev. 18 (16), 1909-1925 (2004).
  8. Humbert, P. O., et al. Control of tumourigenesis by the Scribble/Dlg/Lgl polarity module. Oncogene. 27 (55), 6888-6907 (2008).
  9. Huang, L., Muthuswamy, S. K. Polarity protein alterations in carcinoma: a focus on emerging roles for polarity regulators. Curr Opin Genet Dev. 20 (1), 41-50 (2010).
  10. Brumby, A. M., Richardson, H. E. scribble mutants cooperate with oncogenic Ras or Notch to cause neoplastic overgrowth in Drosophila. EMBO J. 22 (21), 5769-5779 (2003).
  11. Igaki, T., Pastor-Pareja, J. C., Aonuma, H., Miura, M., Xu, T. Intrinsic tumor suppression and epithelial maintenance by endocytic activation of Eiger/TNF signaling in Drosophila. Dev Cell. 16 (3), 458-465 (2009).
  12. Tamori, Y., et al. Involvement of Lgl and Mahjong/VprBP in cell competition. PLoS Biol. 8 (7), e1000422(2010).
  13. Cordero, J. B., et al. Oncogenic Ras diverts a host TNF tumor suppressor activity into tumor promoter. Dev Cell. 18 (6), 999-1011 (2010).
  14. Yamamoto, M., Ohsawa, S., Kunimasa, K., Igaki, T. The ligand Sas and its receptor PTP10D drive tumour-suppressive cell competition. Nature. 542 (7640), 246-250 (2017).
  15. Vaughen, J., Igaki, T. Slit-Robo Repulsive Signaling Extrudes Tumorigenic Cells from Epithelia. Dev Cell. 39 (6), 683-695 (2016).
  16. Tamori, Y., Suzuki, E., Deng, W. -M. Epithelial Tumors Originate in Tumor Hotspots, a Tissue-Intrinsic Microenvironment. PLoS Biol. 14 (9), e1002537(2016).
  17. Ohsawa, S., et al. Elimination of oncogenic neighbors by JNK-mediated engulfment in Drosophila. Dev Cell. 20 (3), 315-328 (2011).
  18. Menéndez, J., Pérez-Garijo, A., Calleja, M., Morata, G. A tumor-suppressing mechanism in Drosophila involving cell competition and the Hippo pathway. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14651-14656 (2010).
  19. Hogan, C., et al. Characterization of the interface between normal and transformed epithelial cells. Nat Cell Biol. 11 (4), 460-467 (2009).
  20. Kajita, M., et al. Interaction with surrounding normal epithelial cells influences signalling pathways and behaviour of Src-transformed cells. J Cell Sci. 123 (Pt 2), 171-180 (2010).
  21. Norman, M., et al. Loss of Scribble causes cell competition in mammalian cells. J Cell Sci. 125 (1), 59-66 (2012).
  22. Wagstaff, L., et al. Mechanical cell competition kills cells via induction of lethal p53 levels. Nat Commun. 7, 1-14 (2016).
  23. Kajita, M., Fujita, Y. EDAC: Epithelial defence against cancer-cell competition between normal and transformed epithelial cells in mammals. J Biochem. 158 (1), 15-23 (2015).
  24. North, A. J. Seeing is believing? A beginners' guide to practical pitfalls in image acquisition. J Cell Biol. 172 (1), 9-18 (2006).
  25. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  26. Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118 (2), 401-415 (1993).
  27. Jory, A., et al. A survey of 6,300 genomic fragments for cis-regulatory activity in the imaginal discs of Drosophila melanogaster. Cell Rep. 2 (4), 1014-1024 (2012).
  28. McGuire, S. E., Le, P. T., Osborn, A. J., Matsumoto, K., Davis, R. L. Spatiotemporal rescue of memory dysfunction in Drosophila. Science. 302 (5651), 1765-1768 (2003).
  29. Rodrigues, A. B., et al. Activated STAT regulates growth and induces competitive interactions independently of Myc, Yorkie, Wingless and ribosome biogenesis. Development. 139 (21), 4051-4061 (2012).
  30. Khan, S. J., et al. Epithelial neoplasia in Drosophila entails switch to primitive cell states. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (24), E2163-E2172 (2013).
  31. Pagliarini, R. A., Xu, T. A genetic screen in Drosophila for metastatic behavior. Science. 302 (5648), 1227-1231 (2003).
  32. Gonzalez, C. Drosophila melanogaster: a model and a tool to investigate malignancy and identify new therapeutics. Nat Rev Cancer. 13 (3), 172-183 (2013).
  33. Patel, P. H., Edgar, B. A. Tissue design: how Drosophila tumors remodel their neighborhood. Semin Cell Dev Biol. 28, 86-95 (2014).
  34. Nakajima, Y. -I., Meyer, E. J., Kroesen, A., McKinney, S. A., Gibson, M. C. Epithelial junctions maintain tissue architecture by directing planar spindle orientation. Nature. 500 (7462), 359-362 (2013).
  35. Colombani, J., Andersen, D. S., Léopold, P. Secreted peptide Dilp8 coordinates Drosophila tissue growth with developmental timing. Science. 336 (6081), 582-585 (2012).
  36. Garelli, A., Gontijo, A. M., Miguela, V., Caparros, E., Dominguez, M. Imaginal discs secrete insulin-like peptide 8 to mediate plasticity of growth and maturation. Science. 336 (6081), 579-582 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

Drosophila GAL4 UAS ImageJ Flip out GAL4
الاستقراء والتشخيص للأورام في
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.